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Cartilla Bioquimica (Tomo II)
Cartilla Bioquimica (Tomo II)
El metabolismo
Es definido brevemente, como la suma total de las reacciones enzimáticas que tienen
lugar en la célula. Cuatro son las funciones específicas del metabolismo:
Obtener energía química del entorno de los elementos orgánicos nutritivos o de la
luz solar
Convertir los elementos nutritivos exógenos en los precursores de los
componentes moleculares de las células.
Reunir los precursores para formar proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y otros
componentes celulares.
Formar y degradar aquellas biomoléculas necesarias para las funciones celulares
especializadas.
Las secuencias reacciónales del metabolismo son semejantes en todas las formas de
vida especialmente las que se conocen como rutas metabólicas centrales.
Catabolismo y anabolismo
1
secuencias anabólicas puede utilizarse esa energía del enlace fosfato. Esta fase del
metabolismo se denomina acoplamiento energético. El metabolismo intermedio y el
acoplamiento de energía están obligatoriamente interconectados y son
interdependientes. Por ello, cuando examinamos los esquemas metabólicos deberemos
analizar:
1. Las etapas de reacción por las que la estructura covalente del precursor se
altera para formar el producto.
2. Los cambios de energía química que acompañan a esta conversión.
2
Lípidos Polisacáridos Proteínas
Fase I
Ácidos grasos Hexosas
Aminoácidos
glicerina Pentosas
Gliceraldehído
3-fosfato
Fase II
Fosfoenol
piruvato
Piruvato
Acetil - C o A
citrato
oxalacetato
isocitrato
Fase III malato
LA ENERGÍA EN LA CÉLULA
Las moléculas orgánicas complejas, tales como la glucosa contienen mucha energía
potencial a causa de su elevado grado de ordenación estructural; poseen una entropía
relativamente pequeña. Cuando la molécula de glucosa se oxida y forma seis moléculas
de CO 2 y seis de H2 O , sus átomos experimentan un aumento en el desorden. Como
resultado de esta transformación, la molécula de glucosa experimenta una pérdida de
energía libre que es energía útil y capaz de realizar trabajo. La energía libre se conserva,
como energía química, específicamente como ATP. Dado que el ATP formado puede
difundirse hacia aquellos lugares en la célula en que se necesite su energía, constituye
una forma de transportar la energía. La energía química del ATP se libera después,
durante la transferencia de su grupo o grupos fosfatos terminales, a determinadas
moléculas de un aceptor específico, que adquiere un nivel superior de energía y puede
realizar trabajo. Un segundo camino para transportar la energía química de las
reacciones de óxido-reducción del catabolismo a las reacciones anabólicas, que
necesita de energía, es en forma de electrones. En las síntesis de algunas biomoléculas
ricas en hidrógeno, tales como los ácidos grasos y el colesterol, se requieren electrones
e hidrógeno para la reducción de los enlaces dobles a simples. En La célula los
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electrones son transportados enzimáticamente desde las oxidaciones productoras de
electrones tales como los dobles enlaces carbono-carbono o carbono-oxígeno, mediante
coenzimas transportadoras de electrones, la más importante es la nicotinamida-adenin-
dinucleótido fosfato (NADP). El NADP desempeña de este modo, el panel de
transportador de electrones ricos en energía desde las reacciones catabólicas hasta las
reacciones anabólicas que los necesitan.
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TEMA XIII: PRINCIPIOS DE BIOENERGETICA Y CICLO DEL ATP
Localización y propiedades del ATP y del ADP. Variación de energía libre estándar de
las reacciones químicas. Energía libre estándar de la hidrólisis del ATP. Compuesto con
enlace fosfato de bajo y alto nivel energético. Vías enzimáticas de la transferencia de
fosfato. Principio del intermediario común. Otros ribonucleótidos que participan en la
transferencia de energía en la célula 5' difosfato y 5' trifosfato. Papel del AMP y del
pirofosfato.
El sistema ATP - ADP actúa como transportador de energía química, ya que el ADP es
capaz de aceptar un grupo fosfato en las reacciones acopladas productoras de energía
del catabolismo, y el ATP así formado puede ceder su grupo fosfato terminal, en otras
reacciones acopladas que requieren energía.
En este capítulo examinaremos los principios químicos y termodinámicos en que se
basa el funcionamiento del sistema ATP - ADP.
El ATP fue aislado por primera vez, en 1.929 por Fiske y Subbarow, de los extractos
ácidos de músculo.
Su estructura se dedujo algunos años después, mediante experimentos de degradación
y fue definitivamente confirmada por síntesis química total realizada por Todd y sus
colegas en 1948. Desde los inicios del descubrimiento, se sospechó que el ATP
desempeñaba un papel en la transferencia de energía celular pero recién en 1939-1941
Lipmann propuso que actuaba como medio principal de transferencia de la energía
química en la célula.
El ATP, el ADP y el AMP no son sustancias que existen solo en trazas; la suma de sus
concentraciones en la fase acuosa de los diversos tipos de células intactas oscila entre 2
y 15 mM. La concentración de ATP es por lo común, muy superior a la suma de las otras
dos concentraciones del AMP, habitualmente es la menor de las tres.
Estos nucleótidos están presentes no sólo en el citoplasma, sino también en organelas
tales como mitocondrias y núcleo. La compartimentación intracelular del sistema ATP
constituye una característica importante en la regulación celular del metabolismo.
A pH 7,0 tanto ATP como ADP son aniones muy cargados, el ATP posee cuatro
protones ionizables en su grupo de ácido trifosfórico. Tres de los protones poseen
valores de pK (K = constante de disociación) bajo entre 2 y3; por lo tanto a pH 7,0 están
completamente disociados; el cuarto protón tiene un pK' de 6,5; por consiguiente a pH
7,0 se halla disociado en un 75%.
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NH2
N
N ATP
N N
O O O
HO P O P O P OH 2 C O
OH OH OH
H H
H
H : hidrógenos que cede en su disociación
OH OH
El ADP posee tres protones ionizables, dos de ellos están completamente disociados a
pH 7,0 y el tercero que posee un pK' de 7,2 a pH 7,0 se halla disociado alrededor del
39%.
La elevada concentración de cargas negativas en torno al grupo trifosfato del ATP
constituye un factor importante en su naturaleza de compuesto de alto contenido
energético.
En la célula intacta existen muy pocas cantidades de ATP y de ADP en forma de
aniones libres, se hallan presentes en su mayor parte en forma de complejos Mg ATP y
Mg ADP a causa de la gran afinidad de los grupos pirofosfato para enlazar cationes
divalentes y de la elevada concentración de ión Mg en el fluido intracelular. La afinidad
del ATP por el Mg es unas diez veces mayor que la del ADP.
mg
-
O O O
-
Adenina Ribosa O P O P O P O mg-ATP
O O O
mg
O O
-
Adenina Ribosa O P O P O mg-ADP
O O
Una descripción de las bases físico-químicas de la función del ATP en el ciclo energético
de la célula, requiere un breve repaso de algunos principios de la termodinámica. El
análisis termodinámico de los intercambios energéticos se inicia por las siguientes
definiciones:
a. Sistema: Es el conjunto de materia que es objeto de nuestro estudio.
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b. Entorno: Toda materia del universo, aparte del sistema que se considera. En
el transcurso del proceso en estudio la energía puede pasar del sistema al
entorno, o viceversa.
c. Estado inicial: Es el contenido de energía del sistema y del entorno, al iniciar
el proceso que se analiza.
d. Estado final: Contenido de energía de sistema y entorno una vez que se ha
alcanzado el equilibrio.
El contenido de energía de cada estado es una función de diversas magnitudes
medibles (temperatura, presión, volumen, masa, etc.) que se formulan mediante una
ecuación de estado. A partir de las medidas de los cambios de contenido de energía del
sistema y el entorno, a medida que el sistema evoluciona desde su estado inicial hasta
su estado final, puede realizarse un balance de energía.
(Bloques de cobre)
Estado de equilibrio
UN SISTEMA DE EQUILIBRIO
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desorden (arco a bloques al azar).
irreversible
reversible
espontáneo
endotérmico
exotérmico
G H - T. S (1)
En los sistemas biológicos las reacciones químicas tienen lugar en disoluciones acuosas
diluidas, en las que la temperatura, presión y volumen permanecen constantes. En estas
condiciones, ΔPV es cero, por lo tanto:
H E
Si sustituimos en la ecuación (1)
G E - T. S
reordenamos la ecuación:
E G T. S
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Con esta ecuación vemos que a temperatura y presión constantes la variación de
energía total del sistema ( ΔE ) (que es equivalente al cambio calórico ΔH) es la suma de
T.Δ. S más la variación de la energía libre.
La variación de energía libre puede definirse como aquella fracción del cambio de
energía total del sistema disponible para realizar trabajo a medida que el sistema
evoluciona hacia su estado de equilibrio, a T y P constantes. Mientras el sistema se
aproxima al equilibrio, la energía libre disminuye hasta un valor mínimo.
El cambio de energía libre que tiene lugar durante las reacciones químicas se calcula
empleando una ecuación que puede derivarse de la ley de equilibrio químico. Para una
reacción general del tipo:
aA + bB cC + dD (3)
c d
C .D
ΔG ΔG º RT ln a b
(4)
A .B
c d
C .D
0 ΔGº RT ln a b
(5)
A .B
De donde:
c d
C .D
ΔG º RT ln a b
(6)
A .B
c d
C .D
K' eq a b
(7 )
A .B
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ΔGº RT ln (K' eq)
O bien:
ΔGº 2.303 RT log10 (K' eq) (8)
Esta ecuación nos muestra que ΔGº , la variación de energía libre estándar de una
reacción química, puede calcularse a partir de su constante de equilibrio. La ΔGº
constituye, por lo tanto, una constante termodinámica para una reacción química dada.
Puede definirse de otro modo, que indica claramente su verdadero significado. La
variación de energía libre estándar de una reacción constituye, en realidad, la diferencia
existente entre la energía libre estándar de los reactivos y la energía libre estándar de
los productos, hallándose cada término ajustado a la estequiometría de la ecuación de
reacción:
ΔGº Gº productos Gº reaccionantes
Para la reacción (3) será:
ΔGº (c Gº C d Gº D ) (a Gº A b Gº B )
La energía libre estándar de un compuesto constituye la medida de la cantidad total de
energía libre que puede proporcionar por descomposición completa.
Es importante comprender la diferencia que hay entre ΔGº , que es la variación de
energía libre estándar, y ΔG que es la variación de energía libre medida o real. Esta
diferencia puede explicarse mejor utilizando una analogía. ΔGº es un valor constante
para una determinada reacción a una temperatura también determinada.
Por otra parte, ΔG varía con las concentraciones de los reaccionantes y de los
productos.
El valor de ΔGº únicamente es igual al de ΔG cuando todos los reactivos y todos los
productos están presentes a concentración 1,0M.
El valor de ΔG es el que determina si una reacción química ocurrirá en la dirección
escrita, partiendo de unas concentraciones de reaccionantes determinadas.
Recuérdese que una reacción química solamente ocurrirá si ΔG es negativo, es decir, si
la energía libre del sistema disminuye.
Las reacciones químicas con un ΔGº negativo reciben el nombre de exergónicas; se
realizan espontáneamente en la dirección en que están escritas. Si recordamos el
ejemplo de los bloques:
ordenado
ΔG º disminuye, es negativo
exergónica o exotérmica
espontánea
irreversible
desordenado
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Las reacciones con un cambio de energía libre estándar positivo reciben el nombre
de endergónicas o endotérmicas, no se realizan de modo espontáneo en la dirección en
que se escriben. Volviendo al ejemplo:
desordenado
ΔG º aumenta, es postivo
endergónica o endotérmica
no es espontánea
reversible
ordenado
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grandes valores negativos de ΔGº .
Para poder medir el ΔGº de la hidrólisis del ATP, se descompone en cierto número de
etapas menores, las cuales pueden medirse más fácilmente.
Veremos un ejemplo: en primer lugar, se deja reaccionar al ATP con la glucosa, en
presencia de hexoquinasa para formar ADP y glucosa-6-fosfato. Se mide la constante de
equilibrio, y a partir de ella se calcula ΔGº .
hexoquinasa
ATP + glucosa ADP + glucosa_6_fosfato
K'eq = 661
fosfatasa
glucosa_6_fosfato + H2O glucosa + fosfato Pi
K'eq = 171
fosfatasa
glucosa_6_fosfato + H2O glucosa + fosfato Pi
Puesto que los valores de ΔGº de las dos reacciones son aditivas, la ΔGº de la hidrólisis
del ATP puede calcularse a partir de ellos:
Sin embargo el único grupo fosfato del AMP tiene un valor mucho menor:
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AMP + H2O adenosina + Pi ΔGº -3.40 kcal
Lo que sucede es que los enlaces entre grupos fosfatos adyacentes son enlaces del tipo
de anhídrido, mientras que el enlace entre el fosfato y la ribosa en el AMP es un enlace
éster.
ΔGº (kcal)
O sea que la función del sistema ATP-ADP, consiste en servir como transportador
obligatorio intermedio de grupos fosfato desde los compuestos con enlaces fosfato de
elevado nivel energético, situados por encima del ATP en la escala termodinámica,
hasta las moléculas aceptoras que forman compuestos con enlaces fosfato de bajo nivel
energético situados en la escala por debajo del ATP.
Hay dos clases de compuestos fosforilados que poseen una ΔGº de hidrólisis más
negativa que la del ATP:
1. Los compuestos fosfato que se forman durante la ruptura enzimática de
moléculas combustibles.
2. Los compuestos fosfato utilizados como almacenadores de la energía del enlace
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fosfato.
Los dos miembros más importantes de la primera clase son el 1-3 difosfoglicerato y
el fosfoenol piruvato, los cuales se forman durante la fermentación anaerobia de la
glucosa (glucólisis).
1-3 difosfoglicerato + ADP 3 fosfoglicerato + ATP ΔG º -4.5 kcal
Los compuestos fosfato de elevado nivel energético, que actúan como reservorio de la
energía de enlaces fosfato, reciben con frecuencia el nombre de fosfágenos. Los dos
fosfágenos principales son la fosfocreatina hallada en muchos vertebrados, y la
fosfoarginina, presente en muchos invertebrados. Ambos se forman a partir de la
creatina y de la arginina por transferencia de grupos fosfato desde el ATP en reacciones
catalizadas por la creatin-fosfoquinasa y la arginin-fosfoquinasa, respectivamente.
Ambas reacciones son reversibles pero el equilibrio se halla desplazado hacia la
formación de ATP.
fosfocreatina + ADP creatina + ATP
Fosfoenol piruvato
Dadores de P de alta energía
P
Reservorio de fosfocreatina
1-3 difosfoglicerato
P
P
ATP
P
Aceptores de P Glucosa_6_fosfato
de baja energía P
Glicerol_3_fosfato
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La figura es un esquema de las reacciones enzimáticas de transferencia de fosfato en la
célula. Constituye un rasgo importante que el sistema ATP-ADP sea el nexo de unión
obligado entre los compuestos fosfato de elevado y de bajo nivel energético. Los grupos
fosfato se transfieren, en primer lugar, mediante la acción de fosfotransferasas
específicas, desde compuestos de alto nivel energético al ADP, como en el ejemplo:
piruvato -
fosfoenol piruvato + ADP piruvato + ATP
quinasa
A + B C + D
D + E F + G
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ambas reacciones están ligadas por un intermediario común, en este caso el
componente D.
El único camino mediante el cual la energía química puede ser transferida desde una
reacción a otra en condiciones isotérmicas es el de que ambas reacciones posean un
intermediario de reacción común. Casi todas las reacciones metabólicas de la célula se
realizan mediante secuencias de esta clase.
En las reacciones consecutivas, responsables de la transferencia de energía a través del
ATP, la energía química se transfiere desde un dador fosfato de elevada energía hasta
el ADP, y se conserva en forma de ATP como producto de reacción. En la reacción
subsiguiente, el ATP se comporta como un sustrato, y cuando pierde su grupo fosfato
terminal, que cede a la molécula del aceptor, ésta última aumenta su contenido
energético. Por lo tanto, el ATP es el intermediario común.
En realidad, la transferencia de intermediarios comunes constituye un atributo general de
las reacciones químicas consecutivas y no necesita por fuerza, ni grupos fosfatos, ni
ATP.
En efecto, veremos que muchos grupos funcionales distintos del fosfato, por ejemplo,
átomos de hidrógeno, grupos acetilo, se transfieren enzimáticamente mediante
reacciones consecutivas que poseen intermediarios comunes, tales reacciones pueden
analizarse termodinámicamente por los mismos métodos que se han desarrollado para
el caso especial de las transferencias del grupo fosfato.
ATP
P UTP
Polisacáridos
ATP
P GTP
Proteínas
ATP
P CTP
Lípidos
ATP
P CTP
P GTP
ARN
P UTP
ATP
P d ATP
P d GTP
ADN
P d TTP
P d CTP
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Todas estas canalizaciones conectan con el ATP mediante la enzima nucleósidos
difosfoquinasa presente en las mitocondrias y en el citoplasma de la célula, cataliza las
reacciones del tipo mostrado en el esquema.
Cada tipo de nucleósido trifosfato posee una función especializada. Por ejemplo: el
UTP es el dador de fosfato inmediato, y por lo tanto el donador de energía de reacciones
que conducen a la síntesis de polisacáridos.
PPi + H2O 2 Pi
Esta hidrólisis secundaria del pirofosfato constituye una etapa valiosa de liberación de
energía, la cual se utiliza para asegurar que ciertas reacciones biosintéticas se realicen
por completo.
El Pi formado se utiliza para la regeneración del ATP a partir de ADP. La adenilato-
quinasa cataliza la refosforilación del AMP a ADP.
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TEMA XIV: GLUCOLISIS
Vamos a considerar los mecanismos por los que las moléculas combustibles se
degradan y su energía se conserva en forma de energía de enlace fosfato ATP.
Se estudiarán los procesos conocidos como fermentación, mediante el cual muchos
organismos extraen energía química de la glucosa y otros combustibles en ausencia de
oxígeno molecular.
Nos referimos primeramente el proceso de fermentación para luego poder hablar de
respiración.
FERMENTACION Y RESPIRACION
glucosa glucosa
con CO 2
CO2 + H2O
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proceso se denomina glucólisis que significa lisis de la glucosa.
triosas triosas
C C C C C C C C C C C C
En estas reacciones tenemos que hablar de las reacciones de óxido reducción que se
producen en todo organismo donde el agente oxidante recibe los electrones y el agente
reductor entrega electrones.
En este caso de la fermentación alcohólica el etanol es una molécula relativamente
reducida rica en H 2 , pobre en O 2 . La molécula de CO 2 es relativamente oxidada, pobre
en H 2 .
En el caso de la fermentación homoláctica el grupo metilo se halla más reducido que el
grupo carbonilo. Veamos la reacción completa:
O
C
H CH3
HC OH
HO C H + 2 Pi + 2 ADP 2 CH OH + 2 ATP + 2 H2O
HC OH COOH
HC OH
CH2 OH
Etanol
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ANALIZAREMOS LA REACCION ENERGETICA DE LA GLUCOLISIS
ETAPA DE LA GLUCOLISIS:
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glucosa almidón
glucogeno
ATP Pi
FASE I glucosa-1-P
galactosa ADP
manosa glucosa-6-P
Congregación de azúcares sencillos y pentosa
su conversión en fosfato de fructosa-6-P
gliceraldehído; entrada de ATP ATP ADP
fructosa-1-6-di P
glicealdehído-3-P (2)
2 NAD+
Pi
fosfoenolpiruvato (2)
2 ADP
2 ATP piruvato (2)
2 NAD+
2 lactato
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1. Fosforilación de glucosa por el ATP: catalizada por dos enzimas: la
hexoquinasa y glucoquinasa.
Mg++
ATP + glucosa ADP + glucosa-6-P Gº 4 kcal
O O
H H H H
H H
+ ATP ADP + ΔG º -4 kcal
OH H OH H
OH OH OH OH
H OH H OH
glucosa glucosa-6-fosfato
CH2 OPO 3=
CH2 OPO 3=
O O
H H CH2 OH
H
H OH H OH
glucosa-6-P fructosa-6-P
H OH H OH
22
4. Escisión de la fructosa 1 - 6 difosfato por una aldosa (la fructosa-1-6-difosfato
gliceraldehído 3-liasa) dando fosfato de dihidroxiacetona + gliceraldehído-3-
fosfato.
1. CH2 OPO 3=
2. C O H
1. CH2 OPO 3= 4. C O
3. HO CH
ΔGº 5.73 kcal
2. C O + 5. H COH
4. H COH
3. CH2 OH 6. CH2 OPO 3=
5. H COH
6. CH2 OPO 3=
Solamente uno de los dos fosfatos de triosa, el gliceraldehído 3-fosfato, puede ser
directamente degradado en las reacciones posteriores de la glucólisis. El otro, el
fosfato de dihidroxiacetona, se convierte reversiblemente en gliceraldehído-3-fosfato
por acción de la enzima triosa fosfato isomerasa.
O
CH2 OPO 3= C
H
ΔGº 1.83 kcal
C O H C OH
SEGUNDA FASE
1. Oxidación del gliceraldehído 3 P a 1-3 difosfoglicerato.
La enzima que actúa es G_3_fosfato deshidrogenasa, o gliceraldehído 3 fosfato
deshidrogenasa.
23
O
C O PO 3=
H
C O HC OH
CH2 OPO 3=
O
1. C 3. CH2 OPO 3=
O PO 3=
- -
COO COO
3-fosfoglicerato 2-fosfoglicerato
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CH2 OH CH2
enolasa
H COPO 3= C O PO 3= + H2O ΔG º 0.44 kcal
- -
COO COO
2-fosfoglicerato fosfoenolpiruvato
CH3
CH2
ΔG º 7.5 kcal
C O PO 3= + ADP ATP + C O
(reacción irreversible)
- -
COO COO
fosfoenolpiruvato piruvato
CH3
CH3
+
C O + NADH + H+ H COH + NAD ΔGº 6.0 kcal
-
- COO
COO
piruvato lactato
25
BALANCE GLOBAL
2 ADP
26
TEMA XV: CICLO DE LOS ACIDOS TRICARBOXILICOS Y VIA DEL
FOSFOGLUCONATO
En primer lugar, el producto de la glicólisis, el ácido láctico, es una molécula casi tan
compleja como la de glucosa y sus átomos de carbono todavía se hallan en un
mismo estado de oxidación. El CO 2 , producto de la respiración, es una molécula
mucho más sencilla y pequeña que la glucosa, y su átomo de carbono está
completamente oxidado. En segundo lugar, la cantidad de energía que se libera en
la transferencia de un par de electrones desde una molécula combustible
determinada a un aceptor electrónico, varía con la naturaleza del aceptor. Puede
liberarse mucha más energía cuando el aceptor electrónico el oxígeno molecular,
como ocurre en la respiración, que cuando es el piruvato el que actúa como aceptor,
que es el caso de la glicólisis.
27
ORGANIGRAMA RESPIRATORIO
28
Carbohidrato
Acetil-CoA
oxalacetato citrato
cis-aconitato
Ciclo del ácido malato
isocitrato
tricarboxilo CO2
fumarato -oxoglutarato
CO2
succinato
2H 2H 2H 2H
flavoproteina
coenzima Q
Transporte electrónico
y fosforilación citocromo b
oxidativa ADP + Pi ATP
+ citocromo c
2H
citocromo a + a3
+
ADP A Pi ATP
2 H+ + 1/2 O2 H2O
29
Oxidación del Piruvato a acetil CoA
O
Piruvato
CH3 C COOH
NAD+ NADH2
HS-CoA CO2 O
CH3 C S CoA + CO 2
Acetil-CoA
Gº 8.0 kcal
S
CH2
CH
(CH 2)4
30
COOH
La decarboxilación oxidante del piruvato a acetil CoA CO2 necesita tres enzimas
diferentes y 5 coenzimas que constituyen el:
Piruvato-deshidrogenasa
enzimas dihidrolipoil-transacetilasa
dihidrolipoil-deshidrogenasa
Sistema de la
piruvato-deshidrogenasa Coenzima A
ácido lipoico
coenzimas Pirofosfato de tiamina (TPP)
NAD
FAD
COOH
COOH CH2
C O HO C COOH citrato
COOH COOH
En esta reacción el grupo metilo (CH3 ) de la acetil CoA se condensa con el átomo
de carbono carbonílico del oxalacetato con la hidrólisis del enlace tioéster y
formación de la CoA SH libre.
O
C
OH H2O
COOH COOH
citrato cis-aconitato
31
H2O
COOH CH2 CH CH COOH
COOH OH
isocitrato
CO2 O
COOH CH2 CH CH COOH COOH CH2 CH2 C COOH
COOH OH NAD+
NADH2
isocitrato alfa-cetoglutarato
succinato fumarato
6. Se produce una hidratación del fumarato dando malato, actuando coma catali-
zador la fumarasa.
OH
COOH CH CH COOH + H2O COOH C CH2 COOH
Fumarato H Malato
7. En la última reacción del ciclo la malato-deshidrogenasa dependiente del NAD
cataliza la oxidación del malato a oxalacetato.
OH O
+
COOH C CH2 COOH + NAD COOH C CH2 COOH + NADH2
H
Malato Oxalacetato
Podemos ahora resumir los productos producidos en una vuelta del ciclo del ácido
tricarboxílico.
Dos átomos de carbono aparecen en forma de CO 2 equivalentes, aunque no
idénticos, a los dos átomos de carbono del grupo acetilo que ingresa en el ciclo. Por
deshidrogenación enzimática se producen cuatro pares de átomos de hidrógeno,
tres pares se utilizan para reducir el NAD y uno para reducir el FAD.
En último término, estos cuatro pares de átomos de hidrógeno y electrones se
combinan con el oxígeno, una vez realizado su transporte a lo largo de la cadena
respiratoria.
Muchas células disponen, además del ciclo del ácido tricarboxílico, de otra ruta de
degradación de la glucosa cuya primera reacción es la oxidación de la glucosa-6-
fosfato a 6-fosfato gluconato.
La ruta del fosfogluconato, conocida como ruta de los fosfatos de pentosa o
desviación del monofosfato de hexosa, no es una ruta principal de oxidación de la
glucosa.
Su objetivo primordial, en la mayor parte de las células, es obtener NADP reducido
en el citoplasma extramitocondrial.
Una segunda función es la producción de pentosas en especial D-ribosa, que se
emplea en la síntesis de ácidos nucleicos.
Otra función importante consiste en participar en la formación de glucosa, a partir del
CO 2 , en las reacciones de fotosíntesis.
Las diversas etapas de la ruta del fosfogluconato tienen lugar en la porción soluble
del citoplasma extramitocondrial de la célula.
33
1. La primera reacción de la ruta del fosfogluconato es la deshidrogenación
enzimática de la glucosa-6-fosfato por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
para formar 6-fosfogluconato.
H C OH C O COOH
H C OH H C OH H C OH
O + NADP+ O +NADPH
2
HO C H HO C H HO C H
H C OH H C OH HC OH
H C H C HC OH
COOH C O
H C OH
H COH
H C OH
+ NADP+ H COH + NADPH2 + CO2
HO C H
CH 2OPO 3=
H C OH
CH 2OPO 3=
6-fosfogluconato ribulosa-5-fosfato
34
CH2 OH
C O
HO C H xilulosa-5-fosfato
CH2 OH
HC OH
C O sa
m era
epi CH 2OPO 3=
H C OH
CHO
H C OH
iso HC OH
me
CH 2OPO 3= ras
a
H C OH ribosa-5-fosfato
ribulosa-5-fosfato
H C OH
CH 2OPO 3=
C O HCOH C O
HO C H + H C OH HO C H + CHO
H C OH H C OH HC OH HC OH
HC OH
CH2 O PO 3=
Debe observarse que uno de los productos de la acción de la transcetolasa es el
xilulosa-5-P ribosa-5-P sedoheptulosa-7-P gliceraldehído-3-P
35
gliceraldehído-3-P que es un intermediario de la secuencia glicolítica. Su formación
constituye un lazo de conexión entre la vía glicolítica y la del fosfogluconato.
CH2 OH CH2 OH
C O C O
HO C H CHO HO C H CHO
H C OH + H C OH H C OH + HC OH
H C OH CH2 O PO 3= H C OH HC OH
CH2 O PO 3=
H C OH CH2 O PO 3=
CH2 O PO 3=
36
TEMA XVI: TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACION OXIDATIVA
Veremos en este capítulo que los pares de electrones derivados de los inter-
mediarios del ciclo del ácido tricarboxílico fluyen a lo largo de una cadena de varios
eslabones, constituidos por enzimas de transporte electrónico, con niveles de
energía sucesivamente inferiores hasta reducir al oxígeno molecular, que es el
último aceptor electrónico, en la respiración. Durante este proceso se conserva gran
parte de la energía libre de estos electrones en forma de energía del enlace fosfato
del ATP; el proceso se denomina fosforilación oxidativa.
El transporte electrónico y la fosforilación oxidativa suceden en casi todas las células
aerobias, las enzimas que catalizan estas reacciones se hallan localizadas en la
membrana interna de las mitocondrias.
Reacciones de oxidación-reducción
carga 0 carga 2
carga 2 carga 0
37
Resumiendo:
H H H H
H2O -2H H2O -2H
H C H H C OH H C O H C O CO 2
-2H -2H
H H
ácido anhídrido
metano metanol metanal carbónico
metanoico
pérdida de oxígeno
reducción ganancia de electrones
ganancia de hidrógeno
Los sistemas que poseen un potencial estándar de reducción más negativo que el
+
del par H2 2H muestran mayor tendencia a perder electrones que el hidrógeno.
Los que poseen potencial más positivo tienen menor tendencia a perder electrones.
Obsérvese la pareja agua-oxígeno: posee un potencial estándar de reducción
fuertemente positivo.
H2O 1/2 O2 + 2 H+ + +2e-
Por dicha razón el agua muestra muy poca tendencia a perder electrones y a formar
oxígeno molecular. Dicho de otro modo, el oxígeno molecular tiene gran afinidad por
los electrones, superior que la de aceptores biológicos de electrones tales como el
NAD , las flavoproteínas y los citocromos.
Cadena respiratoria:
cit. b c a+ a3
Enzimas de óxido-reducción:
Tres son las clases principales de enzimas que participan de la corriente del
transporte electrónico desde los sustratos orgánicos hasta el oxígeno molecular.
De acuerdo al orden en que participan son los siguientes:
1. Deshidrogenasas ligadas a la piridina que requieren NAD o NADP como coen-
zima. Participan en la primera parte del eslabón:
Sustrato reducido NAD+
FADH + H CoQ
FAD CoQH + H +
cit. b c a+ a3
40
Deshidrogenasa ligada a la piridina:
+ O adenina
HO P O H2C
H H
O OH OH
CONH 2
+ O +
HO P O H2C N
H H
O
OH OH
H H
CONH 2 CONH 2
+ 2H + H+
+
N N
R R
41
Deshidrogenases ligadas a la flavina:
6-7 dimetil-iso-aloxacina
CH2
CH2
CH2
riboflavina CH2
(vitamina B2)
CH2
FDN
O OH
+ O adenina
HO P O P OCH2
H H
O O
H
OH OH
FDN: resulta de la unión pirofosfórica entre el FMN y el AMP. La parte activa del
FAD y del FMN es el anillo de isoaloxacina.
O H O
H N H
N
CH3 N CH3 N
CH3 CH3
N N O N N O
R R H
HC CH
N +++
Fe
++
N Fe HN
N
HC CH
Forman quelatos (literalmente, cuatro dientes) con iones metálicos como el hierro,
por ejemplo. En los citocromos, el átomo de Fe experimenta cambios reversibles
entre las formas Fe (II) y Fe (III); su función real es la de desempeñar el papel de
transportadores electrónicos.
44
Acoplamiento de la fosforilación oxidativa al transporte electrónico
y de su componente endergónico:
3 ADP + 3 Pi 3 ATP + 3 H2O Gº 3 7.3 21.9 kcal
2.
2 piruvato 2 acetil CoA
Resumiendo:
a ………….. 6 ATP
b ………….. 6 ATP
c ………….. 6 ATP
d ………….. 4 ATP
e ………….. 2 ATP
24 TP
1. ………….. 2 ATP
2. .………….. 6 ATP
24 glucosa + 6 O2 + 36 Pi + 36 ADP
3. …………..
ATP
6 CO2 + 36 ATP + 42 H2O
4. ………….. 4 ATP
36
ATP
componente endergónico
36 Pi + 36 ADP 36 ATP + 36 H2O Gº 263 kcal
46
263
100 39%
680
NADH + H+ NAD+
DIHIDROXICETONA-P GLICEROL-FOSFATO
NAD
FAD
ATP
ATP MITOCONDRIA
O2
47
TEMA XVIII: Oxidación de los ácidos grasos
Los ácidos grasos que experimentan oxidación en los tejidos de los animales
superiores provienen del fluido extracelular o bien de los lípidos intracelulares
endógenos. La sangre de los vertebrados contiene cantidades considerables de
triacilgliceroles y de fosfoglicéridos, así como cantidades muy pequeñas de ácidos
grasos libres unidos a la proteína seroalbúmina, que actúa transportando los ácidos
grasos. Estos últimos son oxidados en tejidos tales como el corazón y el músculo.
La fuente endógena principal de ácidos grasos combustibles es grasa de depósito,
en foma de gotitas de grasa del citoplasma, constituido, en su mayor parte por
triacilgliceroles.
Resumiendo lo expuesto:
Ácidos grasos a
oxidarse provienen 1. grasa de depósito constituida
por triacilgliceroles.
b. fuente endógena
2. fosfoglicéridos de las
membranas
A. Hidrólisis intracelular
Los ácidos grasos deben hallarse en forma libre, es decir, no esterificados para que
puedan experimentar el proceso de activación y oxidación. Para ello, deben en
primer lugar, hidrolizarse por la acción de lipasas intracelulares para rendir ácidos
grasos libres y glicerina. Se sabe relativamente poco acerca de la secuencia y
48
detalles de la hidrólisis intracelular de los lípidos. Sin embargo, en general, no tiene
lugar acumulación significativa de ácidos grasos o de otros productos de hidrólisis
que serían tóxicos para la estructura de la membrana. Evidentemente, la velocidad y
la ruta de hidrólisis de los lípidos intracelulares está ajustada a la velocidad de
utilización de los ácidos grasos.
Tres enzimas diferentes catalizan la formación de ésteres acil-CoA graso; cada una
de ellas se específica para un determinado intervalo de longitud de cadena de ácido
graso.
Las últimas dos tioquinasas activan tanto los ácidos grasos saturados como los no
saturados. Las tres se encuentran en la membrana exterior de la mitocondria. Las
propiedades y mecanismos de las tres tioquinasas, son más o menos idénticos. La
reacción global catalizada por las tioquinasas ligadas al ATP es la siguiente:
A medida que el enlace tioéster se forma entre el grupo carboxilo del ácido graso y el
grupo tiol de la CoA, el ATP experimenta ruptura pirofosfórica y rinde AMP PPi . A
su vez el PPi formado resulta hidrolizado por la pirofosfatasa inorgánica.
49
PPi + H2O 2 Pi
Transferencia de carnitina
Los ácidos grasos superiores poseen una capacidad limitada para atravesar la
membrana interior de la mitocondria en forma de ésteres de CoA; pero su entrada es
estimulada por la carnitina. En el proceso actúa una enzima la acil-CoA graso:
carnitin transferasa de ácido graso, que cataliza la transferencia del grupo acilo
graso desde su enlace tioéster con la CoA, a un enlace éster con la carnitina que es
un enlace de elevada energía.
CH3 O
+
CH3 N CH2 CH CH2 COOH + R C S CoA
CH3 OH
CH3
+
CH3 N CH2 CH CH2 COOH + CoA SH
CH3 O
C O
50
como sustrato para el ciclo de oxidación del ácido graso, que tiene lugar en el
compartimiento interno de la matriz. Las mitocondrias contienen otro tipo de acil-
tioquinasas que participan en la activación del ácido graso. Esta enzima necesita
GTP en lugar de ATP y produce GDP Pi .
2 3
R CH2 CH2 C SCoA acil-graso CoA
E FAD oxi.
H O
D. Etapa de hidratación
La hidratación reversible del doble enlace de los ésteres 2,3 enoílicos del CoA
para formar beta-hidroxiacil-CoA es catalizada por la enzima enoil-hidratasa.
51
H O
OH O
H
O O
+
R CH2 C CH2 C SCoA + NADH + H
O
O
R CH2 C SCoA + CH3 C SCoA
Balance de la oxidación
Ahora podemos escribir la ecuación para las siete vueltas del espiral necesarias
a fin de convertir una molécula de palmitoil-CoA en 8 moléculas de acetil CoA (el
ácido palmítico tiene 16 átomos de carbono). Cada molécula de FADH 2 cede un
par de equivalentes electrónicos a la cadena respiratoria a nivel de la CoA y se
generan 2 moléculas de ATP. De modo análogo, la oxidación de cada molécula
de NADH da por resultado la formación de 3 moléculas de ATP. Por lo tanto, se
forman un total de 5 moléculas de ATP por molécula de acetil-CoA escindido.
Podemos escribir ahora la ecuación que también comprende las fosforilaciones:
(1) pamitoíl CoA + 7 CoA + 7 O2 + 35 Pi + 35 ADP
Las 8 moléculas de acetil CoA formadas en el ciclo del ácido graso pueden
incorporarse ahora al ciclo de Krebs
(2) 8 acetil CoA + 16 O2 + 96 Pi + 96 ADP
Los ácidos grasos no saturados, son oxidados por las mismas rutas generales que
los ácidos saturados; pero se plantean dos problemas:
1. Los dobles enlaces de los ácidos grasos no saturados existentes en la
naturaleza se hallan en la configuración geométrica cis, mientras que los
ésteres 2,3 insaturados del acil CoA que actúan como intermediarios en
la oxidación de los ácidos grasos saturados, son trans.
2. Los dobles enlaces de la mayor parte de los ácidos grasos no saturados
aparecen en posiciones tales que la eliminación sucesiva de fragmentos
de dos átomos de carbono rinde un acil-CoA graso 3,4 en lugar de 2,3 .
53
Se ha resuelto este problema con el descubrimiento de una enzima auxiliar, la 3,4 -
cis- 2,3 -trans-enoil CoA-isomerasa que cataliza el desplazamiento del doble enlace
desde la configuración 3,4 -cis a la 2,3 -trans que es el sustrato normal de la
siguiente enzima de la secuencia de oxidación del ácido-graso.
Cuerpos cetónicos y su oxidación
CH3 O
OH
PROTEOLISIS
Antes que las proteínas puedan incorporarse a las rutas catabólicas deben
experimentar hidrólisis completa hasta transformarse en aminoácidos ya que las
moléculas proteicas intactas y la mayoría de los péptidos no pueden atravesar la
membrana celular, mientras que los aminoácidos libres son absorbidos fácilmente.
Los péptidos extracelulares y las proteínas con frecuencia son hidrolizados por
acción de enzimas segregadas al entorno, por ejemplo muchos microorganismos
forman y segregan peptidasas y enzimas proteolíticas. Sin embargo, la proteólisis
extracelular ha sido estudiada con máximo detalle en el tracto digestivo de los
vertebrados (ver proceso en página 460 de Lehninger). Por acción combinada de las
enzimas proteolíticas segregadas por el estómago, el páncreas y el intestino
delgado, las proteínas ingeridas se hidrolizan por completo hasta aminoácidos, los
cuales son absorbidos por las células epiteliales del intestino delgado, mediante un
transporte activo que requiere energía. Los aminoácidos son enviados luego a los
55
tejidos por medio de la sangre. Al entrar en las células individuales también por
transporte activo, se incorporan a los canales metabólicos. Se sabe muy poco de la
proteólisis intracelular, que en algunos tejidos como el hígado, tiene lugar a un ritmo
elevado.
Alanina
Arginina
Cisteína Glutamato
Piruvato Histidina
Glicocola
Glutamina
Serina
Prolina
Treonina
Oxoglutarato
Isocitrato
Isoleucina
Leucina Isoleucina
Triptófano Succinil-CoA Metionina
Citrato Valina
Acetil-CoA Succinato
Oxalacetato Tirosina
Fumarato
Acetoacetil-CoA
Fenilalamina
Malato
Aspartato
Fenilalanina
Asparagina
Tirosina
Leucina
Lisina
Triptófano
Ejemplo de transaminación:
R' O O NH2
COOH H
O
C O
CH2 O P OH El fosfato de piridoxal es también el
HO C grupo prostético de cierto número de
C C
OH otras enzimas que catalizan
Fosfato de piridoxal 57
C CH
H3C N
reacciones en las que intervienen -aminoácidos. En principio el fosfato de piridoxal
actúa como un transportador de grupos O, en algunos casos de aminoácidos. La
clave de acción es su grupo aldehído que puede formar una base de Shiff o
cetimina, con amoníaco o con diversas aminas.
NH2 O H H
R1 CH COOH + E C H H2O + R1 C N C E
Base de Shiff I
enzima-fosfato de
COOH oxoácido piridoxamina
Base de Shiff II
oxoácido COOH
aceptor de NH2
Base de Shiff III
H H O NH2
R2 C N C E E C H + R2 CH COOH
DESAMINACION OXIDATIVA
Este proceso ocurre en la mitocondria y los grupos NH2 recogidos de los diferentes
aminoácidos por la acción de las transaminasas, aparecen en el último término en
forma de grupos -aminos del L-glutamato.
En algunas células, particularmente en las bacterias, el glutamato experimenta una
58
desaminación oxidativa rápida, catalizada por la glutamato-deshidrogenasa ligada a
la piridina.
Descarga así en forma de iones NH 4 , los grupos aminos recogidos de los demás
aminoácidos. La L-glutamato deshidrogenasa puede usar también el NADP como
aceptor de electrones, el NADPH así formado, actúa como reductor en las
reacciones biosintéticas. La mayor parte de los organismos tienden a reutilizar el
NH 4 formado en el catabolismo de los A.A. recuperándolo.
Glutamato deshidrogenasa
Treonina
Cistina
Glicocola
Ácido Pirúvico
Acetil-CoA
El esquema muestra los portales de entrada por los que penetran en el ciclo de los
ácidos carboxílicos, los esqueletos carbonados de los diferentes aminoácidos. Las
rutas de los 20 A.A. dependen del punto de entrada. El punto principal de entrada en
el ciclo es por la vía del acetil-CoA, diez aminoácidos penetran por esta ruta, cinco
de ellos se degradan al acetil-CoA por la vía del piruvato y los restantes por la del
acetoacetil-CoA.
59
NH2
CH3 CH CH COOH
OH
Treonina
O
Glicocola H2N CH2 COOH CH3 C
H acetaldehído
Serin-
hidroximetil
CH OH tranferasa
NH 2 NAD+
ATP
Serina CH2 CH COOH CoA
OH Serina
deshidrasa
O
Acetil CoA
Los cinco aminoácidos que penetran por la vía del piruvato son la alanina, la
cisteína, la glicocola, la serina y la treonina (ejemplo anterior). La alanina rinde
directamente piruvato por transaminación con el -cetoglutarato. En el ejemplo
puede verse como se degradan hasta piruvato, la treonina, la glicocola y serina.
Arginina Prolina
Semialdehído
glutámico
Histidina Glutamina
Ácido Glutámico
cetoglutar ato
60
El esquema muestra las rutas que conducen hasta el -cetoglutarato de los
distintos A.A. para poder entrar al ciclo de Krebs.
METIONINA
Ácido oxobutírico
Isoileucina
Propionil-CoA
Valina
Metilmalonil-CoA
Succil-CoA
61
FORMACION DE PRODUCTOS DE EXCRECION NITROGENADOS
CICLO DE LA UREA
La formación de urea tiene lugar casi por completo en el hígado de los organismos
ureotélicos, es catalizada por un mecanismo cíclico denominado ciclo de la urea.
Penetran en este ciclo dos grupos aminos que proceden inicialmente de los -
aminoácidos por desaminación, junto con una molécula de CO 2 y forman arginina a
partir de la ornitina, diaminoácido homólogo de la lisina. Esta parte del ciclo de la
urea tiene lugar en casi todos los organismos capaces de realizar la biosíntesis de la
arginina pero solamente los animales ureotélicos poseen grandes cantidades de
enzima arginasa, que cataliza la hidrólisis irreversible de la arginina para formar urea
regenerando ornitina. La urea molécula neutra soluble en H2 O se excreta con la
orina.
- NH2 arginina
ácido
- NH2 aspártico arginasa
- NH2 carbamil-
fosfato
C NH2 ornitina
El primer grupo NH2 que entra al ciclo surge en forma de NH3 libre como
consecuencia de la desaminación oxidativa ligada al NAD del glutamato en las
mitocondrias.
Entonces el NH3 libre es utilizado junto con el CO 2 para formar fosfato de carbamilo
en una reacción compleja, catalizada por la carbamil-fosfato sintetasa.
62
-
O O
-
CO2 + NH3 + 2 ATP + H2O H2N C O P O + ADP + Pi
O
Fosfato de carbamilo
EXCRECION DE AMONIACO
Se cree que en los organismos amonotélicos los grupos NH2 derivados a diversos
-aminoácidos, se transaminan para formar glutamato, que experimenta después
una desaminación oxidativa mediante la glutamato-deshidrogenasa. El NH3 así
formado se convierte después en N 2 amídico de la glutamina, que es la forma de
transporte del NH3 en la mayor parte de organismos. La glutamina se forma por
acción de la glutamina-sintetasa, a partir de ácido glutámico.
NH2 O NH2
Mg++
HOOC CH2 CH2 CH COOH + NH3 + ATP H2N C CH2 CH2 CH COOH + ADP + Pi
63
La glutamina rinde NH3 libre en los túbulos renales de la mayoría de los vertebrados,
pero esta reacción predomina en los organismos amonotélicos. La reacción es:
OH
C N C N O2
N C C N C
NH2
Amino ácidos C H
Xantin
C C C C
N N HO N N oxidasa
H
H
O H
H C N
N C
C O
C C
O N N
H H
Acido Urico
(forma oxo)
64
TEMA XX: BIOSINTESIS DE CARBOHIDRATOS
Gº 0.5 kcal
Gº 0.7 kcal
Sumando todas las reacciones, escribimos la ecuación global, teniendo en cuenta la
suma algebraica de los Gº .
Gº 0.2 kcal
Esta reacción global es reversible, puesto que su variación de energía libre estándar
es muy pequeña. Tenderá a desplazarse a la derecha siempre que el cociente (ATP)
/ (ADP) tenga un valor elevado y que haya presente un exceso de piruvato. Para
fosforilar una molécula de piruvato se consumen dos enlaces de alto valor
energético. Practicando le dirección energética de la ecuación, se observa que el
proceso endergónico que requiere energía es:
enolasa
fosfoenol-piruvato + H2O 2-fosfoglicerato
(1)
2-fosfoglicerato 3-fosfoglicerato
(2)
ATP + 3-fosfoglicerato ADP + 1,3-difosfoglicerato
(3)
1-3 difosfo-glicerato + NADH2 gliceraldehido-3-fosfato + NAD+ + Pi
(4)
gliceraldehído-3-P dihidroxiacetona-P
(5)
gliceraldehído-3-P + dihidroxiacetona-P fructosa-1-6-di P
Gº 0.4 kcal
Resumiendo:
Por cada molécula de glucosa que se forma se consumen seis enlaces fosfato de
alto valor energético y se requiere dos moléculas de NADH2 como reductor.
67
La reacción global es exergónica.
glucógeno
UDP-glucosa
UTP
glucosa-1-P
fructosa-1-6 P
gliceraldehído-3-P
3-P-glicerato
2-P-glicerato
fosfoenolpiruvato
GTP
CO2
oxalacetato
malato
malato
oxalacetato
piruvato
piruvato
68
Gluconeogénesis a partir de los intermediarios del ciclo de los ácidos
tricarboxílicos
Acido oxalacético.
COOH
CH2
C O
COOH
En los tejidos de los animales superiores no hay formación neta de nueva glucosa a
partir de los dos átomos de carbono del grupo acetilo del acetil CoA. Lo que sí
sucede es que la condensación de la acetil CoA con el oxalacetato de citrato que al
oxidarse para dar fosfoenol-piruvato pierde 3 átomos de C en forma de CO 2 . Se
deduce que no puede formar más glucosa que el oxalacetato. En los tejidos
animales la acetil CoA no puede convertirse directamente en piruvato o en succinato.
En los animales superiores no existe senda metabólica alguna por lo que los átomos
de carbono de los ácidos grasos puedan ser utilizados para producir nueva glucosa.
69
TEMA XXI: BIOSÍNTESIS DE LÍPIDOS
Biosíntesis de ácidos grasos saturados. Formación de malonil CoA. Pasos en la
síntesis de ácidos grasos. Prolongación de los ácidos grasos saturados en la
mitocondria y los microsomas. Biosíntesis de triacil-gliceroles. Biosíntesis de
colesterol.
La ruta biosintética que conduce desde la glucosa a los ácidos grasos es importante
en la mayoría de los organismos. Puesto que la capacidad de los animales
superiores para almacenar polisacáridos es bastantes limitada la glucosa ingerida en
exceso, respecto a las necesidades calóricas inmediatas y a la capacidad de
almacenaje, se convierte en ácidos grasos, y éstos a su vez, en triacilgliceroles que
pueden almacenarse en grandes cantidades en el tejido adiposo. Constituye otro
proceso importante la biosíntesis de fosfoglicéridos de las membranas, puesto que la
mayoría de las células experimentan un recambio relativamente veloz. También se
verá la biosíntesis de colesterol. Aunque desde el punto de vista cuantitativo se trata
de una vía secundaria, el gran número de esteroles, biológicamente activos, que
derivan del colesterol le confiere considerable importancia.
Malonil transferasa
Acil transferasa
Palmitil
transferasa
Enzima condensante
( citonil sintetasa)
Deshidrogenasa
(2º reducción) SH (resto fosfopantotenil
con grupo SH terminal que
enlaza los intermediarios
acílicos)
Deshidrogenasa
Deshidratasa (1º reducción)
SH
O O
biotina
CH3 C SCoA + CO2 + ATP HOOC CH2 C S CoA
++
Mn
O O
acil
SH + CH3 C SCoA S C CH3 + HSCoA
transferasa
SH SH
O O O
malonil
S C CH3 + COOH CH2 C SCoA S C CH3 + HSCoA
transferasa
SH S
C O
CH2
COO H
71
SH + CO2
condensante
S
C O
CH2
C O
CH3
SH SH SH
SH S
C O
acil
transferasa CH2
S
CH2
C O
SH CH3
CH2
CH2
CH3
butiril-S-ACP
72
La formación de butiril-S-ACP completa el primer ciclo, el cual se repite seis veces
más en el cual una molécula de malonil-S-CoA se incorpora a la ACP para dar
malonil-S-ACP la cual experimenta pérdida de CO 2 y condensación con el acilo
graso que se encuentra en el otro brazo. De ésta manera el producto es el ácido
palmítico de 16 átomos de carbono. Al final del ciclo se libera la ACP por la acción
de una desacilasa hidrolítica.
ácido palmitico
SH
El ácido palmítico que es el producto final normal del sistema de la sintetasa de los
ácidos grasos del citoplasma, puede prolongarse mediante dos tipos diferentes de
sistema enzimáticos: el de las mitocondrias y del retículo endoplasmático.
En las mitocondrias los ácidos grasos saturados de 12 a 16 átomos de carbono, en
forma de ésteres de la CoA, se alargan por adiciones sucesivas de acetil-CoA. La
ruta mitocondrial se realiza por inversión de las mismas etapas implicadas en la
oxidación, con excepción de la reducción del doble enlace α β que conduce al ácido
graso saturado, que se verifica a expensas del NADHP como reductor, y no de la
flavoproteína. El sistema mitocondrial es capaz de alargar también los ácidos grasos
no saturados.
En los microsomas tanto los ésteres de ácidos grasos saturados, como los de los no
saturados pueden prolongarse, pero en este caso es la malonil-CoA la fuente de
grupos acetilos.
73
Acido palmítico (C16) Acido Esteárico (C18)
1 par 1 par
Los cuales sufren ulterior alargamiento y/o desaturización. Los ácidos linoleicos y
linolénicos no pueden ser sintetizados por los mamíferos quienes tienen que
tomarlos de fuentes vegetales por esta razón se denominan ácidos grasos
esenciales.
ETAPAS DE LA BIOSINTESIS
- Primera etapa: Acilación de los grupos oxidrilos libres del glicerol-3-fosfato por
dos moléculas de acil-CoA graso, produciendo un ácido fosfatídico.
O
CH2 O C R
CH2 OH
O O
+ 2 R C S CoA CH O C R' + 2 HSCoA
CH OH
CH2 O PO 3H2
CH2 O PO 3H2
- Segunda etapa: El ácido fosfatídico experimenta una hidrólisis por acción de una
fosfatasa específica formando diacilglicérido.
O O
CH2 O C R CH2 O C R
O O
CH O C R' + H2O CH O C R' + Pi
BIOSINTESIS DE FOSFOGLICERIDOS
75
Su porción CMP puede considerarse la portadora del ácido fosfatídico. En las
reacciones subsiguientes, cada una de las cuales es catalizada por una enzima
específica la porción CMP es desplazada por los alcoholes: serina, inositol, fosfato
de glicerilo.
O
CH2 O C R
O
CH O C R'
CH2
HO P O
HO P O
CH2 O citosina
H H
H
OH OH
76
Acido fosfatídico
CTP
CO2 Pi
Fosfatidil-etanolamina Fosfatidil-glicerina
3 CH3- + CDP-diacilglicérido
Cardiolipina
Fosfatidil-colina
BIOSINTESIS DE COLESTEROL
El ácido mevalónico tiene seis átomos de carbono por lo que se forma por
condensación de tres moléculas de acetil-CoA.
NADPH2
hidroxi - metil - glutaril CoA ácido mevalónico + NADP + HSCoA
CH3 OH OH
COO H CH2 C CH2 CH2 O P O P OH
O O
O
HO P OH
O
77
El compuesto es muy inestable pierde H3PO 4 y se descarboxila dando
isopentenil-pirofosfato que se isomeriza y dá el 3-3'-dimetil-alil-pirofosfato.
CH2
OH OH
C CH2 CH2 O P O P OH
O O
CH3
CH3
OH OH
C CH CH2 O P O P OH
O O
CH3
El escualeno sufre un ataque del oxígeno formando el 2-3 epóxido, el cual sufre
una ciclización a lanosterol en el cual se producen desplazamientos electrónicos
con el cierre de los cuatro anillos y formación de colesterol.-
78
TEMA XXII: BIOSÍNTESIS DE LOS AMINOACIDOS
Se definen a éstos como aquellos aminoácidos que pueden ser sintetizados por la
rata albina. Conviene considerar en primer lugar este grupo de aminoácidos, porque
la mayoría de los organismos pueden realizar su síntesis. Además este grupo se
distingue porque sus rutas biosintéticas son más bien cortas y muestran variaciones
relativamente pequeñas de unas especies a otras.
79
BIOSINTESIS DE ACIDO GLUTAMICO, GLUTAMINA Y PROLINA:
O OH
C O P OH
CH2 O
CH2
ácido glutamil-fosfórico
H C NH2
COOH
NH2
O
H2C CH2
inhibición
H
HC C Acido 1~pirrolín
N COOH 5 carboxílico
NADH 2
H2C CH2
H
H2C C
N COOH
H
Prolina
ALANINA
O NH2 NH2 O
CH3 C COOH + HOOC CH2 CH2 C COOH CH3 C COOH + HOOC CH2 CH2 C COOH
H H
α cetoglutarato
Acido pirúvico Acido glutámico Alanina
ACIDO ASPARTICO
O NH2
HOOC CH2 C COOH + Acido glutámico HOOC CH2 C COOH + Acido -oxoglutámico
Acido oxalacético H
Acido Aspártico
NH2 NH2
NH2
HOOC CH2 C COOH + NH3 + ATP C CH2 C COOH + ADP + Pi
O H
H
Acido Aspártico Asparagina
TIROSINA
SINTESIS DE TREONINA
O OH
H
NAD+ C CH2 OH
COOH ATP ADP C O P OH NADH NADH NAD+
O
CH2 CH2
CH2 CH2 O
apartil H C NH2
H C NH2 quinasa H C NH2 H C NH2
COOH COOH
COOH COOH
Acido aspartil Semialdehído Homoserina
aspártico fosfato aspártico
OH CH2
ATP ADP H+
CH2 O P OH - Pi CH
CH2 O C N CH ENZ.
Complejo enzimático
C N CH ENZ. -homoserin-fosfato COOH
COOH
Se cree que la secuencia completa tiene lugar con el grupo NH2 del sustrato
unido al grupo aldehído del fosfato de piridoxal de la enzima como una base de
Schiff, en éste complejo el átomo de H2 es lábil.
El producto final de la secuencia, la treonina, es un inhibidor modulador de la
primera enzima del sistema que es la enzima regulador aspartil-quinasa.
METIONINA
83
O
CH2 OH Succinil CoA CH2 O C CH2 S CH
Cisteína
CH2 CH2 CH2 CH2 H C NH2
H C NH2 H C NH2 CH2 H C NH2 COOH
COOH COOH COOH COOH
CH3
SH S
CH2 CH2
Piruvato DA ~ Cobalanina
CH2 CH2
5
N ~ Metil
+ NH2 H C NH2 H C NH2
tetrahidroflorato
COOH COOH
Homocisteina Metionina
84
Mg++
Acido glutámico + Cisteína + ATP Glutamilcisteína + ADP +P i
HSCoA COOH
CH2 CH2 NH2 CH2 CH2
+
CH2 COOH CH2 CH2
C S CoA C O C O
Glicina
O
H C NH2 CH2
Succinil~CoA
COO H NH2
Acido amino
Acido amino levulínico
oxoadípico
COOH COOH
HOOC CH2 COOH
CH2 CH2
2 H2O CH2 CH2
H C H + CH2
C C
C O C O
CH2 C C H
CH2 H C H N
NH2
NH2 N H H
Porfobilinógeno
H
85
Como precursores de la Protoporfirina actúan cuatro moléculas de porfobilinógeno, a
través de una serie compleja de reacciones, la primera de las cuales la cataliza la
porfobilinógeno~desaminasa. Algunas de las etapas de la serie permanecen aún
oscuras.
El hierro no se incorpora hasta que se ha completado la molécula de la
protoporfirina. Esta incorporación requiere una enzima, la hemo-sintetasa o
Ferroquelatasa que está localizada en las mitocondrias.
CH3 CH CH2
C C
HOOC CH2 COOH
CH C C CH
CH2 CH2
H
CH3 C C C C CH3
C C
N H H N
CH2 C C H
N CH2 C C C C CH CH2
NH2 CH2 H
H HC C C CH
COOH
Porfobilinógeno
C C
CH2 CH3
CH2
COOH
Protoporfirina IX
86
TEMA XXIII: BIOSINTESIS DE LOS MONONUCLEOTIDOS
Biosíntesis de los nucleótidos de purina. Vías del ácido inosínico hacia los ácidos
adenílico y guanílico. Biosíntesis de los nucleótidos de pirimidina.
C Formiato
8
Formiato C C
2 4
N N
3 9
amida de la glutamina
N9
NH2 de la glutamina glicina
ATP
aminotransferasa
ADP + P
NH 2
PP ácido glutámico
R P
O fosforibosilamina
P P O CH2 OH
H H
H H
OH OH 87
fosforibosilpirofosfato (FRPP)
C4 y C5 N7
C8
NH2 NH
CH "CHO" CH2 glutamina
CHO
CoF ácido glutamínico
C C
NH NH
O O
R P R P
N3 O C6
N1
N C N
CH CO2 NH2 CH "CHO"
CH CH
C Acido aspártico CoF
NH2 N NH2 N
R P R P
C2
O
C N
NH
CH
CH
N N
R P
Inosina 5' - fosfato
Acido Inosínico IMP
88
Vías del ácido inosínico hacia los ácidos adenílico y guanílico
H N N
IMP (H+ inosínico)
N N
R P
NAD aspartato
[O]
NADH2 GTP GDP + Pi
O H
N N H N N
O
H R P
N N aspartato
AMP
glutamina H+ glutámico H+ Xántico
R P
O
NH2
H N N
H N N
N N
NH2
N N
R P
R P
89
Vías de la biosíntesis de nucleótidos purínicos:
En este caso el exceso de ATP, ADP o AMP o de GTP, GDP o GMP producen una
inhibición a nivel de la enzima que cataliza la reacción entre el fosforibosilpirofosfato
y la 5 fosforibosilamina, por lo tanto se frena la secuencia metabólica y se inhibe la
biosíntesis. Es un caso de retroalimentación negativa.
Es una ruta similar a la de los nucleótidos purínicos, pues las bases libres no son
productos intermedios.
Esta ruta es más simple y se diferencia en que la D-Ribosa se acopla después que
se ha formado el anillo pirimidínico. El precursor es el ácido Orótico.
O
C
H N C H
C C COOH
O N
90
ácido orótico
H2O
carbamil PO4
Acido Aspártico Acido Carbamil Aspártico
PO4 Dihidrotasa
NAD PRPP PP
Acido Dihidrótico Acido Orótico Acido Orotidílico
NADH2 fosforibosil-tr OMP
ansferasa
CO2
Acido Uridílico
OMP
descarboxilasa UMP (uridin monofosfato)
O NH2
C C
H N C H ATP ADP + Pi N C H
+ NH3
C C H C C H
O N O N
R P P P R P P P
En Escherichia Coli (bacteria) el que dona el grupo NH2 es el NH3 libre. En los
mamíferos es el grupo amino de la glutamina.
91
Acido Aspártico
UMP
UTP
CTP
O O
C C
N5; N10.Metilen FH2
H N CH H H N C CH3
Tetrahidrofolato Dihidrofolato
C CH H C C H
O N O N
Reacciones fosfotransferásicas:
92
TEMA XXIV: NATURALEZA, ESTRUCTURA Y REPLICACION DEL MATERIAL
GENETICO
93
Como las propiedades de la célula están controladas por genes los caracteres
pueden cambiar por mutación. De esta manera se pudo conocer la secuencia de
los genes en los cromosomas y saber que los genes poseen un gran número de
locus que pueden experimentar mutación; y que químicamente están constituidos
por ácido desoxiribonucléico.
Pero el desarrollo más importante en el campo de le genética fue:
La enunciación de la hipótesis de "un gen - una enzima", por Beadle y
Tatum que dice que los genes se expresan a través de proteínas, por lo
tanto, las mutaciones darán origen a proteínas alteradas.
El descubrimiento de Avery y Col, que demostraron que el ADN contiene
la información genética.
A-T y G-C
N N
núcleo de núcleo de
AyG TyC
N N N
O sea que éste dogma definió tres procesos fundamentales de los cuales el primero
es el de REPLICA, es decir la "copia" del ADN con formación de moléculas hijas.
Veremos como sucede éste proceso a nivel molecular. La característica más
sorprendente de la hipótesis de Watson y Crick, desde el punto de vista genético, en
su postulado de que las dos hebras del ADN duplohelicoidales son complementarias.
La réplica de cada una de ellas conduce a dos moléculas hijas de ADN; cada una
contiene una hebra del ADN progenitor. Este proceso se denomina réplica
semiconservadora.
Pero ¿Cómo pueden replicarse simultáneamente las dos hebras del ADN de modo
que se formen al mismo tiempo.
Éste mecanismo requiere tres enzimas:
ADN - polimerasa dependiente del ADN
ADN - ligasa
Endodesoxiribonucleasa
ADN – polimerasa
97
hebra patrón hebra cebadora
2. O bien podría ser utilizado como patrón sobre el cual la enzima podría
construir una hebra complementaria al ADN preformado.
ADN
|
nd ATP
d AMP
nd GTP ADN preformado |
d GMP + 4 PPi
nd CTP Mg++ |
nd TTP d CMP
|
d TMP
OH
HO P H2C
O Base
O
H H
H
O H
O Base
HO P O
H H
H
H2C
OH + PPi
O O H
Base
H H O P OH
H
OH H PPi H2C
OH
O Base
O O P
H H
H
O P O P O P OH
OH H
OH OH OH
H2C
O Base
98
H H
H OH
OH H
Hay un ataque al átomo de fósforo alfa del nucleótido trifosforado entrante y provoca
el desplazamiento de su grupo pirofosfato, con formación de enlace internucleótido.
El PPi formado es rápidamente hidrolizado por una pirofosfatasa por lo cual la
reacción es muy exergónica. La dirección de la síntesis es por lo tanto 5’ --- 3'.
ADN ligasa
1. Enlaza extremos de moléculas de ADN produciendo formas circulares. Ej.:
bacterias.
2. Cataliza la reparación de roturas de una cadena de ADN.
O
NMN
Dinucleótido
Base CH2 O P OH NAD constituído
NMN y AMP
5' AMP
OH
H OH
3'
H
Base O
99
OH
O O
OH OH Adenina HO P O
O
OH
Base O
Base O
Mecanismo de replicación
P 3'
T
A T
5' 3' 5'
cebadora 3' P
P 3' 5' 3'
5'
T A
T
3'
P
P
Kornberg: postuló que la réplica comienza con la producción de una mella o una
rotura en una hebra por acción de una endonucleasa. Unidades de MN adicionadas
por la ADN polimerasa:
5'
5'
101
TEMA XXV: LA TRASCRIPCION DE LA INFORMACION GENÉTICA
ARN mensajero: teoría y propiedades del mensajero. La polimerasa del ARN
dependiente del ADN. Mecanismo de acción: unión, iniciación, elongación y
terminación de la trascripción. La réplica del ARN.
Para obtener esta enzima en forma pura, Richard Burgen realizaron una
electroforesis en gel de poliacrilamida. Así se pudo detectar 4 bandas por tinción de
los polipéptidos.
Lo que interesaba saber era si los 4 polipéptidos intervenían en la actividad de la
enzima. Para ello eliminaron uno de los polipéptidos que denominaron factor
(sigma).
La eliminación de este factor cambió las propiedades de la enzima ya que perdió su
capacidad de usar como matriz al ADN. La adición de factor restauraba la
propiedad de la enzima de usar ADN como matriz.
102
Mecanismo de acción de la ARN polimerasa
A T C T G A G A C T A T C T G A G A C T
T A G A T A G A
G T G T
A A
C T C C T C
G G A
3'
P P P OH P P P OH
OH
P
5'
P
103
P
A T C T G A G A C T
T A G A
G T
Se forma el primer enlace
internucleótido A
C T C
G A
P P P P OH + P P
5'
A T C T G A G A C T
T A G A
G T
A La enzima se desplaza
por la hebra del ADN
C T C
G A G A
P P P P P P OH
104
Cuando el producto de la elongación llega a un tamaño crítico el factor se libera.
Las cadenas nucleotídicas crecen por adición secuencial de ribonucleótidos al
extremo 3' del dinucleótido iniciador.
La entrada de los diferentes sustratos depende de la complementariedad con las
bases de la hebra del ADN que sirve de matriz.
Terminación de la transcripción:
1.
secuencia terminadora
reconocida por la enzima
2.
factor de terminación
Ro
105
TEMA XXVI: EL CODIGO GENETICO
Por ejemplo:
fenilalanina es cofificada por UUU UUC
106
Características generales del código
107
TEMA XXVII: LA TRADUCCION DE LA INFORMACION GENETICA
Estructura ribosómica
A
| Locus de enlace aminoácido
C
|
G C
108
O
H O
P O P O P O CH2
O
R C C OH +
OH
NH2 Adenina
H O O
R C C O P O CH2 + PPi
O Adenina
NH2 OH 109
Segunda fase de activación
30 S
LP LA
50 S
El ribosoma para que puedan unirse el ARN m y el ARN t AA debe disociarse en sus
dos subunidades. Participan en este proceso factores proteicos F1 F2 F3 (llamados
también disociasaribosomal) y GTP. Estos factores permiten la disociación de los
ribosomas y además la unión del ARN m en el lugar donde se inicia el mensaje.
110
30 S 30 S 30 S
50 S
AA AA
50 S
LP LA
(metionina) AA AA
2.- En la segunda fase se forma el enlace peptídico por reacción entre el grupo
amino del nuevo aminoacil - ARN t captado con el grupo carboxilo del AA ya
existente en el LP.
111
NH NH
R CH
R CH
C O LP HO LP descargado
O C
O
NH
NH2
R C H
R CH
C O
C O LA LA
O O
ARNm
O CH
NH
R C H
C O LP
O
LA
112
Cuarto Estadío: Terminación de la cadena polipeptídica
113
TEMA XXVIII: REGULACION DE LA SÍNTESIS PROTEICA
Las células vivas disponen de mecanismos que regulan la cantidad de proteínas que
se sintetizan.
Estos mecanismos de regulación fueron estudiados en células bacterianas y se
observó que la cantidad de enzimas que se acumula en el medio depende de la
naturaleza de los nutrientes. En base a todos estos estudios se distinguió dos tipos
de respuestas:
De inducción enzimática
De represión enzimática
INDUCCION
REPRESIÓN ENZIMATICA
Regulador
Estructural
114
¿Cómo funciona el gen regulador tanto en la represión como en la inducción?
Jacob y Monod formularon una hipótesis general respecto a la función de los genes
estructural y regulador) en los 2 procesos.
Inducción
El gen regulador transcribe un ARN mensajero que codifica una proteína
denominada represor.
ARNm
regulador
operador
estructural represor
Este represor tiene un locus de unión específico próximo al gen estructural. Este
locus se denomina operador.
¿Qué sucede en una inducción, es decir, cuando se agrega al medio un sustrato que
debe degradarse? El sustrato, que sería el inductor, se combina con el represor
formando un complejo inductor-represor inactivo, que no puede unirse al operador.
represor
inductor
Represión
Si agregamos al medio un aminoácido por ej. histidina, la célula no necesita utilizar
las enzimas que lo sintetizan.
ARNm
regulador
operador
estructural represor
115
En este caso, la histidina se une al represor y forma un complejo represor-
correpresor que se combina al operador; el gen estructural no se transcribe y por lo
tanto no se sintetiza histidina.
Regulación coordinada
operador z x a b
116
BIBLIOGRAFIA
2. Griffihs, A. Miller, J., Suzuki, D., Lewontin, R., y Gelbart, W., (1995) Genética.
3. Murray, R., Darylk, Granner, Meyer, P, & Rotewell, V., (1994) Bioquímica de
4. Kuchel, P., & Ralston, G., (1994) Bioquímica General. Editorial Mac Graw Hill
Interamericana. México.
6. MC Keen, T., 2003. Bioquímica. La base molecular de la vida. Mac Graw Hill
Interamericana.
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Wesley Ibero
8. americana. USA.
9. Strayer, L., (1990) Bioquímica. Tomo I y II. Tercera Edición. Editorial Reverté.
Buenos Aires.
USA.
11. Torres, H., Carminatti, H & Cardini, C., (1983) Bioquímica. Editorial El Ateneo.
Buenos Aires.
12. Watson, J., (1978) Biología molecular del gen. Fondo Educativo
Interamericano. España.
117