BIOPROCESOS I

Practica 1: Crecimiento y cinética microbiana en cultivo por lote

1. Se realizó un recuento de Sacharomyces uvarum de una muestra de fermentación
cervecera, para ello se tomó 2 ml de muestra y se diluyó en una matraz con 198 ml de
agua. De éste se tomó 1 ml y se realizó tres diluciones en serie en tubos con 9 ml de
agua. Del último tubo, se tomó 0.1 ml y se realizaron tres diluciones en serie en tubos
con 9.9 ml de agua. Finalmente se realizó un recuento por cámara Neubauer por
triplicado obteniéndose: 50,40 y 60 microorganismos por campo.

a) Calcule el n° de células/ml
b) Calcule el n° de células de la muestra original.

2. Se desea realizar un recuento de Clostridium botulinium de una muestra de agua, para

ello se tomó 1ml de muestra y se realizaron dos diluciones en serie en tubos con 9 ml
de agua. Del último tubo se realizó el recuento por cuadriplicado, obteniéndose los
siguientes resultados por campo: 80-70-40-50. Calcular el número de
microorganismos totales.

3. Para realizar el seguimiento de una cinética de crecimiento celular se tomó una muestra
de 2 ml de caldo y se mezcló con 4 ml de agua, de esta dilución se tomaron 4 ml y se
aforaron a 10 ml, posteriormente la muestra se analizó por turbidimetría obteniéndose
un valor de absorbancia de 0.217. Utilizando la siguiente curva de calibrado, determine
la concentración celular.

Concentración celular (g/L) D.O (640 nm)

0.01 0.019
0.04 0.102
0.05 0.127
0.09 0.254
0.19 0.485

Luego de 8 horas de fermentación se toma nuevamente una muestra del fermentador,

esta vez fueron 2.5 ml de caldo, el cual se mezcló con 10 ml de agua, de esta dilución
se tomaron 2 ml y se aforaron a 15 ml para finalmente medirse la densidad óptica
obteniéndose un valor de 0.302. Determinar la nueva concentración celular.

4. Se realizó un conteo de microorganismos en una cámara cuyas dimensiones son 1 cm2

de área, 1 mm de profundidad y posee 100 sectores. Con el fin de facilitar el conteo se
 tomaron 100 ml del caldo de cultivo los cuales se diluyeron a 1 L, luego se tomaron
50 ml y se enrasó a 2 L. Al realizar el conteo se observó 15 microorganismos por
sector, no obstante tres horas antes se contaron 3 microorganismos por sector.
Determine el tiempo necesario para que el cultivo alcance una biomasa final de 50 g/L.
Dato: la masa de un microorganismo es 1*10-7 g

5. Escherichia coli se desarrolló en un medio de cultivo a 37ºC y se determinó el peso

seco (g/l) a diferentes tiempos

Tiempo (h) Peso seco (g/L) Tiempo (min) Peso seco (g/L)
0 0.2 12 3.2
2 0.211 14 5.6
4 0.305 16 6.15
8 0.98 18 6.2
10 1.77 ------------ --------------

Determine la velocidad específica de crecimiento máxima y el menor tiempo de

duplicación.

6. Una bacteria creciendo en condiciones óptimas duplica su biomasa cada 45 minutos.

Si un medio de cultivo con 0.5% de glucosa se inocula con 10 mg/l de biomasa. Calcule
la cantidad de biomasa que se producirá en mg/l a las 4, 8 y 12 horas de incubación.

7. Si la concentración celular al inicio de un cultivo es 104 cel/ml y después de 4 horas

se producen 108 cel/ml, calcular la velocidad de crecimiento y el tiempo de duplicación
del cultivo.

8. Una bacteria tiene un tiempo de duplicación de 3.5 hr. Si se inocula con 2x10 6 cel/ml
en un fermentador, ¿cuánta biomasa se producirá después de 26 horas de
fermentación? Considere crecimiento exponencial y una célula tiene una masa de 10 -
7
g.

9. En un fermentador por lotes se inoculó una bacteria mediante un caldo concentrado de

25 g/L. Determine el tiempo de duplicación y el tiempo que necesita la cepa para
alcanzar la misma concentración del inóculo. Sabiendo que μ=0.35 h-1 y que el inóculo
es 10 % del volumen del fermenador.

10. En un reactor por lotes se realizó un cultivo mixto con dos tipos de bacterias. Al
comienzo del cultivo se tiene que X1=2X2 y se sabe que μ2= 2μ1.
Determinar:
a) El tiempo que debe transcurrir para que la concentración de la cepa 1 iguale a la
de la cepa 2.
b) El tiempo que debe transcurrir para que la condición inicial se invierta.

11. Al inicio de un cultivo por lotes la fuente de carbono y a la vez nutriente limitante es
la glucosa, presentando la cepa una fase de latencia cuya duración es de 100 minutos,
mientras que la fase exponencial corresponde al 38% del tiempo total del cultivo.
Una vez agotada la glucosa se alcanza una biomasa de 2.3 g/L. Luego se utiliza como
fuente de carbono acetato, esta vez la fase lag tiene una duración de 30 minutos y la
fase log equivale al 51 % del tiempo total de cultivo, alcanzando una biomasa de 5.1
 g/L. Determine el tiempo total de duración del cultivo y las velocidades específicas
de crecimiento para cada nutriente. Dato: tD acetato=tD glucosa

12. En un experimento de laboratorio se cultivó E. coli en un medio mínimo, primero a

37°C hasta consumir la mitad de sustrato limitante y después a 24°C hasta alcanzar
la fase estacionaria. Se ha determinado que la cepa utilizada tiene un tD de 49 minutos
a 37°C y su Ea es de 16200 cal/mol. Calcular el tiempo en el que se realiza el cambio
de temperatura y el tiempo total de cultivo si se inoculan matraces que contienen 80
ml de medio estéril con 1 ml de cultivo a una concentración celular de 4 g/L . Datos:
∆X= 7 g/l, Yx/s= 50; So= 0.14 g/L
13. Un fermentador que contiene 10 litros de medio estéril es inoculado con 500 ml de
un caldo que contiene 4.1 g/L de concentración celular. Se lleva a cabo un cultivo
aerobio a 28 °C, en el cual el nutriente limitante es glucosa cuya concentración inicial
es 18 g/L.
a) Si la velocidad específica de crecimiento de la cepa a la temperatura de cultivo es
de 0.67 h-1, determinar cuál es el tiempo que dura la fermentación. La cepa contiene
50% de carbono.
b) Cuando ha transcurrido la mitad del tiempo total de cultivo (a), se agregan 3 litros
de solución estéril de 25 g/L de glucosa y la temperatura se cambia a 34°C. Calcular
el nuevo tiempo de cultivo y la concentración celular final que se alcanza. Dato: Ea=
13 kcal/mol.

14. Dos cepas de microorganismos (A y B) se cultivan independientemente y se inoculan

simultáneamente. Luego de transcurrida 1 hora y 30 minutos, las mediciones indican
que la cepa A alcanza a 0,39 g/L y la cepa B llega a 0,71 g/L. Una segunda medición
realizada a las 3 horas con 42 minutos, arroja que la cepa A ha crecido hasta 1,06 g/L
y la B alcanza 1,63 g/L. Determine:
a. Cuál de las dos cepas tiene una mayor velocidad específica de crecimiento
máxima
b. Cuánto tiempo debe transcurrir para que las concentraciones de ambas
poblaciones sean iguales.
c. Cuál es el valor de la concentración de la biomasa al alcanzar la condición señalada
en b.
d. Cuáles son las concentraciones iniciales de las cepas A y B.
Suponga que el crecimiento es solo exponencial.

15. Considere el crecimiento de un microorganismo en cultivo por lote, inoculado en una

densidad de 0,1 g/L, creciendo en glucosa como el sustrato limitante con
concentración inicial S0= 10 g/L. Después de un tiempo lag de aproximadamente 3h,
el cultivo crece exponencialmente con un tiempo de duplicación de 2 h. La fase
estacionaria es alcanzada después de un tiempo total de 14 h.
Estime:
a) μmax (h-1)
b) YX/S (g/g)
c) El tiempo total del cultivo para alcanzar la fase estacionaria, sí S0 fue 2 g/L,
asumiendo que esta concentración es también suficiente para soportar el crecimiento
máximo.
16. Un microorganismo es cultivado en un reactor por lote de 10 L, la cual inicialmente
contiene 100 g/L de sustrato limitante y 0,2 g/L de biomasa. El tiempo de duplicación
en la fase exponencial es 1,25 h.
Después de 6 horas totales de cultivo, se midió la densidad celular (1,24 g/L) y la
concentración de sustrato (73 g/L)
Estime:
a) La velocidad específica de crecimiento máxima, umax(h-1)
b) El coeficiente de rendimiento, Yx/s (g biomasa/g sustrato)
c) La densidad celular en la fase estacionaria (g/L)
d) El tiempo total del cultivo requerido para alcanzar la fase estacionaria (h)
e) El aparente tiempo lag (h)

17. ¿En un cultivo por lotes si se duplica la concentración inicial del sustrato limitante
se duplicará el tiempo de fermentación (suponga solo etapa de crecimiento
logarítmico)?