Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Determinación del efecto protector del azul de metileno frente a la

producción de metahemoglobina por administración de nitritos en ratas
Wistar

Guido, M.; Montes, S. &Polina, A.

Lic. en Farmacia Laboratorio de Toxicología 1701 Equipo 3 14 de Noviembre del 2018

Resumen
El efecto tóxico más preocupante de la intoxicación de nitratos y nitritos es la metahemoglobinemia.La
metahemoglobinemia reduce la capacidad de transporte de oxígeno por la sangre.El antídoto de
elección para la metahemoglobinemia es el azul de metileno que se administra endovenoso directo a 1-
2 mg/Kg, este revierte la metahemoglobinemia al aumentar la conversión de metahemoglobina en
hemoglobina, por su acción conjunta con la metahemoglobina reductasa NADPH dependiente presente
en el organismo, por medio de una reacción de oxido-reducción. La presente práctica tuvo como
objetivo principal determinar si existía o no un efecto protector por parte del azul de metileno frente a la
producción de metahemoglobina derivada de la administración de una solución de nitritos a ratas
Wistar. Con los resultados obtenidos no se observó una disminución de la metahemoglobina en las
ratas tratadas con el azul de metileno, al contrario existió un aumento de esta, así buscando en la
literatura se encontró que los resultados se pudieron deber a la administración de una dosis demasiado
alta de azul metileno, la cual se sabe genera metahemoglobinemia.

Palabras Clave
Metahemoglobinemia, Azul de metileno, Nitratos, Nitritos, Metahemoglobina-reductasa, Antídoto.

Abstract
The most worrisome toxic effect of nitrate and nitrite poisoning is methemoglobinemia.
Methemoglobinemia reduces the ability of oxygen transport by blood. The antidote of choice for
methemoglobinemia is methylene blue that is administered intravenously direct at 1-2 mg / kg, this
reverses methemoglobinemia by increasing the conversion of methemoglobin into hemoglobin, by its
joint action with the NADPH dependent methaemoglobin reductase present in the organism, by means of
an oxidation-reduction reaction. The main objective of the present practice was to determine whether or
not there was a protective effect on the part of methylene blue against the production of methemoglobin
derived from the administration of a nitrite solution to Wistar rats. With the results obtained, no decrease
in methaemoglobin was observed in the rats treated with methylene blue; on the contrary, there was an
increase in methemoglobin, thus searching the literature for results that could be due to the
administration of a dose too much high methylene blue, which is known to generate
methemoglobinemia.

Key Word
Methemoglobinemia, Methylene blue, Nitrates, Nitrites, Metahemoglobin-reductase, Antidote,

Introducción
-Dosis > a 15 mg/kg se asocian a hemólisis.
El efecto tóxico más preocupante de la intoxicación
de nitratos y nitritos es la metahemoglobinemia.La
metahemoglobinemia reduce la capacidad de
transporte de oxígeno por la sangre y además
cambia la curva de disociación de oxihemoglobina
hacia la izquierda lo cual interfiere con la descarga
de oxígeno. (Sánchez, 2001)
En los humanos, el nitrato ingerido se absorbe
rápidamente en el intestino delgado y se distribuye
en el organismo, el nitrato llega al intestino grueso
a través de la sangre y de ahí se convierte
rápidamente – en parte por los microorganismos
fecales- en nitrito, el cual es muy reactivo y se
reabsorbe a la sangre. Una vez en la sangre, el
nitrito reacciona con el ion ferroso (Fe +2) de la
desoxihemoglobina, formando metahemoglobina
en la cual el hierro se encuentra en estado férrico
(Fe+3), por lo que es incapaz de transportar el
oxigeno. En el hígado, los nitratos se convierten
rápidamente en metabolitos desnitrogenados y
nitritos inorgánicos, los cuales son excretados con
la orina. (García, 1994)
El antídoto de elección para la
metahemoglobinemiaes el azul de metileno que se
administra endovenoso directo a 1-2 mg/Kg. Este
revierte la metahemoglobinemia al aumentar la
conversión de metahemoglobina en hemoglobina,
esto debido a la acción conjunta con la
metahemoglobina reductasa NADPH dependiente
presente en el organismo que reduce al azul de
metileno en azul de leucometileno, que a su vez
reduce la metahemoglobina en hemoglobina.
(Risso, s.f)
Paradójicamente el azul metileno puede producir
hemólisis o metahemoglobinemia en pacientes con
déficit de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, por lo
que debe ser evitado en pacientes con déficit total
y utilizarse a dosis menores y con precaución si es
necesario en pacientes con déficit parcial. Cuando
el azul de metileno se utiliza a dosis de más de 4
mg/Kg dichos efectos se pueden presentar en
pacientes previamente sanos, donde:
-Dosis excesivas > 7mg/kg pueden causar
metahemoglobinemia al oxidar el hierro de la
hemoglobina de su forma ferrosa a la forma férrica.
La administración a largo plazo puede producir
anemia.
(Herman, 1999)
La presente práctica tuvo como objetivo principal
determinar si existía o no un efecto protector por
parte del azul de metileno frente a la producción de
metahemoglobina derivada de la administración de
una solución de nitritos a ratas Wistar.
Metodología
Para la presente practica se dividió a una población
de 8 ratas en 3 lotes, a los que se les administro vía
intraperitoneal un tratamiento diferente; el primero
fue el lote control a este se le administro solo S.S.F,
el segundo fue el lote tratado con una solución de
nitritos disueltos en S.S.F y por ultimo el lote tres
cuyo tratamiento consistió en una dosis de nitritos, al
día siguiente una de azul de metileno y
posteriormente una segunda dosis de nitritos.
Posterior a las administraciones se coloco a las
ratas en una campana de anestesia, una vez
inconscientes y por medio de una punción cardiaca
se obtuvieron 3 mL de sangre (mismos a los que se
les adiciono EDTA para evitar su coagulación) de la
cual se tomo una alícuota de 0.1mL que se llevo a
un tubo con buffer de fosfatos, se centrifugo y
decanto, posteriormente se leyó en el
espectrofotómetro a 630 nm (Lectura A1).
La muestra que se leyó se regresó al tubo de
ensaye con el resto de la muestra, a esta misma se
le agregó 1 gota de cianuro de potasio neutralizado,
se agitó, dejó reposar y se llevó a leer nuevamente
al espectrofotómetro a la misma longitud de onda
(Lectura A2).
Una vez más la muestra leída se regresó al tubo de
ensaye, se le agregó 1 gota de hidróxido de amonio,
de esta mezcla se tomó una alícuota de 1mL se le
agregó buffer de fosfatos y solución de ferricianuro
de potasio al 20%, se dejó reposar y se le añadió
además una gota de cianuro de potasio
neutralizado, se agitó, dejó reposar y se llevó a leer
al espectrofotómetro esta vez a una longitud de
onda de 540 nm (Lectura A3).
 Resultados

Tabla 1 Resultados grupales obtenidos durante la experimentación.

Equipo Lote A1 A2 A3 Hbt MHbt % en

(g/100mL) (g/100mL) sangre de
MHbt

0.075 0.230 0.447 16.7178 -3.627 -21.695

0.078 0.175 0.412 15.4088 -2.269 -14.7253
2 1

Promedio 16.0633 -2.948 -18.2101

6 0.089 0.094 0.308 11.5119 -0.117 -1.015

5 0.141 0.052 0.283 10.5842 2.0826 19.6764
2
9 0.365 0.210 0.354 13.3518 3.627 27.1648

Promedio 11.8184 1.8642 15.2754

7 0.241 0.206 0.295 11.033 0.819 7.4231
3 0.284 0.139 0.314 11.7436 3.393 28.8923
3
4 0.236 0.124 0.279 10.4346 2.6208 25.1164
1 0.364 0.241 0.396 14.8104 2.8782 19.4636

Promedio 12.0054 2.4277 20.21163

 Ejemplo del cálculo de los valores de Hbt, MHbt y %MHbt en sangre.

Utilizando los datos del equipo 2 tenemos:

Hbt (g/100mL) = A3 x 37.4

Hbt (g/100mL) = 0.447 (37.4)
Hbt = 16.7178 g/100mL
% Mthb
25 MHbt (g/100mL) = (A1-A2) x 23.4
20
MHbt (g/100mL) = 0.075-0.230
% Metahemoglobina

15
10 MHbt (g/100mL) = -3.627g/100mL
5
0
-5 Lote1 Lote 2 Lote 3
-10
% MHbt = (MHbt / Hbt) x 100
-15 % MHbt = (-3.627/16.7178) x 100
-20
-25 % MHbt = -18.2101
Lote

Gráfica 1. % Metahemoglobina de cada lote

Análisis de resultados
Debido a que se le administro de azul de metileno, se
En la práctica se llevó a cabo la cuantificación de esperaría que el lote tres tuviera la menor
metahemoglobina presente en ratas Wistar y se concentración de metahemoglobina en sangre, dado
analizó un posible efecto protector del azul de que este revierte la metahemoglobinemia al aumentar
metileno frente a la producción de esta. la conversión de metahemoglobina en hemoglobina,
esto debido a la acción conjunta con la
Primero se le administro a las ratas del lote 2 y 3 metahemoglobina reductasa NADPH dependiente
nitrito de sodio por vía intraperitoneal, debido a presente en el organismo que reduce al azul de
que esta vía presenta buena irrigación sanguínea metileno en azul de leucometileno, que a su vez reduce
y así llegaría una cantidad apreciable de nitritos a la metahemoglobina en hemoglobina (Risso, s.f).
circulación general, al lote 3 se le administro
también azul de metileno por la misma vía para Lo anterior no ocurrió debido a que, en la
llevar a cabo el efecto protector. administración de azul de metileno, no se le
administraron los 0.34356 ml que correspondían al
Se observa en los resultados de la Tabla 1. hacer el ajuste según el peso corporal de la rata, sino
Resultados grupales obtenidos durante la que se le administraron los 0.5 ml que se mencionaban
experimentación.; que el lote 1 presenta una en el procedimiento, cantidad equivalente 4 mg de azul
concentración en sangre de metahemoglobina de metileno (concentración del frasco 8 mg/mL).
nula debido a que fue el lote control y no se le La bibliografía nos indica que una dosis mayor a los
administraron nitritos, por lo tanto era normal no 4mg/Kg de hecho genera un aumento de
apreciar un incremento de los niveles de metahemoglobina, en vez de reducirla, esta fue
metahemoglobina, dado que no se provoco su probablemente la razón por la que el lote 3 presenta
formación de forma intencional; además de que se una concentración alta de metahemoglobina en todos
esperaría que las ratas estuviesen con un buen los casos (se le pregunto a los demás equipos que
estado de salud o al menos libres de la deficiencia aplicaron un tratamiento de lote 3 y de hecho afirmaron
de alguna enzima que les provocara haber administrado los 0.5mL sin hacer el ajuste).
metahemoglobinemia, como por ejemplo déficit de Lo anterior se reafirmo a partir de la información
glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (Herman, 1999). encontrada en la literatura la cual no menciona que el
azul de metileno es un compuesto que tiene acción
Por otro lado se observa en los resultados de la óxido-reductora y la propiedad de colorear los tejidos.
misma tabla que el lote 2 ya presenta una Tiene acciones contrarias sobre la hemoglobina
concentración de metahemoglobina en sangre dependiendo de la concentración, donde en altas
debido a la administración de nitritos disueltos en concentraciones convierte el hierro ferroso de la
SSF, cabe mencionar que se esperaba una hemoglobina reducida a la forma férrica, y como
concentración relativamente alta de resultado se produce metahemoglobina, en contraste,
metahemoglobina ya que no se administró azul de bajas concentraciones de azul de metileno son capaces
metileno. La literatura describe el mecanismo por de activar la conversión de metahemoglobina a
el cual los nitritos forman la metahemoglobina de hemoglobina (base de la acción antídota del azul de
la siguiente manera, una vez en la sangre, el metileno) (RSC, 1999).
nitrito reacciona con el ion ferroso (Fe+2) de la
desoxihemoglobina, formando metahemoglobina Conclusión
en la cual el hierro se encuentra en estado férrico
(Fe+3), por lo que es incapaz de transportar el Se comprobó la generación de metahemoglobina
oxigeno (García, 1994). después de la administración de nitritos en un reactivo
biológico, como resultado del efecto toxicológico de
Por último, se aprecia en esos mismo resultados estos. Se determinó además la conexión que existe
que el lote que presenta mayor porcentaje de entre la concentración de azul de metileno administrado
metahemoglobina es el 3 (el cual se trato con la y su efecto, ya sea protector (a dosis bajas) o como
solución de nitritos y además azul de metileno). agente formador de metahemoglobina (a dosis altas) en
el organismo.

Referencias consultadas
García, M. (1994). Nitratos, nitritos y compuestos
n-nitroso. México: CPEHS.

Herman, M. (1999). Methylene blue by

intraosseous infusión for metahemoglobinemia.
Annals of Emergency Medicine; 33 (1), 111-113.

Sánchez, J. (2001). Methemoglobinemia and

consumption of vegetables in infants. Pediatrics;
107(5), 1024-1028.

Red de Salud de Cuba. (1999). Azul de Metileno.

13 11 2018, de SLD Sitio Web:
http://www.cva.itesm.mx/biblioteca/pagina_con_fo
rmato_version_oct/apaweb.html

Risso, M. (s.f). Metahemoglobinemia.

Recuperado de:
http://www.amc.sld.cu/amc/2008/v12n4/amc0440
8.pfd