Guías de Fundamento de los procesos Biológicos 1

ADVERTENCIA

Es de suma importancia que los alumnos, previo a la realización de la práctica, comprendan en su totalidad lo que se hará,
cómo se efectuará y por qué.

REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO

Toda persona que haga uso del laboratorio, deberá sujetarse al presente reglamento.

1. Dentro del laboratorio es indispensable el uso de gabacha.

2. No se permite fumar, comer o beber dentro del laboratorio.
3. Durante el período de prácticas las mesas deben mantenerse limpias, por lo que hay que secar inmediatamente cualquier
salpicadura o mancha que se produzca. Cuando la práctica termine, cada estudiante deberá limpiar su lugar de trabajo antes
de abandonar el laboratorio.
4. No colocar artículos personales y libros sobre las mesas a excepción de la guía de laboratorio y cuaderno de apuntes.
5. Evitar manipular equipo del cual se desconoce su operación así como también, el que no se esté usando.
6. Debe evitarse la proximidad del mechero a sustancias tales como alcohol, éter, parafina, etcétera.
7. Regresar a su sitio inmediatamente los frascos de reactivos después de ser utilizados.
8. Manejar con cuidado los reactivos químicos, especialmente los ácidos y las bases.
9. Al calentar una sustancia en un tubo de ensayo, no dirigir la boca del tubo hacia sus compañeros o hacia usted mismo.
10. Cuando se trabaje con sustancias inflamables, asegurarse antes de que no existan llamas en sus proximidades.
11. Nunca probar una disolución o sustancia por inofensiva que sea.
12. Verter siempre los ácidos concentrados, especialmente el ácido sulfúrico (H 2SO4), sobre el agua con sumo cuidado; no
realizar jamás la operación inversa ya que puede producir calentamiento violento con salpicaduras.
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FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

GUÍA DE LABORATORIO No. 1

“Obtención e Hidrólisis del almidón de la papa”

I. INTRODUCCIÓN
El almidón ha sido parte fundamental de la dieta del hombre desde los tiempos prehistóricos, además de que se la ha dado
un gran número de usos industriales.

En las plantas constituye el producto de reserva predominante. Se presenta por lo general en forma de gránulos que pueden
ser esféricos, lenticulares u ovoides y con una marcada estructura en capas. El almidón vegetal está formado por los dos
glucanos amilosa (15 a 27 %) y amilopectina. La amilosa es soluble en agua caliente y es responsable del color azul típico
que adopta el almidón al tratarlo con yodo. Está formada por cadenas no ramificadas de D-glucosa unidas por enlaces
glucosídicos . La amilopectina se esponja al ponerla en agua y al calentarla forma engrudo; al tratarla con yodo se
obtienen una coloración que va desde el púrpura hasta el marrón.

En los microorganismos el almidón se reconoce por la coloración con la disolución de yodo, azul como almidón y de color
pardo como glucógeno.

La hidrólisis del almidón se puede probar de dos maneras:

1. Por la desaparición del color azul característico de la prueba del yodo.

2. Por la aparición de glucosa, como azúcar reductor.

Los almidones de distinta procedencia se diferencian por su ramificación, grado de polimerización y por otras
características.

II. OBJETIVOS

1. Obtener el almidón de la papa siguiendo el procedimiento indicado.

2. Estudiar las propiedades químicas del almidón como polisacárido.
3. Comprobar la hidrólisis del almidón a través de la degradación en sus componentes elementales.
4. Valorar la prueba del yodo en la comprobación de la hidrólisis del almidón.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 Ralladores finos. Pipetas de 5 mL

 Agitadores de vidrio. Hornilla
 Beakers de 250 mL Centrífuga con tubos para 25 mL
 Beakers de 600 mL Plancha de calentamiento o mechero
 Tubos de ensayo Baño María con control de temperatura.
 Gradillas. Una papa de regular tamaño *
 Goteros. Agua destilada
 Probetas de 10 mL Solución de almidón al 1%
 Pipetas graduadas Solución de yodo.
* Lo traen los estudiantes
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IV. PROCEDIMIENTO

Parte A. Obtención del almidón

1. Pelar una papa y luego rayarla.

2. Mezclar la pulpa con el doble de agua destilada y agitar fuertemente.
3. Filtrar a través de dos dobleces de gasa.
4. Eliminar las partículas gruesas retenidas en la gasa.
5. Lavar con agua el sedimento obtenido de la filtración.
6. Resuspenderlo y centrifugarlo varias veces.
7. Suspender el almidón en 100 mL de agua.
8. Hervirlo durante unos minutos para formar el gel.
9. Colocar 5 ml de agua en tres tubos de ensayo.
10. Verter en el primero 5 gotas de solución de almidón al 1%, al segundo una gota de solución de almidón y al tercero
no agregar nada.
11. Luego añadir una gota de solución de yodo a cada uno de los tres tubos y notar la diferencia de color.
12. Colocar los tres tubos en un baño de agua caliente (700C) y observar cualquier cambio de color que se de.
13. Enfriar los tubos y observar nuevamente.

Parte B. Hidrólisis del almidón

1. Verter sobre un tubo de ensayo 5 mL de agua destilada, 0.5 mL de almidón al 1% y gota de solución de yodo (testigo
1).
2. Verter sobre otro tubo de ensayo 5 mL de agua y 1 gota de la solución de yodo (testigo 2).
3. Colocar 10 ml de almidón al 1% y 0.3 mL de HCl concentrado en un tubo de ensayo y caliente durante 5 minutos
en un baño de agua hirviendo.
4. Tomar otro tubo de ensayo y agregar 5 mL de agua destilada, 0.5 ml de almidón hidrolizado y 1 gota de yodo.
Note el color azul intenso que se produce.
5. Repetir el paso anterior por lo menos tres veces hasta que la prueba de yodo sea negativa.

V. CUESTIONARIO
1. Enumerar otros productos naturales con altos porcentajes de almidón.
2. ¿Por qué es necesario tener siempre una muestra testigo?
3. ¿Por qué es necesario controlar la temperatura en el paso No 12 de la parte A?
4. ¿A qué se deben los cambios de color observados en la parte A?
5. Por medio de una reacción química explicar la hidrólisis del almidón
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GUÍA DE LABORATORIO No. 2

“Reconocimiento de la enzima catalasa”

I. INTRODUCCIÓN

La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en
los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de
hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el
problema.

La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:

2H 2O 2 catalasa
 2H 2O  O 2
Por otro lado, ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas.
Al perder la estructura terciaria, perderá también la función y como consecuencia su función catalítica.

II. OBJETIVOS
1. Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
2. Comprobar una de sus propiedades (la desnaturalización).

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 Gradilla
 Pipetas
 Tubos de ensayo
 Mechero
 Agua oxigenada
 Tomate *
 Hígado *
* Lo traen los estudiantes

IV. PROCEDIMIENTO

Parte 1. Identificación de la catalasa

1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.

2. Añadir 5 mililitros de agua oxigenada.

3. Se observará un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxígeno.

4. Repetir este paso con trocitos de tomate.

Parte 2. Desnaturalización de la catalasa

1. Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos de hígado.

2. Añadir agua para hervir la muestra. Hervir durante 5 minutos.

3. Después de este tiempo, retirar el agua sobrante.

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4. Añadir el agua oxigenada.

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V. CUESTIONARIO

1. ¿En cuál de los tejidos (animal o vegetal) se observó mayor burbujeo? ¿Por qué?
2. ¿Por qué no se observó burbujeo después de hervir los tejidos?

3. Dibuje la estructura orgánica de la enzima catalasa.

4. ¿Qué tipo de enzima es la catalasa?

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GUÍA DE LABORATORIO No. 3

“Actividad Catalítica de las enzimas ante el pH”

I. INTRODUCCIÓN
La concentración de ion hidrógeno es uno de los factores más importantes que influyen en la velocidad de las reacciones
bioquímicas; tales reacciones son inducidas y controladas por enzimas, por ende es necesario conocer como afecta el pH en
la actividad de las enzimas. Cada enzima es activada dentro de un intervalo específico y limitado y presenta su máxima
actividad a un pH óptimo, por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye. Algunas enzimas actúan mejor a pH
bajos (ácidos), otras requieren pH altos (básicos) pero la mayoría son más efectivas en soluciones neutras.

El presente experimento prueba la catálisis de una enzima por el pH, para lo cual se utiliza el sistema catalasa/H 2O2.

II. OBJETIVOS
1. Extraer la enzima catalasa de una papa.
2. Preparar diferentes concentraciones de catalasa mezclando la extracción con varios volúmenes de agua destilada.
3. Probar la enzima en varias concentraciones y hacerla reaccionar con el sustrato H2O2.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 Beakers de 500 mL Servilletas

 Probeta de 100 mL Reloj
 Probeta de 10 mL Agitador de vidrio
 5 Beakers de 50 mL Licuadora
 1 beaker de 500 mL para desechos Gasa para filtrar
 1 beaker de 100 mL marcado (“reacción”) H2O2 al 3%
 2 Erlenmeyer de 250 mL Soluciones amortiguadoras de pH 4, 7 y 10
 Pinzas Cinta adhesiva y marcador
 40 discos de papel filtro Agua destilada

IV. PROCEDIMIENTO

Parte 1. Preparación del extracto de papa

1. Lavar una papa, partirla en dos.

2. Cortarla en pedazos, sin quitar la cáscara, y echarla en la licuadora.
3. Agregar agua destilada hasta cubrir los pedazos de papa.
4. Licuar a la velocidad máxima durante 15 segundos.
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5. Filtrar el puré en un embudo con gasa, recolectando tanto líquido como sea posible.
6. Agregar agua destilada para subir el volumen a 200 ml. Marcar este contenido como “100%” con cinta
adhesiva.
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Parte 2. Actividad enzimática

1. Poner 30 mL de H2O2 al 3% en el vaso marcado “reacción”.

2. Agregar 30 mL de solución amortiguadora pH 4.
3. Sumergir con pinzas un disco en el vaso de catalasa al “100%” por cinco segundos. Después quitar el exceso de líquido
sacudiendo levemente el disco (no tocar con la servilleta u otro objeto).
4. Dejar caer el disco en el vaso de “reacción” y sincronizar el reloj. Se observarán burbujas desencadenadas de la
reacción.
5. Anotar el tiempo necesario para que el disco suba hasta tocar la superficie a causa de las burbujas en orientación
horizontal.
6. Tirar el contenido del vaso con H2O2 y llenarlo de nuevo.
7. Repetir los pasos 1 a 5 con soluciones amortiguadoras pH 7 y 10.
8. Hacer el experimento testigo No. 1: poner un disco mojado en agua destilada en 30 mL de H 2O2 y con 30 mL de
solución amortiguadora pH 4, 7 y 10, por separado. Dejar el tiempo necesario hasta que flote. Anotar el tiempo.

V. CUESTIONARIO

1. ¿En cuál de las soluciones amortiguadoras se observa mayor actividad enzimática?

2. ¿Por qué es importante que el H2O2 tenga la concentración adecuada?
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GUÍA DE LABORATORIO No. 4

“TITULACIÓN DE AMINOÁCIDOS”

I. INTRODUCCIÓN

Desde el punto de vista químico, los aminoácidos (AA) son ácidos orgánicos con un grupo amino en posición alfa. Según
esta definición, los cuatro sustituyentes del carbono alfa en un aminoácido son:

 el grupo carboxilo
 un grupo amino
 un átomo de hidrógeno
 una cadena lateral R, que es característica de cada AA

Los AA son excelentes amortiguadores, gracias a la capacidad de disociación del grupo carboxilo,
del grupo amino y de otros grupos ionizables de sus cadenas laterales (carboxilo, amino, imidazol,
fenol, guanidino, etc). Los grupos ácido-base débiles presentan una capacidad tamponadora
máxima en la zona próxima al pK a. El comportamiento ácido-base de los AA es el que va a
determinar las propiedades electrolíticas de las proteínas, y de ellas dependen, en gran medida,
sus propiedades biológicas. En el modelo de interacción proteína-ligando, la carga eléctrica de una
y otro juegan un papel fundamental. Por este motivo, la función de las proteínas es
extraordinariamente sensible al pH.

Los aminoácidos pueden tener, por lo tanto, tres estados que dependen del pH: a pH<pI se encuentran en forma protonada o
catiónica; en el pI su carga es cero, y a pH>pI adquieren una carga negativa o aniónica. Es decir, no existe un pH en el cual
estos anfolitos estén completamente ausentes de cargas eléctricas, ya que las presentan aun en el PI; en cualquiera de sus
tres estados pueden ligar iones de carga contraria por fuerzas electrostática débiles.

La ionización de los AA sigue la ecuación de Henderson-Hasselbach:

Guías de Fundamento de los procesos Biológicos 9

(base)
pH  pKa  log
( ácido)

Usualmente esta ecuación es utilizada en la titulación de la glicina con ácido y base. La glicina contiene dos grupos
ionizables: un grupo carboxilo y un grupo amino, con valores de pKa de 2.4 y 9.6 respectivamente. La mayoría de
aminoácidos contienen grupos carboxilo y grupos amino con pKa similares a los de la glicina.

II. OBJETIVOS

1. Determinación de la curva de titulación de dos aminoácidos (Glicina y Arginina)

2. Calcular los valores de pKa por inspección visual de la curva de titulación

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 pH metro
 Agitador magnético
 Dos aminoácidos desconocidos en soluciones 0.1 M
 NaOH 0.1 M
 HCl 0.1 M
 Bureta
 Beaker de 250 mL
 Pipeta
 Soporte universal
 Pinzas para buretas

IV. PROCEDIMIENTO

TITULACIÓN DE GLICINA

1) Colocar 25 mL de la solución de glicina y 50 mL de agua en un beaker de 250 mL. Sumergir el electrodo del pH metro
en la solución y agitar utilizando el agitador magnético.
2) Llenar la bureta con la solución de HCl 0.1 M y colocarla encima del beaker.
3) Agregar poco a poco el HCl, midiendo el pH correspondiente y el volumen de ácido utilizado, hasta obtener un pH de
1.5.
4) Repetir los pasos 1 a 3, utilizando NaOH 0.1 M como titulante. Titular hasta obtener un pH de 11.5.

TITULACIÓN DE ARGININA

Repetir el procedimiento descrito anteriormente pero ahora utilizando una solución de arginina 0.1 M.

V. CUESTIONARIO

a) Dibuje la curva de titulación de cada aminoácido

b) Determine los valores de pKa, para cada aminoácido

c) Calcule los puntos isoeléctricos de cada aminoácido

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GUÍA DE LABORATORIO No. 5

“SIEMBRA EN MEDIOS SÓLIDOS”

I. INTRODUCCIÓN

Hay ciertos procedimientos que son indispensables en microbiología, y entre ellos están las técnicas estándar del vaciado en
placa y el estriado en placas y tubos de ensayo. Estos métodos tienen la virtud de ser eficaces tanto para la identificación
como la enumeración de diferentes microorganismos presentes en especimenes típicos utilizados en estudios.

El procedimiento de placa estriada es un ejemplo de una técnica de dilución que fue desarrollada originalmente por dos
bacteriólogos, Loeffler y Gaffkey. El método moderno para la preparación de una placa y un tubo estriados incluye la
diseminación de una sola asada de material con microorganismos sobre la superficie de un medio con agar que ya se ha
solidificado.

II. OBJETIVO

Conocer algunos tipos de siembra empleados en Microbiología así como, aprender a hacer siembra de microorganismos
en medio sólido.

III. MATERIALES

 Cajas de Petri estériles

 Tubos de ensayo estériles
 Gasa y algodón
 Asa de siembra
 Mechero

IV. MEDIOS DE CULTIVO

 Agar Nutritivo

IV. PROCEDIMIENTO

A) Llenado de placas y tubos

1. Fundir el agar nutritivo colocándolo en baño maría.

2. Tomar la caja de petri estéril y destaparla con los dedos índice y pulgar sosteniendo la base con los demás dedos.
Flamear el labio de la caja.
3. Con la otra mano se destapa el matraz que contiene el medio de cultivo, sosteniendo el tapón con los dedos meñique y
anular. También se flamea la boca del matraz y se vierte en la caja de petri a ¾ partes de su capacidad.
4. Depositar la caja de petri en la mesa de trabajo y dejar solidificar el medio.
5. El llenado de los tubos se efectúa en forma semejante al de las cajas de petri con la diferencia que estos se colocan en
forma inclinada en ángulo de 450.

B) Siembra en placas por estrías

1. Se esteriliza el asa de siembra en la región de mayor calor del mechero hasta el rojo vivo.
2. Se toma una asada de la cepa bacteriana contenida en el tubo de ensayo, este se abre de la misma forma en como se
llenó flameando la boca del tubo al destaparlo y antes de taparlo.
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3. La caja de petri se abre en la misma forma que como cuando se llenó, se flamea el labio y el asa se desliza sobre el
medio de cultivo, sin perforar el agar, formando estrías. La figura 1 muestra un esquema de cómo se lleva a cabo esta
operación.
4. Las cajas sembradas se incuban a 320C.
C) Siembra en tubos de ensayo por estrías.

1. Tomar una muestra de colonia con el asa de la siembra estéril de la misma forma que se hizo en el inciso B de la
siembra en placas.
2. Usando los medios de cultivo inclinados deslizar el asa sobre la superficie del medio en forma de estrías. La figura 2
muestra la forma de hacerlo.
3. Una vez inoculado los tubos, se incuban a temperatura de 320C.

Una pequeña cantidad

de inóculo que se toma
del área de descarga, se
2
distribuye en la caja por
medio de estrías.

1 5

Inóculo

Figura 1. Técnica Normal de siembra.

Asa de siembra

Fin

Principio

Vista lateral Vista de frente

Figura 2. Siembra en tubos de cultivo por estrías