DETRMINACION DE CREATINA

INTRODUCCIÓN:

En la presente practica realizaremos la determinación de urea y creatinina, que son utilizadas

rutinariamente para valorar el funcionamiento de los riñones, es decir, para valorar como marcha
la excreción de los residuos tóxicos producidos en el organismo como consecuencia del
metabolismo celular de todas las células del organismo.

La creatinina es una molécula de deshecho que se genera a partir del

metabolismo muscular. Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es
una prueba diagnóstica esencial, ya que se ha observado que su concentración en
sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la función renal.

OBJETIVOS:

Practicar el adecuado manejo de la técnica de laboratorio para la correcta determinación

de creatinina en una muestra biológica.

Determinar los valores referenciales de laboratorio de la creatinina y compararlos con el

valor obtenido de nuestra muestra problema que analizaremos.

Señalar las principales patologías que se presentan, cuando se tienen valores superiores
o inferiores a los valores de normalidad de creatinina en una muestra biológica

MARCO TEORICO:

La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la

creatina por pérdida de una molécula de agua. A su vez, la creatina se produce por
hidrólisis del fosfato de creatina, por acción de la creatin-fosfo-kinasa (CPK), apareciendo
como metabolitos de dicha reacción el fosfato energético y la creatina. El radical fosfato
puede aportar energía directamente por dicha reacción o a través de su acoplamiento a
una molécula de ADP para formar ATP y posterior hidrólisis por acción de ATPasa.

La eliminación de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente a

través de la filtración glomerular, siendo un importante índice del funcionalismo renal. A
diferencia de la urea, la eliminación de creatinina por la orina no viene afectada por la
diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es muy constante su eliminación
diaria con casi independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor
condicionante más directo de su excreción total por día. En resumen, podemos decir que
la eliminación de creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor constante,
dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y que por otro lado el
cálculo del aclaramiento de la creatinina será un parámetro directo del funcionalismo
renal.
La creatinina es una molécula de desecho que se genera a partir del metabolismo
muscular. La creatinina proviene de la creatina, una molécula muy importante para la
producción de energía muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se
convierte en creatinina cada día. La creatinina se transporta desde los músculos por
medio de la sangre hacia el riñón. Los riñones filtran la mayoría de la creatinina y la
eliminan en la orina.

Aunque es una sustancia de desecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial,

ya que se ha observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el
estado de la función renal. Si los riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina
y por lo tanto ésta se acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una
posible disfunción o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten síntomas. Por
eso la creatinina suele figurar en los análisis de sangre que serealizancomúnmente. Los
valores normales de creatinina en la sangre son aproximadamente 0,6 a 1,2 miligramos
(mg) por decilitro (dL) en los varones adultos y 0,5 a 1,1 miligramos por decilitro en las
mujeres adultas. Los adultos con mucha masa muscular pueden tener más creatinina en
la sangre que la población normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener
menos creatinina en la sangre de lo normal. Algunos fármacos pueden producir una
elevación anormal de las concentraciones de creatinina en sangre. Una concentración
muy elevada de creatinina en la sangre puede indicar la necesidad de someterse a diálisis
para eliminar las sustancias de desecho de la sangre. VALORES NORMALES EN LA
SANGRE Los valores normales en los hombres adultos son entre 0,7 y 1,3 mg por
decilitro. En las mujeres adultas entre 0,5 y 1,2 mg por decilitro En los niños pequeños se
aceptan valores de 0,2 y 1 mg/dl. Los valores más altos de 4 mg/dl se deben a un fallo
renal importante. USO EN DIAGNÓSTICO Medir la creatinina del suero es una prueba
simple y es el indicador más común de la función renal. Una subida en los niveles de
creatinina de la sangre solamente es observada cuando hay un marcado daño en los
nefrones(RC). Por lo tanto esta prueba no es conveniente para detectar estados
tempranos de enfermedades del riñon Una mejor valoración de la función del riñón es
dada por la prueba de aclaramiento de creatinina.

La separación de creatinina puede ser calculada con precisión usando la concentración

de la creatinina del suero y alguna o todas las variables siguientes: sexo, edad, peso, y
raza según lo sugerido por la National Diabetes Association con una recolección de orina
de menos de 24 horas. Algunos laboratorios calcularán el ClCr si está escrito en la forma
de solicitud de la patología; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la
información del paciente. 5.6 INSUFICIENCIA RENAL La insuficiencia renal (o fallo renal)
es la condición en la cual los riñones dejan de funcionar correctamente. Fisiológicamente,
la insuficiencia renal se describe como una disminución en la filtracion de la sangre tasa
de filtración glomerular (TFG). La insuficiencia renal se puede dividir ampliamente en dos
categorías, insuficiencia renal aguda e insuficiencia renal crónica.

Causas de la insuficiencia renal La diabetes es la causa más frecuente de insuficiencia

renal, y constituye más del 40 por ciento de los casos nuevos. Incluso cuando los
medicamentos y la dieta pueden controlar la diabetes, la enfermedad puede conducir a
nefropatía e insuficiencia renal.

Una causa típica de insuficiencia renal en los niños es el Síndrome urémico hemolítico
(SUH), una enfermedad causada por la bacteria Escherichia coli O157:H7 que puede
ocasionar la muerte o dejar daños renales, neurológicos o hipertensión arterial.

Aunque cualquier persona y a cualquier edad puede desarrollar insuficiencia renal

crónica, existen ciertos factores de riesgo identificados que favorecen la aparición de
alteraciones renales: * Diabetes * Hipertensión * Enfermedades del corazón *
Antecedentes familiares de enfermedad renal * Edad * Raza Las personas con
insuficiencia renal tienen que someterse a diálisis pero no en todas las ocasiones, la cual
reemplaza algunas de las funciones de filtración de los riñones, o a un transplante para
recibir el riñón de un donante sano. Debido a que hay pocos síntomas en los inicios de la
enfermedad, el diagnóstico depende de las pruebas de laboratorio. Para ello es necesario
reconocer ciertas anormalidades o “marcadores” renales como la presencia de proteínas
en la orina y disminución de la función renal por más de tres meses.

Determinación de Creatinina:

La reacción química aplicable para fotometría es la descrita por Jaffe, basada en el color
anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato alcalino. Hay varias
substancias en el suero y orina que actúan como cromógenos inespecíficos, lo que es un
problema principalmente para el cálculo del aclaramiento. Por este motivo tiene una gran
importancia la adecuación de todas

las variables de la reacción, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la máxima
sensibilidad para la creatinina y la mínima interferencia de cromógenos. Adaptando la
reacción a una medida cinética, se logra una gran especificidad debido a que la
creatinina reacciona con el picrato alcalino con más rapidez que los cromógenos
(metilguanidina, picramato,), por lo que la medida del incremento de color en un breve
período de tiempo inicial de la reacción valorarán principalmente creatinina, con poca
influencia de los cromógenos inespecíficos, por esto es recomendable, de ser posible, la
determinación cinética.

MATERIALES

• Pipeta automática, de ul

• Pipeta de 1ml

• Muestra (sangre)

• Espectrofotómetro

• Tubos de ensayo

• Cubetas de 1cc
• Tubo tapa lila

REACTIVOS

• Reactivo Tapa Blanca: solución de ácido pícrico

• Reactivo Tapa Azul: solución de hidróxido

• Standard: solución de creatinina 2 mg/dl.

PROCEDIMIENTO

1. Preparar el reactivo de trabajo, con la mezcla de los reactivos de los frascos de tapa
blanca y azul

2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.

4. En tres cubetas de 1cc marcadas B (Blanco), S (Estándar) y D (Desconocido), colocar:

B S D

R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Estándar - 100 ul -

Muestra - - 100 ul

5. Leer la densidad óptica en espectrofotómetro a 492 nm.

6. Leer la absorbancia después de 30 s de haber puesto la cubeta, esperar a los 90 s y

tomar anotar una nueva medida.

7. Calcular el resultado.

NORMALIDAD

Valores normales de Creatinina:

0,7 – 1,4 mg/dl Varones

0,6 – 1,1 mg/dl Mujeres

Los adultos con mucha masa muscular pueden tener más creatinina en la sangre que la
población normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener menos creatinina
en la sangre de lo normal.

CONCLUSIONES:
Se realizo la determinación de Creatina, y se concluyo que la creatinina es la molécula
producto de deshecho del metabolismo proteico.

La determinación de creatina se utiliza en la práctica clínica como un parámetro idóneo

para valorar el funcionamiento renal.

DETERMINACIÓN DE UREA.

INTRODUCCIÓN

La urea representa la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la mayoría de

los líquidos biológicos del organismo, se eliminación en el hombre es el principal producto
final del metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a
través de los riñones.

OBJETIVOS:

Practicar el adecuado manejo de la técnica para la determinación de urea en una muestra

biológica

Determinar los valores de referencia de la urea y compararlos con el valor obtenido en

nuestra muestra problema que se analizara..

Señalar cuáles son las principales patologías que se presentan si tenemos valores altos o
bajos de urea en una muestra biológica.

MARCO TEORICO

La Urea Es un compuesto químico cristalino e incoloro, de formula CO(NH2)2, soluble en

agua y en alcohol. Se encuentra abundantemente en la orina y en la materia fecal. Es el
principal producto terminal del metabolismo de proteínas en el hombre y en los demás
mamíferos. La urea se presenta de forma esférica o granular. Es una sustancia que tiene
la capacidad de absorber agua de la atmosfera y presenta un ligero olor a amoniaco. La
orina humana contiene unos 20g por litro, y un adulto elimina de 25 a 39g diariamente

La concentración sanguínea de amoniaco es superior en los infantes que en los adultos,

debido a que el desarrollo de la circulación hepática se termina después del nacimiento.
La hiperamonemia es una entidad que se presenta con frecuencia debido a defectos
congénitos en el ciclo de la urea. El error innato del metabolismo más común es la
deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La hiperalimentación es una causa mucho más
frecuente de hiperamonemia en infantes. Con frecuencia, se diagnostica el síndrome de
Reye por un amoniaco sanguíneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.

Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amoníaco sanguíneo en

las etapas terminales de: la cirrosis hepática, la falla hepática y la necrosis del hígado
aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la encefalopatía hepática por una
elevación en el amoníaco sanguíneo. Se ha demostrado que la medición en líquido
cefalorraquídeo (LCR) de la glutamina, correlaciona bien con el desarrollo de la
encefalopatía hepática. También se puede utilizar la medición de la glutamina en el
LCR, para diferenciar la encefalopatía hepática de la séptica. Sin embargo, no es común
la medición de la glutamina en el LCR. La excreción de amoníaco urinario se eleva con
la acidosis y se disminuye en la alcalosis, puesto que la formación de sales de amonio
es un mecanismo importante para excretar el exceso de iones hidrógeno. Daños en los
túbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis, el
hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excreción de amoníaco
disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguíneos de amoníaco.

Puesto que la urea se sintetiza en el hígado, en la enfermedad hepática sin daño en la

función renal, se presenta nitrógeno ureico sérico bajo, aunque la relación urea a
creatinina se puede conservar normal. La elevación en el nitrógeno ureico sérico no
implica necesariamente daño renal, puesto que la deshidratación puede llevar a
concentraciones de nitrógeno ureico tan altas como 600 mg/L. En los infantes que reciben
una fórmula alta en proteínas pueden tener niveles de nitrógeno ureico de 250 a 300
mg/L. Naturalmente, enfermedades como la glomerulonefritis aguda, la nefritis crónica, el
riñón poliquístico y la necrosis renal elevan el nitrógeno ureico.

La urea, que constituye el 80% del nitrógeno en la orina, procede de la descomposición

de las células del cuerpo pero, sobre todo, de las proteínas de los alimentos.

USOS Debido a su alto contenido en nitrógeno, la urea preparada comercialmente se

utiliza en la fabricación de fertilizante agrícola; esencial en el metabolismo de la planta ya
que se relaciona directamente con la cantidad de tallos y hojas, las cuales absorben la luz
para la fotosíntesis. Además el nitrógeno está presente en las vitaminas y proteínas, y se
relaciona con el contenido proteico de los cereales. En dermatología la urea se utiliza
como humectante natural por sus excelentes propiedades hidratantes.

Ciclo de la urea El llamado ciclo de la urea, es el proceso que consiste en la formación de

urea a partir de amoníaco. El ciclo de la urea (Ciclo de Krebs-Henseleit) corresponde a la
via metabólica usada para eliminar los desechos nitrogenados del organismo. Los
diversos compuestos pueden entrar por casi cualquier parte del ciclo, y el producto final
de desecho es la urea. La mayoría del ciclo de la urea es citosolico, pero la ornitina
transcarboxilasa es intramitocondrial. Los principales ingresos del ciclo son los
aminoácidos, los cuales degradan su parte amínica en el ciclo y su parte carboxilica en el
Ciclo de Krebs. En el ciclo principal, el nitrógeno entra por medio del amonio (NH4) y
mediante la Carbomil-P sintetasa forma Carboamil-P NH3 + CO2 + 2 ATP -----> H2N--CO-
-O-- PO4- El gasto de dos moléculas de ATP desplaza el equilibrio de la reacción a la
derecha y fuerza la síntesis del carbamilfosfato. La ornitina se convierte en citrulina
directamente por el paso del carbamilo del carbamilfosfato a la ornitina en la reacción de
transcarbamilación. La citrulina es, por lo tanto, una carbamilornitina, cuya síntesis se
realiza en la mitocondria de la cual sale al citosol para continuar el ciclo.

La formación de arginina es un proceso más complejo que requiere la presencia de

aspartato, ATP y Mg+2. El primer paso es la formación de argino-succinato por la
condensación (en presencia de ATP y Mg+2) de citrulina y aspartato. El argininosuccinato
se fragmenta en arginina (lista para ser atacada por arginasa) y fumarato, que entra al
ciclo de krebs y permite la regeneración de aspartato. Finalmente, la arginasa hidroliza a
la arginina en urea y ornitina, la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e
iniciar el ciclo aceptando otro carbamilfosfato. Dada la toxicidad y la necesidad de manejar
concentraciones cambiantes de NH4+, el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de
ajuste pudiendo, de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse, cada 24 horas en
condiciones normales, de 5 a 50 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden ser
lentos, requiriendo de 3 a 4 días para instalarse, por depender de la cantidad de enzimas
presentes, o rápidos, bajo control hormonal, instalados en minutos, en este caso en
relación con el mayor acopio de sustratos, sobre todo de acetil-glutamato, el modulador
alostérico positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato, alimentador
del ciclo.

Toxicidad del amoniaco El amoniaco generado por las bacterias entéricas se absorbe en
la sangre de la vena porta, por tanto ésta contiene niveles más altos de amoniaco que la
sangre sistémica. Ya que un hígado sano metaboliza rápidamente el amoniaco de la
sangre portal, la sangre periférica se encuentra virtualmente libre de amoniaco; esto
resulta esencial, puesto que aún cantidades mínimas de amoniaco son tóxicas para el
sistema nervioso central. En caso de que la sangre portal no pase por el hígado, el
amoniaco en sangre sistémica puede elevarse a niveles tóxicos. Esto puede ser
consecuencia de una disminución pronunciada en la función hepática, o al desarrollo de
comunicaciones colaterales entre venas porta y sistémicas, como sucede en la cirrosis.
Los síntomas de la intoxicación por amoniaco incluyen temblor, lenguaje poco entendible,
visión borrosa y, en casos graves, coma y muerte. Estos síntomas se asemejan a los del
coma hepático, que se presenta cuando los niveles de amoniaco en sangre y en cerebro
se elevan en forma significativa.

DETERMINACIÓN UREA EN LA SANGRE Mide la cantidad (concentración) de urea o

nitrógeno ureico presente en la sangre. El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos
de urea al día –algo más en personas que comen dieta rica en proteínas, menos en
personas con dieta pobre en proteínas. Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo
contrario se acumulará en líquidos corporales. Su concentración normal promedio en el
plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de
hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos
como 2 mg/dl. Los dos factores principales que establecen el ritmo de excreción de urea
son: 1) la concentración de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtración glomerular
DETERMINACION DE UREA

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado

se valora mediante una reacción enzimática (GLDH), pasando NADH a NAD+.
La disminución de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la
concentración de urea.
Ureasa
+
Urea + H2O +2H 2 NH3 + CO2

GLDH
2NH3 + α-cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato

MATERIALES
• Pipeta automática, de ul
• Pipeta de 1ml
• Muestra (sangre)
• Espectrofotómetro
• Tubos de ensayo
• Cubetas
• Reactivo de trabajo
• Standar
• Tubo tapa lila

PROCEDIMIENTO
1. Preparar el diluyente para enzimas en un litro de agua destilada.
2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.
3. En 3 tubos marcados B (Blanco), S (Estándar), D (Desconocido), colocar:

B S D
R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Estándar - 5 ul -
Muestra - - 5 ul
Incubar 10 minutos a temperatura ambiente

4. Leer la densidad óptica en espectrofotómetro a 580 nm.

5. Calcular el resultado.

Normalidad
20 a 50 mg%
CONCLUSIONES

Se realizo la determinación de Urea, y se concluyo que la urea es la excreción o

eliminación de los desechos nitrogenados luego del metabolismo celular de las proteínas.

La determinación de urea se utiliza en la practica clínica para valorar el funcionamiento

renal, y esta muy ligada a la producción y metabolismo del amoniaco a nivel del hígado.

Bibliografia:

http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-urea-informe-de.html

http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-creatinina-informe-de.html

https://es.slideshare.net/guillermoreynaldomejiagutierrez/labo-de-urea

https://es.slideshare.net/karenstefysuarez/proyecto-de-urea-en-la-sangre

.http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf