Escuela Superior de Ingeniería

Química e Industrias Extractivas

MARZO 2019
Ing. Lilia Palacios Lazcano.

1
➢FUNDAMENTOS

➢INSTRUMENTACION

➢ANALISIS CUALITATIVO

➢ANALISIS CUANTITATIVO

➢APLICACIONES

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INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS DE SEPARACIÓN

➢DE EQUILIBRIO QUÍMICO

MÉTODOS DE SEPARACIÓN ➢ CONTROLADAS POR LA VELOCIDAD

➢MECÁNICA

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 MÉTODOS DE SEPARACIÓN
DE EQUILIBRIO QUÍMICO DE VELOCIDAD

➢Evaporación ➢Espectrometría de masas

➢Destilación ➢Electrodiálisis
➢Absorción ➢Ósmosis inversa
➢Cristalización ➢Electrólisis con reacción
➢Ósmosis ➢Difusión gaseosa
➢Secado de sólido ➢Ultrafiltración
➢Lixiviación ➢Permeabilidad de gases
➢Flotación
➢CROMATOGRAFÍA MECÁNICO
➢Deshidratación
➢Separación magnética ➢Filtración
➢Centrifugación
➢Sedimentación
➢Precipitación electrostática

4
 ¿Y PARA QUÉ? físicos, mecánicos, fisicoquímicos, etc.
Procedimientos
Para aislar uno o varios componentes de una mezcla

MUESTRA

SÓLIDA LÍQUIDA GASEOSA

5
 Clasificación
Cromatografía

Gases Líquidos

Gas - sólido Gas--líquido Plana

Capa fina Papel

Líquido Líquido Fase químicamente Intercambio Exclusión

Sólido Líquido unida iónico

Permeación en gel Filtración

6
CROMATOGRAFÍA : Separación en sus componentes
de una mezcla como resultado de
la distribución diferencial de los
elementos solubles, entre dos
fases una fija y una móvil

7
CROMATOGRAFÍA DE GASES:

Técnica de separación que permite analizar mezclas

complejas.

La separación de los compuestos se efectúa entre una fase móvil

(gas) y una fase estacionaria (sólida o líquida).

La separación se lleva a cabo mediante equilibrios de distribución

de los analitos entre las dos fases.

8
➢Los compuestos de la muestra pasan parte del tiempo en
la fase estacionaria y el tiempo restante son arrastrados
por el gas portador a través de la columna.

➢El tiempo de retención de los compuestos de la muestra

es distinto para cada uno, por lo cual emergen de la columna
separados.

➢Ofrece rapidez y alta resolución en la separación de un

amplio rango de compuestos.

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➢Análisis de compuestos suficientemente volátiles (presión
de vapor alta o temperatura de ebullición baja).

➢Compuestos estables a la temperatura de análisis

(compuestos no lábiles).

➢La muestra debe estar en fase gaseosa durante todo el

sistema.

10
 En cromatografía la regla de oro es:

“Lo semejante disuelve a lo semejante”

11
En la Cromatografía ocurren dos fenómenos importantes:

ADSORCIÓN.- El fenómeno es de SUPERFICIE y se lleva a cabo

por afinidad de la muestra con la fase estacionaria SÓLIDA

Depende de:

• La naturaleza de la sustancia adsorbida.

• La temperatura.
• La naturaleza y estado desubdivisión del adsorbente.
• La concentración.

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PARTICIÓN.- Este fenómeno se lleva a cabo en el seno de un
liquido soportado que funciona como fase
estacionaria

Depende de la tendencia que tiene el analito a disolverse

selectivamente en la fase estacionaria.

13
➢CROMATOGRAFÍA GAS-SÓLIDO (CGS)
• La fase móvil es un gas y la fase estacionaria es
un sólido.

➢CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO (CGL)

• La fases móvil es un gas y la fase estacionaria
es un líquido soportado en un sólido.

14
 Proceso de separación

  
Tiempo 1 
  
  


 

    
  


Tiempo 2     


   


Fase móvil (gas de arrastre) Fase estacionaria

Muestra 

15
 Proceso de separación

   
Tiempo 3      

 

Cromatograma
Respuesta

Línea base
Tiempo (minutos)

16
Sistema Cromatográfico de Gases

17
 Gas de arrastre

➢Transporta los componentes de la muestra.

➢ Crea una matriz adecuada para el detector.

Características:
➢Químicamente Puro (Grado cromatográfico).
➢ Libre de humedad e hidrocarburos.
➢ Químicamente inerte.
➢ Se selecciona de acuerdo al detector.
➢ Económico y fácilmente disponible.
➢ Entre los tipos de gas de arrastre que existen están:
He, Ar, N2, H2, Ar / CH4.

18
 Inyector
➢Sistema de muestreo.

➢ Introducción y evaporación de la muestra.

➢ La muestra se introduce y evapora instantáneamente.

➢ La muestra es arrastrada en forma de vapor a la columna.

Inyección:

Muestras líquidas.  Jeringa hipodérmica.

Muestras gaseosas.  Válvulas especiales de vidrio o acero.

 Jeringa con émbolo de teflón y cierre
hermético.

Muestras sólidas.  Disolver en solvente.

19
➢Permiten la inyección y vaporización de la muestra.

➢La muestra debe inyectarse y evaporarse

instantáneamente para evitar al máximo el
ensanchamiento de las bandas.

20
➢Tipos de inyectores

• Split/splitless
• Empacado
• On-Column
• On-Column programado
• split/splitless programado

21
DO

Entrada del gas

22
INYECTOR SPLIT/SPLITLESS PROGRAMADO

Purga del
septum Entrada de gas
Salida del divisor

Difusores de calor
Ventilador de
enfriamiento Inserto de vidrio
Punto de división Bloque de calentamiento

Columna
capilar

23
 Headspace.

La muestra se deposita en un vial, el cual se cierra

herméticamente, se calienta y se equilibra, se toma una
alícuota del vial cerrado y se transfiere directamente al
sistema cromatografico de gases.

Se pueden analizar muestras sólidas, liquidas y gaseosas.

Es valido cuando solo interesa el vapor sobre la muestra.
Se utiliza en perfumes o productos alimenticios.
Orgánicos volátiles en orina, muestras ambientales, sangre,
aguas residuales y agua potable.

24
Headspace.

25
 COLUMNAS.
CLASIFICACIÓN

➢Empacadas o rellenas

➢Capilares

➢Megaboro o semicapilares

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 COLUMNAS EMPACADAS
➢Tubo de vidrio o metal. ➢Eficiencias bajas.

➢Rellena de un soporte granular

cubierto por una película de la fase
estacionaria.

➢Longitud: 1 a 10 m.

➢Diámetro interno: 2 a 4 mm.

➢Flujo: 30 a 100 ml/min

➢Capacidad de carga grande.

27
➢Volumen de inyección: 2 a 5 l.
COLUMNAS CAPILARES

➢Tubo capilar de 0.1 a 0.53 mm

➢La fase estacionaria está depositada en la pared del tubo.
➢Longitud: 15 a 100 m.
➢Flujo: 0.5 a 3.0 ml/min
➢Capacidad de carga pequeña.
➢Volumen de inyección < 1 l

28
 ➢Eficiencias
COLUMNAS CAPILARES
altas.

➢Empleo de divisores de flujo.

• Disminuyen la cantidad de muestra que pasa a la columna.

• Aumenta la velocidad lineal del gas acarreador en el sistema

de inyección.

• Disminuye la difusión molecular.

29
TIPOS DE COLUMNAS CAPILARES

➢WCOT (Columnas tubulares abiertas de paredes impregnadas)

• Fase líquida depositada sobre la pared del tubo.

• Eficiencias altas.

• Capacidad de carga según el espesor de la película.

• Silica fundida.

• Muestras con separaciones críticas al final de la corrida.

30
TIPOS DE COLUMNAS CAPILARES

➢SCOT (Columnas tubulares abiertas con soporte impregnado)

• En la pared interior del tubo se deposita un soporte que se recubre de fase
estacionaria.
• Capacidad de carga alta.
• Eficiencia excelente.
• Análisis de trazas.
• Cantidad de muestra limitada.
• Tiempo de análisis corto.
• GC-MS

➢PLOT (Columnas capilares abiertas de capa porosa)

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VENTAJAS DE LAS COLUMNAS CAPILARES SOBRE LAS COLUMNAS
EMPACADAS
➢Proporcionan una separación mejor en un tiempo igual o más
corto que una columna empacada.
➢Puede conseguirse la misma resolución que en una columna
empacada en menor tiempo.

32
EFICIENCIA DE LAS COLUMNAS

➢La eficiencia de la columna depende de muchas variables y es

una función compleja de diferentes parámetros tales como la
difusión de los compuestos de la muestra entre la fase estacionaria
y la fase móvil.

33
EFICIENCIA DE LAS COLUMNAS

➢Factores que influyen en la eficiencia.

➢Longitud de la columna.

➢Naturaleza de las fases.

➢ Fase estacionaria: Viscosidad (a baja temperatura disminuye la

eficiencia).

➢ Fase móvil: Viscosidad (dispersión de la velocidad lineal a lo

largo de la columna; mejor gas H2, le siguen N2, He y Ar) y
coeficiente de difusión (las moléculas de soluto se difundirán
mejor en un gas con menor tamaño de partícula o molecular; el
mejor es el H2)
34
EFICIENCIA DE LAS COLUMNAS

➢Cantidad de fase estacionaria (cuanto más pequeña mejor

eficiencia).

➢Velocidad del gas acarreador.

➢Cantidad de muestra inyectada.

➢Temperatura de la columna.

➢Diámetro de la columna.

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 ECUACIÓN DE VAN DEEMTER
APTE= A + B + C V
V

Donde:

A = 2λd’

B = 2γDg

λ = factor de empaque

d’ = diámetro promedio de la partícula

γ = factor de corrección para los espacios intermoleculares

Dg = coeficiente de difusión de la fase gaseosa

36
 2

8 K (DF)
CV =
2 2

DL (1+K) *Π
K = COEFICIENTE DE TRANSPORTE

DF = ESPESOR MEDIO DE LA PELÍCULA

DL = COEFICIENTE DE DIFUSIÓN EN LA FASE LÍQUIDA

37
EFICIENCIA DE LAS COLUMNAS

38
 SELECCIÓN DE COLUMNAS

➢La selección acertada de la composición de la columna

depende de la separación que se realizará.

39
 TIPOS DE FASES ESTACIONARIAS

➢Fases no polares: Para la separación de sustancias poco polares

o no polares. Escualeno, OV-101.

➢Fases ligeramente polares: Separación de sustancias no polares

y no polares. OV-17

➢Fases de polaridad media o alta: Ideales para hidrocarburos no

aromáticos. Carbowax.

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 Fase liquida Aplicaciones
Fase no polar
Elite-1 (100 % Dimetilpolisiloxano) Aminas, Hidrocarburos, Pesticidas, PCBs,
Fenoles, Saborizantes y fragancias.
Elite-5 (5 % Difenil – 95 % Dimetilpolisiloxano) Alcaloides, Drogas, Compuestos halogenados,
Semivolatiles, pesticidas.
Fase medianamente polar
Elite-1301 (6 % Cianopropilfenil – 94% Aroclores, Alcoholes, Pesticidas.
Dimetilpolisiloxano)
Elite-1701 (14 % Cianopropilfenil – 86 % Pesticidas, Herbicidas, Aroclores.
Dimetilpolisiloxano)
Elite-17 (50 % Fenil – 50% Metilpolisiloxano) Drogas, Glicoles, Pesticidas, Esteroides

41
 Fase polar
Elite-225 (50 % Cianoprofenil – 50 % Azucares como Acetatos de aditol
Metilpolisiloxano)
Elite-WAX (Polietilenglicol) Solventes, glicoles, Alcoholes
Elite-FFAP (Polietilenglicol - Acido modificado) Ácidos, Alcoholes, Aldehídos, Acrilatos,
Cetonas, Nitrilos.
Fases especiales para área ambiental (medianamente polar)
Elite-Volátiles Orgánicos volátiles
Elite-608 PCBs, Pesticidas clorinados, Herbicidas
Elite-624 Orgánicos volátiles
Fases especiales para área ambiental (no polar)
Elite-5MS Semivolatiles

42
DETECTOR SELECTIVIDAD DETECTABILIDAD
TCD UNIVERSAL 0.2 ppm
FID UNIVERSAL PARA HIDROCARBUROS < 10 pg/seg
ECD HALÓGENOS, PERÓXIDOS, QUINONAS, ÓRGANO < 0.2 ppb
METÁLICOS, GRUPOS NITRO
FPD SULFURO, FÓSFORO 0.1 ng S/seg
1 PG P/seg
TSD FÓSFORO, NITRÓGENO < 0.05 pg P/seg
< 0.1 pg N/seg
ELCD COMPUESTOS ORGÁNICOS CON NITRÓGENO Y 2 pg N/seg
SULFURO 2 pg S/seg
0.5 pg Cl/seg
PID AROMÁTICOS, FENOLES, HIDROCARBUROS < 10 pg/seg
INSATURADOS

43
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD

44
DETECTOR DE IONIZACION DE FLAMA

Colector
Flame jet

Air in

Hydrogen in

Columna

45
DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES

Colector

63Nickel foil

Make-up gas in

Columna

46
DETECTOR DE NITROGENO FOSFORO

Collector
Bead power connection

Air in
Bead Hydrogen in

Column connection

47
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD ELECTROLITICA

➢Linearidad mayor de 106

➢Temperatura de operación: 100oC to 450oC
➢Sensitividad: 5 x 10-13 gCl/sec

➢Selectividad: Cl a Hidrocarburos 106

48
49
50
➢Valores de retención corregido (Tiempo, Diatancia y volumen de
retención)

➢Adición de patrón

➢Series Homólogas

➢Dos columnas

➢Multicolumnas

➢Técnicas Auxiliares: IR, RMN, Masas

51
Cuantificación por áreas o alturas.
• C  altura o área del pico

➢Métodos de cuantificación.
➢Normalización
➢Normalización con factor de Respuesta
➢Estándar externo
➢Estándar interno

52
 La cantidad de determinada sustancia es directamente proporcional
al área del pico obtenido en el cromato grama.

1 l INYECTADO
2 l INYECTADO

Existen varios métodos para cuantificar un pico cromatográfico,

siendo los mas comunes:

 Normalización con factor de respuesta de 1.0.

 Normalización.
 Estandarización externa.
 Estandarización interna.

53
 Normalización (factor de respuesta de 1.0)
Es el cálculo más simple.

El 100% de la muestra debe ser eluída e integrada.

 Proporciona un análisis aproximado.

En este método se supone que el por ciento de área es igual a la
concentración en %.

Todos los componentes en la muestra deben responder igual en el

detector.

54
 Normalización (factor de respuesta de 1.0)

Todos los componentes deben estar bien separados.

No es necesario conocer exactamente la cantidad inyectada.

 El % área puede ser muy precisa (reproducible)

El % área se utiliza para una rápida comparación como: ¿La muestra A
es la misma que la muestra B?

Él % área no debe reportarse como concentración ya que se requiere

calibración.

55
 A1 + A2 + A3 =  Ai n
Area % = ( Ai / Ai ) X 100
n=1

Asumiendo Ci % = Ai %
Ai = ÁREA DEL PICO INDIVIDUAL
An = SUMA DEL ÁREA DE TODOS LOS
PICOS
Desventajas:
No es aplicable a todas las muestras – toda la muestra debe ser eluida.
Proporciona análisis aproximado en muchos casos no es exacto.

56
 n
Area1 % = ( A1 / Ai ) X 100
n=1

Por ejemplo:

f1= f2 =f3 = 1.0

A1 = 10; A2 = 20; A3 = 20 AT = 50

C1 = (10 / 50) = 20 %

57
Es el cálculo más simple.

El 100% de la muestra debe ser eluída e integrada.

 Proporciona un análisis aproximado.

En este método se supone que el por ciento de área es igual a la
concentración en %.

Todos los componentes en la muestra deben responder igual en el

detector.

58
Todos los componentes deben estar bien separados.

No es necesario conocer exactamente la cantidad inyectada.

 El % área puede ser muy precisa (reproducible)

El % área se utiliza para una rápida comparación como: ¿La muestra A
es la misma que la muestra B?

Él % área no debe reportarse como concentración ya que se requiere

calibración.

59
 CUANTIFICACION ESTÁNDAR EXTERNO

➢Preparar una curva de calibración de los estándares

de interés.

➢Inyectar estándares de concentración conocida.

➢Graficar área vs. concentración.

60
CUANTIFICACION ESTÁNDAR EXTERNO

➢Inyectar la muestra problema.

➢Interpolar el área del analito de interés en la curva de

calibración.

➢Reportar la concentración del analito en la muestra

problema.

61
 Curva de calibración (Estándar Externo)

160000

140000

120000

100000
Area

80000

60000

40000

20000

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16

Concentración (ppm)

62
 CUANTIFICACION ESTÁNDAR INTERNO
➢Preparar una curva de calibración de los estándares de interés
más el estándar interno.

➢Inyectar estándares de concentración conocida.

➢Graficar relación de áreas vs. relación de concentración.

➢Inyectar la muestra problema, a la cual se le ha adicionado el

estándar interno.

63
CUANTIFICACION ESTÁNDAR INTERNO

➢Interpolar la relación de áreas del analito de interés y el

estándar interno en la curva de calibración.

➢Reportar la concentración del analito en la muestra

problema.

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 Curva de calibración (Estándar Interno)

16000

14000

12000
Relación de áreas

10000

8000

6000

4000

2000

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

65
Relación de concentraciones
Cada 5 alumnos prepararán una aplicación completa con los
lineamientos que se les indique
67