La cuantificación de las características biofísicas de Plasmodium-falciparum-
glóbulos rojos parasitados en la microcirculación
DA Fedosov a, b, B. Caswell una, S. Suresh do, y GE Karniadakis a, 1
una División de Matemáticas Aplicadas, Universidad de Brown, Providence, RI 02912; do Departamento de Ciencia de los Materiales e Ingeniería, Instituto de Tecnología, Cambridge, MA 02139 Massachusetts; y segundo Institut für
Festkörperforschung, Jülich, 52425 Jülich, Alemania
Editado por Robert H. Austin, Universidad de Princeton, Princeton, Nueva Jersey, y aprobado el 15 de noviembre de, 2010 (recibido por opinión 2 julio, 2010)
La patogenicidad de Plasmodium falciparum (Pf) resultados malaria de la rigidización de glóbulos
rojos (GR) y su capacidad de adherirse a las células endoteliales (cytoadherence). La dinámica de
los glóbulos rojos parasitados-Pf es estudiado por tridimensionales simulaciones mesoscópicos de
flujo en los capilares cilíndricos con el fin de predecir la mejora de la resistencia al flujo en los
diferentes niveles de parasitemia. Además, la dinámica adhesivas de pf- Los glóbulos rojos se
explora para varios parámetros que revelan varios tipos de dinámica celular, tales como la
adhesión firme, deslizándose muy lentamente a lo largo de la pared, y volteo intermitente. El
parásito dentro de la RBC se modela explícitamente el fin de capturar fenómenos como “ obstaculizado marco DPD, y validado mediante la simulación de la dinámica adhesivas de leucocitos
tumbling ” movimiento de la RBC y la transición repentina desde firmRBC cytoadherence a mover para los que existen extensas resultados experimentales (20, 21). En resumen, en la
de un tirón en la superficie endotelial. Estas predicciones están en concordancia cuantitativa con
las observaciones experimentales recientes, y por lo tanto el método de modelado en tres
dimensiones que aquí se presenta ofrece nuevas capacidades para guiar e interpretar el futuro in
vitro e in vivo de la malaria.
adhesión | eritrocitos | malaria | propiedades mecánicas |
dinámica de partículas disipativas
R
(glóbulos
pf- RBCs)edseparasitados por Plasmodium
someten a cambios falciparum
irreversibles en la estructura y características biofísicas,
que pueden conducir a la circulación de sangre drásticamente alterado. El módulo de corte de
la membrana de los glóbulos rojos infectados puede aumentar hasta diez veces causantes de
oclusiones capilares (1, 2), lo que resulta en aumento sustancial de la resistencia al flujo
sanguíneo. Tales efectos pueden intensificarse debido a la cytoadherence mejorada de pf- RBCs
al endotelio vascular (3 - 6). Esta adherencia de pf- Los glóbulos rojos se cree que es la principal
causa de complicaciones en la malaria cerebral sangrado debido a los bloqueos de pequeños
vasos en el cerebro (7). A diferencia de la extensa investigación sobre los leucocitos, son muy
pocos los experimentos in vitro (8 - 11) han examinado la dinámica adhesivas de pf- Los glóbulos
rojos. Por ejemplo, en la ref. 8 de las paredes de los canales de microfluidos se recubrieron con
ligandos de proteínas purificadas que participan en cytoadherence (por ejemplo, ICAM-1) y con
células mamma- Lian ovario de hámster chino (CHO) que expresan dichos ligandos. Purificada
ICAM-1 causó rodante o mover de un tirón de pf- CNA sin desprendimiento o detención de RBC
movimiento. En contraste, las células CHO de mamífero parecen ser el resultado
principalmente en un archivo adjunto empresa de pf- Los glóbulos rojos con desprendimiento
completo esporádica. Esta diferencia en el comportamiento y la dinámica adhesivas
complicados de pf- Los glóbulos rojos no se han estudiado cuantitativamente. En términos más
generales, no se han realizado estudios cuantitativos de la dinámica de los glóbulos rojos en la
malaria para investigar la reología y la resistencia al flujo, además de la nueva dinámica
adhesivas reportados.
Los recientes avances en la modelización numérica de múltiples escalas (12 - 14)
permite modelar la materia blanda, y los glóbulos rojos, en particular, en sufi- ciente detalle, es
decir, simulando escalas nanométricas mientras que captura simultáneamente la dinámica de
gran escala. Hemos desarrollado y validó un modelo de partículas disipativas Dinámica (DPD)
(12, 14 - 16) que se puede simular con precisión las propiedades y el comportamiento dinámico
de los glóbulos rojos sanos, así como pf- Los glóbulos rojos. El modelo multiescala puede
representar un RBC a nivel de la espectrina con 30.000 puntos (17)
www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1009492108
o en un nivel más grueso con 500 puntos por la escala adecuada de los parámetros
fisiológicamente correcta (12, 14, 15); por lo tanto, no se requiere calibración ad hoc.
La capacidad predictiva del modelo DPD se ha demostrado en comparaciones con
experimentos de microfluidos que controlado por sonda relaciones de presión de
velocidad de (sana) de flujo de RBC a través de microcanales cuya abierto interior Ings
imitar las dimensiones más pequeñas para el paso RBC en la vasculatura micro (16) .
Además, hemos extendido el modelo de dinámica de adhesivos de (18, 19) para el
obra usando corriente DPD modelamos la membrana RBC como material coelastic vis,
el sólido pf- parásito, el fluido dentro de las células y el plasma exterior, así como las
paredes nel microchan- funcionalizados. Los parámetros del modelo incluyen el
módulo de cizalla membrana μ 0, la rigidez de la membrana de flexión k do, la viscosidad
membrana η metro, y el interior / exterior η yo / η o viscosidades de fluido; ver
métodos y SI texto para más detalles.
resultados
En primer lugar, validar nuestro modelo RBC en la salud y la enfermedad con los valores
fisiológicamente correctas de todos los parámetros utilizando los datos de pinzas experimentos
ópticos. Posteriormente, mediante el mismo un conjunto de parámetros que investigar la
dinámica de pf- RBCs a diferentes niveles de parasitemia y cuantificar los diferentes modos de
dinámica sivos adherencias en presencia de ICAM-1 superficies de pared recubiertos.
INGENIERIA
Aumento de la rigidez de pf- Los glóbulos rojos parasitados. En la enfermedad de la malaria, la progresión a
través de las etapas de desarrollo del parásito (anillo →
trophozoite → esquizontes) conduce a un endurecimiento considerable de
pf- Los glóbulos rojos en comparación con las sanas (22, 23). Además, en la fase de
esquizonte la forma RBC se convierte casi esférica, mientras que en las etapas precedentes
RBCs mantienen su biconcavity. La Fig. 1 muestra los resultados de simulación para glóbulos
rojos sanos y pf- RBCs en diferentes etapas de desarrollo del parásito en comparación con los
experimentos pinzas ópticas (23). Los resultados de la simulación se obtuvieron con un
modelo RBC multiescala libre de estrés (ver Métodos) con 500 puntos, módulo de cizallamiento μ
0¼ 6.3 μ norte / m para los glóbulos rojos sanos,
14,5 para la etapa de anillo, 29 para los trofozoítos y 60 μ norte / m para la esquizontes;
estos valores son consistentes con los experimentos de árbitros. 22, 23. La rigidez de
flexión para todos los casos se establece en
2.4 × 10 - 19 J, que es el valor de la rigidez de glóbulos rojos sanos flexión, ya que la rigidez
a la flexión de la membrana para las diferentes etapas no se conoce. La curva para la
etapa de esquizonte marcado como “ esférica NEAR ” corresponde al estiramiento una
forma elipsoidal con
Contribuciones de los autores: BC, SS, y GEK diseñado investigación; DAF lleva a cabo la investigación;
DAF analizó los datos; y DAF, BC, SS, y GEK escribió el documento. Los autores declaran no tener ningún
conflicto de intereses. Este artículo es una presentación directa PNAS.
1 A quién debe dirigirse la correspondencia. E-mail: gk@dam.brown.edu. Este artículo contiene información de apoyo en línea en www.pnas.org/lookup/suppl/
doi: 10.1073 / pnas.1009492108 / - / DCSupplemental .
PNAS | 4 de enero de, 2011 | vol. 108 | no. 1 | 35 - 39
 Sano 1.4
esquizonte simulación
δ
trophozoite experimento,-cerca esférica
1.2
esquizontes

re UNA Borde de la pared del tubo núcleo

Distribución
0.8 1
RBC

0.6
20

0.4
18

0.2
16 δ
μ
diámetro (m)

14
10 20 30 40 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 0
X ( μ metro) espesor de la capa libre de células ( μ metro)

12

10 = 0,15
3.5

68
Ht = 0,3

re T Ht = 0,45
simulaciones Ht
24

0
experimentos
0 50 100 150 200
2,5 3

viscosidad aparente relativa

fuerza (pN)

Figura 1. El aumento de rigidez de pf- RBC: Simulación de estiramiento saludable y

pf- RBCs en las etapas de la malaria diferentes en comparación con los experimentos pinzas ópticas (23). re UNA y re T
se refieren a los diámetros axiales y transversales.

1.5 2
ejes una X ¼ una y ¼ 1.2 una z. Aquí, el módulo de corte de membrana de
40 μ norte / mmatches la respuesta de tensión-deformación con el experimento,
es decir, es menor que para la simulación bicóncava-forma. Para la célula casi esférica
de la membrana está sujeta a fuertes estiramiento local para la misma deformación
uniaxial en comparación con la forma bicóncava. Para la forma bicóncava desinflado, el
0.5 1
volumen de fluido interior se puede deformar en respuesta al estiramiento, mientras que
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
en la forma casi esférica del volumen de fluido se aplica una resistencia adicional sobre Diametro del tubo ( μ metro)
la membrana estirada. Por lo tanto, la célula geome- try juega un papel importante, y por
lo tanto tiene que ser de cerca el modelo para la extracción precisa de los parámetros de Figura 2. Resistencia al flujo en salud: superior: Un ejemplo de un borde CFL (izquierda) y la distribución del
espesor local de CFL (derecha) para H t ¼ 0.45 y re ¼ 20 μ metro. Baja: relativa viscosidad aparente en
las pinzas experimentos ópticos. En todas las simulaciones que siguen se utilizó la
comparación con los datos experimentales (26) para varios H t valores y diámetros de tubo. parcela Inset es una
forma bicóncava RBC.
instantánea de RCBs en el flujo de Poiseuille en un tubo de un diámetro re ¼ 20 μ ma H t ¼ 0.45.

para todas las fracciones de volumen en comparación con los perfiles parabólicos que indican
La resistencia de flujo. En primer lugar vamos a modelar la sangre como una suspensión de glóbulos
una disminución en la velocidad de flujo (15). la formación del núcleo ARBC se establece con
rojos sanos utilizando el modelo de DPD y simular el flujo de sangre en tubos de diámetros que
una capa de plasma delgada junto a las paredes de los tubos llamados el libre de células capa
van de 10 μ m a 40 μ metro. Es importante para modelar cuidadosamente las interacciones
(CFL) (15). El espesor de la CFL está directamente relacionada con la Fahraeus y los efectos
volumen excluido (EV) entre las células, que a menudo se implementan a través de una fuerza de
Fahraeus-Lindqvist, ambos de los cuales se simularon con precisión por nuestro modelo DPD
repulsión entre los vértices de membrana de células diferentes. Un cierto rango (es decir, fuerza
(15). Para determinar el espesor CFL que computa el borde exterior del núcleo RBC, que es
de radio de corte) de las interacciones repulsivas puede imponer una distancia mínima no nula
similar a las mediciones de CFL en experimentos (24, 25). La Fig. 2 muestra un borde CFL
entre vecina membranas de glóbulos rojos, la llamada “ la distancia de detección ” entre las
muestra a partir de simulaciones para
membranas. La elección de un radio de corte menor puede dar lugar a la superposición de las
células, mientras que un valor mayor aumentaría la distancia de detección entre las células. Esta
H t ¼ 0.45 y re ¼ 20 μ m y la distribución local de espesor CFL, que se construye a partir
distancia puede ser no físico y puede afectar fuertemente los resultados en fracciones de alto
de un conjunto de mediciones locales discretas de espesor CFL tomado cada 0,5 μ m a
volumen de glóbulos rojos. Una mejor proach AP- es hacer cumplir interacciones EV entre las
lo largo del flujo ( X) dirección. La viscosidad del fluido de la región CFL es mucho menor
células mediante el empleo de reflexiones de vértices de RBC en las superficies de membrana de que la del núcleo tubo poblado con RBCs proporcionar una LUBRICAClON lu- eficaz
otras células que producen esencialmente una distancia de detección cero entre dos superficies para el núcleo fluya. La viscosidad aparente se define como sigue η aplicación ¼ π Δ PD 4
de glóbulos rojos. Además, empleamos una repulsión neta de los glóbulos rojos de la pared
mediante el establecimiento adecuadamente el coeficiente de fuerza de repulsión entre las
partículas de pared y los vértices de células. 128 QL, dónde Δ PAG es la diferencia de presión, Q es el
velocidad de flujo, y L es la longitud del tubo. La viscosidad aparente aumenta para mayor H t valores
porque mayor aglomeración de células mayores rendimientos resistencia al flujo. Es más
conveniente considerar la viscosidad aparente relativa definida como η rel ¼ η aplicación

Los glóbulos rojos en el flujo de Poiseuille migran al centro del tubo que forma un núcleo en η s, dónde η s es el Sol-
el flujo. La Fig. 2 muestra una instantánea de la muestra de RCBs que fluye en un tubo de ventilar viscosidad. La Fig. 2 muestra el simulado η rel valores en comparación con el ajuste
diámetro re ¼ 20 μ metro. Los gradientes de presión em- pleados aquí están 2,633 × 10 5, 1.316 × 10 empírico a los experimentos (26) para el intervalo de diámetro de tubo de 10 - 40 μ my H t valores
5, y 6.582 × 10 4 Pensilvania / m para tubos de diámetros 10, 20, y 40 μ m, respectivamente. En el en el rango de 0,15 - 0.45. se obtiene una excelente concordancia entre las simulaciones y
caso de bajo hematocrito H t ( por ejemplo, 0,15) los perfiles de velocidad siguen de cerca curvas experimentos para las interacciones EV adecuados para todos los casos analizados.
parabólicas en la región próxima a la pared. En la región central del tubo se encuentra una
reducción sustancial en la velocidad A continuación se simula el flujo sanguíneo en la malaria como una suspensión de sana y pf- Los
glóbulos rojos en la etapa de trofozoitos y el hematocrito

36 | www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1009492108 Fedosov et al.

H t ¼ 0.45. Varios niveles de parasitemia (porcentaje de pf- RBCs con respecto al número
total de células en una unidad de volumen) de 5% a 100% se consideran en vasos con
diámetros de 10 y 20 μ metro. El recuadro de la Fig. 3 muestra una instantánea de RCBs
pf- Los glóbulos rojos se movió en una superficie recubierta con purificada ICAM-1 show-ing
que fluye en un tubo de diámetro 20 μ m a un nivel de parasitemia de 25%, véase también película
S1 . El principal resultado en la Fig. 3 está dada por la trama de la viscosidad aparente
relativa en malaria - una medida de la resistencia al flujo - obtenido a diferentes niveles de
parasitemia. El efecto del nivel de parasitemia parece ser más importante para las
pequeñas y dia- metros de alto H t valores. Por lo tanto, en H t ¼ 0.45 el flujo de sangre
tancia tencia en malaria puede aumentar hasta un 50% en vasos de diámetros de
alrededor de 10 μ m y hasta 43% para los diámetros de los vasos alrededor de 20 μ metro.
Estos incrementos no incluyen todas las contribuciones del interacción de pf- RBCs con el
glicocalix (27, 28); tales interacciones importantes son complejos ya que pueden incluir
cytoadhesion que Próximo.
Dinámica de adhesivo. La dinámica adhesivas de pf- Los glóbulos rojos en el flujo de cizallamiento se
estudió para diferentes valores de la tensión de cizallamiento (WSS) y se compararon con los
experimentos de ref. 8 para la pared recubierta con purificada ICAM-1. La Fig. 4 (parte superior
izquierda) muestra varias instantáneas sucesivas de una célula simulada rodando a lo largo de la
pared. partículas azules pequeñas se añaden como trazadores para mayor claridad visual, y distintas
instantáneas RBC están separados por desplazamiento de su X Nate coordinación. La dinámica de la pf-
Los glóbulos rojos se caracteriza por un comportamiento flipping iniciado en primer lugar por la célula
de la peladura de la pared debido a la fuerza hidrodinámica después plana RBC de adhesión (la
primera instantánea en la trama; véase también película S2 ). Después de la mayor parte del área de
contacto de la pared celular inicial se despega, el RBC voltea encima sobre su otro lado facilitado por
el área de contacto pequeña pared restante. Durante estos pasos, pf- Los glóbulos rojos se someten a
grandes deformaciones de la membrana como se ilustra en la trama y en película S2 .
comportamiento flipping similares y grandes deformaciones de membrana (incluyendo membrana
BUCK- ling) también fueron encontrados en los experimentos (8).
WSS parece ser el parámetro clave que regula la pf- dinámica adhesivas RBC, porque
los glóbulos rojos adheridas son accionados por tensiones de fluidos y ruedan a lo largo de
la pared con una velocidad mucho menor que la velocidad del flujo. Varias simulaciones
iniciales con varyingWSS y otros parámetros fijos revelaron que pf- RBCs puede exhibir
adhesión firme a una WSS inferior a 0.317 Pa, mientras que pueden separarse
completamente de la pared a valores más altos. visualizaciones sistemáticas
saludables - experimentos saludables -
Simulaciones de parasitemia 5% de
parasitemia 25% de parasitemia 50% de
parasitemia 100% de esquizontes,
parasitemia 25% X
2,5 3
viscosidad aparente relativa
X intracelular en comparación con los glóbulos rojos sanos, lo que indica que el parásito
1.5 2
1
0 5 10 15 20
Diametro del tubo ( μ metro)
Fig. 3. Pérdida de carga de la malaria: saludable (rojo) y pf- RBCs (azul) en el flujo de Poiseuille en un tubo de
diámetro re ¼ 20 μ metro. H t ¼ 0,45, nivel de parasitemia 25%. Trazada es la viscosidad aparente relativa de la
sangre en la malaria para varios niveles de parasitemia y diámetros de tubo. Símbolo “ X ” corresponde a la fase de
esquizonte con una forma casi esférica. Los datos experimentales a partir del ajuste empírico por Pries et al. (26).
Fedosov et al.
mostró que pf- RBC desprendimiento a alta WSS se produce durante el movimiento
relativamente rápido de RBC flipping, debido a que el área de contacto es entonces mínima.
Sin embargo, en los experimentos de ref. 8
rodadura persistente y estable durante largos periodos de observación para una amplia gama
de WSS entre 0,2 Pa y 2 Pa. Esta observación sugiere un mecanismo de estabilización para el
laminado de pf- RBCs a altas tensiones de cizallamiento. Tal comportamiento no es
sorprendente porque se sabe que la adhesión de leucocitos puede ser regulado activamente
con condiciones de flujo y con estímulos bioquímicos (29, 30).
Para estabilizar RBC vinculante en tensiones de cizallamiento alto que necesitamos para Im-
probar el modelo al permitir que la constante de resorte de bonos ( k s) a variar con WSS; aquí, por
simplicidad asumimos la dependencia lineal de k s
onWSS. La Fig. 4 (parte inferior izquierda) presenta la velocidad de laminación promedio de
pf- Los glóbulos rojos en comparación con los experimentos de células que ruedan sobre una
superficie recubierta con purificada ICAM-1 (8). Los lazos veloci- promedio simulados
muestran una dependencia casi lineal de la tensión de corte, y están en buen acuerdo con los
experimentos. La discrepancia en el más alto esfuerzo de cizalla simulado sugiere un mayor
refuerzo de las interacciones de enlace de pared celular. Sin embargo, los valores simulados
se mantienen entre el 10 y los percentiles 90 se encuentran en periments ex.
En, el comportamiento adhesivo general de pf- RBCs, explorado por medio de la simulación
numérica para diversos parámetros, reveló varios tipos de dinámica de células tales como la
adhesión firme, RBC despegando de la superficie seguido de voltear de un lado a otro, o por
desprendimiento de la pared, y muy lento deslizamiento a lo largo de la pared. Sin embargo, un
examen minucioso de la de vídeo que contiene un ejem- plo de la dinámica adhesivas de RBC
en las células CHO de mamífero de los experimentos (8) muestra la adhesión firme de pf- Los
glóbulos rojos desde hace algún tiempo, seguido de repentino desapego. Por el contrario, la
adhesión firme en las simulaciones aparece siempre que sea estable sin separación en el
tiempo de simulación de aproximadamente 30 s. En los experimentos de las pf- RBCmotion
antes de las pantallas de separación muy lento de ping al deslizamiento a lo largo de la
superficie debido a la corriente y colisiones aleatorias con otros glóbulos rojos que fluyen. Por lo
tanto, es probable que el desprendimiento completo repentina de la pared es causada por el
RBC deslizarse en una zona de pared con un número limitado de ligandos disponibles para la
unión debido a revestimiento imperfecto. Para verificar esta hipótesis nos encontramos con una
La simulación en la que los sitios de ligandos fueron retirados de la zona de la pared entre el 30 μ
m y 40 μ m en la dirección del flujo. La Fig. 4 (parte inferior derecha) presenta el pf- RBC
velocidad instantánea (curva verde) que corresponde a frenar el deslizamiento a lo largo de la
superficie continuó hasta una X de coordenadas (posición corriente-wise) entre 30 μ m y 40 μ m,
donde un desprendimiento celular completa se produce debido a la ausencia de ligandos para
INGENIERIA
la unión, de acuerdo con el pf- dinámica de RBC en las células CHO de mamífero que se
encuentran en experimentos (8). se ha encontrado ningún otro cambio en los parámetros físicos
de la adhesión celular para reproducir estas dinámicas.
Ht = 0,45
A continuación, vamos a modelar explícitamente el efecto del parásito en el interior del
sólido pf- Los glóbulos rojos. Experimentos recientes (22) sugieren que el volumen de
citosol se puede reducir de tres veces en las últimas etapas del desarrollo del parásito
ocupa un volumen considerable dentro de pf- RBC. Por lo tanto, una cantidad
suficientemente grande parásito proporciona un esqueleto rígido dentro de una pf- RBC para
afectar fuertemente su dinámica adhesivas. En periments ex en la ref. 9 se observó que el
parásito se une a un lado, especialmente en las etapas de anillo y trofozoitos, causando
una anisotropía estructural en el pf- RBC que afecta cytoadherence. El parásito se modela
como una colección de partículas DPD uni- distribuye formemente dentro de un volumen
cilíndrico de radio de 3,3 μ m y la altura 0.2 μ metro. Estas partículas se colocan dentro del
25 30 modelado RBC y obligados a someterse a movimiento rígido. Para evitar que el cuerpo
parásito de cruzar la membrana de RBC, introducimos interacciones Lennard-Jones entre
las partículas del cuerpo parásito y vértices de membrana; Sin embargo, el parásito nada
libremente en el citosol RBC. El número de partículas de DPD para representar el citosol
RBC se reduce de acuerdo con el volumen ocupado por el
PNAS | 4 de enero de, 2011 | vol. 108 | no. 1 | 37
 Fig. 4. dinámicas adhesivas:
Arriba a la izquierda: vista
superior y lateral de
instantáneas sucesivas de un
solo mover de un tirón de un
RBC infectados; ver también película
S2 . parte superior derecha:
vistas superior y lateral de varias
instantáneas de un RBC rodar
con un cuerpo parásito dentro
de la célula (dibujado en verde);

35 ver también película S3 . Abajo a

sin parásito con
la izquierda: la velocidad
desprendimiento
parásito promedio móvil de los glóbulos
30 simulaciones, experimentos 30
media y media rojos infectados en función de la
experimentos, percentiles 25 y 75
tensión de corte comparedwith
experimentos, percentiles 10 y 90
25 25 la rollingon celular
experimentsof purificado ICAM-1
μ Sra)

velocidad ( μ Sra)
20 (8). Los datos experimentales
20
includemeanvaluesand
velocidad media (

tothe10th curvesthatcorrespond,
15 15
25a, 75a, y percentiles 90. Parte
inferior derecha: Velocidades de pf-
10 10 Los glóbulos rojos con /
withoutparasiticbody, y para el
caso de desprendimiento
5 5
completo.

0 0
0 0.5 1 1.5 0 5 10 15 20
tensión de cizallamiento (Pa) tiempo (s)

cuerpo parásito. La Fig. 4 (parte superior derecha) presenta instantáneas sucesivas de un RBC
rodando con un parásito rígido dentro de la célula (véase también
película S3 ). La membrana de RBC muestra pandeo local debido a su baja rigidez de flexión, lo
cual es consistente con lizations la RBC La percepción visual de la Fig. 4 (parte superior
izquierda). Además “ obstaculizado tumbling ”
movimiento de la membrana parece ser causada por el sitio para- sólido, ver película S3 .
La Fig. 4 (parte inferior derecha) muestra la velocidad instantánea correspondiente (curva
roja), que presenta una tern Pat- más irregular que la curva azul. Por ejemplo, la curva
roja en la Fig. 4 (parte inferior derecha) indica varios intervalos de tiempo durante el cual
el
pf- RBC muestra la adhesión firme durante varios segundos. Además, la adhesión firme puede
ser seguido por varios saltos rápidos del RBC a lo largo de la superficie que se caracteriza por
dos picos estrechamente ubicados de la velocidad de todo el tiempo de 20 s. visualizaciones
sistemáticas re- vealed que los picos más pequeños de velocidad de la célula en la Fig. 4
(parte inferior derecha) corresponden a “ obstaculizado tumbling ” movimiento facilitado por el
cuerpo parásito debido a que el parásito está suspendido libremente en el citosol RBC. Una
colocación apropiada del cuerpo parásito dentro de la RBC puede resultar en una distribución
de la tensión en la parte delantera de la membrana que obliga a la RBC en un movimiento de
rastreo.
malaria tiva en la mayoría de los casos se caracteriza por niveles de 0,5% - 20%. A pesar
de que los niveles de parasitemia simuladas aquí están más allá de este rango, se
intentó abarcar toda la gama 0% - 100% para evaluar la dependencia de las propiedades
de flujo de la sangre en los niveles de parasitemia. A bajos niveles de parasitemia, las
diferencias en propie- dades medidos pueden no ser significativo, y por lo tanto serían
difíciles de detectar. También es posible que la resistencia se predijo en laciones simular
está subestimado debido a un aumento potencial de mem- brana rigidez de flexión pf- RBCs
y la presencia de “ rígido ”
parásitos dentro de las células. Estas propiedades de Pf-eritrocitos podrían poner en peligro aún
más la capacidad de pf- RBCs para cumplir con ciones deformaciones en el flujo, y por lo tanto
impiden su embalaje cerca en el núcleo del flujo. Otras condiciones, no considerados aquí, son
más propensos a influir significativamente en la resistencia al flujo sanguíneo en la malaria. Por
ejemplo, más rígido pf- Los glóbulos rojos pueden bloquear los pequeños capilares hasta 5 - 6 μ m
de diámetro (1). Además, la propiedad de pf- Los glóbulos rojos se adhieran entre sí y al
endotelio vascular en etapas posteriores del desarrollo del parásito puede perjudicar
fuertemente el flujo de sangre en laries capil- y pequeñas arteriolas resultan en un incremento
sustancial de la resistencia de flujo.

La dependencia de la velocidad de rodadura de glóbulos rojos en la tensión de corte

Discusión
Hemos empleado un modelo de múltiples escalas validadas para cuantificar las propiedades encontrado en experimentos es claramente no lineal. Por lo tanto, la suposición de la

dinámicas de pf- Los glóbulos rojos en condiciones típicas encontradas en la microcirculación. dependencia lineal de k s en el esfuerzo de corte es un plificación oversim-. Además, puede haber

En concreto, las respuestas mecánicas simuladas de glóbulos rojos sanos y pf- Se encontraron un cambio en la asociación y disociación cinética de unión con esfuerzo cortante, lo que afectaría

RBCs estar en excelente acuerdo con pinzas ópticas experimentos al igual que las respuestas
dinámicas medidos en términos de la capa libre de células y el aumento de la viscosidad
aparente de la sangre. resistencia de flujo se calculó en los niveles de parasitemia más altas
que las que se encuentran a menudo en los análisis de sangre clínicos (31) de los individuos
que sufren frommalaria. A un nivel de parasitemia por encima de 0,2% se inicia una respuesta
a la estabilización de balanceo de los glóbulos rojos infectados a altas velocidades de corte.
Nuestras simulaciones sugieren que la dinámica de adhesivos pf- RBCs no es sensible a los
cambios por debajo de 30% - 40% en las velocidades de reacción k 0 en
y k 0 apagado . Sin embargo, la dinámica de células pueden verse afectadas fuertemente si estos

inmune, y los niveles de alrededor de 20% se encuentra en casos muy graves de malaria con
una alta mortalidad (9, 32). Las pruebas clínicas son capaces de detectar
pf- RBCs a un nivel parasitemia tan pequeñas como 0.0001 - 0,0004%. C.A-
parámetros se cambian considerablemente como se ve en leucocitos simulaciones de dinámica.
Además, los datos experimentales muestran una dispersión más amplia de la velocidad media
RBC para diferentes células que el encontrado en las simulaciones (15). Esta observación es
probable que esté relacionada a las distribuciones no uniformes de los receptores en la RBC

38 | www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1009492108 Fedosov et al.

membrana y ligandos en la pared. En las simulaciones, las distribuciones de ambos
receptores y ligandos son fijos, y son casi homogénea con aproximadamente la misma área
ocupada por cada receptor o de cada ligando. Una dispersión en el comportamiento entre los
glóbulos rojos distintos en las simulaciones es únicamente relacionada a la naturaleza
estocástica del modelo de adhesivo. Sin embargo, en experimentos buciones distribu-
irregulares de receptores y ligandos son propensos a bute significativamente contri- a
dispersarse en la dinámica adhesivas RBC.
El cuerpo parásito constriñe la membrana RBC mediante el suministro de un soporte
rígido, lo que obliga RBC flipping sin flexión sustancial. La presencia de un cuerpo rígido
dentro de un RBC afecta significativamente la dinámica adhesivas RBC que resulta en
un comportamiento más errático en comparación con la dinámica adhesivas más
regulares de glóbulos rojos con parásitos. Un disco delgado para representar el cuerpo
de parásitos se considera; sin embargo, otras formas geométricas o tamaños del
parásito pueden tener un efecto diferente sobre la dinámica adhesivas RBC. Por lo tanto,
una caracterización experimental de la metría parásito geográfica para las diferentes
etapas del desarrollo del parásito sería de gran interés. Además, el cuerpo parásito
modelada fue suspendido libremente en el citosol RBC, mientras que en condiciones
reales, es probable que el parásito está unido a la membrana, porque expone proteínas
adhesivas en la superficie de la membrana para mediar en la unión a la pared. Estos
problemas no resueltos requieren mayor investigación experimental y numérico.
métodos
Método de simulación. El método DPD (33) es una técnica de simulación mesoscopic basado en partículas, donde
un sistema simulado consiste en norte partículas puntuales. Cada partícula corresponde a una colección de átomos
o moléculas en lugar de un átomo individual. partículas DPD interactúan a través de pares potenciales suaves
prudentes y se mueven de acuerdo con la Newton ' s segunda ley del movimiento; ver también SI texto .
Modelo de membrana. La membrana de RBC se modela por 500 puntos discretos, que son los vértices de una red
triangular de muelles en la superficie de la membrana. Tales modelos de redes se han utilizado ampliamente para
simular miem-
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branas, por ejemplo, ver ref. 34. La red de conectividad fijo proporciona la elasticidad y la respuesta viscosa de un
RBC porque una “ amortiguador ” está unido a cada muelle. El modelo RBC también incluye flexión de energía entre
plaquettes triangulares vecinos y zona y restricciones de volumen. Utilizamos una “ libre de estrés ” modelo (14, 15),
que elimina los artefactos de triangulación irregular. El modelo '' libre de estrés- '' se obtiene por recocido de
simulación tal que cada resorte asume su propia longitud del resorte de equilibrio ajustado a ser la longitud del
borde después de la triangulación. RBC-de fluido condiciones de contorno se aplican a través de reflexiones de
rebote posterior de partículas de fluido en triángulos themembrane y por un ajuste apropiado de las interacciones
entre las partículas de fluido y vértices de RBC. Más detalles sobre el modelo RBC se pueden encontrar en el SI
texto .
Dinámica de adhesivo. dinámica adhesivo se simularon con la formación modelo del enlace estocástica /
disociación similar a la ref. 18. Los bonos se modelan como resortes lineales y su formación k en y disociación k apagado
tarifas dependen de la distancia de separación entre los receptores y ligandos de RBC distribuido en la pared como
una red cuadrada con la constante de red de 0,5 μ metro. El receptor y las densidades de ligando en las
simulaciones pueden ser diferentes de aquellos en los experimentos (8). Sin embargo, observamos que las
interacciones receptor-ligando en simulaciones corresponden a interacciones adhesivas eficaces de pf- Los glóbulos
rojos con la pared. Las interacciones receptor-ligando simulados no corresponden a enlaces moleculares reales y
pueden representar una serie de enlaces moleculares existentes. dinámicas adhesivas en las simulaciones
procede por: ( yo) la comprobación de potencial de disociación de los enlaces existentes con probabilidad 1 - exp re - k
apagado Δ t Þ, dónde Δ t
es el paso de tiempo, ( ii) pruebas de ligandos no unidos para la formación de enlace potencial con probabilidad 1 - exp
re - k en Δ t Þ, y ( iii) la aplicación de fuerzas de todos los enlaces existentes. Más detalles sobre la dinámica de adhesivo
y los parámetros del modelo se pueden encontrar en SI texto .
EXPRESIONES DE GRATITUD. Damos las gracias a los árbitros anónimos por sus útiles sugerencias. Este
trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales de Salud (NIH) de Grant R01HL094270. GEK reconoce el apoyo
de la National Science Foundation (NSF) de Grant EBNC-0852948. SS reconoce el apoyo del Grupo de
Investigación Interdisciplinaria en Enfermedades Infecciosas (ID), que es financiado por el Instituto
Singapur-Tecnológico de Massachusetts (MIT) Alli- ance de Investigación y Tecnología (SMART). Los cálculos se
realizaron en el NSF ' Instituto Nacional de Ciencias s Computacional de la Universidad de Tennessee instalación
(NIC).
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