Metodología:

Esta investigación está basada en el método de investigación experimental con la

finalidad de analizar y comparar cepas de microalgas nativas para fitorremediación de
pasivos ambientales (relaves).
A partir de este método científico de investigación, se obtiene la caracterización de
cepas tolerantes a metales pesados, en base a la experimentación que consistió en tomar
una muestra de relave de la mina metálica o … ( …… ) , caracterizar las microalgas,
cultivar las microalgas, determinar sus capacidad fitorremediadora y finalmente
optimizarla para uso de biofertilizante.
Para lograr este resultado de detalla la metodología utilizada:

Muestreo de relave:
Se toman muestras de relave y se determina la composición de metales pesados
Muestreo de microalgas
Se evalúan microalgas tolerantes a medios con presencia de metales pesados
Análisis de nutrientes:
análisis de nitrógeno amoniacal (N-NH4 + ), nitrito (N-NO2 - ), nitrato (N-NO3 - ) y
fosfato (P-PO4 -3) se ha empleado un analizador discreto automático de Westco
Scientific Instruments: Smartchem 200 (Analyzer Medical System).
Determinación de ácidos grasos volátiles y alcalinidad
Para la determinación de ácidos grasos volátiles y alcalinidad se ha utilizado el método
de valoración ácido-base de 5 puntos propuesto por Moosbrugger et al. (1992) para la
determinación de la concentración de ácidos volátiles de cadena corta (mg HAc/L) y
alcalinidad (mg CaCO3/L).
Determinación de demanda química de oxígeno (DQO)
La DQO se determina mediante el método colorimétrico, para lo cual se ha empleado un
espectrofotómetro de UV/VIS: Spectroquant® Pharo 300 con un rango de longitudes de
onda 190-1100, lámpara y +- 1 nm de precisión.
Determinación de sólidos suspendidos
Se emplea la metodología gravimétrica propuesta por Standard Methods (ME 2540-D).
La concentración de sólidos suspendidos totales (SST) se determina así mediante la
eliminación de la humedad a 105ºC de una muestra filtrada
Determinación de fósforo total
 Para la determinación de fósforo total de las muestras se realiza una digestión ácida
previa mediante la cual los polifosfatos y el fósforo orgánico son convertidos a
ortofosfatos
Identificación de las poblaciones microbianas
La técnica empleada para la identificación de las bacterias nitrificantes y metano
tróficas ha sido el método FISH, o de hibridación fluorescente in situ. El método se
describe en Borrás (2008). Se utilizaron sondas generales para la identificación y
seguimiento microbiológico de las bacterias.
Optimización de micro

Análisis cromatográfico
Uno de los análisis más utilizados para caracterizar el perfil lipídico de una muestra es
la cromatografía de gases. Se basa en la técnica de separación por elución en solventes y
en el principio de que las moléculas , según sus características, PM y polaridad varían
en el tiempo hasta que llegan al detecto ( López 2008)
Lamuestra se volatiliza y se inyecta en una columna cromatografica de elución, es
generada por flujo de una fase móvil de un gas inerte, para este caso hidrógeno o helio
Para el perfil lipídico de grasas y aceites, la muestra problema debe tener únicamente
fracción lipídica.