Práctica No.

5 Duración (horas): 1 sesión de 4 horas

Nombre de la INMUNOLOGÍA
asignatura
Unida de Contenido INTRODUCCIÓN AL SISTEMA INMUNOLÓGICO
Nombre de la Práctica ACTIVIDAD LÍTICA DEL COMPLEMENTO
Competencia El estudiante:
asociada a la práctica Determinará la actividad lítica del complemento sobre los trofozoítos
de Entamoeba histolytica.
Materiales
De la institución/Docente: Para el alumno:
Material: Bitácora de trabajo
1 algodón 300 g
8 tubo vacutainers morado K3 EDTA Equipo de seguridad (bata, guantes, liga de
4 vidrio de reloj cabello, pantalón y zapato cerrado)
20 pipetas Pasteur 5’
8 bulbos para pipeta Pasteur Investigación previa
20 tubos Falcon de 15 mL
4 cámara de Neubauer Ligadura para venopunción (personal)
40 tubos de ensaye 10*130
4 gradillas para tubos de 10*130
8 pipetas de 10 mL
8 pipetas de 5 mL
8 pipetas de 1 mL
8 cajas de Petri
2 micropipeta 10 uL
Puntas para micropipeta blancas

Equipos:
4 microscopios
1 centrífuga

Reactivos:
Etanol (10 mL)
PBS pH 7.4
Suero humano no descomplementado y
descomplementado
Cultivo de Entamoeba histolytica
Actividades
Para el Docente/Facilitador: Para los Alumnos:
BRIEFING INICIAL: Actividad 1. Preparación de los sueros.
1. Presentación e ingreso al laboratorio. Tomar una muestra sanguínea de 5 mL con
2. Diagrama de bloques tubo de tapa lila (EDTA).
3. Socialización del propósito de aprendizaje o Centrifugar los tubos a 1500 rpm/10 min para
examen rápido. obtener el plasma.
Con ayuda de una pipeta Pasteur, colocar el
PREPARACIÓN INICIAL: plasma en un tubo limpio con mucho cuidado
de no tomar eritrocitos.
1. El docente solicita a los auxiliares de
laboratorio con una semana de anticipación
sus materiales.
2. El docente verifica que el alumno ingresó su
solicitud de materiales con los auxiliares de
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación.
3. El docente verifica que los auxiliares de
laboratorio entreguen el material a los
alumnos contra vale de solicitud y credencial
del responsable de equipo.
4. El docente verifica que el alumno revise que
cuenta con el 100% de los materiales
solicitados.
5. El docente verifica que el alumno tenga el
área de trabajo limpia y despejada.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA:
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a
llevar la cronología
2. Provee feedback descriptivo durante la
práctica
3. Resuelve dudas durante la ejecución
4. Promueve el buen comportamiento del
equipo durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la entrega de material limpio y
completo
6. Utiliza un modelo de FACILITADOR NO
INSTRUCCIONAL
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3
DEBRIEFING:
1. Recapitula con los alumnos los hechos
ocurridos
2. Promueve la reflexión, discusión y
resolución de dudas
3. Verifica si se cumplió el propósito del
aprendizaje.
Dividir el plasma en dos porciones iguales en
tubos Falcon. Dejar uno de los tubos en la
gradilla y el otro colocarlo en baño maría a
56°C durante 30 min para descomplementarlo.
Preparar una solución de suero no
descomplementado al 50% (volumen final 2
mL) y otra de suero descomplementado al
50% (volumen final 2 mL). El diluyente será
PBS.
Reservar en el refrigerador hasta su uso.
Actividad 2. Preparación de la suspensión de
amibas.
Tomar un cultivo de Entamoeba histolytica en
fase logarítmica, despegar a las amibas de las
paredes por agitación mecánica y pasarlas a
un tubo Falcon de 15 mL.
Centrifugar los trofozoítos a 1500 rpm/5 min y
eliminar el sobrenadante.
Adicionar 3 mL de PBS y repetir la
centrifugación.
Repetir el lavado dos veces más para eliminar
los restos de medio de cultivo.
Tomar una alícuota y contar en cámara de
Neubauer.
Ajustar la suspensión a una concentración de
500,000 amibas/mL.
Actividad 3. Actividad lítica del complemento.
Colocar 1 mL de la suspensión de amibas en 2
tubos Falcon.
Centrifugar a 1500 rpm/5 min y eliminar los
sobrenadantes.
Resuspender uno de los botones en 1 mL de
suero al 50% descomplementado y el otro en
1 mL de suero al 50% no descomplementado.
Homogenizar perfectamente.
Tomar inmediatamente una alícuota de 10 uL
de cada tubo y colocarla en un tubo
Eppendorf. Llevar las suspensiones a incubar a
37°C.
Adicionar a cada tubo Eppendorf 10 uL de azul
tripan y determinar el número de amibas vivas
(refringentes), muertas (azules) y totales.
Repetir este procedimiento a los 15, 30, 60, 90
y 120 min.
Para el reporte.
 Calcular el número de amibas en cada uno de
los tiempos establecidos.
Determinar el porcentaje de viabilidad y
muerte en cada uno de los tiempos.
Hacer una tabla obtenida con los datos de
todos los equipos. Calcular media y desviación
estándar.
Graficar los datos grupales.
Discutir las diferencias o similitudes
observadas.
Aprendizaje autodirigido (independiente)
Antes de la práctica:
¿Qué es el complemento?
¿Cuáles con las tres vías de activación del complemento?
¿En qué punto confluyen todas las vías del complemento?
¿El complemento es parte de la respuesta inmune innata o adaptativa?
¿Cuáles son las funciones biológicas del complemento?
¿Cuáles son las estrategias que usan los patógenos para evadir la acción lítica del
complemento?

Después de la práctica:
Determinar el porqué de las diferencias observadas en la acción lítica del complemento.
Conocer los mecanismos de visión del complemento.