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Identificación de quinonas en la Lawsonia inermis (hojas de henna: Henna hindú)

Universidad Distrital Francisco José de Caldas


Facultad de Ciencias y Educación, Licenciatura en Química
1
Alexander Fernández Álvarez. 20132150082
1
Pedro Andrés Chitiva Chitiva. 20132150109
1
Gabriel Leonardo Moncada Gucaneme 20141150067
2
Beatriz Ofelia Devia Castillo
1
Estudiantes Productos Naturales, 2Docente
1
alfernandeza@correo.udistrital.edu.co
Bogotá D.C 27 de junio 2019

Resumen

Las quinonas son un grupo de compuesto cuya coloración puede ser desde amarillo pálido hasta casi
negro, se encuentran frecuentemente en la corteza y raíces, estas se pueden clasificar en tres tipos de
quinonas; Benzoquinonas, Naftoquinonas y antraquinonas. En este caso las que nos importan son las
naftoquinonas los cuales se han aislado de diversas fuentes de origen vegetal, bacteriano, fúngico y
animal, y se han empleado desde la antigüedad por sus propiedades tintóreas, y actualmente por su
actividad biológica. En esta práctica se analizó la especie Lawsonia inermis la cual es un planta nativa
de África, medio oriente y Asia occidental, en esta especie se encuentra presente la 2-hidroxi-
1,4naftoquinona, durante esta práctica se realizaron diversas pruebas de coloración para identificar la
presencia de dicha Naftoquinona, así como también se usaron dos sistemas de cromatografía en capa
fina para logra separa e identificar los componentes presentes en esta especie, por último se comprobó
su capacidad tintórea en una fibra de lana, los resultados obtenidos indicaron que la cromatografía
arroja mejores datos en fase móviles poco polares, así mismo que al utilizar el producto henna hindú
para analizar las naftoquinonas causo algunos problemas para la identificación de la lawsona, ya que
esta se encontraba en muy poca concentración en este producto.

Palabras clave: Quinonas, naftoquinonas, Lawsonia inermis, Lawsona, cromatografica en capa fina,
teñido de fibras.

Abstract

Quinones are a group of compounds whose coloration can be from pale yellow to almost black, are
frequently found in the bark and roots, these can be classified into three types of quinones;
Benzoquinones, Naftoquinones and anthraquinones. In this case those that matter to us are the
naphthoquinones which have been isolated from various sources of plant, bacterial, fungal and animal
origin, and have been used since ancient times for their dyeing properties, and currently for their
biological activity. In this practice we analyzed the Lawsonia inermis species, which is a plant native
to Africa, the Middle East and Western Asia. In this species, 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone is
present. During this practice, various coloration tests were performed to identify the presence of said
Naphthoquinone, as well as two systems of thin layer chromatography were used to achieve separates
and identify the components present in this species, finally its dyeing capacity was checked in a wool
fiber, the results obtained indicated that the chromatography It yields better data in a less polar mobile
phase, as well as when using the Indian henna product to analyze the naphthoquinones caused some
problems for the identification of lawsona, since this was in very little concentration in this product.

Key Words: Quinones, naphthoquinones, Lawsonia inermis, Lawsona, thin layer chromatography,
fiber dyeing.
Introducción derivan de la ruta del ácido shikímico. (Deanna Marcano,
2002)
Las quinonas están ampliamente representadas, bien sea
como núcleo principal de un compuesto o formando parte Lawsonia inermis
de otros más complejos, las quinonas son un grupo de
metabolitos que están presentes en pigmentos vegetales y Es una planta de la familia Lythraceae, es originaria de las
animales, un ejemplo de esto es la alizarina, la cual es una zonas subtropicales del continente africano y el occidente
antraquinona que es usada desde hace más de 2000 años de Asia, donde comprende terrenos que van desde Egipto
para la tinción de telas, dicha antraquinona es hasta Irán, esta es bastante popular debido a sus
comúnmente encontrada en ciertas manchas rojas de los cualidades como pigmento, aunque actualmente es
huesos humanos que se han hallado, y esto se debió a la considerado como relativamente toxico, generando
ingesta de la Rubia tinctorum, la cual es rica en alizarina. dermatitis.
(Deanna Marcano, 2002) La Lawsona inermis es un arbusto de 2 metros de altura,
Las quinonas naturales son generalmente un grupo de ramos, con hojas casi persistentes, opuestas, aovadas,
compuestos que poseen una coloración que poder ser lisas y lustrosas, posee pequeñas flores de color blanco y
amarilla pálida hasta negro, pero es más común olorosas en racimos terminales, y por frutos bayas negras,
encontrarlas con coloración amarrilla a rojo, son redondas y del tamaño de un guisante. Sus hojas recogidas
frecuentemente halladas en la corteza o en el corazón de en primavera, secadas después al aire libre y reducidas a
la madera o de la raíz, en pocos casos se pueden encontrar polvo sirven para teñir, este polvo recibe el nombre de
quinonas en las hojas o flores, donde su color queda alheña. La Lawsona inermis posee distintos nombres
enmascarado por otros pigmentos. (Ugaz, 1997) como se muestra en la tabla 1.

Las quinonas también se hallan en algunos organismos Tabla 1: Sinonimia de la Lawsona Inermis
marinos invertebrados de la clase Echinodermis o en
Moluscos, también hay algunos insectos que contienen Sinonimia
quinonas, como es el caso del Dactilopius coccus, que se
caracteriza por la presencia del ácido carmínico. Alcanna spinosa Gaerth
Desde la antigüedad las quinonas han sido reconocidas
por sus propiedades tintóreas, están consideradas dentro Lawsona alba Lam
del grupo de colorantes para mordiente, siendo de las más
comunes la alizarina, la cual presenta un comportamiento Lawsonia speciosa L.
poligenético. (Ugaz, 1997)
Rotantha combretoides Baker
Tomando en cuenta la estructura, las quinonas se pueden
clasificar en benzoquinonas, naftoquinonas, y En la tabla 2 se muestra la descripción taxonómica de la
antraquinonas (Img 1). Las estructuras más frecuentes son Lawsonia inermis
p-quinoideas, las cuales pueden estar altamente
hidroxiladas por lo cual pueden encontrarse en equilibrio Tabla 2: Descripción taxonómica de la Lawsonia inermis
varios Tautómeros. (Deanna Marcano, 2002)
Taxonomía de la Lawsonia inermis
O O O Reino Plantae
Phylum Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Orden Myrtales
Familia Lythraceae
O Genero Lawsonia
O O Epíteto especifico Lawsonia inermis
Benzoquinona Naftoquinona Antraquinona
Usos
Img 1: Tipos de Quinonas (elaboración propia)

El origen biogenético de las quinonas está distribuido La Lawsonia inermis, más comúnmente llamada henna,
entre los metabolitos fundamentales principales (ácido es el cosmético más utilizado en la historia de la
acético, ácido shikímico y mevalónico), aunque humanidad, sus propiedades fueron descubiertas en la
actualmente se acepta que las quinonas provenientes de antigüedad, en china las damas de la corte la usaban para
los microrganismos son formadas mediante el ácido teñirse las uñas. Durante siglos se ha utilizado para teñir
acético, mientras las que provienen de plantas superiores la ropa. Pero su uso más habitual es para el cabello y para
las decoraciones corporales. Estas decoraciones Reacción con ditionito de sodio. A una solución
tradicionalmente se realizaban en las manos y pies. En la etanólica de la muestra se le adiciono unas gotas de
india, áfrica y países árabes lo usaban para darle fuerza y ditionito de sodio al 5%. La solución se decolora en
color al cabello, así mismo lo utilizaban para hacer presencia de quinonas. Si se adiciona unas gotas de agua
tatuajes. (Dra. Ana I. Sánchez Moyaa, 2005) oxigenada al 30%, el color se regenera.

La Lawsona reacciona químicamente con la queratina de Naftoquinonas y Antraquinonas. reacción de


la piel y el cabello, en un proceso de adición de Michael, Borntrager. Se hierve durante 10 minutos, un poco de la
lo que resulta en una mancha permanente color marrón, muestra (~30mg) con 1 mL de KOH al 4%, se enfría la
en la zona del cabello o de la piel, en donde fue aplicada. solución, se acidula con ácido sulfúrico al 50% y se extrae
La Lawsona absorbe eficientemente la radiación UV y a con benceno. La capa de benceno se separa, se toma la
la luz, por lo tanto, los extractos acuosos pueden ser muestra para la cromatografía TLC (y para la prueba 4 en
eficaces en bloqueadores solares y bronceadores. el caso de la Lawsona) y luego se pasa a un embudo de
decantación. Se adiciona la solución de KOH al 4% y se
Metabolitos secundarios presentes en la Lawsonia agita.
inermis
Naftoquinonas. A una solución bencénica de la muestra
Los metabolitos presentes en la Lawsonia inermis, son de se adiciono unas gotas de NaOH al 10%.
la familia de las quinonas, la Lawsona o también conocida
como la 2-hidroxi-1,4-naftoquinona, es una quinona que Teñido de fibras:
se halla en las hojas de la henna. (Img 2.)
La relación peso de la fibra/ material tintóreo, depende del
O material utilizado, para este caso se considera la
proporción 1/3 para las muestras vegetales.
OH
Extracción del colorante: se trituro el material tintóreo
en un mortero y se extrajo con agua en un vaso de
precipitado colocado en un baño de María a 600C, durante
20 min con agitación constante. Posteriormente se retira
se filtra si es necesario y se adicionan las fibras para el
O teñido.
Img 2: 2-hidroxi-1,4-naftoquinona
Teñido: Se pesan las fibras previamente mordentadas con
Químicamente la Lawsona (Img2) es un isómero de la alumbre (Al K(SO4)2. xH2O))., se lavan con agua a 400C
juglona (Img 3), la cual se encuentra en las nueces, su y se sumergen en la solución tintórea. Se coloca el
biosíntesis está vinculada a la ruta del 1,4-dihidronaftoato, recipiente en el baño de María a 600C y se deja durante 1
en común con la biosíntesis de la vitamina K. hora a esta temperatura con agitación constante. Se enfría
y se lava con abundante agua.
O
C) Análisis por cromatografía en capa fina, TLC.

En este caso nos limitaremos al empleo de un sistema


cromatografica con la antraquinona alizarina, como
muestra de referencia, y se utilizaron dos sistemas para
la cromatografía:

OH O • Sistema II: acetato de etilo: ácido acético (99:1)


Img 3: 5-hidroxi-1,4-naftoquinona (juglona) • Sistema III: cloroformo: metanol (19:1)
Metodología
Resultados
Reacciones de coloración.
El análisis de quinonas se realizó en una muestra de henna
reacciones generales. A una solución etanólica de la
hindú de color negro (Img 4), dicha henna no solo
muestra (1 mL) se adiciono unas gotas de ácido sulfúrico
contenía el metabolito secundario a analizar (Lawsona),
al 50%, en otro tubo repitió el ensayo adicionando unas
sino que también contenía los componentes que se
gotas de NaOH al 10%, agite y se observó un cambio de
detallan en la tabla 3.
coloración.
ácido succínico, ácido ascórbico,
ácido acácico, lactona y los azúcares
naturales glucosa, arabinosa y
Rhamnosa

Ácido gálico (Tanino)

Img 4:Henna Hindú analizada

Tabla 3: Componentes de la henna hindú analizada

Componente Estructura
Ácido elágico (Polifenol)
Lawsona (Naftoquinona)
O
OH
Henna
Emblica
Officinalis
O Fruit Powder
(Amla)
Kaempferol (Flavonol)
Lupeol (triterpenoide)

Ácido ascórbico

α-Spinasterol (fitosterol)

Acacia
Concinna wedelolactona (cumestanos)
Fruit Powder
(Shikakai)

Nicotina (alcaloide)

Eclipta
Prostrata
Powder
Tiofeno

También se encuentran presentes


otros compuestos como lo son:
hexacosanol, espinasterona, ácido
oxálico, ácido tartárico, ácido cítrico,
también posee polipéptidos,
polyacetilenos, esteroides,
triterpenos y flavonoides.
Naftoqui
O OH
O O nonas y Reacción de
+
antroqui Borntrager
Ácido cítrico nonas
HO OH
OH

Perborato de
NaBO3
sodio

NH2

p- 1,4-
Naftoquinona
fenilendiamin Naftoqui +
s
a nonas

NH2

Bisulfato de
NaHSO4
sodio Tabla 5: Teñido de las fibras mordentadas con Lawsona
Sulfito de inermis
Na2SO3
sodio
Carbonato de Teñido de la fibra mordentada
MgCO3
magnesio

Tabla 4:Resultados de las reacciones de coloración

Re
M.
Tipo de su
secunda Observaciones
prueba lta
rio
do

Con
H2SO4
Reac
(50%)
cione
s +
gene
Con
rales
NaOH
(10%) Orden: (Base-acido-
Quinona extracto etanólico)
s

Reacción con
ditionito de +
sodio
Orden: Extracto
etanólico y reacción
con ditionito de sodio
Tabla 7: Rf obtenidos para los extractos de la Lawsonia
Tabla 6: Cromatografía en capa fina inermis

Cromatografica en capa fina (TLC) Sistema II Sistema III


Recorri
do del
4.1 4.4
eluyent
Extract e (cm)
o Recorri
etanólic do de la
0.8 3.9 1.5
o muestra
(cm)
0.19 0.95
Rf 0.34
5 1
Sistema II: Recorri
acetato de etilo: do del
ácido acético 4.1 4.4
eluyent
(99:1) Extract e (cm)
o Recorri
bencéni do de la
3.7 0.6 1.4 2.4
co muestra
(cm)
0.13 0.31 0.54
Rf 0.902
6 8 5
Recorri
do del
4.1 4.4
eluyent
Extract
e (cm)
o de la
Recorri
hidrolis
do de la
is 3.8 1.1 2.4
muestra
(cm)
Rf 0.92 0.25 0.54

Análisis de resultados

• Reacción con ácido sulfúrico e hidróxido de


sodio
Sistema III:
cloroformo: Mediante el uso de NaOH y el H2SO4, se realiza
metanol (19:1) una hidrolisis básica y acida respectivamente, lo
cual genera condiciones oxidativas, que permiten
que las naftoquinonas glicosiladas queden libres,
en el caso del tratamiento con ácido sulfúrico, la
Lawsona sufre una oxidación que genera un
cambio de coloración al extracto etanólico, como
se observa en la tabla 4. Por otra parte, cuando la
Lawsona se somete a NaOH genera soluciones
coloreadas que puede ir desde el amarrillo hasta
rojo, en este caso el grupo OH está siendo
reducido para formar un fenóxido que es el
responsable de la coloración tal y como se
observa en la tabla 4. (Gibaja, 1998)
O tabla 3, es uy posible que sea más exactamente a
O
O la p-fenilendiamina que no permite que la
OH
H O H H2SO4 Lawsona vuelva a oxidarse sino que en cambio se
H
OH H oxida este.
HO OH

H OH O O
O OH OH
O
H2SO4 Na2S2O4

O
O OH
O
O O

OH OH
H2O2
O
Reacción 1: Lawsona en medio ácido

OH O
O O Reacción 3: ditionito de sodio y peróxido de hidrógeno
O OH
H O H

H H H NaOH • Reacción de Borntrager y Naftoquinonas


HO OH
OH OH

O Como se muestra en la tabla 4, las naftoquinonas


O
y antraquinonas libres al ser tratadas con una
NaOH solución de hidróxido de potasio, forman
complejos de color rojo cereza, el KOH primero
O hidroliza a los glicósidos naftalenicos, la
O
-
coloración roja nos indica la presencia de
O O
Na naftoquinonas libres oxidadas, y así mismo la
+
intensidad del color es proporcional a la
Na concentración del metabolito secundario
presente, el uso del benceno en esta reacción es
O O con el fin de separar los compuestos apolares que
Reacción 2:Lawsona en medio básico halla en solución, para así dejar libre las agliconas
que posteriormente se tornaran de color rojo a
azul violeta en medio básico. (Departamento de
• Reacción con ditionito de sodio Química Farmacológica y Toxicológica,
Universidad de Chile , 2019)
El uso de Na2S2O4 en quinonas, más
específicamente en la Lawsona causa una O O
reducción del grupo ceto en el anillo naftalenico, OH
O
lo cual causa un cambio de coloración en la KOH
O H
solución, pasando de estar en un verde pardo, a H
H H H
un verde mucho más claro cómo se observa en la HO OH
OH OH
tabla 4, esto en parte se debe a que el uso del O
O
ditionito de sodio causa que se generen
compuestos menos coloreados, ya que este KOH
destruye a las sustancias cromóforas que son las
que generan el color. (Deanna Marcano, 2002)
OH
Esta reacción se puede revertir con el uso de H2O2
ya que este genera una re-oxidación en la O
solución, volviendo a generar el grupo ceto de la
Lawsona, tal y como se muestra en la reacción 3,
aunque cabe resaltar que en el caso de la henna
esto no ocurrió y esto se debió posiblemente a los O
demás componentes de esta como se indica en la Reacción 4: Borntrager
Debido a que no se tenía ningún patrón para
• Teñido de fibras realizar una comparación de la separación en la
TLC, se optó por revisar la literatura, para realizar
El primer paso consiste en colocar el alumbre en una comparación y se encontró algunos valores
agua caliente, para que el mordiente se disuelva, de Rf que corresponde a la lawsona en un estudio
en este proceso la sal doble KAl (SO4)2·12H2O o de la actividad antimicrobiana de la Lawsonia
también conocido como alumbre se disocia, y el inermis. (Img 4)
metal queda como catión, el cual pasa a unirse a
la fibra (queratina), una vez que la fibra
mordentada, esta pasa a unir un complejo con la
Lawsona. (tabla 5)
El alumbre tiene como función darle una mayor
fijación a la Lawsona sobre la fibra, además de
que permite que el color posea mayor brillo y
vivacidad, además de que permite de que se
forme un quelato que es el que permite que el
colorante (lawsona) siga unido a la fibra.
(reacción 5) (Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales (UBA), 2015)

Img 5:Cromatografia en capa fina, para un estudio de la


O
OH actividad antimicrobiana de la Lawsonia inermis. (Abd-el-
O
Al
Malek, el-Leithy, Reda, & Khalil, 1973)
H3C S NH2
Al momento de realizar la comparación con los datos
H3C SH NH2
obtenidos se observa que el Rf reportado (Img 4) es
KAl(SO4)2 .12H2O bastante cercano, ya que se indica que para la 2-hidroxy-
O CH3 1,4-naftoquinona el Rf es de 0.346, además de que en el
O
O Al UV posee una coloración púrpura, y en la luz visible debe
OH CH3 OH
OH de poseer una coloración naranja, y el Rf (tabla 7)
O O
obtenido fue de 0.34 en el sistema III en el extracto
O O etanólico y en el extracto bencénico fue de 0.318, además
O de que en la luz visible se observa una coloración naranja-
marrón, y en el UV se observa una coloración purpura
aunque es muy pequeña, así que se puede inferir de que
Reacción 5: Teñido de fibra mordentada con alumbre más posiblemente si se logró separa la lawsona de la especie
Henna
Lawsonia inermis, en la tabla 8 se observa una
• Cromatografía en capa fina (TLC) comparación de todos los mejores Rf obtenidos con los
reportados.
La cromatografía se realizó para la especie
Tabla 8: Comparación de lo Rf del sistema III con los Rf
Lawsonia inermis, la cual contiene como teóricos
metabolito secundario la lawsona, para dicha
cromatografía se utilizaron dos sistemas (acetato Rf Obtenidos en el
de etilo: ácido acético) ligeramente polar y Rf reportados
Sistema III
(cloroformo: metanol) poco polar, tal y como se 2-hidroxy-
muestra en la tabla 6, en cada sistema se sembró Extracto
0.34 1,4- 0.346
de izquierda a derecha una nuestra de Lawsonia EtOH
naftoquinona
inermis en extracto etanólico, en extracto Extracto 1,4-
bencénico y en hidrolisis, en cada sistemas se 0.31 0.84
Bencénico naftoquinona
determinó el Rf (tabla 7), y se presenció que el 1,3-
sistema 3 (cloroformo: metanol) fue el mejor de Hidrolisis 0.545 dihidroxy- 0.8
los dos sistemas usados, ya que se logró una naftaleno
mejor separación de los componentes presentes
en dicha especie.
Conclusiones en la prueba de naftoquinoas la cual debía dar una
coloración azul-violeta y se obtuvo un violeta
• La fase móvil en la que mejor se separaron los muy tenue, lo cual también indica que la
componentes de la Lawsonia inermis fue los proporción de Lawsona presente en el producto
sistemas III, donde se logró obtener un Rf cercano utilizado (henna hindú) era bastante pobre.
al reportado en la literatura para la lawsona (2-
• En la reacción de peróxido de hidrogeno que
hidroxy-1,4-naftoquinona)
consistía en volver a re-oxidar el grupo ceto de la
Naftoquinona para así recuperar el color de la
• Debido a que la henna que se analizó tenía otros solución, no se dio debido a un componente (p-
componentes que interferían con el análisis de fenilendiamina) del producto trabajado que
quinonas, no se logró obtener un buen resultado impedía que este se volviera a oxidar.

Bibliografía
Abd-el-Malek, Y. A., el-Leithy, M. A., Reda, F. A., & Khalil, M. (1973). Antimicrobial Principles in
Leaves of Lawsonia inermis L. Elsevier , 61-67.

Deanna Marcano, M. H. (2002). Fitoquímica Orgánica. Venezuela: Torino.

Departamento de Química Farmacológica y Toxicológica, Universidad de Chile . (17 de Junio de


2019). Obtenido de https://www.u-
cursos.cl/faciqyf/2010/1/FBQI4109/3/material_docente/bajar?id_material=557012

Dra. Ana I. Sánchez Moyaa, D. M. (2005). Dermatitis alérgica de contacto por tatuajes temporales.
Medicina de Familia. SEMERGEN, 199-251.

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA). (2015). Química y color en los textiles . Quimica
viva, 33.

Gibaja, S. (1998). Pigmentos Naturales Quinónicos. Perú: Universidad Nacional Mayor de San
Marcos.

Ugaz, O. L. (1997). Colorantes Naturales. Perú: Fondo Editorial de la Pontificia Universidad Católica
del Perú.