Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Mediosbioqumicos 100408011644 Phpapp02
Mediosbioqumicos 100408011644 Phpapp02
Medios diferenciales
Son empleados para detectar reacciones
bioquímicas, con carácter diferencial de grupos, géneros
o especies microbianas, mediante el viraje de color del
indicador presente en el medio, demostrando algunas de
sus características.
Estos medios son el TSI, LIA, Citrato de Simmons,
SIM, Caldo úrea.
Medios diferenciales
LIA UREA
TSI (Triple Sugar Iron)
• Color: rojo ladrillo
• Inhibidores: no tiene
• Indicador: rojo de fenol
• Sustratos principales: lactosa, sacarosa y
glucosa (la proporción en el medio de lactosa y
sacarosa es de 10: 1 con la glucosa)
• Sustratos secundarios: tiosulfato sódico,
peptona, citrato férrico amoniacal y extractos.
• Se siembra por picadura profunda con aguja y
luego se siembra por estrías en el pico
TSI (Triple Sugar Iron)
TSI (Triple Sugar Iron)
En este medio se busca determinar la capacidad de la
bacteria para degradar los azúcares y la formación de gas y de
H2S.La fermentación aeróbica se produce en el pico de tubo y la
anaeróbica en el fondo del tubo.
La degradación de la lactosa ocurre en la parte superior,
la de la sacarosa en la parte intermedia y la de la glucosa en la
parte profunda, produciéndose un viraje del rojo al amarillo.
El tiosulfato es reducido a H2S quien reacciona con el
citrato férrico amoniacal para dar formación al sulfuro de fierro
que es de color negro.
La presencia de gas se debe al CO2 producto de la
fermentación.
TSI (Triple Sugar Iron)
1.- Rx en bacterias glucosa, lactosa y sacarosa +
A/A -;-
A/A +;-
Ej.:
Ej.:
Escherichia Vibrio
coli cholerae
TSI (Triple Sugar Iron)
A/A ++, ++
Ej.: Citrobacter freundii
TSI (Triple Sugar Iron)
2.- Rx en bacterias solo fermentadoras de glucosa (glucosa +;
lactosa y sacarosa -)
N/N -;-
Pseudomonas
* Este resultado no es de una
enterobacteria
LIA (Lysine Iron Agar)
• Color: lila
• Inhibidores: no tiene
• Indicador: púrpura de bromocresol
• Sustratos principales: lisina y glucosa
• Sustratos secundarios: peptona, tiosulfato de
sodio, extracto de levaduras.
• Se siembra por picadura profunda con aguja y
luego por estrías en el pico
LIA (Lysine Iron Agar)
LIA (Lysine Iron Agar)
En este medio se permite evidenciar la descarboxilación
del aminoácido lisina en la diamina cadaverina, como también la
desaminación de la lisina en un alfa cetoácido. Esta 2 reacciones
se ponen de manifiesto por el viraje del indicador púrpura de
bromocresol.
La formación de H2S se pone de manifiesto por la
presencia del tiosulfato sódico, que dará formación al sulfato
férrico.
También puede verificarse la formación de gas a partir de
la degradación de la glucosa.
LIA (Lysine Iron Agar)
1.- Lisina descarboxilasa +
lisina
descarboxilasa
Lisina cadaverina (alcaliniza el
medio)
Ej.: Salmonella
LIA (Lysine Iron Agar)
3.- Lisina descarboxilasa -
Ej.: Shigella
LIA (Lysine Iron Agar)
4.- Lisina deaminasa +
Lisina deaminasa
Lisina alfa cetácido
N/N -;-
Pseudomonas
* Este resultado no es de una
enterobacteria
Citrato de Simmons
• Color: verde
• Inhibidor: no tiene
• Indicador: azul de bromotimol
• Sustrato principal: citrato de sodio
• Sustratos secundarios: fosfato
dipotásico, cloruro de sodio, sulfato de
magnesio y fosfato monoamónico.
• Se siembra por picadura profunda con
aguja y luego por estrías en el pico.
Citrato de Simmons
Citrato de Simmons
Este medio nos permite comprobar la capacidad de la
bacteria de utilizar el citrato como fuente exclusiva de
carbono.
La degradación del citrato conlleva a la alcalinización del
medio y el viraje del indicador azul de bromotimol de verde a
azul prusia.
Con este medio podemos diferenciar entre las coliformes
fecales y bacterias de los grupos Enterobacter y Citrobacter
así como algunas especies del grupo Salmonella.
Citrato de Simmons
1.- Citrato positivo:
La bacteria consume el citrato
como fuente exclusiva de carbono
citritasa
Cit- Na+ Cit+ Na+ OH –
alcaliniza el
medio
Ej.: Klebsiella pneumoniae
Citrato de Simmons
2.- Citrato negativo
La bacteria no consume el
citrato como fuente de carbono.
Presencia de Presencia de
turbidez difusa en crecimiento solo en
el medio. el sitio de punción
•Rápida • Retardada
Ejm.: Proteus Ejm.: Klebsiella
mirabilis pneumoniae
Caldo Úrea
2.- Úrea negativa
• Color: lila
• Inhibidor: no tiene
• Indicador: púrpura de bromocresol
• Sustratos principales: ornitina y glucosa.
• Sustratos secundarios: peptona, triptona
y extractos.
• Se siembra por picadura profunda
MIO (Motilidad-Indol-Ornitina)
Este medio se usa para la identificación de enterobacterias
en base a su movilidad, producción de indol y actividad de ornitina
descarboxilasa.
El aminoácido ornitina es descarboxilado por la enzima
ornitina descraboxilasa para producir la diamina putrescina y CO2,
implicando una alcalinización del medio.
La motilidad se demuestra por un enturbamiento del medio o
un crecimiento que se difunde desde la línea de inoculación. Los
cultivos no móviles no muestran este crecimiento difuso, sino que
más bien crecen a lo largo de la línea de inoculación.
La prueba del indol se basa e la eacción que s eproduce con
el rvo de Kovacs.
MIO (Motilidad-Indol-Ornitina)
M: negativa
I: positivo
O: negativo
Ej.: Klebsiella oxytoca
MIO (Motilidad-Indol-Ornitina)
M: positiva
I: negativo
O: positiva
Ej: Enterobacter aerogenes
MIO (Motilidad-Indol-Ornitina)
M: positiva
I: positivo
O: positivo
Ej.: Escherichia coli
Prueba de la Catalasa o
Peroxidasa
La catalasa es una enzima respiratoria presente en las
bacterias aerobias y anaerobias facultativas que descomponen
el H2O2 que se forma como producto final del metabolismo de
los carbohidratos, que reacciona y forma H2O y O2.
En los tubos con la bacteria desarrollada se le vierte 2
gotas de H2O2 y si inmediatamente se forman burbujas se
anota que la prueba es +; de no existir burbujas, la prueba es
negativa.
Esta prueba sirve para diferenciar cultivos de
Streptococcus y Staphylococcus, ya que el Staphylococcus es
catalasa + y el Streptococcus es catalasa - . Del mismo modo
sucede con Bacillus que es catalasa + y Clostridium que es -
Prueba de la Catalasa o
Peroxidasa
Prueba de la Coagulasa
Coagulasa + Coagulasa -
Prueba de la Coagulasa
1.- Determinación de la coagulasa libre
Se hacen subcultivos a partir de cepas seleccionadas en
caldo Infusión Cerebro-Corazón y se deja incubando a 37ºC 24h.
Añadir 0,1ml del cultivo a 0,3ml de plasma y dejar incubando a
37ºC. A las 4h examinar los tubos para ver si el medio aparece
coagulado, si es negativo, se examina hasta las 24h.
Interpretación:
• Negativo: Ningún signo de formación de fibrina
• Positivo:
- 1+: Presencia de pequeños coágulos organizados
Prueba de la Coagulasa