Producción de somatotropina por la ingeniería genética

una de las zonas económicamente más rentables de la biotecnología en la actualidad

es la producción de proteínas humanas. muchas proteínas de mamíferos tienen un alto
valor farmacéutica, pero son típicamente presentes en cantidades muy bajas en el
tejido normal, por lo que es extremadamente costoso purificarlos. incluso si la proteína
se puede producir en un cultivo celular, es mucho más caro y difícil de que crezcan
cultivos microbianos que producen la proteína en un alto rendimiento. Por lo tanto, la
industria de la Biotecnología ha diseñado genéticamente microorganismos para
producir muchas diferentes proteínas de mamíferos. Aunque la insulina fue la primera
proteína humana que se produjo de esta manera el procedimiento tenía varias
complicaciones inusuales, porque la insulina se forma de dos polipéptidos cortos unidos
por enlaces disulfuro. un ejemplo más típico es la somatotropina, y nos centramos en
esto aquí.

hormona del crecimiento, o somatotropina, se compone de un único polipéptido

codificado por un solo gen. somatotropina de una especie de mamífero generalmente
funciona razonablemente bien en otras especies; de hecho, los animales transgénicos
han hecho expresar genes de somatotropina extranjera, como veremos más adelante.

la falta de resultados de somatotropina en enanismo hereditario. Se da porque el gen

de somatotropina humana se clonó y se expresó con éxito en las bacterias, los niños
que muestran retraso en el crecimiento pueden ser tratados con somatotropina
humana recombinante. Sin embargo, el enanismo también puede ser causada por la
falta del receptor de la somatotropina, y en este caso la administración de la
somatotropina no tiene ningún efecto (la gente de las tribus de pigmentos africanos
tiene niveles normales de somatotropina humana, pero la mayoría de ellos no son más
altos que 4 pies, 10 pulgadas porque tienen receptores de la hormona de crecimiento
defectuoso).

el gen de la somatotropina se clonó como DNA complementario (cDNA) a partir de

ARNm como se describe en la sección 15.10

DIBUJOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO

a continuación, el ADNc se expresó en un vector bacteriano. El principal problema con

la producción de hormonas de polipéptidos relativamente cortos tales como
somatotropina es su susceptibilidad a la digestión de la proteasa. este problema puede
ser contrarrestado mediante el uso de cepas huésped bacterianas defectuosos para varias
proteasas.

somatotropina bovina recombinante (rBST) se utiliza en la industria láctea. inyección

de rBST en las vacas no las hace crecer más grande, pero les estimula la producción de
leche. La razón de esto es que la somatotropina tiene dos sitios de unión. uno se une al
receptor de la somatotropina y estimula el crecimiento, la otra para el receptor de la
prolactina y promueve la producción de leche. Sin embargo, la producción de leche
excesiva provoca algunos problemas de salud en el animal, incluyendo un aumento de
infecciones en la ubre y la disminución de la capacidad reproductiva.

cuando la somatotropina se utiliza para remediar los defectos de crecimiento humano,

es deseable para evitar efectos secundarios de las hormonas. mutagénesis dirigida al
sitio del gen de la somatotropina para hacer que la somatotropina ya no se una al
receptor de prolactina. actividad prolactina (prolactina estimula la lactancia). Para
lograr esto, varios aminoácidos necesarios para la unión al receptor de la prolactina
fueron alterados en sus secuencias de codificación. por tanto, es posible no sólo para
hacer auténticas hormonas humanas, sino también para alterar su especificidad y la
actividad para que sean mejores productos farmacéuticos.

Otras proteínas y productos mamíferos

Muchas otras proteínas de mamíferos se producen por ingeniería por ingeniería
genética tabla 15.6 estas incluyen en particular un surtido de hormonas y
proteínas de coagulación de la sangre y otros procesos de sangre, por ejemplo,
el activador de plasminogeno es una proteína de la sangre que neutraliza y
disuelve los coágulos sanguíneos que pueden formarse en las etapas finales
del proceso de curación. TPA se utiliza principalmente en pacientes cardiacos y
otras personas que sufren de mala circulación para evitar el desarrollo de
coágulos que pueden ser potencialmente mortales. La enfermedad cardiaca es
la principal causa de muerte en muchos países desarrollados, especialmente
en estados unidos, a si la producción de microbios por TPA de alta demanda en
contraste con TPA, los factores de coagulación de la sangre VII, VIII, Y IX, son de
importancia crítica para la formación de coágulos de sangre. Hemofílicos sufren
de una deficiencia de uno o más factores de coagulación y por lo tanto se
pueden tratar con microbios produciendo factores de coagulación, los últimos
hemofílicos han sido tratados con extractos de factor de coagulación de la
sangre humana coagulada, algunos de los cuales están contaminados con virus
como el VIH y la hepatitis C poniendo a los hemofílicos en alto riesgo de
contraer estas enfermedades. Pero los factores de coagulación recombinados
han eliminado este problema.

Tabla -----

algunas proteínas de mamíferos realizados por ingeniería genética son enzimas en

lugar de hormonas. por ejemplo, la DNasa I humana utilizada para tratar la
acumulación de moco que contiene el ADN en pacientes ingresados con fibrosis
quística. las formas mucosas debido a la fibrosis quística a menudo se acompañan de
infecciones pulmonares potencialmente mortales por la bacteria Pseudomonas
aeruginosa.
las células bacterianas forman biopelículas dentro de los pulmones que hacen difícil el tratamiento
de drogas. ADN se libera cuando las bacterias lisan, y se da la formación combustibles
moco. DNasa digiere el ADN y en gran medida disminuye la viscosidad de la
mucosidad. hay más de 30.000 pacientes con fibrosis quística en los Estados Unidos
solamente, tratamiento de la fibrosis quística con DNasa fue aprobado en 1994, y las
ventas actuales de esta enzima para salvar vidas exceda los $ 100 millones. una
segunda enzima, alginato liaza, también producido por ingeniería genética, se muestra
prometedor en el tratamiento de fibrosis quística porque degrada el polisacárido
producido por células de p. aeruginosa. como el ADN de las células lisadas, este
polímero también contribuye a tratar la mucosidad pulmonar, y por lo tanto su
hidrólisis alivia los síntomas respiratorios.
no todas las enzimas producidas por ingeniería genética tienen usos terapéuticos.
muchas enzimas comerciales se producen ahora de esta forma. a veces los beneficios
de la ingeniería genética son bastante inesperados. cuajo, que es una enzima que se
utiliza para hacer queso, es el producto de los animales sacrificados y por lo tanto no
puede ser consumido por los vegetarianos estrictos (veganos). Sin embargo "queso
vegetariano" que contiene cuajo recombinante producida en un microorganismo está
siendo comercializado y ha encontrado una amplia aceptación.

nuevas solicitudes proceden de uso de mutagénesis dirigida al sitio en los genes

clonados existentes para generar nuevos productos con nuevas propiedades. ciertas
moléculas, como muchos de los antibióticos, se sintetizan en las células de las vías
bioquímicas que utilizan una serie de enzimas, estas enzimas pueden ser modificados
por ingeniería genética para producir formas modificadas de los antibióticos.

vacunas de ingeniería genética

vacunas son sustancias que provocan la inmunidad a una enfermedad particular
cuando se inyecta en un animal. Por lo general, las vacunas son suspensiones de
microorganismos muertos o modificados o virus patógenos (o partes aisladas de ellos).
a menudo la parte que provoca la respuesta inmune es una proteína de superficie, por
ejemplo, una proteína de la cubierta viral. la ingeniería genética se puede aplicar de
muchas maneras diferentes para la producción de vacunas.

vacunas recombinantes
técnicas de ADN recombinante se pueden utilizar para modificar el propio patógeno.
por ejemplo, se puede eliminar genes de patógenos que codifican factores de
virulencia pero que dejan a aquellos cuyos productos provocar una respuesta inmune.
Recombinar este rendimiento, genera una vacuna viva atenuada. por el contrario, se
puede añadir genes de un virus patógeno a otro virus relativamente inofensivo,
llamado virus transportado. tales vacunas se denominan vacunas de vectores. este
enfoque induce inmunidad a una enfermedad de vital importancia patogénica. de
hecho, uno puede incluso combinar los dos enfoques. por ejemplo, una vacuna
recombinante se utiliza para proteger aves de corral contra la viruela aviar
(enfermedad que reduce la ganancia de peso y la producción de huevos) y la
enfermedad de Newcastle (una enfermedad viral que es a menudo fatal). el virus de la
viruela aviar (un virus pox típico) se modificó primero mediante la supresión de genes
que causan la enfermedad, pero no los que provocan la inmunidad. a continuación, se
inserta la inmunidad inducida de genes de virus de Newcastle. Esto resultó en una
vacuna polivalente, una vacuna que inmuniza contra dos enfermedades diferentes.
virus vaccinia se utiliza ampliamente para vacunas recombinantes preparados para uso
humano. virus vaccinia en general, no es patógeno para los seres humanos y se ha
utilizado hace 100 años como vacuna contra el virus de la viruela. Como siempre, la
clonación de genes en el virus vaccinia requieres un marcador selectivo, que es
proporcionada por el gen de la timidina quinasa. vaccinia es inusual para un virus en la
realización de su propia timidina quinasa, una enzima que normalmente convierte
timidina en trifosfato de timidina. sin embargo, esta enzima también convierte el
análogo de base de 5-bromodesoxiuridina a un nucleótido que se incorpora en el ADN,
que es una reacción letal. Por lo tanto, las células que expresan la timidina quinasa (ya
sea a partir del genoma de la célula huésped o de un genoma del virus) se mataron por
5- bromodesoxiuridina.

genes que se pondrán en virus vaccinia se insertan primero en un plásmido de

Escherichia coli que contiene parte del gen de la quinasa de timidina vaccinia. el ADN
extraño se inserta en el gen tdk, que está interrumpido. Este plásmido recombinante se
transforma entonces en células animales cuya tdk donde sus propios genes han sido
inactivados. estas células también están infectadas con el virus vaccinia de tipo
silvestre. las dos versiones de un gen tdk recombinan en el plásmido y el otro en el
virus. algunos virus adquieren un gen tdk perturbado más su inserción externa. las
células infectadas por el virus de tipo salvaje, con timidina quinasa activa, se matan
por la 5-bromodesoxiuridina. las células infectadas por el virus vaccinia recombinante
con un gen tdk interrumpido crecen el tiempo suficiente para producir una nueva
generación de partículas virales. en otras palabras, el protocolo selecciona en busca de
virus cuyo gen tdk contiene un inserto clonado de ADN extraño.
virus vaccinia en realidad no necesitan timidina quinasa para sobrevivir. en
consecuencia, los virus vaccinia recombinantes pueden infectar células humanas y
expresar ningún gen foráneo que llevan. De hecho, los virus vaccinia pueden ser
diseñados para llevar genes de varios virus (es decir, que son vacunas polivalentes)
Actualmente, varias vacunas de vectores vaccinia se han desarrollado y con licencia
para uso veterinario, incluyendo uno para la rabia. muchas otras vacunas vaccinia
están en fase de ensayo clínico. vacunas de vaccinia son relativamente benignas, pero
altamente inmunogénica en humanos, y su uso es probable que aumente en los
próximos años.