Bioquímica 2º cuatrimestre

Tema 21 Fosforilación Oxidativa

Estructura de la ATPasa
La fosforilación oxidativa es
la síntesis de ATP a partir de
ADP y fosfato inorgánico
( ADP  Pi ATPsintasa
 ATP )
catalizada por una enzima.
Esta enzima se localiza
insertada en la membrana
mitocondrial interna y se
denomina ATP sintasa, ATP
sintetasa o ATP-asa FoF1.

En estudios con ultrasonidos (sonicación) de las mitocondrias, se obtienen unas vesículas

invertidas con unas protuberancias, las ATPasas. Si estas vesículas invertidas se tratan con
tripsina (proteasa) o urea, se separan los componentes de la ATP sintasa:
 Factor Fo: Componente integrado en la membrana mitocondrial que es sensible a la
oligomicina, este compuesto se une al factor Fo inhibiendo la síntesis de ATP.
 Factor F1: que es la “protuberancia” que se ve al microscopio electrónico.
Estas estructuras son incapaces de sintetizar el ATP cuando se separan, es decir, que la
enzima ATP sintasa se compone de estos dos factores. Sin embargo, el factor que presenta
actividad ATPasa es el factor F1, y por ello, a la ATP sintasa se la puede denominar como
ATPasa Fo F1.

Estructura de la ATP sintasa:

El factor Fo es la base de la ATP sintasa y se compone de 3 subunidades: a, b y c. La
subunidad c está formada por 12 estructuras proteicas que atraviesan la membrana
mitocondrial interna. La subunidad a también está inserta en la membrana, e interacciona
con la subunidad b, que sirve de unión al factor F1.
El factor F1 se divide en:
 tallo: se compone de dos subunidades proteicas.
 nudo: contiene tres subunidades α y tres subunidades β, y los seis polipéptidos
están dispuestos como los gajos de una naranja. También hay un polipéptido γ, un
polipéptido ε y un polipéptido δ.

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Hipótesis de la fosforilación oxidativa

A lo largo de la historia de la bioquímica, ha habido varias hipótesis para explicar el
aprovechamiento de la energía del transporte electrónico mitocondrial para realizar la
síntesis de ATP. Estas hipótesis son:

Hipótesis del acoplamiento químico: esta hipótesis suponía que, en la cadena de

transporte electrónico, se generaban componentes como el fosfoenolpiruvato (PEP) o la
creatina fosfato (CP) que participaban en la síntesis de ATP por una reacción acoplada. Sin
embargo, fue descartada porque no existe ningún componente químico de elevada energía
en el transporte electrónico.

Hipótesis del acoplamiento conformacional: según algunos autores, la fosforilación

oxidativa se podía producir sobre alguna molécula de la membrana mitocondrial interna, lo
que conllevaba a un cambio de la conformación a una molécula con una conformación de
elevada energía que recogía, de ese modo, la energía del transporte electrónico. Esa energía,
posteriormente, se cedía para la síntesis del ATP. Esta hipótesis fue descartada porque no se
ha visto ningún cambio conformacional en ninguna molécula de la membrana mitocondrial
interna.

Hipótesis del acoplamiento quimiosmótico: es la hipótesis que se considera verdadera,

sostiene que la fosforilación oxidativa es la consecuencia del transporte electrónico
mitocondrial, dado que se produce el bombeo de hidrogeniones desde la matriz al espacio
intermembranoso. Esto conlleva que el lado externo tiene mayor carga positiva, mientras
que el lado interno tiene mayor carga negativa. Además, como la concentración de protones
en el exterior es mayor que en el interior, se ve una diferencia de pH considerable. Con

esto, se produce un gradiente electroquímico (  H ) de protones con dos componentes:
- Variación del potencial de membrana (Δψ): es la consecuencia del cambio de carga
positiva y negativa.
- Variación del pH (ΔpH): se produce entre dos compartimentos (el espacio
intermembranoso y la matriz mitocondrial).
 pH
Así, la fórmula del gradiente electroquímico de H es:  H    2,3  R  T
F

Función de la ATPasa
La ATP sintasa, para cada uno de los dímeros αβ del factor F1, puede tener tres
configuraciones distintas:
 Conformación laxa (L).
 Conformación compacta o tensa (T).
 Conformación abierta (O): en esta configuración es donde puede entrar ADP y
fosfato inorgánico o salir ATP.

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Primero, entra ADP y fosfato inorgánico en un dímero αβ cuya conformación es abierta.

Con esto, llega energía, que hace que se cambie la conformación de todos los dímeros, de
modo que siempre se pasa de un dímero O a uno L; de L se pasa a T; y de T se pasa a O.

Con esto, se permite que salga el ATP previa síntesis. Tras este primer cambio
conformacional de dímero O a L, la subunidad γ gira entre 60º y 120º y, en una segunda
etapa, en el dímero T se produce la síntesis de ATP.

Se sabe que una molécula de NADH va a bombear 10 protones, mientras que una molécula
de FADH2 bombeará 6 H+. Para la síntesis de cada molécula de ATP, se requiere que la
ATP sintasa bombee 4 protones. Así, en realidad, se dice que:
 Por cada molécula de NADH se forman 2,5 moléculas de ATP
 Por cada molécula de FADH2 se forman 1,5 moléculas de ATP

Por convenio se dice que:

 Por cada molécula de NADH se forman 3 moléculas de ATP
 Por cada molécula de FADH2 se forman 2 moléculas de ATP

Además, la síntesis de ATP y la actividad del transporte electrónico dependen del contenido
energético de la célula. A mayor energía de la célula, menor síntesis de ATP y, a menor
energía intracelular, se aumentará la síntesis de ATP. Esto se debe a que las
concentraciones de ADP y ATP en la célula están estrechamente relacionadas en un
cociente que es constante:
K
ATP
ADP

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Lanzaderas
La cadena transportadora de electrones consume NADH y produce NAD+. Sin embargo,
este NADH proviene del citosol y de diversas rutas metabólicas. Así, surge ahora una
pregunta: ¿cómo es posible que el NADH del citosol entre en la mitocondria?
Esto se soluciona con lo que se conoce como lanzaderas, que son sistemas que
permiten “bombear” el NADH producido en el citosol al interior mitocondrial por medio de
isoenzimas.

Lanzadera dihidroxiacetona fosfato/glicerol-3-fosfato: el NADH va a ser utilizado en el

citosol oxidándose a NAD+ en una reacción acoplada (que es la reducción de la
dihidroxiacetona fosfato a glicerol–3–fosfato). Esta reacción está catalizada por la glicerol–
3–fosfato deshidrogenasa citosólica.
Posteriormente, el glicerol–3–fosfato atraviesa la membrana mitocondrial externa
(dado que ésta no es impermeable) y llega a la membrana mitocondrial interna. Allí, este
glicerol–3–fosfato se transforma en dihidroxiacetona fosfato por una isoenzima de la
glicerol–3–fosfato deshidrogenasa (que es una enzima mitocondrial) usando el poder
reductor de la reacción de reducción del FADH2 ( FAD 2  FADH 2 ). La dihidroxiacetona
fosfato atraviesa libremente la membrana externa y se repite de nuevo este ciclo.

Lanzadera malato/aspartato: en el citosol el NADH + H+ se usa para reducir el

oxalacetato (que es un componente de cuatro carbonos) a malato, oxidándose así a NAD+
por medio de la malato deshidrogenasa. Este malato atraviesa las dos membranas
mitocondriales, dado que en el interior de la mitocondria se encuentra con un sistema
transporte que le introduce en la matriz.
Dentro de la mitocondria, se da la reacción inversa, es decir, de malato se oxida a
oxalacetato, usando el NAD+ para reducirse a NADH. Esta reacción esta catalizada por la
isoenzima malato deshidrogenasa mitocondrial.
Tras esto, se produce la transaminación del ácido glutámico (Glu) con un
oxalacetato para dar lugar al ácido α-cetoglutámico (que es un α-cetoácido) y aspartato
(Asp).
Ambos van a ir al espacio intermembrana por medio de dos sistemas de transporte:
- En uno, el malato entra y el α-cetoglutarato sale.
- En el otro, el ácido glutámico (Glu) entra y el aspartato (Asp) sale.
En el citosol, se produce la reacción inversa a la de la mitocondria:
  cetoglutar ato  Asp Aspartato
transamina
sa
 Glu  Oxalacetat o
5C 4C 5C 4C

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Componentes enzimáticos de la membrana mitocondrial interna

Cuando el NADH cede su poder reductor y se usa para la síntesis de ATP, este ATP se ha
de situar posteriormente en el hialoplasma. Además, el fosfato inorgánico que se usa en la
síntesis de ATP se irá gastando en la mitocondria. Por esto, tendrá que haber sistemas de
transporte en alguna de las membranas mitocondriales.

La membrana mitocondrial externa es muy permeable y, por ello, lo más probable es que no
haya sistemas de transporte. Sin embargo, la membrana mitocondrial interna es
impermeable a todos los componentes celulares, salvo los que tienen sistema de transporte.

Enzimas que se encuentran en la membrana mitocondrial interna:

 Adenina nucleótido translocasa: esta enzima expulsa al citosol una molécula de

ATP y permite la entrada de una molécula de ADP.
 ATP sintasa FoF1.
 Fosfato translocasa: puede actuar de dos modos:
o Modo antiporte: un antiporte es aquel transporte activo en el que entra una
sustancia a cambio de la salida de otra. En este caso, entra un ión
dihidrógenofosfato (H2PO4–) y sale un ión hidroxilo (OH–).
o Modo simporte: un simporte es aquel transporte activo en el que entran dos
sustancias a la par. En este caso, entran un ión H2PO4– y dos protones (2H+).
 Sistema de transporte de piruvato: el piruvato se produce por la glucolisis y se
transporta al interior bombeando al exterior iones hidroxilo, de modo que se da un
antiporte.
 Sistemas de transporte de moléculas del ciclo de Krebs (succinato, malato,
fumarato): este sistema de transporte de ácidos dicarboxílicos funciona mediante la
introducción de uno de estos ácidos bombeando un fosfato inorgánico u otro ácido
dicarboxílico distinto al citosol.
 Sistemas de transporte de ácidos tricarboxílicos (citrato o isocitrato): estos
sistemas de transporte permiten la entrada de citrato o isocitrato a cambio de la
salida de isocitrato, citrato o un ácido dicarboxílico.

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