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Metodos para La Determinacion de Carbohi
Metodos para La Determinacion de Carbohi
INTRODUCCIÓN.
Métodos
Métodos Químicos
-Método de Ácido Fenol Sulfúrico: se basa en los productos de reacción y degradación del ácido y
del azúcar, en donde el azúcar se torna fundamentalmente hidroximetilfurfural (HMF) o furfural
(F), leyendo una absorbancia a 490nm generando colores amarillos y anaranjados.
-Método de Ácido Sulfúrico: sus fundamentos son los mismos del método de Ácido Fenol
Sulfúrico, se diferencia en que los colores que se observan son azules y verdes leyendo una
absorbancia de 620nm.
*Estos métodos si bien son fáciles, rápidos, no interfieren con las proteínas y los resultados son
confiables y reproducibles, si los carbohidratos no proporcionan HMF o F en la descomposición
ácida, la muestra arrojará una amplia gama de colores.
Este método se basa en la determinación del volumen de una disolución de la muestra, que se
requiere para reducir completamente un volumen conocido del reactivo alcalino de cobre. El
punto final se determina por el uso de un indicador interno, azul de metileno, el cual es reducido a
blanco de metileno por un exceso de azúcar reductor.
Este método se puede aplicar en productos como leche evaporada y condensada, productos
lácteos, jarabes, mieles, mermeladas, néctares y jugos, dulces y moles.
-Reactantes, procedimiento.
Método Fehling-Soxhlet
Este es el método químico más aconsejable para utilizar. El fundamento de éste es que precipita el
óxido cuproso (Cu2O) en presencia de una sustancia reductora.
1. El citrato o tartrato evita la precipitación del hidróxido cúprico el álkali enoliza a los
azúcares provoca su rompimiento en fragmentos reactivos que pueden oxidarse
inmediatamente: Cu++ (cúprico) es reducido a Cu+ (el ión cuproso).
2. A medida que los iones Cu++ se reducen por los fragmentos de azúcar, los iones Cu+ se
combinan con los iones hidroxilo para formar hidróxido de cobre (de color amarillo, Cu+).
3. El CuOH reducido pierde H2O en presencia de calor para dar como resultado óxido cuproso
insoluble (Cu2O).
4. La determinación del cobre reducido se puede llevar a cabo por gravimetría, volumetría, o
por métodos electrolíticos. El peso del Cu2O sólo es aplicable a muestras relativamente
puras.
Si bien este método es uno de los métodos químicos más utilizados, presenta una serie de
desventajas, entre ellas está que la reducción del cobre y la oxidación de los azúcares no es
estequiométrica. Otra es que la producción de óxido cuproso varía, dependiendo del reactivo
álkali, la velocidad y tiempo de calentamiento y la concentración de azúcares en la muestra,
además, los azúcares difieren en su habilidad para reducir la solución cúprica, por tanto, la
titulación (o peso o absorbancia) deben ser convertidos en (miligramos de cobre) y
posteriormente se debe recurrir a tablas para determinar la concentración de azúcar presente en
la muestra.
Método Gavimétrico o La Propuesta de Munson-Walker
La determinación del Cu2O puede ser gravimétrica, pero es generalmente mejor titular el óxido
cuproso. Esto se puede realizar mediante uno de los siguientes métodos (se llevan mucho tiempo):
HNO 3
Cu 2º → Cu(NO 3 ) 2
2I - + 2Cu++ → 2Cu + + I 2
S2O3-2
I2 + I - → I3 - → S4O6 -2 + 3I –
(TRIIODURO)
Método Benedict
Procedimiento:
Reactivo de Somogy I
Reactivo de Nelson
Este método es posible realizarlo cuando los compuestos de la muestra absorben la radiación a
una longitud de onda corta y luego emiten radiación a una longitud de onda más larga.
• Excitación a 454nm.
Método Enzimático
En este método se requiere de un extracto neutro o ácido libre de alcoholes y metales pesados (ya
que no se pueden usar sales de plomo para clarificar los extractos).
Este método se puede aplicar a una gran variedad de carbohidratos o compuestos relacionados
como monosacáridos, disacáridos, polisacáridos, ácidos, alocholes y polioles.
Reacciones
GLUCOSA OXIDASA
CATALASA
H2O2 → H2O + ½ O2
Reacciones:
HK
G6P-DH
INVERSIÓN ENZIMÁTICA
ß-FRUCTOSIDASA
Método Haderdorn-Hansen
Los azúcares presentes en una muestra de azúcar comercial o de algún producto azucarado se
determinan cuantitativamente por métodos físico (ópticos/preferentemente) o por métodos
químicos.
Se basan en lo mismo: Una de las técnicas analíticas más potentes consiste en determinar la
cantidad de una sustancia disuelta midiendo la cantidad de radiación absorbida por la misma. Esta
técnica se llama Espectrofotometría. Se puede utilizar el espectrofotómetro para determinar la
longitud de onda de radiación necesaria para las determinaciones de la cantidad de azucar en las
muestras bajo estudio, comparándola después con la radiación absorbida por un blanco. La regla
específica que relaciona la cantidad de radiación absorbida por una sustancia con la concentracion
de esa misma sustancia, se llama ley de Beer.
Densimetría
Para este proceso se utiliza un instrumento de medición llamado Higrómetro (también utilizado
para la medición de sólidos solubles totales), para este método se ha diseñado un higrómetro
especial que lee el % de azúcar directamente a 20°C.
POLARIMETRÍA
Fundamento:
-SI SE PUEDE HACER QUE TODOS LOS RAYOS TENGAN ORIENTADOS SUS COMPONENTES
ELÉCTRICOS Y MAGNÉTICOS EN LA MISMA DIRECCIÓN, LA RADIACIÓN SERÁ POLARIZADA EN
PLANO. ESTO SE PUEDE LOGRAR MEDIANTE EL USO DE UN FILTRO POLARIZADOR.
• CUANDO LA LUZ POLARIZADA BRILLA EN UNA MOLÉCULA ASIMÉTRICA (UN COMPUESTO QUE
NO PUEDE PRODUCIR UNA IMAGEN AL ESPEJO). LA LUZ ES ROTADA. ESTO ES LLAMADO
“COMPUESTO ÓPTICAMENTE ACTIVO” (e.g. GLUCOSA).
• TEMPERATURA
POLARÍMETROS vs SACARÍMETROS