“Juntos descubriendo el futuro”

Laboratorio de Microbiología
Grupo 3

“Aislamiento e Identificación de Hongos y Levaduras”

Práctica 4

Equipo 2
Iris Darinka Gasca Arce - A01209323
María Esther Rodríguez Ríos - A01703245
André Omar Cano Barrera - A01703430
Luisa Fernanda Macías Muñoz - A01703457

Integrantes Calificación Observaciones

otorgada

Iris Darinka Gasca Arce 100

María Esther Rodríguez Ríos 100

André Omar Cano Barrera 100

Luisa Fernanda Macías Muñoz 100

Resumen
Los hongos son organismos eucariontes, no autótrofos, unicelulares o
pluricelulares, que poseen una organización biológica muy diferente a otros
microorganismos. Los hongos están formados por filamentos en forma de tubos que
poseen los organelos del hongo y a su vez componen el micelio; dentro de esta
clasificación podemos encontrar: setas, mohos y levaduras. Estas últimas, son un tipo
de hongo unicelular, formadas por pequeñas células ovales, a diferencia de la
mayoría de hongos, que si bien, viven el suelo o son endófitos (crecen en asociación
con ciertas estructuras de las plantas), las levaduras tienden a desarrollarse en
sustancias hipertónicas de glucosa. Con lo ya conocido acerca de hongos y
levaduras, el eje temático de esta práctica fue observar e identificar en hongos y
levaduras, así como, sus características morfológicas y formas de reproducción, con
ayuda del aislamiento en cultivos y microcultivos. Para poder cumplir con el objetivo,
fue primordial conseguir una muestra adecuada, nosotros elegimos para hongos una
mandarina y para levaduras, levadura en polvo (previamente activada) y un pepino,
posteriormente para el cultivo usamos NYDA en levaduras y APD para los hongos,
estos cultivos se inocularon igual que un cultivo de bacterias. Los microcultivos, por
otro lado se usó NYDA para las levaduras y para hongos se contó con AMS y APS, y
se inocularon por técnica del “piquete”. Todos los medios fueron sólidos. Los cultivos,
permitieron la observación de características macroscópicas (color, aspecto, tamaño)
y los microcultivos la observación de características microscópicas (tipo de hifas, tipo
de esporas). Lo obtenido en la parte de hongos, nos permitió ver lo que parce un
mismo tipo de hongo, en diversas etapas de crecimiento, mientras que en las
levaduras lo que sucede con una muestra contaminada y como esto no es detectable
a simple vista.

Objetivo de la práctica
Aislar e identificar hongos filamentosos o mohos y levaduras (hongos
unicelulares) por medio de su aislamiento, cultivo y microcultivo para el estudio de sus
características morfológicas y de reproducción.

Resultados obtenidos
Tabla 1. Observaciones macroscópicas

LEVADURAS

MEDIO NYDA NYDA

MUESTRA Pepino Levadura en polvo

CARACTERÍSTICAS -Forma: Puntiforme -Forma de la colonia: Circular

-Color: Amarillo claro, -Color: Amarillo claro, casi
transparente || Amarillo crema, blanco.
oscuro -Aspecto: Cremoso
 -Aspecto: Cremoso || -Tamaño: Mediano
Algodonoso, Arenoso -Borde: Regular y liso
-Tamaño: Pequeños || Mayor
tamaño
-Borde: Definidos || Irregulares

OBSERVACIONES Se pudieron observar dos Parecen ser levaduras, sin

tipos de microorganismos, contaminación alguna.
con características
diferentes, ocasionados por
posible contaminación. No se
puede saber si alguno es
levadura. El tipo 2 (letras
cursivas) se localizó en
orillas.

FOTO

Fotografía 1 tomada por Iris Gasca Fotografía 2 tomada por Iris Gasca

HONGOS

MEDIO AMS APD

MUESTRA Mandarina

CARACTERÍSTICAS -Color del micelio: blanco, -Color del micelio: café

con tonalidades cafés y claro, en tonalidades
verdes. verdes, con blanco.
-Aspecto del cultivo: terrosos, -Aspecto del cultivo:terroso,
algodonoso algunas partes
-Tipo de desarrollo: en algodonosas.
colonias, con formas -Tipo de desarrollo: en
circulares, aisladas. colonias, aisladas de gran
tamaño.

OBSERVACIONES Colonias más pequeñas. Tuvo mayor crecimiento,

que la muestra se puede
deducir que son el mismo
hongo. El cambio de color
 se puede relacionar a la
maduración de las esporas.

FOTO

Fotografía 3 tomada por Iris Gasca Fotografía 4 tomada por Iris Gasca

Tabla 2. Observaciones microscópicas

Levaduras

Medio de cultivo NYDA NYDA

Muestra Levaduras (Saccharomyces) Pepino

Observaciones A 10X de aumento se A 10X de aumento se

observaron estructuras fibrosas observaron estructuras fibrosas
de forma muy tenue. de forma muy tenue.
Al final del análisis visual no se Al final del análisis visual no se
identificaron organismos identificaron organismos
levaduriformes, sólo hifas levaduriformes, sólo hifas
aisladas no desarrolladas. aisladas no desarrolladas.

Fotografía (10X)

Fotografía 5 tomada por Iris Gasca Fotografía 6 tomada por Iris Gasca
Fotografía (40X)

Fotografía 7 tomada por Iris Gasca

Hongos

Medio de cultivo APD (microcultivo) AMS (microcultivo)

Muestra Mandarina Mandarina

Observaciones Hifas: Septadas. Hifas: Septadas.

Esporas: Conidiosporas - Esporas:
Pequeñas, de forma redonda a
ovoide.
Se encontró un crecimiento
vasto en los bordes del
microcultivo, y varios micelios
de formas irregulares (no
siguiendo el patrón de la
punción del asa de cultivo) en el
centro de éste (ver ejemplo en
fotografía a 10X de aumento).
Presentó coloración verdusca-
marrón de los micelios,
particularmente en los del
centro del cultivo.
Conidiosporas -
Pequeñas, de forma redonda a
ovoide.
Su crecimiento se encontró
mayormente guiado por las
punciones realizadas por el asa
de cultivo. No se encontraron
otras áreas de crecimiento
destacables en el microcultivo.
Presentó coloración verdusca-
marrón del micelio en las áreas
de mayor concentración.
 Fotografía (10X)

Fotografía 9 tomada por Iris Gasca

Fotografía 8 tomada por Iris Gasca

Fotografía (40X)

Fotografía 11 tomada por Iris Gasca

Fotografía 10 tomada por Iris Gasca

Discusión de resultados
En la presente práctica se trabajó en el aislamiento e identificación de hongos
y levaduras en muestras contaminadas como pepino y mandarina, además de
reactivar una levadura que también se estudió.
En el caso del pepino, una muestra excesivamente contaminada no sólo por
hongo sino también por bacterias, no se pudo lograr el cometido de la práctica, ya
que en el medio de cultivo no se pudo aislar el hongo, había una presencia tanto de
bacterias como hongos que no permitían estudiar específicamente a uno solo. Esta
prueba se descartó de la práctica dado que el cultivo se realizó únicamente para tener
probabilidad de aislar a un único organismo.
En el caso de la levadura, se reactivó una levadura Saccharomyces, la cual es
un modelo de estudio biotecnológico y gran muestra para observar las características
morfológicas generales de las levaduras. Las diferentes especies que encontramos
en el género saccharomyces es la levadura del pan, vino y de la cerveza, por lo que
su estudio en el laboratorio es de uso común, entre otras especies que incluso llegan
a ser patológicas. Este género pertenece al grupo de los ascomicetos, uno de los más
grandes en el reino fungi, las características morfológicas de este grupo son hongos
de micelio tabicado que producen ascosporas endógenas. (Consejo Superior de
Investigaciones Científicas (CSIC). Delegación de Cataluña. s.f). A pesar de que a
simple vista se logró observar un crecimiento en el medio NYDA, en las observaciones
microscópicas no se diferenciaron levaduras. Esto pudo ser debido a contaminación
en el cultivo, a pesar de que la levadura fue reactivada dentro del laboratorio. Cabe
mencionar que la situación de contaminación encontrada en este caso fue muy similar
a la obtenida en el cultivo de organismos del pepino, dado que en ninguno de los dos
se logró identificar algún tipo de levadura y en las observaciones se encontraron los
mismos resultados. Visualmente sólo fueron diferenciadas algunas hifas pequeñas,
no desarrolladas y aisladas entre sí.
La mandarina es un cítrico que tiende a ser contaminado por el hongo
Penicillium digitatum, es el hongo que más afecta a los cítricos en postcosecha, por
sus esporas que aparecen en forma de polvo fino y son transportadas por ligeras
corrientes de aire. Es fácil identificar al hongo en cítricos infectados ya que puedes
observar un micelio blanco con esporas verdes, tal como podemos ver en nuestra
muestra. (Ladaniya, M. 2008).

Foto 12 tomada por Iris Gasca. Mandarina usada para la siembra de hongos en AMS y ADP.

El hongo Penicillium digitatum o también conocido como moho verde, no se

propaga al contaminar un fruta, sólo crece en el área afectada, por lo que si un fruta
se ve afectada por este hongo basta con removerla del empaque y pasar todos tus
frutos sanos a un nuevo empaque. Pero, sí suele ser muy contagiosa si se pone en
presencia de corrientes de aire ya que las esporas se liberan y llegan a contaminar
frutas adyacentes. (Ladaniya, M. 2008).
Penicillium digitatum puede crecer rápidamente en agar extracto de malta y
agar dextrosa de papa y crecen poco en agar czapek y otros medios sintéticos
similares. Sus colonia son planas, de color verde en la parte superior y en la parte
inferior pueden ser incoloras, amarillo crema o café opaco. Su textura es de pelos
cortos, finos, suaves y dispuestos de manera compacta. El hongo se reproduce a 5ºC
y deja de crecer y reproducirse en una temperatura de 37ºC. Las colonias pueden
llegar a un diámetro de 3mm y el olor siempre tiende a ser fuerte, por los metabolitos
volátiles que produce como el limoneno, valenceno, etileno, alcohol etílico, acetato de
etilo de metilo. Palou, L. (2014).
Conclusión
Al realizar esta práctica, pudimos observar las diferencias estructurales entre
las bacterias que fueron aisladas en la práctica tres con los hongos y levaduras que
logramos aislar en esta sesión. Aparte de producir los medios de cultivo para los
hongos, pudimos realizar una nueva técnica de cultivo que consistía en cubos de agar
sólido y punciones con muestreo de hongos.
Observando los hongos pudimos ver claramente su estructura de fibras. Una
de las partes más emocionantes fue la identificación de esporas en hongos, se
denotaba claramente sus colores y sus formas. En las levaduras se complicó
identificar a los microorganismos, no sabíamos qué buscar y cuando vimos las fibras
tan tenues consideramos que habíamos logrado nuestro objetivo. Para nuestra
sorpresa, y después de repeticiones de los portaobjetos, concluimos que no se
encontraron levaduras en nuestras observaciones debido a una contaminación de los
cultivos.
Con nuestro estudio morfológico en el laboratorio y en fuentes de datos
confiables, podemos inferir que el hongo presente en la muestra de mandarina
infectada era el hongo Penicillium digitatum o moho verde, esto fue claro ya que el
hongo es muy característico desde que es visible para nuestros ojos, además de que
este dato se corroboró con nuestras observaciones microscópicas y macroscópicas
del hongo aislado. En el caso de la levadura, se conocía previamente lo que que se
iba a estudiar, ya que se reactivó una levadura muestra que se obtiene en los
supermercados, sólo decidimos investigar más a fondo la presencia y trascendencia
de la levadura, para corroborar que efectivamente se estaba estudiando a la
Saccharomyces.
Próximamente utilizaremos este conocimiento para la realización de las
siguientes prácticas al igual que en nuestro proyecto final. En este último, será
crucialmente importante ya que definirá qué microorganismos conseguimos de
productos de belleza caducados. Este es un ejemplo de la influencia que tiene este
tipo de información en nuestra vida cotidiana. Finalmente, cabe recalcar que logramos
aislar satisfactoriamente a un tipo de hongo lo cual es reflejo directo de la práctica
que hemos obtenido en el transcurso la materia.
Cuestionario
1. Describe las diferencias que hay entre bacterias y hongos según los siguientes
criterios
a. Tipo de microorganismo.
b. Forma
c. Tamaño
d. Tipo de reproducción.

Bacterias Hongos

Tipo de microorganismo - Procariota - Eucariota

- Unicelular - Suelen ser
- Móvil (en su pluricelulares
mayoría) - No móvil

Forma ● Bacilos Dimórfica:

● Cocos ● Levaduras
● Vibrios ● Hongos
● Espiroquetas filamentosos (hifas)

Tamaño Microscópico (entre 0.2 y Macroscópico (entre 1 y

10 μm) 30 mm) y microscópico
(levaduras)

Tipo de reproducción Asexual (fisión binaria, ❖ Asexual

esporulación) (fragmentación del
micelio o hifas,
esporulación,
gemación)
❖ Sexual
(conjugación de
hifas haploides)
(Lecona Urrutia, 2014)
2. ¿Qué características macroscópicas se pueden observar en un cultivo de
hongos en el laboratorio?
● Color del micelio.
● Aspecto del cultivo: terroso, húmedo, aterciopelado, rugoso.
● Tipo de desarrollo: extensivo, en colonias.
(Laboratorio de Microbiología, Práctica 4)

3. ¿Cuál es el medio de cultivo para el desarrollo de hongos, qué valor de pH

debe tener y la temperatura de incubación?
Temperatura ambiente, entre los 20° y 30°C, con un pH ácido. Los
medios de cultivo sugeridos son: Agar Papa Dextrosa (APD), AMS y APS
(Laboratorio de Microbiología, Práctica 4)
 4. Describe las diferencias que hay entre bacterias y levaduras según los
siguientes criterios
a. Tipo de microorganismo.
b. Forma
c. Tamaño
d. Tipo de reproducción.

Bacterias Levaduras

Tipo de microorganismo - Procariota - Eucariota

- Unicelular - Unicelular
- Móvil (en su - Aerobio y
mayoría) anaerobio

Forma ● Bacilos ● Esférica

● Cocos ● Ovoidea
● Vibrios ● Elipsoidea
● Espiroquetas ● Alargada

Tamaño Microscópico (entre 0.2 y Microscópico (entre 1 y 9

10 μm) μm de ancho, de 2 a 20
μm de longitud)

Tipo de reproducción Asexual (fisión binaria, Asexual (gemación)

esporulación)
(Lecona Urrutia, 2014) (Carrilo & Audisio, 2007)
5. ¿Qué características macroscópicas se pueden observar en un cultivo de
levaduras en el laboratorio?
● Forma de las colonias.
● Color de las colonias.
● Aspecto: cremosas, brillantes, opacas, rugosas.
● Tamaño.
● Borde: liso, rugoso.
(Laboratorio de Microbiología, Práctica 4)
6. ¿Cuál es el medio de cultivo para el desarrollo de levaduras, qué valor de pH
debe tener y la temperatura de incubación?
Temperatura ambiente, entre los 20° y 30°C, con un pH ácido. El medio
de cultivo por excelencia es NYDA
(Laboratorio de Microbiología, Práctica 4) (Condiciones para el
desarrollo de las levaduras. (2013, July 18).
 Referencias bibliográficas
Carrillo, L., & Audisio, M. C. (2007). Levaduras. En L. Carrillo, M. C. Audisio,
N. V. Bejarano, S. E. Gómez Molina, E. G. Ancasi, & M. R. Benítez
Ahrendts, Manual de Microbiología de los Alimentos (Primera ed., págs.
40-46). Argentina. Obtenido de
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/4%20levaduras.pd
f
Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Delegación de
Cataluña. (s.f). La levadura de la cerveza y... del laboratorio. Febrero 21
de 2018, de Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).
Delegación de Cataluña. Sitio web:
http://seresmodelicos.csic.es/llevat.html
Condiciones para el desarrollo de las levaduras. (2013, July 18). Retrieved from
https://www.conocimientosweb.net/dcmt/ficha19506.html
Laboratorio de Microbiología. Práctica 4: Aislamiento e Identificación de
Hongos y Levaduras.
Ladaniya, M. (2008). POSTHARVEST DISEASES AND THEIR
MANAGEMENT. Febrero 21, 2018, de Science Direct Sitio web:
https://www.sciencedirect.com/topics/agricultural-and-biological-
sciences/penicillium-digitatum
Lecona Urrutia, A. (2014). Dominio Bacteria (Eubacteria). En A. Lecona Urrutia,
Biología I (Segunda ed., págs. 135-139). McGraw-Hill.
Lecona Urrutia, A. (2014). Reino Fungi. En A. Lecona Urrutia, Biología I
(Segunda ed., págs. 148-153). McGraw-Hill.
Palou, L. (2014). Penicillium digitatum, Penicillium italicum (Green Mold, Blue
Mold). Febrero 21, 2018, de Science Direct Sitio web:
https://www.sciencedirect.com/topics/agricultural-and-biological-
sciences/penicillium-digitatum