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2. Se desea realizar un recuento de Clostridium botulinium de una muestra de agua, para ello
se tomó 1ml de muestra y se realizaron dos diluciones en serie en tubos con 9 ml de agua.
Del último tubo se realizó el recuento por cuadriplicado, obteniéndose los siguientes
resultados por campo: 80-70-40-50. Calcular el número de microorganismos totales.
3. Para realizar el seguimiento de una cinética de crecimiento celular se tomó una muestra de
2 ml de caldo y se mezcló con 4 ml de agua, de esta dilución se tomaron 4 ml y se aforaron
a 10 ml, posteriormente la muestra se analizó por turbidimetría obteniéndose un valor de
absorbancia de 0.217. Utilizando la siguiente curva de calibrado, determine la
concentración celular.
Luego de 8 horas de fermentación se toma nuevamente una muestra del fermentador, esta
vez fueron 2.5 ml de caldo, el cual se mezcló con 10 ml de agua, de esta dilución se
tomaron 2 ml y se aforaron a 15 ml para finalmente medirse la densidad óptica
obteniéndose un valor de 0.302. Determinar la nueva concentración celular.
8. Una bacteria tiene un tiempo de duplicación de 3.5 hr. Si se inocula con 2x106 cel/ml en un
fermentador, ¿cuánta biomasa se producirá después de 26 horas de fermentación?
Considere crecimiento exponencial y una célula tiene una masa de 10-7g.
10. En un reactor por lotes se realizó un cultivo mixto con dos tipos de bacterias. Al
comienzo del cultivo se tiene que X1=2X2 y se sabe que μ2= 2μ1.
Determinar:
a) El tiempo que debe transcurrir para que la concentración de la cepa 1 iguale a la de la
cepa 2.
b) El tiempo que debe transcurrir para que la condición inicial se invierta.
11. Al inicio de un cultivo por lotes la fuente de carbono y a la vez nutriente limitante es la
glucosa, presentando la cepa una fase de latencia cuya duración es de 100 minutos,
mientras que la fase exponencial corresponde al 38% del tiempo total del cultivo. Una
vez agotada la glucosa se alcanza una biomasa de 2.3 g/L. Luego se utiliza como fuente
de carbono acetato, esta vez la fase lag tiene una duración de 30 minutos y la fase log
equivale al 51 % del tiempo total de cultivo, alcanzando una biomasa de 5.1 g/L.
Determine el tiempo total de duración del cultivo y las velocidades específicas de
crecimiento para cada nutriente. Dato: tD acetato=2tD glucosa
17. ¿En un cultivo por lotes si se duplica la concentración inicial del sustrato limitante se
duplicará el tiempo de fermentación (suponga solo etapa de crecimiento logarítmico)?
BIOPROCESOS I
Practica 2: Diseño de medios de cultivo y cinética de productos
Profesores:
- Roberto Vega Paulino
- Ángel Castro Alvarado
1. Diseñe el medio de cultivo si se desea obtener una biomasa de 7 g/L a partir de un inóculo
de 200 ml cuya concentración de biomasa es de 5 g/L. El volumen total del reactor es de 7
L y los nutrientes usados son glucosa, sulfato de amonio y fosfato ácido de potasio.
Además, se sabe que estas células contienen 53 % de C; 8,5% de N; 1.5% de P y 0.5 % de
S.
4. Se va a realizar un cultivo mixto por lote de las cepas bacterianas A y B que compiten por
los nutrientes del medio de cultivo. Si el nutriente limitante es la fuente de carbono y
energía y se encuentra en una cantidad inicial de 18 g/L, encuentre las concentraciones
de cada una de las poblaciones al término de la fermentación. Datos:
𝑦𝑖𝑒𝑙𝑑𝑠
𝐶6 𝐻12 𝑂6 + 𝛽𝑁𝐻3 → 0,59𝐶𝐻1,74 𝑁0,2 𝑂0,45 (𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎) + 0,43𝐶3 𝐻8 𝑂3 + 1,54𝐶𝑂2
+ 1,3𝐶2 𝐻5 𝑂𝐻 + 0,036𝐻2 𝑂
6. Considere una fermentación anaeróbica usando levadura con formula de biomasa empírica
CH1,7O0,45N0,15. Las fuentes de carbono y nitrógeno son glucosa (C6H12O6) y sales de
amonio, respectivamente. Los posibles productos son biomasa y etanol (C2H6O), junto
con dióxido de carbono y agua.
𝐴𝐶𝑂2 + 𝐵𝐹𝑒𝑆𝑂4 + 𝐷(𝑁𝐻4 )2 𝑆𝑂4 + 𝐸𝑂2 + 𝐹𝐻2 𝑆𝑂4 → 𝐶𝑎 𝐻𝑏 𝑂𝑐 𝑁𝑑 + 𝐺𝐹𝑒2 (𝑆𝑂4 )3 + 𝐼𝐻2 𝑂
8. Para realizar una fermentación por lotes, 35 litros de medio estéril son inoculados con 2.7
L de un cultivo de 3.3 g/L de células. El medio de cultivo contiene sulfato de amonio y
melaza (ρ=1.11 g/ml) con 49% de azúcares totales, de los cuales el 85 % es sacarosa y el
resto son azúcares no fermentables. El inóculo contiene 6 g/L de sacarosa y 2g/L de
cloruro de amonio. El microorganismo presenta una velocidad específica de crecimiento de
0.55 h-1 a 32 °C y una energía de activación de 11.5 Kcal/ mol. La biomasa seca contiene
49% C, 11% H, 29% O y 11% N.
9. A Ud. Le han solicitado que diseñe un medio de cultivo para producir 20 g/L de penicilina
utilizando una cepa de Penicillium chrysogenum. A las condiciones que se realiza e
cultivo, se sabe que esta cepa utiliza la fuente de carbono y energía destinando 35 % para
crecimiento, 50% para mantención y 15% para producto. La ecuación global de síntesis es:
Suponiendo que no existe variación de volumen del medio durante la fermentación, defina
y calcule las fuentes de carbono y azufre, teniendo encuenta que las concentraciones
iniciales de células y de PEN son 1.2 y 0 g/L respectivamente.
Determine la cantidad de AFA necesaria suponiendo que su conversión es de 90 %
Como fuente de sales se ha propuesto utilizar una solución que contiene en g/L:
MgSO4.7H2O 22.8, FeSO4.7H2O 15, NaCl 28, CaCl2 32.4 ¿cuál debería ser el mínimo
volumen a agregar al medio?
¿Cuál sería la concentración final de hongos y cuáles son los rendimientos globales de la
fuente de carbono y energía en células y producto?
Indique claramente toda suposición que realice
AFA: ácido fenil acético (PM: 136)
PEN-G: penicilina C16H17N2O4S
11. Se desea producir ácido láctico en un cultivo por lotes de la bacteria Lactobacillus
cultivada a 45°C y un pH de 6. La producción del metabolito sigue una cinética de
Luedeking y Piret con α = 2.75 g ácido láctico/g célula, β= 0.6875 g ácido láctico/h*g
célula y μ= 0.48 h-1. Determine el tiempo de fermentación necesario para acumular 20
g/L de ácido láctico. La fase de latencia es de 2 h, con una concentración celular a t=0 de
0.05 g/L y de ácido láctico 0.02 g/L
12. Una levadura es cultivada por lotes en un fermentador con 5000 L. de medio estéril que
contiene 40 g/L de nutriente limitante. El fermentador es inoculado con 300 L de un
cultivo que contiene 8 g/L de células y 3 g/L de nutriente limitante. Se sabe que en las
condiciones de operación usadas μ es constante e igual 0.44 h-1 y Yx/s es 0.32 g/g
La levadura acumula un pigmento con una productividad volumétrica dada por
𝑄𝑃 = −𝑎 + 𝑏𝑋 − 𝑐𝑋 2
Profesores:
- Roberto Vega Paulino
- Ángel Castro Alvarado
a) Determinar Ks y µmax
b) Dada una concentración de sustrato en la entrada del reactor de 120 g/L y asumiendo una
alimentación estéril, calcular el rendimiento del sustrato.
c) Determinar el caudal de alimentación que podrá ser procesado en un reactor similar de
100 m3 en estado estacionario, si se pretende obtener en la corriente de salida el 20 % del
nutriente limitante de una alimentación estéril que contiene 120 g/L de sustrato.
El volumen del contenido del fermentador fue 1 L. La corriente de entrada fue estéril. La
velocidad de flujo y la concentración de entrada de sustrato fueron variando y la
concentración en el estado estacionario de glucosa en el fermentador fue medido y
tabulado como se observa en la tabla (los datos son arbitrarios)
a) Determine los parámetros cinéticos (µmax, Ks y KI) de este microorganismo.
b) Si el rendimiento celular, Yx/s, es 0.46 g/g, cuál es la concentración celular en el estado
estacionario cuando la velocidad de flujo es 0.20 L/h
Velocidad de flujo Conc. glucosa entrada Conc. glucosa estado
L/hr g/L estacionario (g/L)
0.20 30 0.5
0.25 30 0.7
0.35 30 1.1
0.50 30 1.6
0.70 30 3.3
0.80 30 10
0.50 60 30
0.60 60 22
0.70 60 15
1. Se quiere realizar un cultivo por lote alimentado con alimentación constante con una
duración de 5 h. La transición a la zona de crecimiento limitado ocurrirá transcurrida la
mitad del tiempo total. La alimentación contendrá 77 g/L de nutriente limitante de un
rendimiento celular de 0.37 g/g. el microorganismo presenta un μM de 0.45 h-1 y al
momento de iniciar el flujo el volumen de medio es 12000 L, la concentración celular es
1.0 g/L y la concentración del nutriente limitante es 1.11 g/L.
Se desea determinar la biomasa al final de la fermentación, el flujo de alimentación y el
volumen final de caldo en el fermentador.
2. Una fermentación por lote alimentado se opera con alimentación constante de 375 L/h. Al
inicio de la alimentación el volumen del caldo es 21,000 L, la concentración celular 3 g/L y
la concentración de nutriente limitante 1,9 g/L. El rendimiento del nutriente limitante es
0,46 g/g y μM= 0,42 h-1.
Si el tiempo de transición es de 2,1 h y se desea que al final de la fermentación se haya
duplicado la masa celular que había al tiempo de transición, determine la concentración de
nutriente limitante en la alimentación, el tiempo total de alimentación y el volumen final.
3. Las condiciones de operación con que se lleva a cabo un cultivo por lote alimentado con
alimentación constante de una determinada bacteria, se señalan a continuación junto con
algunos de sus principales parámetros:
Vo= 59 983 L VF= 80 000 L μM= 0.26 h-1
So= 6 g/L F= 1250 L/h Ks= 50 mg/L
Xo=3 g/L Yx/s=0.5 (limitante) SF=180 g/L
Durante el cultivo se ha tomado una muestra que indica que la concentración celular en ese
momento es de 15.3 g/L ¿Podría Ud. señalar cuántas horas restan para el término de la
fermentación?
4. Una fermentación se realiza por lote alimentado, utilizando una alimentación constante de
0.8 L/h con una concentración del nutriente limitante de 120 g/L. El cultivo se inicia por
lotes con un volumen útil de 20 L, la concentración celular después de inocular es de 0.1
g/L y hay un medio de cultivo con 7.5 g/L de nutriente limitante. El cultivo por lote
continúa hasta que la masa celular se quintuplica, comenzando en ese momento la
alimentación. Determine:
a) Las condiciones iniciales del cultivo por lote alimentado.
b) Las condiciones de transición
c) Las condiciones finales que corresponde al momento en que el volumen del caldo es
30 L.
Datos:
VF= 30 L Yx/s= 0.45 μM= 0.62 h-1 Ks= 80 m g/L
5. En una fermentación por lote alimentado se desea mantener una velocidad específica de
crecimiento constante e igual a 0.33 h-1. Al momento de iniciar la alimentación el volumen
del medio es 10000 L y la concentración celular es 6 g/L. Se alimenta medio que contiene
90 g/L de nutriente limitante de rendimiento celular de 0.44 g/g. La constante de saturación
es 0.055 g/L y μM es 0.46 h-1. Al final de la fermentación se desea obtener 600 Kg de
células secas. Calcule el tiempo de alimentación, el volumen final de medio de
fermentación, la concentración de nutriente limitante, el flujo inicial de medio y el flujo
cuando transcurre la mitad del tiempo de alimentación.
6. Una fermentación por lote alimentado se lleva a cabo con una levadura que presenta una
velocidad específica de crecimiento máxima de 0.35 h-1 y una constante de saturación y un
rendimiento del nutriente limitante de 0.026 g/L y 0.46 g/g, respectivamente. Se alimenta
con 100 g/L de nutriente limitante de forma tal de mantener una velocidad específica de
crecimiento de 0.23 h-1. El fermentador contiene al inicio de la alimentación 11300 L de
caldo de una concentración celular de 3.7 g/L.
La alimentación se continua hasta alcanzar una concentración celular el triple de la inicial.
Calcule el tiempo de alimentación y el volumen final del caldo.
7. Se quiere instalar un sistema de cultivo por lote alimentado en el cual se obtenga un
crecimiento exponencial a flujo constante y con una concentración del sustrato limitante
variable con el tiempo.
a) Deduzca las ecuaciones que representan el comportamiento del sistema
b) Determine el tiempo de alimentación y la masa de glucosa total adicionada al fermentador
si el fermentador inicialmente con 22 m3 de líquido se desea obtener 640 Kg de biomasa
seca a un μ= 0.5 h-1
Datos:
Xo=8 g/L Yx/s= 0.4 μM= 0.62 h-1
3
F= 1 m /h
Ks= 0.045 g/L
8. A usted le han solicitado que diseñe un ensayo a nivel laboratorio de un CLA con
alimentación constante operado en condiciones de estado pseudoestacionario (e.p.e) para
evaluar la producción de un metabolito M mediante una bacteria aerobia. Las condiciones
de operación del cultivo deben ser tales que la velocidad específica de crecimiento de la
población celular al inicio del e.pe. sea 0.083 h-1. Al término del CLA se espera alcanzar
una biomasa de 237.3 g. El nutriente limitante será la fuente de carbono y energía y único
componente de la corriente de alimentación. Todos los demás nutrientes se adicionaran en
cantidades adecuadas al medio de cultivo inicial. Se sabe que la productividad específica
de M es igual a 3.8*10-4 U.A. (g cel)-1h-1 cuando µ ≤ 0.083 h-1.
A usted le solicitan que determine la velocidad específica de crecimiento de la población y
la concentración de metabolito M al término del CLA.
Datos:
X0= 4,8 g/L µM= 0,38 h-1
V0=8L Yx/s=0,5
S0=20 g/L
P0=0 g/L
Indique todas las suposiciones realizadas.
BIOPROCESOS I
4. El aire suplementado a un fermentador fue cerrado por un corto periodo de tiempo y luego
restaurado. Un valor para C* de 7.3 mg/L ha sido determinado para las condiciones de
operación. Use las medidas tabuladas de oxígeno disuelto para estimar la demanda de oxígeno
y el KLa en este sistema.
Tiempo OD (mg/L)
(min)
-1 3.3
Aire off 0 3.3
1 2.4
2 1.3
3 0.3
4 0.1
5 0.0
Aire on 6 0.0
7 0.3
8 1.0
9 1.6
10 2.0
11 2.4
12 2.7
13 2.9
14 3.0
15 3.1
16 3.2
17 3.2
Tiempo OD
(min) (mg/L)
1 1
2 3
2.5 4
3 5
4 6.5
5 7.2
10. Un fermentador opera con 120 L de medio con un agitador con dos rotores de disco y
HL/T= 1.27. La fermentación se realiza a 45 °C y 2 atm de presión absoluta y una aireación de
1,8 vvm. En esas condiciones el microorganismo presenta un µmax de 0.4 h-1, el caldo tiene
una densidad 1070 g/L y viscosidad de 3,5 cp. El rendimiento de oxígeno en células es 1,47
g/g y la concentración de oxígeno disuelto no debe ser menor que un 15 % de la
concentración de saturación. La potencia sin aireación es de 4,2 KW/m3. Si,
3. Un fermentador opera con 120 L de medio con un agitador con dos rotores de disco y
HL/T= 1.27. La fermentación se realiza a 45 °C y 2 atm de presión absoluta y una aireación de
1,8 vvm. En esas condiciones el microorganismo presenta un µmax de 0.4 h-1, el caldo tiene
una densidad 1070 g/L y viscosidad de 3,5 cp. El rendimiento de oxígeno en células es 1,47
g/g y la concentración de oxígeno disuelto no debe ser menor que un 15 % de la
concentración de saturación. La potencia sin aireación es de 4,2 KW/m3. Si,
4. Un fermentador piloto tiene un volumen de operación de 550 litros, HL/T= 1,0; D/T=0.33 y
dos rotores de turbina de disco. Para una cierta fermentación por lotes las condiciones de
operación son de 30°C, 295 rpm y 1.25 vvm, obteniéndose un crecimiento celular de 18 g/L.
Con estas condiciones µ es 0.2 h-1, YO2 es 1.4 g/g, la densidad del fluido es 1050 g/L y la
viscosidad es 10 cp. Durante las experiencias se ha determinado la siguiente correlación:
𝑃𝑔 0.8
𝐾𝑙𝑎 = 6,0 ∗ ∗ 𝑣𝑠0.6
𝑉
Donde: Kla (h-1), Pg (W), V (m3) y vs (m/s)
Se desea operar con una concentración de oxígeno disuelto no inferior a un 15 % del valor de
saturación y se sabe que la constante de Henry para oxígeno en agua a 30 °C es de 4,75*10 4
(atm/ fracción mol). Determinar la eficiencia de adsorción de oxígeno y la composición del
gas de aireación para que no se presente limitación por oxígeno.