Procedimiento de Administracion de Sustancias y Toma de Mues PDF

CODIGO:
MACROPROCESO
[Codigo_Documento]
[Nombre_Macroproceso] VERSIÓN: X
PROCESO
[Nombre_Proceso] FECHA: XXXX de XXXX
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTÁNDAR

(POE)
PROCEDIMIENTO DE ADMINISTRACION DE
SUSTANCIAS Y TOMA DE MUESTRAS SANGUINEAS
INCLUYENDO RUTAS Y VOLUMENES EN ROEDORES DE
LABORATORIO
REVISADO POR APROBADO POR
Presidente CICUAL-PUJ Decanatura de Ciencias
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PROCEDIMIENTO OPERATIVO CODIGO:
ESTÁNDAR [Codigo_Documento]
PROCEDIMIENTO DE VERSIÓN: X
ADMINISTRACION DE SUSTANCIAS Y
TOMA DE MUESTRAS SANGUINEAS
FECHA: XXXX de XXXX
INCLUYENDO RUTAS Y VOLUMENES EN
ROEDORES DE LABORATORIO
1. OBJETIVO
El objetivo de este procedimiento es establecer lineamientos estandarizados para el
desarrollo de técnicas correctas de administración de sustancias y extracción de
muestras sanguíneas en animales de laboratorio. La aplicación de estas técnicas se
desarrolla con base a guías y normativas internacionales.
2. ALCANCE
Este procedimiento se inicia con la manipulación y sujeción del modelo animal y

finaliza con la administración de la sustancia o la toma de una muestra sanguínea
necesaria para el desarrollo de un procedimiento experimental. El procedimiento
puede ser realizado en ratones, ratas, cobayos, jerbos, hámster y roedores silvestres
usados con fines experimentales.
3. DEFINICIONES
 Volúmenes de Inoculación: cantidad de solución o substrato preparado en

mililitros que debe ser inoculado a un modelo animal, los volúmenes varían según
la vía y especie animal seleccionada y muchas veces deben asociarse a un
adyuvante, solvente o vehículo.
 Dosificación: calculo establecido para definir el volumen de inoculación asociado

al peso vivo del modelo animal, este cálculo normalmente se expresa en mililitros
por kilo.
 Rutas de administración: diferentes vías que pueden ser utilizadas para

administrar sustancias en modelos animales. Generalmente se manejan las vías
intramuscular (i.m.), intravenosa (i.m.), intraperitoneal (i.v.), subcutánea (s.c.),
oral (p.o) e intradérmica (i.d.). La selección de la vía depende de múltiples
factores, entre ellos se deben considerar:
 pH, osmolalidad y estabilidad de la sustancia
 efecto y tasa de absorción
 compatibilidad y solubilidad
 dosis única o múltiples
 Inoculaciones parenterales: se refiere a todas las vías de administración de

sustancias asociadas a una inoculación que generara un efecto sistémico; sin
importar la vía las sustancias serán distribuidas por el torrente sanguíneo a todos
los sistemas corporales. En caso de inoculaciones parenterales, es posible que la
cantidad del inoculo sea absorbido por el sistema portal-hepático lo que llevara a
procesos metabólicos hepáticos sin alcanzar una totalidad de distribución
sistémica.
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 Vehículos: sustancias o sustratos que se utilizan para diluir un compuesto a

administrar en un modelo animal dependiendo de las características físico químicas
que este tenga. Por ejemplo, compuestos que son solubles en agua pueden ser
vehiculizados con agua estéril o solución salina al 0.9%; compuestos oleosos o
viscosos pueden ser diluidos con acetona o aceite de maíz.
 Seroma: formación de masa cutánea de consistencia liquida que puede

presentarse luego de una mala inoculación subcutánea. En este caso se presenta
un acumulo de líquido asociado a la sustancia inoculada que suele ser benigno. Si
es necesario el contenido puede drenarse si es persistente luego de 8 días pos
inoculo.
 Flebitis: inflamación de vasos sanguíneos venosos luego de una punción para

administrar sustancias o extraer muestras de sangre. La flebitis suele asociarse a
malas prácticas o múltiples punciones en una misma zona. En la zona afectada se
evidencia tumefacción de la zona con coloración rojiza violeta del lecho vascular
respectivo.
 Volumen sanguíneo circulante: es el volumen total que tiene un modelo animal

expresado en mililitros por kilogramo de peso. Existen variaciones leves asociadas
al linaje y sexo, dependiendo de la especie el volumen varía considerablemente.
Los volúmenes se presentan como medias, por ejemplo en la especie conejo el
volumen medio es 56 ml/kg con un rango de 44 a 70 ml/kg.
 Volumen de extracción: con base al volumen total sanguíneo, el volumen de

extracción es la cantidad máxima de sangre que puede tolerar un modelo animal
en un procedimiento determinado. Este factor debe calcularse teniendo en cuenta
si la extracción es en toma única o en tomas progresivas en tiempos determinados;
por ejemplo la extracción máxima del 7,5 % del volumen sanguíneo varia las
respuestas de recuperación (1 a 2 semanas) dependiendo del tiempo de extracción
(1 minuto o 1 día).
 Microvacutainer: recipiente triangular de doble boca utilizado para la recolección

y almacenamiento de muestras de sangre. Permite la recolección de bajos
volúmenes asociados a muestras de rata y ratón.
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4. FUNDAMENTOS
La administración de sustancias y la toma de muestras sanguíneas son

procedimientos rutinarios en al manejo, cuidado y uso de modelos animales con
fines científicos. Una buena y exitosa práctica debe garantizar una observación del
efecto deseado asociado a la sustancia expuesta o inoculada. El desarrollo de una
buena técnica debe disminuir el dolor y malestar percibidos por el animal durante el
procedimiento.
5. CONDICIONES GENERALES
 Estos procedimientos deben ser llevados a cabo por personal entrenado en la

ejecución de los mismos. En caso de investigadores o usuarios sin experiencia,
el desarrollo de las técnicas deben ser supervisadas por los investigadores
principales o el personal técnico y veterinario de la unidad de Bioterios.
 Este procedimiento solo puede llevarse a cabo en áreas o laboratorios
asociados a la unidad de Bioterios, en caso de zonas diferentes, estos
procedimientos deben ser previamente aprobados por el Comité Institucional
de Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (CICUAL PUJ).
 Para la administración de sustancias en roedores de laboratorio, se
debe tener en cuenta los volúmenes permitidos según la especie
seleccionada (tabla 1), volúmenes excesivos puede llevar a una pérdida del
bienestar de los animales, en cualquier caso los valores deben ser ajustados
según los requerimientos farmacológicos. En caso de ser necesario administrar
volúmenes mayores a los permitidos, el procedimiento debe ser consultado con
el coordinador de la unidad de Bioterios y se deben manejar varios sitios de
inoculación.
 En algunas ocasiones se deben utilizar vehículos para la dilución de las
sustancias a administrar, estos compuestos deben ser biológicamente inertes
y no alterar la estabilidad de la sustancia y formulado, así mismo no debe ser
toxico para los animales. Algunos ejemplos de vehículos son soluciones
isotónicas acuosas, soluciones bufferadas, suspensiones y aceites. Cuando se
mezcla el vehículo y la sustancia a implementar se debe validar la viscosidad,
el pH y la osmolalidad.
 En el caso de administración de sustancias por vía oral, en algunas ocasiones
puede ser necesario restringir por periodos cortos de tiempo el consumo de
agua o alimentos. Debe tenerse en cuenta que esta restricción no debe superar
las 2 – 4 horas por la alta tasa metabólica de estas especies. La administración
de altos volúmenes (≥40 ml/kg) puede llevar a distensiones severas del
estómago y reflujo esofágico, lo cual puede afectar la absorción de la sustancia.
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Es recomendable que las sustancias se administren por medio de una sonda

oro gástrica para garantizar una adecuada dosificación.
 Las inoculaciones parenterales pueden ser administradas por vía subcutánea,
intradérmica, intraperitoneal, intramuscular e intravenosa. En estos casos se
debe tener en cuenta la estabilidad de la formulación, pH, viscosidad,
osmolaridad, esterilidad y biocompatibilidad. En la mayoría de los casos se
deben usar agujas calibre 27 y 24 con jeringas de 1 mililitro; con sustancias
muy viscosas y densas puede ser necesario usar agujas calibre 22. En ningún
caso deben usarse agujas calibre 18 o inferior en roedores de
laboratorio.
 En caso de administración de sustancias por vía subcutánea se debe tener en
cuenta que esta ruta es de lenta absorción y dependiendo de la sustancia puede
tardar 30 minutos aproximadamente en llegar al torrente sanguíneo
 Las agujas de inoculación no debe utilizarse para cargar jeringas atravez de
sellos de recipientes. En estos casos debe utilizarse una aguja de mayor calibre
para ello, con esto se garantiza que la aguja de inoculación no pierda filo y el
procedimiento será menos doloroso para el animal.
 En caso de administración de sustancias por vía intraperitoneal debe tenerse
en cuenta el riesgo de administrar sustancias irritantes que induzcan peritonitis
química, así mismo la absorción puede llevarse a cabo por la circulación
sistémica o el circuito portal hepático.
 En caso de administración de sustancias por vía intramuscular debe tenerse en
cuenta la ubicación ya que existe riesgo de lesionar nervios. En roedores las
inyecciones pueden colocarse en los músculos epaxiales, glúteos y
semitendinoso. Por otro lado debe tenerse en cuenta que formulaciones
aceitosas pueden tener bajas tasas de absorción por esta vía (≥24 hrs). En
caso de multidosis puede presentarse inflamación en la zona.
 En caso de administración de sustancias por vía intravenosa, generalmente se
utiliza las venas laterales de la cola en la rata y el ratón. En caso de cobayos
se puede acceder por la vena cefálica o safena. Así mismo se debe valorar la
administración como inyección por bolos, intravenosa lenta o infusión
constante. La inyección por bolos se utiliza en estudios con múltiples dosis, en
este caso cada dosis se administra en un periodo estimado de 1 minuto. Este
método se debe utilizar con sustancias con una alta compatibilidad con la
sangre y poco viscosas, así mismo, si se pretende administrar altos volúmenes
la temperatura de la solución debe ser similar a la corporal. En roedores los
bolos no deben exceder una tasa de 3ml/min. La inoculación intravenosa
lenta se utiliza en dosis únicas, en estos casos el tiempo de inoculación es de
5 a 10 minutos, lo que resulta útil en caso de soluciones levemente irritantes
o poco solubles. Dado este tiempo prolongado, en estos casos es necesario fijar
un catéter mariposa o catéter de administración de fluidos. El protocolo de
infusión continua se utiliza en estudios de valoración secuencial de fármacos o
diferentes sustancias. En estos casos el volumen de administración debe
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ser menor al 10% del volumen sanguíneo circulante en un periodo de

2 horas (tabla 2).
 La administración de sustancias por vía intradérmica se utiliza normalmente
para estudios de hipersensibilidad y evaluación de inflamación. En este caso
se deben manejar volúmenes de 0,05 – 0,1 mililitros por sitio de
punción.
 En el caso de extracción de muestras deben tenerse en cuenta los volúmenes
circulantes en relación con su peso corporal (Tabla 2), extracciones excesivas
pueden llevar a alteraciones cardiovasculares, patrones respiratorios
anormales y cambios comportamentales.
 Dependiendo del volumen de extracción deben establecerse unos tiempos base
de recuperación para que la hemodinámia del animal vuelva a niveles normales
(Tabla 4 y Tabla 5). Debe tenerse en cuenta que altos volúmenes de
extracción cercanos al 15 y 20% pueden tardar hasta 30 días en recuperar la
línea base sanguínea normal.
 Los sitios de veno-punción son establecidos según la especie involucrada. En
algunos casos pueden presentarse cambios hematológicos en estudios de
patología clínica.
 La toma de muestras sanguíneas por la vena lateral de la cola puede
desarrollarse en ratas y ratones, pueden tomarse múltiples muestras en el
tiempo que deben desarrollarse de distal a proximal para no perder la
integridad del vaso sanguíneo. Los volúmenes de extracción puede ser de
0,1-0,15 mililitros en el ratón y 0,5-1 mililitro en la rata.
 La toma de muestras sanguíneas por las venas safenas pueden desarrollarse
en ratas, ratones, hámster, gerbil y cobayos. Por este método pueden
obtenerse volúmenes hasta del 5% del volumen sanguíneo circulante.
 La punción cardiaca siempre debe realizarse bajo anestesia general o como
procedimiento terminal luego de practicar la eutanasia. La punción cardiaca
siempre debe considerarse como un procedimiento terminal y no se
debe permitir la supervivencia de los animales ya que pueden generarse
sangrado pericárdico o tamponamiento cardiaco.
 La amputación de porciones distales de la cola solo puede utilizarse cuando se
hayan descartado todas vías citadas. Esta técnica permite obtener volúmenes
de extracción de 0.1-0.2 mililitros. Durante el procedimiento debe removerse
un máximo de 5 milímetros y los animales debe estar sometidos a un plano
anestésico.
 La toma de muestras por el plejo retro bulbar no es recomendable en ningún
caso ya que suele generar complicaciones y se pueden generar pérdidas
significativas de bienestar.
 La vena lateral de la oreja es una vía de extracción de sangre usada en cobayos,
conejos y minipigs. Ofrece la ventaja de la arteria central de la oreja que puede
permitir muestras de sangre arterial útiles en diferentes estudios.
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6. MATERIALES Y/O EQUIPOS
Inoculación oral
 Sonda oro-esofágica
 Jeringas 1,2 o 5 mililitros
 Sustancia a administrar
 Vehículo (asociado a la sustancia)
 Elementos de protección personal asociados al personal
 Solución salina 0,9% (casos de comprobar ubicación de la sonda)
Inoculación subcutánea
 Aguja calibre 24
 Aguja calibre 22 (soluciones acuosas o aceitosas)
 Clorhexidina 2% (desinfección de la zona de inoculación)
Inoculación intraperitoneal
 Aguja calibre 22 (soluciones acuosas o aceitosas)
Inoculación Intravenosa
Elementos varían según la técnica empleada
 Aguja calibre 24 o 27
 Catéter calibre 24 (técnica 2)
 Agua tibia
 Cepo inmovilizador
 Banda elástica (ocluir vena)
 Vaselina estéril
 Alcohol 70%
 Lanceta
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 Cuchilla minora
 Jabón hipo alergénico
 Infusión continua (venoclisis de micro goteo, bomba de infusión o buretrol)
Inoculación intradérmica
 Jeringas de 1 mililitro
Extracción de muestras sanguíneas (Vena Safena y Cefálica)

 Recipiente de recolección (tubos capilares o microvacutainer)
 Cuchillas minora
 Alcohol 70%
 Gaza
 Cepo de inmovilización (opcional)
Extracción de muestras sanguíneas (Plejo Submandibular)

 Recipiente de recolección (tubos capilares o microvacutainer)
 Alcohol 70%
 Gaza
Extracción de muestras sanguíneas (Vena lateral de la cola)

 Catéter calibre 24
 Recipiente de recolección (tubos capilares, jeringas o microvacutainer)
 Alcohol 70%
 Gaza
 Agua tibia
 Banda elástica de oclusión
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Extracción de muestras sanguíneas (Punción Cardiaca)

 Jeringas de 1 o 2 mililitros
 Recipiente de recolección (vacutainer)
 Alcohol 70%
 Gaza
Extracción de muestras de la vena marginal y la arteria central de la oreja
 Aguja calibre 22 o lancetas

 Recipiente de recolección (Microvacutainer, capilares)
 Alcohol 70%
 Gaza
 Pomada anestésica
7. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
7.1. PROCEDIMIENTO DE ADMINISTRACION DE SUSTANCIAS Y TOMA DE

MUESTRAS SANGUINEAS INCLUYENDO RUTAS Y VOLUMENES EN
7.1.1. Administración de sustancias por vía oral en roedores
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
Sujeción e inmovilización: El modelo animal “roedor”
debe ser sujetado de la siguiente manera:
 En caso de ratones el animal debe ser
sujetado realizando una pinza en la base de
la cola con el dedo meñique y la palma de la
mano. Luego se debe tomar el pliegue
1 cutáneo dorsal del cuello con los dedos índice
y anular (figura 1). Se debe garantizar con
la cavidad oral y el cuello estén en un ángulo
igual o mayor a 60 grados.
 En caso de ratas el animal debe ser sujetado
realizando una pinza en la zona del cuello con
los dedos índice y anular dirigiéndose de
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
lateral a medial. Con el resto de la mano y
dedos se sujeta al animal de la porción
proximal del abdomen (figura 2).
 En caso de cobayos el animal debe sujetarse
con las dos manos, con una mano se le da
base parte posterior del animal con la palma
extendida y con la otra mano se sostiene el
cuerpo del animal extendiendo los dedos
desde la zona toraxica proximal hasta la zona
abdominal media (figura 3).
Preparación de la jeringa y sonda: La jeringa debe
ser precargada con el volumen de sustancia a
administrar, ver tabla 1. Una vez se complete el
volumen la sonda debe acoplarse a la jeringa y se
debe presionar levemente el embolo para garantizar
2 que la sustancia quede al tope de la boquilla de la
sonda y con esto evitar la introducción de aire en el
estómago. Posteriormente se debe medir el largo de
la sonda y compararlo con el aspecto ventral del
tórax hasta el cartílago xifoides (aproximadamente
hasta allí llegara la sonda).
Ubicación de la sonda-jeringa: Para las tres especies
la sonda debe iniciar su entrada con la boquilla hacia
arriba atravez de la comisura labial. Se debe ir
introduciendo lentamente la sonda lateral a la
lengua y permitir que el animal exponga la lengua
por acción refleja. Una vez la sonda llegue a la
faringe y se sienta una leve obstrucción por los
3 cartílagos traqueales, se deben hacer leves
movimientos giratorios de la jeringa con el fin de
facilitar la introducción de la sonda atravez de la
porción proximal del esófago. Es poco probable en
ratón y rata que la sonda se desplace a través de la
tráquea, sin embargo dependiendo del calibre de la
sonda esta puede palparse ventral a la tráquea a lo
largo del cuello (Figura 4).
Instilación de la sustancia: Una vez esté ubicada la
sonda oro esofágica, se debe iniciar la
4 administración de la sustancia, esta debe hacerse a
una velocidad media observando si hay algún tipo
de reacción anormal en el animal.
Retiro de sonda y observación del animal: una vez
se termine la instilación, la sonda debe ser retirada
5 del animal, esto no suele presentar complicaciones.
En caso de sentir resistencia en la extracción, deben
realizarse movimientos giratorios leves de la
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
jeringa. Cuando la sonda es retirada se debe
observar al animal, su patrón respiratorio y si se
desarrollan ruidos inspiratorios anómalos. Esto
signos pueden indicar broncoaspiración y en tal caso
se debe consultar con el veterinario de la unidad.
7.1.2. Administración de sustancias por vía subcutánea en roedores
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En caso de roedores el animal debe ser
sujetado realizando una pinza en el pliegue
cutáneo dorsal del cuello con los dedos índice
y anular (figura 5). El animal debe
permanecer en posición horizontal sobre una
6
mesa y con el resto de la mano se debe hacer
una leve fuerza para garantizar la
inmovilidad del animal. Luego el pliegue
dorsal debe dirigirse levemente con los dedos
en dirección vertical con lo cual se formara
un triángulo cutáneo con la piel estirada y el
aspecto dorsal del cuello (figura 6).
ser precargada con el volumen de la sustancia a
7
volumen la aguja debe acoplarse a la jeringa.
Ubicación de la aguja-jeringa: Una vez el animal
este inmovilizado, el investigador debe sujetar la
jeringa con la mano libre. Para ello debe tomar la
jeringa con los dedos índice y anular en dirección
latero medial, el dedo pulgar debe ubicarse en el
mango del embolo (Figura 7). Con esta ubicación
se debe observar que el embolo de la jeringa este
8 hacia arriba, así la aguja-jeringa debe dirigirse en
ángulo de 45 grados con relación al aspecto dorsal
del animal, se realiza un movimiento suave de la
mano que sostiene la jeringa en dirección caudal y
se va percibiendo como la aguja atraviesa las capas
de la piel que ofrecen una leve resistencia. Cuando
se han penetrado estas capas la aguja se siente libre
en el espacio subcutáneo (Figura 8).
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
aguja-jeringa, se debe iniciar la administración de la
sustancia, esta debe hacerse a una velocidad media
observando si hay algún tipo de reacción anormal en
el animal. Si durante la administración se empieza a
formar un abultamiento debe detenerse el
9 procedimiento y reubicar la aguja a un espacio
subcutáneo libre (el abultamiento indica que el
inoculo está acumulándose en las capas de la piel o
en las fascias musculares). Una mala administración
de la sustancia puede desarrollar un seroma en
donde se perderá el efecto deseado por la
inoculación (Figura 9).
Retiro de aguja-jeringa y observación del animal:
una vez se termine la instilación, la aguja-jeringa
debe ser retirada del animal, esto no suele presentar
complicaciones. En algunas ocasiones puede
10 observarse un poco de sangrado por rasgadura de
tejidos o perforación de vasos sanguíneos, en ese
caso se debe hacer presión en la zona y devolver al
animal a su jaula cuando sea evidente que el
sangrado no perdura.
7.1.3. Administración de sustancias por vía intraperitoneal en roedores
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En caso de ratones el animal debe ser
sujetado realizando una pinza en la base de
la cola con el dedo meñique y la palma de la
mano. Luego se debe tomar el pliegue
y anular (figura 1).En este procedimiento el
animal debe ser dirigido desde la cabeza en
11
dirección ventral, para garantizar que las
vísceras intestinales se desplacen hacia el
tórax y disminuya el riesgo de perforar el
intestino (Figura 10).
 En caso de ratas el animal debe ser sujetado
realizando una pinza en la zona del cuello con
los dedos índice y anular dirigiéndose de
lateral a medial. Con el resto de la mano y
dedos se sujeta al animal de la porción
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
proximal del abdomen (figura 2). Cuando se
trabaje con ratas de más de 250grms es
recomendable realizar el procedimiento entre
dos personas, la persona que sujeta al animal
debe inmovilizar con una mano y con la otra
estirar al animal desde el mango de la cola
(Figura 11). En este procedimiento el
animal debe ser dirigido desde la cabeza en
dirección ventral, para garantizar que las
vísceras intestinales se desplacen hacia el
tórax y disminuya el riesgo de perforar el
intestino.
con las dos manos, con una mano se le da
base parte posterior del animal con la palma
extendida y con la otra mano se sostiene el
cuerpo del animal extendiendo los dedos
desde la zona toraxica proximal hasta la zona
abdominal media (figura 3). En este
procedimiento el animal debe ser dirigido
desde la cabeza en dirección ventral, para
garantizar que las vísceras intestinales se
desplacen hacia el tórax y disminuya el
riesgo de perforar el intestino.

12
hacia arriba, así la aguja-jeringa debe dirigirse en
13 ángulo de 45 grados con relación al aspecto ventral
del animal. Se traza un cuadrante abdominal
imaginario, en donde se ubicaría una línea en
dirección cráneo-caudal desde el cartílago xifoides
hasta el orificio urogenital, así mismo se ubica una
línea que cruce por la mitad de la primera línea en
dirección latero-lateral. Con esto el abdomen queda
dividido en cuatro cuadrantes (Figura 12). La
inoculación debe realizarse en el cuadrante inferior
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
derecho ya que al lado izquierdo está ubicado el
ciego y existe un riesgo de perforación.

14
el animal. Normalmente el animal no debe tener
ninguna reacción durante la administración.
15
complicaciones. Con algunas sustancias los
animales pueden presentar manifestaciones leves
de dolor que pueden durar unos cuantos segundos.
7.1.4. Administración de sustancias por vía intravenosa en roedores

VENAS LATERALES DE LA COLA (Rata y Ratón)
VENAS CEFALICA Y SAFENA (Cobayos)
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En caso de ratones y ratas el animal debe ser
inmovilizado por medio de un cepo específico
de especie (figura 13). Este sistema
permite una adecuada exposición de la cola
que facilita el procedimiento.
16
con las dos manos, con una mano se sujeta
la zona caudal del animal y con la otra se
sujeta el miembro anterior o posterior
ocluyendo a la altura de la articulación
humero radio-cubital o fémur tibia-peroné.
Este procedimiento debe hacerse entre dos
personas (inmovilización y aplicación)
(Figura 14).
Preparación de materiales y exposición de la zona
de inoculación: Para la inoculación en las venas
laterales de la cola se debe colocar una banda de
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oclusión en el mango de la cola o contar con apoyo
de una persona que ocluya con los dedos índice y
pulgar. Al hacer esta oclusión se debe girar
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
levemente la mano para mejorar la exposición de la
vena. Posteriormente la cola es inmersa en agua
tibia para mejorar la vasodilatación por 1 minuto
aproximadamente. Luego se pasa una gaza con
alcohol al 70% sobre la zona de inoculación y el
observador identifica la ubicación de la vena que
discurre sobre los aspectos laterales de la cola de
forma paralela (no confundir con la arteria que
discurre por el aspecto medial y se observa más
profunda) (Figura 15). En caso de cobayos, la
primera opción son las venas cefálicas. Estas pueden
ser ubicadas sobre la superficie dorsal del radio en
su aspecto medial-proximal. Cuando el personal de
apoyo hace la oclusión es palpable la ubicación de la
vena, en tal caso se realiza una leve depilación de la
zona con ayuda de una cuchilla y jabón hipo
alergénico. Luego se aplica una gaza con alcohol al
70% para mejorar la dilatación del vaso sanguíneo
(Figura 16). Para la exposición de las venas safenas
el procedimiento es similar pero en este caso se
busca la vena que discurre desde el aspecto lateral
del corvejón atravez de la tibia hasta el aspecto
proximal de los metatarsos. En todos los protocolos,
la jeringa debe ser precargada con el volumen de la
sustancia a administrar, ver tabla 1. Una vez se
complete el volumen la aguja debe acoplarse a la
jeringa.
Ubicación de la aguja-jeringa: En las venas laterales
de la cola, la persona debe sujetar la punta distal de
la cola con una mano y sostener la jeringa-aguja con
la otra, la jeringa debe sujetarse de tal forma que
una vez se introduzca la jeringa con el dedo pulgar
pueda realizar la administración. En general las
venas discurren superficiales lo que lleva a que solo
se debe introducir la aguja unos milímetros, la aguja
es ubicada con el orificio hacia arriba en ángulo 10
18
grados aproximadamente, esto es posible por el leve
dobles de la cola que se hace con la mano que la
sujeta (Figura 17). Una vez se ubica la jeringa,
puede observarse un poco de sangre en la jeringa lo
que garantiza que la ubicación ha sido exitosa (esto
no se observa en todos los casos). En los cobayos el
procedimiento es similar pero con una mano se
palpa la vena y se coloca el dedo como guía y con la
otra se ubica la aguja-jeringa.
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RESPONSABLES
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UNIDAD CARGO
Ubicación del catéter: La ubicación de catéteres es
similar, sin embargo en este caso se utiliza una
aguja que sirve de guía. Se toma el catéter desde el
mango y se inserta lateral o dorsal a la vena,
inmediatamente se observa salida de sangre atravez
de la aguja cuando el procedimiento ha sido exitoso.
Luego se deja fija la aguja y con el dedo pulgar se
introduce el catéter el cual debe desplazarse sin
ofrecer mayor resistencia. Una vez se ha introducido
el catéter la aguja se retira y el catéter se tapa y fija
con ayuda de esparadrapo. La fijación es importante
ya que malas fijaciones llevan a extravasación de
soluciones a inocular (Figura 18).
aguja-jeringa o catéter, se debe iniciar la
administración de la sustancia, esta debe hacerse a
una velocidad media o lenta observando si hay algún
tipo de reacción anormal. Si la aguja o catéter no
están en el lecho vascular se va a observar
extravasación de la solución con un abultamiento de
la zona y palidez del tejido circundante. En estos
casos se debe detener el procedimiento y buscar
otra vena para iniciar de nuevo. En inoculaciones
exitosas se puede observar y palpar como el inoculo
se desplaza atravez de la vena (percepción del
flujo).
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Instilación en infusión continua: En casos de
infusiones continuas o intravenosas muy lentas es
necesario ubicar y fijar catéteres. Esto puede ser
difícil en ratones por el tamaño de las venas, por tal
razón estos procedimientos son útiles en ratas y
cobayos. Para el desarrollo del protocolo se debe
implementar la vía con ayuda de un venoclisis de
micro goteo conectado a un buretrol o bomba de
infusión. El cálculo de la tasa y velocidad de infusión
debe realizarse minuciosamente, teniendo en
cuenta que el desarrollo de sobre hidrataciones es
frecuente por administraciones demasiado rápidas
(Tabla 3).
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complicaciones. En algunas ocasiones debe hacerse
presión en la zona para evitar un leve sangrado. Los
catéteres pueden fijarse y utilizarse máximo
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
por tres días, periodos más prolongados llevan
a cuadros de flebitis.
7.1.5. Administración de sustancias por vía intradérmica en roedores
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En caso de roedores el animal debe ser
sujetado realizando una pinza en el pliegue
y anular (figura 5). El animal debe
permanecer en posición horizontal sobre una
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mesa y con el resto de la mano se debe hacer
una leve fuerza para garantizar la
inmovilidad del animal. Luego el pliegue
dorsal debe dirigirse levemente con los dedos
en dirección vertical con lo cual se formara
un triángulo cutáneo con la piel estirada y el
aspecto dorsal del cuello (figura 6).
22
23 hacia arriba, así la aguja-jeringa debe dirigirse en
ángulo de 45 grados con relación al aspecto dorsal
del animal, se realiza un movimiento suave de la
mano que sostiene la jeringa en dirección caudal y
se va percibiendo como la aguja queda ubicada
entre las capas de la piel que ofrecen una leve
resistencia. Debe sentirse esta resistencia para
garantizar una adecuada ubicación.
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UNIDAD CARGO
el animal. Es normal que se forme una pequeña
24 masa o poca difusión de la sustancia ya que la
solución se almacena entre la dermis y epidermis.
Dependiendo de la velocidad de absorción esta
hallazgo ira desapareciendo.

complicaciones. En algunas ocasiones puede
25 observarse un poco de sangrado por rasgadura de
tejidos o perforación de vasos sanguíneos, en ese
caso se debe hacer presión en la zona y devolver al
animal a su jaula cuando sea evidente que el
sangrado no perdura.
7.1.6. Extracción de muestras sanguíneas por las venas laterales de la cola
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En caso de ratones y ratas el animal debe ser
inmovilizado por medio de un cepo específico
26
de especie (figura 13). Este sistema
permite una adecuada exposición de la cola
que facilita el procedimiento.
Preparación de materiales y exposición de la zona:

Para la toma de muestras en las venas laterales de
la cola se debe colocar una banda de oclusión en el
mango de la cola o contar con apoyo de una persona
que ocluya con los dedos índice y pulgar. Al hacer
27 esta oclusión se debe girar levemente la mano para
mejorar la exposición de la vena. Posteriormente la
cola es inmersa en agua tibia para mejorar la
vasodilatación por 30 segundos aproximadamente.
Luego se pasa una gaza con alcohol al 70% sobre la
zona de punción y el observador identifica la
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UNIDAD CARGO
ubicación de la vena que discurre sobre los aspectos
laterales de la cola de forma paralela (no confundir
con la arteria que discurre por el aspecto medial y
se observa más profunda) (Figura 15). Se debe
tener en cuenta que por esta vía se pueden obtener
hasta 0,15 ml en ratones y 1ml en ratas.
Ubicación de la aguja-jeringa o lanceta: En este
procedimiento se pueden utilizar jeringas y
catéteres en ratas y agujas o lancetas en el ratón
para la exposición de la muestra. En las venas
laterales de la cola, la persona debe sujetar la punta
distal de la cola con una mano y sostener el
instrumento con la otra, la jeringa debe sujetarse de
tal forma que una vez se introduzca la jeringa con el
dedo pulgar pueda realizar la extracción de la
muestra. En general las venas discurren
superficiales lo que lleva a que solo se debe
introducir la aguja unos milímetros, la aguja es
ubicada con el embolo hacia arriba en ángulo 10
grados aproximadamente, esto es posible por el leve
dobles de la cola que se hace con la mano que la
sujeta (Figura 17). Una vez se ubica la jeringa,
puede observarse un poco de sangre en la entrada
de la jeringa lo que garantiza que la ubicación ha
sido exitosa (esto no se observa en todos los casos).
28 Cuando se asegura la ubicación en el lumen de la
vena se debe iniciar la extracción lentamente para
evitar colapsar el vaso sanguíneo.
En el caso de ratones se debe aplicar en la zona de
punción una capa de vaselina estéril, esto
favorecerá que la sangre no se adhiera a la piel.
Luego se realiza la punción de la vena y el contenido
de sangre que se empieza a obtener puede ser
recolectado con ayuda de un microvacutainer.
Ubicación del catéter: La ubicación de catéteres es
similar, sin embargo en este caso se utiliza una
aguja que sirve de guía. Se toma el catéter desde el
mango y se inserta lateral o dorsal a la vena,
inmediatamente se observa salida de sangre atravez
de la aguja cuando el procedimiento ha sido exitoso.
Luego se deja fija la aguja y con el dedo pulgar se
introduce el catéter el cual debe desplazarse sin
ofrecer mayor resistencia. Una vez se ha introducido
el catéter la aguja se retira y se empieza a obtener
la muestra sanguínea que pasa por el catéter por
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UNIDAD CARGO
acción capilar, se ubica en la boca posterior un tubo
de recolección (Figura 19).
Retiro del instrumento y observación del animal:

una vez se termine la extracción, el instrumento
29 debe ser retirado del animal, esto no suele presentar
complicaciones. En algunas ocasiones debe hacerse
presión en la zona para evitar un leve sangrado.
7.1.7. Extracción de muestras sanguíneas por las venas safenas y cefálicas
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En el caso de ratones, ratas y cobayos
animal debe sujetarse con las dos manos,
con una mano se sujeta la zona caudal del
animal y con la otra se sujeta el miembro
anterior o posterior ocluyendo a la altura de
30 la articulación humero radio-cubital o fémur
tibia-peroné. Esto también puede hacerse
con ayuda de un de un cepo de inmovilización
(Figura 20). Así mismo, Este procedimiento
debe hacerse entre dos personas
(inmovilización y aplicación). En el caso de
ratones la sujeción debe hacerse con una
suave presión de las áreas.
Las venas safenas se ubican como una proyección
lateral de la vena tarsal. En la observación la vena
discurre desde el aspecto lateral del corvejón
atravez de la tibia hasta el aspecto proximal de los
31 metatarsos. Cuando el personal de apoyo hace la
oclusión es palpable la ubicación de la vena, en tal
caso se realiza una leve depilación de la zona con
ayuda de una cuchilla y jabón hipo alergénico. Luego
se aplica una gaza con alcohol al 70% para mejorar
la dilatación del vaso sanguíneo.
Ubicación de la aguja-jeringa o lanceta: Con la
ubicación de la zona el último paso es aplicar una
32 capa de vaselina estéril sobre la zona de exposición,
esto permitirá evitar que la sangre se adhiera a la
piel. La punción debe realizarse en ángulo de 90
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No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
grados con una leve presión, esto llevara a una
salida de gotas gruesas de sangre que pueden ser
recolectadas con un capilar o micovacutainer
(Figura 21). En el caso de las venas cefálicas el
procedimiento es similar pero los vasos sanguíneos
son ubicados sobre la superficie dorsal del radio en
su aspecto medial-proximal.

33 una vez se termine la extracción se debe hacer
presión de la zona para detener el sangrado
7.1.8. Extracción de muestras sanguíneas por el plejo

submandibular
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
 En el caso de ratones y ratas, el animal se
sostiene del pliegue dorsal de la cabeza y
34
cuello generando una leve extensión de la
piel, lo que desarrollara una buena
exposición de la zona del musculo macetero
y comisura labial (Figura 22).
La zona debe ser depilada manualmente o con
ayuda de una cuchilla minora, luego se pasa una
gaza con alcohol al 70% y se coloca una capa de
35
vaselina estéril. La vena se ubica en el aspecto
latero-ventral con relación a la comisura de la boca,
se pueden observar los plejos venosos con una
tonalidad de azul oscuro.
Ubicación de la aguja o lanceta: la aguja debe
ubicarse en ángulo de 90% directamente sobre el
plejo. Se debe puncionar con un movimiento suave
36 y se observara la salida de una gota gruesa que debe
ser recolectada rápidamente. Esta zona se
caracteriza por un buen flujo sanguínea lo que
permite obtener una buena muestra (Figura 23).
37 una vez se termine la extracción se debe hacer
presión de la zona para detener el sangrado.
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7.1.9. Extracción de muestras sanguíneas por punción cardiaca
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
38  El animal debe ubicarse en decúbito supino y
se debe garantizar ausencia de reflejos
(corneal y podal).
Se debe palpar la zona external con los dedos índice
y pulgar a nivel de la 4 costilla aproximadamente. El
39 dedo pulgar se ubica en el costado lateral izquierdo
y el anular en el derecho. Lentamente se ubica el
punto de mayor intensidad cardiaca (PMI) y el dedo
pulgar se coloca caudal a este.
Ubicación de la aguja-jeringa: Con la otra mano se
sostiene la jeringa y se ubica la aguja en ángulo de
45% directamente sobre el PMI. Lentamente se
introduce la aguja un centímetro aproximadamente
y se observa si hay salida de sangre atravez de la
aguja por capilaridad. En caso negativo se puede
40
reubicar la aguja con muy leves movimientos,
direccionando la aguja hacia craneal y caudal. Con
una adecuada ubicación, lentamente se empieza a
succionar la sangre con el dedo pulgar, la mano debe
estar fija y solo debe moverse el dedo para evitar
malas reubicaciones (Figura 24).
una vez se termine la extracción se debe hacer
41 presión de la zona para detener el sangrado, se debe
garantizar la eutanasia del animal y confirmar la
muerte por los medios respectivos.
7.1.10. Extracción de muestras sanguíneas por venas laterales y

arteria central de la oreja en cobayos
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
Sujeción e inmovilización: El cobayo o conejo puede
ser inmovilizado con un cepo o con un campo,
42
envolviendo el cuerpo del animal y dejando
expuesta la cabeza (Figura 25).
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RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN
UNIDAD CARGO
La oreja puede ser depilada con una cuchilla sobre
la zona adyacente a los márgenes laterales y
43 distales, se administra una pomada anestésica y se
deja actuar por 20 minutos. Se aplica una gaza con
alcohol y se hacen movimientos de la oreja para
favorecer la vasodilatación.
Ubicación de la aguja-jeringa: Previamente se
prepara una aguja calibre 22 o una lanceta, su ubica
la vena en su aspecto latero-distal y se realiza una
punción introduciendo el instrumento en ángulo de
45 grados. Se observa salida de sangre y esta debe
ser recolectada con un tubo, capilar o
44 microvacutainer. En algunas ocasiones se puede
instalar y fijar un catéter intravenoso calibre 24, lo
que facilita múltiples tomas de muestras. La arteria
central también puede utilizarse siguiendo el mismo
procedimiento ubicando la arteria en el margen
central de la base de la oreja dirigiéndose hacia el
ápice medio.
siempre debe aplicarse presión por 5 varios minutos
45
(arteria) para evitar la formación de hematomas. No
suelen presentarse complicaciones en los animales.
- Figura.
Figura 1. Sujeción del ratón (tomada de Newcastle University).
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Figura 2. Sujeción de la rata (Tomada de Newcastle University).
Figura 4. Sujeción paso de sonda oro-esofágica.
Figura 5. Sujeción del ratón (tomada de Newcastle University).
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FECHA: XXXX de XXXX
Figura 6. Inoculación subcutánea (tomada de Newcastle University).
Figura 6b. Inoculación subcutánea (tomada de Newcastle University).
Figura 12. Inoculación intraperitoneal (tomada de Newcastle University).
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Figura 13. Cepo inmovilizador (Tomada de Newcastle University).
Figura 18. Ubicación catéter venas laterales cola (Tomada de Newcastle University).
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FECHA: XXXX de XXXX
- Tablas.
Tabla 1. Volúmenes de administración (volúmenes máximos tolerables)¹
Especie Rutas y Volúmenes (ml/Kg)
Oral S.C. I.P. I.M. I.V. (bolos) I.V. lento
Ratón 10 (50) 10 (40) 20 (80) 0.05 (0.1)² 5 (25)
Rata 10 (40) 5 (10) 10 (20) 0.1 (0.2)² 5 (25)
¹Para inyecciones acuosas se debe considerar el tiempo de absorción antes de re dosificar.

No se pueden administrar más de dos inyecciones intramusculares por sitio una vez al día. Las
inyecciones sub cutáneas no pueden ser más de tres por sitio por día.
²Valores en mililitros por sitio de inoculación.
Tabla 2. Volúmenes sanguíneos circulantes
Especie Volumen sanguíneo (ml/Kg)
Media recomendada¹ Rango de medias
Ratón 72 63 - 80
Rata 64 58 - 70
¹Las medias recomendadas corresponden a el punto medio del

rango de las medias.
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Tabla 3. Infusión intravenosa con repeticiones: dosis

(volumen/tasa)¹
Ratón Rata
Volumen diario total (ml/kg)
4 horas 20
24 horas 96(192) 60(96)
Tasa (ml/kg hora)
4 horas 5
24 horas 4(8) 2.5(4)
¹Se incluyen valores máximos tolerados ().
Tabla 4. Volúmenes limite y periodos de recuperación
Toma de muestra única Toma de muestras múltiples
% del volumen Periodo % del volumen Periodo

sanguíneo aproximado de sanguíneo removido aproximado de
removido recuperación en 24 horas recuperación
7.5% 1 semana 7.5% 1 semana
10% 2 semanas 10-15% 2 semanas
15% 4 semanas 20% 3 semanas
eLABORA
FECHA: XXXX de XXXX
Tabla 5. Volúmenes sanguíneos totales y

volúmenes máximos de extracción por peso
corporal
Especie Volumen 7.5% 10% 15% 20%

sanguíneo (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)
Ratón (25g) 1.8 0.1 0.2 0.3 0.4
Rata (250g) 16 1.2 1.6 2.4 3.2
Conejo (4kg) 224 17 22 34 45
8. RELACIÓN DE REGISTROS
NOMBRE CÓDIGO
9. DOCUMENTOS ASOCIADOS
IDENTIFICACIÓN DEL
NOMBRE
DOCUMENTO
INTERNO
EXTERNO
eLABORA
FECHA: XXXX de XXXX
10. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
 Heinz Karl, Hull Robin, Morton David. A Good Practice Guide to the
Administration of Substances and Removal of Blood, Including Routes and
Volumes. J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).
 Hull RM. Guideline limit volumes for dosing animals in the preclinical stage
of safety evaluation. Hum. Exp. Toxicol. 14, 305-307 (1995).
 D. B. Morton, M. Jennings, A. Buckwell, R. Ewbank. Refining procedures for the

administration of substances. Lab Anim January 1, 2001 35: 1-41
11. ANEXOS
ANEXO NOMBRE DEL ANEXO
ANEXO 1
ANEXO 2
ANEXO 3
ANEXO 4
eLABORA

Procedimiento de Administracion de Sustancias y Toma de Mues PDF

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CODIGO:

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTÁNDAR

REVISADO POR APROBADO POR

Presidente CICUAL-PUJ Decanatura de Ciencias

Este procedimiento se inicia con la manipulación y sujeción del modelo animal y

 Volúmenes de Inoculación: cantidad de solución o substrato preparado en

 Dosificación: calculo establecido para definir el volumen de inoculación asociado

 Rutas de administración: diferentes vías que pueden ser utilizadas para

 Inoculaciones parenterales: se refiere a todas las vías de administración de

 Vehículos: sustancias o sustratos que se utilizan para diluir un compuesto a

 Seroma: formación de masa cutánea de consistencia liquida que puede

 Flebitis: inflamación de vasos sanguíneos venosos luego de una punción para

 Volumen sanguíneo circulante: es el volumen total que tiene un modelo animal

 Volumen de extracción: con base al volumen total sanguíneo, el volumen de

 Microvacutainer: recipiente triangular de doble boca utilizado para la recolección

La administración de sustancias y la toma de muestras sanguíneas son

 Estos procedimientos deben ser llevados a cabo por personal entrenado en la

Es recomendable que las sustancias se administren por medio de una sonda

ser menor al 10% del volumen sanguíneo circulante en un periodo de

6. MATERIALES Y/O EQUIPOS

Extracción de muestras sanguíneas (Vena Safena y Cefálica)

Extracción de muestras sanguíneas (Plejo Submandibular)

Extracción de muestras sanguíneas (Vena lateral de la cola)

Extracción de muestras sanguíneas (Punción Cardiaca)

Extracción de muestras de la vena marginal y la arteria central de la oreja

 Aguja calibre 22 o lancetas

7. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO

7.1. PROCEDIMIENTO DE ADMINISTRACION DE SUSTANCIAS Y TOMA DE

7.1.1. Administración de sustancias por vía oral en roedores

7.1.2. Administración de sustancias por vía subcutánea en roedores

7.1.3. Administración de sustancias por vía intraperitoneal en roedores

Preparación de la jeringa y sonda: La jeringa debe

Instilación de la sustancia: Una vez esté ubicada la

7.1.4. Administración de sustancias por vía intravenosa en roedores

7.1.5. Administración de sustancias por vía intradérmica en roedores

Retiro de aguja-jeringa y observación del animal:

7.1.6. Extracción de muestras sanguíneas por las venas laterales de la cola

Preparación de materiales y exposición de la zona:

Retiro del instrumento y observación del animal:

7.1.7. Extracción de muestras sanguíneas por las venas safenas y cefálicas

Retiro del instrumento y observación del animal:

7.1.8. Extracción de muestras sanguíneas por el plejo

7.1.9. Extracción de muestras sanguíneas por punción cardiaca

7.1.10. Extracción de muestras sanguíneas por venas laterales y

Figura 1. Sujeción del ratón (tomada de Newcastle University).

Figura 2. Sujeción de la rata (Tomada de Newcastle University).

Figura 4. Sujeción paso de sonda oro-esofágica.

Figura 5. Sujeción del ratón (tomada de Newcastle University).

Figura 6. Inoculación subcutánea (tomada de Newcastle University).

Figura 6b. Inoculación subcutánea (tomada de Newcastle University).

Figura 12. Inoculación intraperitoneal (tomada de Newcastle University).

Figura 13. Cepo inmovilizador (Tomada de Newcastle University).

Tabla 1. Volúmenes de administración (volúmenes máximos tolerables)¹

Especie Rutas y Volúmenes (ml/Kg)

Oral S.C. I.P. I.M. I.V. (bolos) I.V. lento

Ratón 10 (50) 10 (40) 20 (80) 0.05 (0.1)² 5 (25)

Rata 10 (40) 5 (10) 10 (20) 0.1 (0.2)² 5 (25)

¹Para inyecciones acuosas se debe considerar el tiempo de absorción antes de re dosificar.

Tabla 2. Volúmenes sanguíneos circulantes

Especie Volumen sanguíneo (ml/Kg)

Media recomendada¹ Rango de medias

¹Las medias recomendadas corresponden a el punto medio del

Tabla 3. Infusión intravenosa con repeticiones: dosis