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MICROPROPAGACIÓN DE PLANTAS "DETECCIÓN, AISLAMIENTO Y

CARACTERIZACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS CAUSANTES DE


CONTAMINACIÓN DE LOS CULTIVOS IN – Vitro”

Universidad Francisco de Paula Santander


Facultad de ciencias agrarias y del ambiente
Ingeniería Biotecnológica
Cúcuta, Norte de Santander, Colombia

Resumen
En el laboratorio de biotecnología vegetal se realizó la detección, aislamiento y

caracterización de los hongos y bacterias causantes de contaminación de los cultivos, se llevó

a cabo aislando en agar PDA y nutritivo los hongos y bacterias luego del periodo de

incubación realizando así sus respectivas tinciones para su identificación. Logrando

identificar 3 hongos filamentosos y 2 bacterias Gram negativas.

Introducción.

La contaminación microbiana es un problema multicausal y la determinación de la fuente

que la origina se dificulta a menudo ya que los microorganismos pueden ser introducidos en

varios puntos del proceso productivo, principalmente, por ineficiente desinfección de los

explantes primarios utilizados en la fase de establecimiento, por inadecuada manipulación

del material vegetal, deficientes técnicas de asepsia, incompleta esterilización del medio de

cultivo, por fallos en el funcionamiento del flujo laminar, o a través del ambiente de los

locales de trabajo. Lo que se quiere lograr en el siguiente informe es aislar e identificar cuáles

son los microorganismos causantes de las contaminaciones en los cultivos in vitro.

Marco teórico
El cultivo in vitro de tejidos vegetales resulta una herramienta potente, básica y necesaria,

en la propagación de plantas que presentan dificultad para multiplicarse vegetativamente,

abarcando una serie de técnicas para su manipulación y control.

La contaminación microbiana es uno de los problemas más graves en la micropropagación

de especies vegetales a nivel mundial, produce cuantiosas pérdidas de material, tanto en los

trabajos de investigación como en la micropropagación comercial. Puede tener dos orígenes:

a) microorganismos que colonizan la superficie o el interior del explante (endófitos) y b)

microorganismos introducidos durante la manipulación en el laboratorio.

La mayoría de los hongos y levaduras aislados del cultivo de tejidos de plantas

pertenecen a géneros y especies que están ampliamente distribuidos y pueden encontrarse en

edificaciones, ambientes externos, en el aire de los laboratorios y como saprofitos o

patógenos en la superficie aérea de las plantas en el campo; las bacterias aisladas como

contaminantes del cultivo de tejidos son especies que no se conocen como patógenos de

plantas in vivo. A diferencia de los hongos y levaduras, estas bacterias no producen

crecimiento visible en el medio o síntomas en las plantas hasta un tiempo después de haber

sido introducidas dentro del cultivo de tejidos.

Metodología

Inicialmente obtuvimos los microorganismos a aislar de los frascos de siembra in vitro


realizadas durante el semestre.

1. Tomamos los frascos y seleccionamos los microorganismos a replicar o aislar.


2. Desinfectamos cuartos de siembra y llevamos a sembrar los frascos según las
especies en cajas con agar nutritivo (bacterias) y Sabouraud (hongos).
3. Llevar a incubar a temperatura 27 hongos de 3 a 4 días y temperatura 28°C de 24-
72horas bacterias.
4. Realizar tinciones para hongos y bacterias y observar al microscopio
5. Reportar.

Resultados

Cuadro1. Reconocimiento de contaminación en frascos de cultivos in-vitro (5 frascos).

Frasco 1 Frasco2 Frasco 3


Caracterización: Caracterización: Caracterización:
 Color blanco  Color dematraceo  Color dematraceo
 Textura algodonosa  Textura polvorienta  Textura polvorienta
Posiblemente: hongo Posiblemente: hongo Posiblemente: hongo

Frasco 4 Frasco 5
Caracterización: Caracterización:
 Color crema  Color trasparente
 Forma circular  Forma circular
 Elevación convexa  Borde entero
 Borde entero  Elevación plana
Posiblemente: bacteria Posiblemente: bacteria

Cuadro 2. Aislamiento de microrganismos en agar nutritivo y Sabouraud para hongos y


bacterias y reconocimiento microscópico 100x.

Caja 1 Caja 2 Caja 3


Confirmación hongo, Confirmación hongo, posiblemente Confirmación hongo,
posiblemente aspergillus niger posiblemente
beauveria bassiana tricoderma horzianum
Microscópica microscópica Microscópica
Conidio Base
Fialide conidioforo
Hifas Fialides

Conidioforo
Rama
Conidios
conidias conidioforo

Caja 4 Caja 5
Confirmación bacteria, gram negativa Confirmación bacteria, gram negativa
observadas al microscopio 100x observadas al microscopio 100x
Microscópica Microscópica

Discusión

En el laboratorio de biotecnología vegetal se realiza el aislamiento de microorganismo

presenten en medios de cultivos contaminados durante las practicas pasada en el que se

realiza una caracterización macroscópica y microscópica y e identificar el posible

microorganismo.

Inicialmente se realiza una identificación macroscópica (ver tabla 1) para los 5 frascos

seleccionados donde posiblemente 3 pueden ser hongo y 2 bacterias que son sembradas en

su medos correspondientes (agar saboraud para hongo y agar nutritivo para bacterias) en el
que luego de su crecimiento y revisión macroscópica coinciden con los que inicialmente se

seleccionaron por lo tanto no se contaminaron, para luego hacer una identificación

microscópica. En hongos se realiza una impronta con azul de lacto fenol para ser observado

en el microscopio en el frasco 1 al aislarlo es de textura granular y color dematiacea,

microscópicamente se observan las estructuras como los conidios, fialide, vesícula y

conidióforo, una forma de bombón común de Aspergillus niger. En el frasco 2 tiene textura

granular y de solor brillante y microscópicamente se observan estructuras como conidios,

fialides, rama del conidióforo y base del conidioforo lo que indica que es Trichoderma sp.

En el frasco 3 al aislarlo es de textura aterciopelada y color blanco, se observa con claridad

en la observación microscópica muchas hifas y conidios lo que es indicador de un

posiblemente Beuveria bassiana en los frasco 4 y 5 se realiza una tinción de Gram para

detectar las bacterias y en la observación al microscopio se ve bacterias gran negativas.

Conclusiones

Al realizar el aislamiento de todos los frascos no se contamino ninguna por lo que se pudo

continuar con la identificación

Al observar en el microscopio de acuerdo a las estructuras se identifican 3 hongos Aspergillus

niger,Ttricoderma sp y Beuveria bassiana asi como 2 bacteria gram netgativas.

Bibliografía
Hernández, Yuniet, & González, María E. (2010). EFECTOS DE LA CONTAMINACIÓN
MICROBIANA Y OXIDACIÓN FENÓLICA EN EL ESTABLECIMIENTO In Vitro DE
FRUTALES PERENNES. Cultivos tropicales, 31(4), 00.