CULTIVOS Y SIEMBRAS DE LOS MICROORGANISMOS

“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

Universidad Nacional Agraria La Molina

Departamento de acuicultura e industrias pesqueras

Curso:
Microbiología Pesquera

Práctica:
5- Efectos del ambiente en el crecimiento y muerte de los
microorganismos

Profesora:
Ing. Nancy Martínez Ordinola

Alumno:
N. Ruth Yupanqui Quispe

Realización de la práctica:
24/04/18

Entrega del informe:

01/04/18

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I.INTRODUCCIÓN

Los objetivos de la práctica son:

El objetivo de la práctica es de conocer la influencia ambiental sobre los microorganismos para el control de las
actividades microbianas.

I. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
1. Temperatura
http://www.redalyc.org/pdf/579/57937307.pdf

2. Potencial Redox
https://www.fing.edu.uy/iq/cursos/qica/repart/qica1/desinfec.pdf
Oxidantes
En este caso debe considerarse con mucha atención el hecho de que capacidad oxidante no es
sinónimo de capacidad desinfectante ya que hay varios mecanismos en juego, mas allá que el
propio potencial redox de la reacción agente-microorganismo.
2.1.1. Halógenos (Cl2, Br2, I2) La acción del cloro es, principalmente, por oxidación del
protoplasma. El iodo es un agente germicida usado bajo forma de solución alcohólica o como
iodoformo. Tiene una buena acción contra las esporas. Interacciona con enzimas.
2.1.2. Ozono (O3)
2.1.3. Permanganato de potasio (KMnO4)
2.1.4. Peróxido de hidrógeno (H2O2)

3. pH
http://repositorio.uchile.cl/bitstream/handle/2250/111174/bahamondez_ci.pdf?sequence=1

La Etapa I puede durar años. Ésta se desarrolla a un pH cercano a la neutralidad, y la oxidación

en esta etapa es en su mayoría química, a causa del oxígeno atmosférico. La oxidación del
mineral causa la generación de sulfatos y de ácido, el cual es rápidamente neutralizado por los

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minerales consumidores de ácido presentes en la roca. Cuando carbonatos, silicatos y otros

minerales alcalinos dejan de estar disponibles, el pH de la solución comienza a disminuir
gradualmente. Si la generación de acidez en el tiempo continúa mayor a la capacidad del
mineral para neutralizar, el pH continuará acidificándose hasta alcanzar las etapas II y III, de la
generación del drenaje ácido. Durante la Etapa II el pH ya es inferior a 4,5, permitiéndose,
además de oxidación química de los minerales sulfurados, la oxidación mediada por distintos
microorganismos acidófilos, aumentando la velocidad de generación de ácido (Chotpantarat
2010). En esta etapa el pH de la solución es menor, y se observa una mayor concentración de
sulfato y metales disueltos. En la Etapa III el pH que rodea a los minerales es aún menor, y la
oxidación biológica de los minerales sulfurados es predominante. En esta etapa la velocidad de
oxidación es la mayor del proceso de generación de drenaje ácido. Cuando una bacteria hierro
oxidante está presente en condiciones ácidas, la oxidación de un amplio rango de minerales
sulfurados puede llegar a ser 106 veces más rápida que la oxidación química (Singer 1970). El
principal oxidante de esta etapa es el hierro férrico.

4. Luz Ultravioleta (UV)

5. https://www.fing.edu.uy/iq/cursos/qica/repart/qica1/desinfec.pdf

Radiación Cuanto más intensa sea la radiación, más efectiva será la eliminación de
microorganismos. Se puede utilizar radiaciones ionizantes o no ionizantes. Las ionizantes (rayos
X y rayos γ) son letales para los microorganismos, pero resulta difícil trabajar con ellas por ser
nocivas y caras. La luz ultravioleta (UV) es una radiación no ionizante y es el agente mas común
por su fácil y segura manipulación. Se trabaja fundamentalmente en 250 nm.

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II. MATERIALES Y MÉTODOS

1. Temperatura

Los materiales usados en la práctica fueron:

 Seis tubos conteniendo cada uno 2 mL de cultivo de una cepa de 24 horas.

 Seis placas Petri estériles.
 Matraz conteniendo Agar nutritivo fundido.
 Pipetas.
 Baño maría.
 Cepa: #37

Los pasos a seguir fueron:

1. Enumerar los tubos y placas del 1 al 6.

2. Del tubo N°1 tomar 0.5 mL de cultivo y colocarlo en la placa N°1; agregar aprox. 12 mL de Agar
fundido.

Se agrega el Agar fundido (45°C) en la placa Petri.

Se agrega 0.5 mL de cultivo en la placa Petri.

3. Mezclar y dejar solidificar.

4. El tubo N°2 llevar a baño marí por 10 minutos a 45°C, transcurridos los 10 minutos enfriar
bruscamente en agua fría. Una vez frío, tomar 0.5 mL y colocarlos en la placa N°2. Operar en igual
forma que en el caso anterior.

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5. Con los cuatro tubos restantes, operar de igual manera pero elevando la temperatura del baño maría
10°C más cada vez que se coloque un tubo, por lo tanto el tubo N°6 la temperatura será de 85°C.

Placa N°1: testigo de temperatura

2. Potencial redox

Los materiales usados en la práctica fueron:

 Cepas de microorganismos a estudiar: #37

 Placa Petri con el medio Agar cerebro corazón (ACC).
 Sistema de anaerobiosis: jarra anaeróbica.

Los pasos a seguir fueron:

1. Tomar la placa de ACC y dividirla en dos partes con la ayuda de un plumón.

2. Sembrar en cada espacio las cepas que se indiquen.

Cultivo de Salmonella sp en la placa.

Placa de ACC con cepas cultivadas.
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3. Colocar las placas en la jarra anaeróbica.

En la jarra anaeróbica se coloca una

vela prendida para que el oxígeno se
desgaste de esta forma.

4. Incubar a 37°C por 24 horas.

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3. pH

Los materiales usados en la práctica fueron:

 Cepa a estudiar: Staphylococcus aureus.

 Seis tubos con caldo nutritivo con los siguientes rangos de pH: 4, 5, 6, 7, 8 y 9.

Los pasos a seguir fueron:

1. Sembrar cada tubo por suspensión con la cepa proporcionada.

2. Incubar a 37°C por 24 horas.

Tubos sembrados listos para la

incubación.

4. Luz Ultravioleta

Los materiales usados en la práctica fueron:

 Cultivo de la cepa a analizar en caldo nutritivo: Staphylococcus aureus.

 Tubos conteniendo 10 mL de agar nutritivo fundido.
 Placas estériles.
 Pipetas.
 Gabinete microbiológico: lámparas de luz UV.
 Cartón circular estéril cortado en uno de los cuadrantes.

Los pasos a seguir fueron:

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Tomar la cepa proporcionada 0.1 mL y colocar por triplicado en placas Petri estériles. Agregar aprox. 10 mL de
agar fundido (45°C).

Homogeneizar bien la dilución con el agar, dejar enfriar y solidificar.

Enumerar las placas del 1 al 3.

1. La placa 1 utilizarla como patrón de comparación.

2. Llevar las placas 2 y 3 al gabinete microbiológico para exponerlas a la radiación UV, utilizando para
esto el cartón circular cortado en un cuadrante en vez de la tapa.

Placas en el gabinete microbiológico.

3. Exponer cada cuadrante de la placa 0, 5, 10 y 15 minutos respectivamente, a la luz UV.

4. Luego tapar y envolver la placa 2 en papel y la placa 3 exponerla 10 minutos a la luz solar.
5. Incubarlas a 37°C por 24 horas.

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III. RESULTADOS

1. Temperatura

Las placas incubadas presentaron los siguientes resultados:

Resultados de la incubación de las

placas Petri. Lado izquierdo es
muestra del Tubo N°1 (100%). Lado
derecho muestra del Tubo N°2
(90%).

Resultados:

Contar colonias de cada una de las placas y graficar el número de colonias vs temperatura:

-No se contó con una cuenta colonias disponibles

-Se trabajó la gráfica con los porcentajes vs temperatura

N° Placa / Tubo
Temperatura%vs
Crecimiento
% crecimiento
1-control 100
120
2 90
100
3 75
% Crecimiento

4
80 70
5
60 40
6
40 25
20
0
30 40 50 60 70 80 90
Temperatura (T°C)

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2. Potencial Redox

Hay mayor crecimiento en el lado de la #52

cubriendo casi todo el espacio que le
correspondía. También hay crecimiento de en #36,
pero es menor a comparación al de #52

Resultados:

Observar si hay crecimiento de cada una de las cepas:

Lado derecho: crecimiento de #52.

Lado izquierdo: Muy escaso crecimiento de #36

Determinar si estas son anaerobias o aerobias:

Lado derecho: Anaerobia la cepa #52.

Lado izquierdo: Aerobia la cepa #36

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3. pH

Resultados de los tubos en diferentes pH.

La muestra patrón se encuentra al extremo
izquierdo. Los tubos se encuentran
ordenados de menor a mayor a mayor
turbidez.

Resultados:
-Observar la turbidez en cada tubo y calificar comparando con un patrón mediante cruces

pH Turbidez

4 +

5 +

6 +

7 +

8 +++

9 +

Se observa una mayor turbidez en los tubos con pH de 8 , y menor turbidez en los tubos con pH 4 y 5.sin
embargo el 9 no presento .Posiblemente por la poca siembra. El orden de turbidez correspondiente es de:

N° tubos - pH:

4 5 6 7 9 8

(-) Turbidez (+)

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4. Luz Ultravioleta

Resultado de la placa 1
está en la izquierda.
Mientras que la placa 2, la
que se encontraba oculta
de la luz está a la izquierda

Resultados:
Hacer un recuento relativo de las colonias
Expresar en % el microorganismo inhibido

N° %Inhibición% vs Temperatura
Inhibición
Característica
placa
120%
1 Testigo 100% La placa que estuvo expuesta a la luz, es decir
100% 0 min 100% la placa 3, presenta menos crecimiento de
5 min 70% m.o. La inhibición del crecimiento de
280% Oculta
10 min 50% microorganismos en las placas se da en el
60%
15 min 45%
orden:
40% 0 min 20%
Expuesta a la 5 min 20%
320%placas:
N°
luz 10 min 70%
0% 15 min
P1 80% P2 P3
0 min 5 min 10 min 15 min

Oculta Expuesta a luz

(-) %Inhibición (+)
IV. DISCUSIO
N
ES

1. Temperatura

El crecimiento de la cepa Staphylococcus aureus ocurre en un amplio rango de temperatura [6.5 – 50] ° C,
siendo óptimo [30 – 40] °C. Es por eso que en la práctica la cepa se encuentra en un buen porcentaje en las
placas iniciales, observándose un decrecimiento en cuando la temperatura aumenta sobre todo en las
temperaturas más altas (75 y 85 °C).

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2. Potencial redox

La Salmonella sp es considerada una bacteria anaeróbica facultativa, es decir, que puede realizar sus funciones
necesarias sin necesidad de oxígeno. Usa oxígeno cuando se encuentra presente, pero también puede cambiar
a fermentación cuando el oxígeno no es disponible. Es por eso que su crecimiento en la placa es abundante.

El crecimiento de colonias de Staphylococcus aureus se debe a que también se trata de una bacteria
anaeróbica facultativa, crecen por respiración aeróbica o fermentación que produce ácido láctico.

Hay una competencia por la captación del oxígeno en el ambiente cerrado, placa Petri, para usarlo por su
energía hasta que se termina en el medio.

3. pH

El rango de pH de la cepa Staphylococcus aureus es de [5 - 8], por lo que se observa en los resultados como
hay un crecimiento de microorganismos siendo mucho menor en 4, pero en mayor cantidad en los pH 6 y 7.

4. Luz Ultravioleta

Se observó que para la cepa Staphylococcus aureus hay una mayor inhibición en la placa que ha permanecido
expuesta a la luz (N°3) debido a que la luz visible tiene efectos negativos sobre las bacterias de forma indirecta,
en el fenómeno de sensibilización fotodinámica. La luz visible de fuerte intensidad es capaz de matar las
bacterias, debido a que ciertas moléculas de estas absorben la energía; también se puede generar oxígeno
singlete, que es un radical muy reactivo (oxidante) que puede destruir la célula con rapidez.

No es conveniente exponer las bacterias en cultivo a la luz, sino que habrán de cultivarse en oscuridad.

V. CONCLUSIÓN

Se ha observado en la práctica que los factores exógenos influyen en el crecimiento de los microorganismos,
por lo que se debe tomar en cuenta las propiedades y rangos de estos factores (mínimos, óptimos, máximos)
para el cultivo adecuado de estos microorganismos, o para la eliminación de estos.

VI. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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