CUESTIONARIO

1. Cuál es la función del acido tricloroacetico?

Ácido tricloroacético (también conocido como Ácido tricloroetanóico) es un análogo

del ácido acético en el cual los tres átomos de hidrogeno del grupo metilo fueron
substituidos por átomos de cloro. Tiene fórmula química CCl3COOH.

ES preparado por la reacción del cloro con al ácido acético en la presencia de un

catalizador adecuado.

CH3COOH + 3 Cl2 → CCl3COOH + 3 HCl

ES anchamente usado en bioquímica para la precipitación de macromoléculas tal como

proteínas, ADN y RNA. Su sal de sódio es usado como un herbicida. Soluciones
conteniendo ácido tricloroacético como ingrediente son usadas para el tratamiento de
verrugas, incluyendo verrugas genitales. ES considerado seguro para el uso con este
propósito durante gestação.[1]

Sales de ácido tricloroacético son llamados tricloroacetatos. Reducción de ácido

tricloroacético resulta en ácido dicloroacético, un compuesto farmacológicamente activo
que se muestra promisor en el tratamiento de cáncer.

2. Cuál es la reacción de la 2,4 dinitrofenilhidrazina con el piruvato?

Los metabolitos de piruvato y acetaldehído se encuentran presentes normalmente en

muy bajas concentraciones, por tanto para demostrar su existencia como intermediario
en el camino metabólico, es necesario impedir que sean transformados en otros
compuestos. Este proceso se usa mucho cuando se investigan caminos metabólicos y se
hace bloqueando la enzima que catalizas la conversión del compuesto, que se está
investigando mediante inhibidores.

La pirúvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera

que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reacción con
nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrocina.
Oxidación aeróbica y anaeróbica de glucosa en la levadura

Los cristales de las distintas hidrazonas tienen puntos de fusión y ebullición

característicos. Gracias a ello la 2,3-DNFH puede usarse para distinguir entre diversos
compuestos con grupos carbonilos. Este método es particularmente importante porque
las determinaciones de punto de fusión requieren tan sólo instrumental de bajo costo.
Esta aplicación en química analítica fue desarrollada por Brady y Elsmie.[3]

Además, no reacciona con otros grupos funcionales que contengan carbonilos, como los
ácidos carboxílicos, amidas y ésteres.

3. Que función cumple el NAD+ en la producción de piruvato?

La enzima Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) EC 1.1.1.8 cataliza la reacción

de oxidación del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+ como
aceptor de electrones.

Glicerol-3-fosfato + NAD+ dihidroxiacetona fosfato + NADH

Esta enzima también cataliza las reacciones de oxidación y reducción del propano-1,2-
diol y del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucha menos afinidad.

Durante la glicólisis se genera NADH en el citosol en la oxidación del gliceraldehído-3-

fosfato y se debe regenerar más NAD+ para que la glicólisis continúe. El NADH no
puede pasar a la mitocondria para ser oxidado por la cadena respiratoria ya que la
membrana interior mitocondrial es impermeable al NADH y NAD+. La solución es que
los electrones del NADH, en vez del propio NADH, sean transportados a través de esta
membrana.

Una de las maneras de introducir electrones del NADH en la cadena respiratoria es la

lanzadera del glicerol-3-fosfato. El primer paso es transferir un par de electrones desde
el NADH a la dihidroxiacetona fosfato, un intermedio glicolítico, para formar glicerol-
3-fosfato. Esta reacción es catalizada por la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa en el
citosol. El glicerol-3-fosfato es reoxidizado a dihidroxiacetona fosfato en la superficie
exterior de la membrana interior mitocondrial por una isozima de la glicerol-3-fosfato
dehidrogenasa unida a la membrana. Un par de electrones se transfiere desde el glicerol-
3-fosfato al grupo prostético FAD de la enzima para producir FADH2. Esta reacción
regenera la dihidroxiacetona fosfato.

Por último, la flavina reducida transfiere sus electrones a al transportador de electrones

Q que entra en la cadena respiratoria como QH2.

La lanzadera del glicerol-3-fosfato se utiliza mucho en los músculos ya que permite

mantener una alta velocidad de fosforilación oxidativa. En cambio, en el corazón y en el
hígado, los electrones del NADH citosólico son transportados a la mitocondria por la
lanzadera del malato-aspartato que está formada por 2 transportadores y 4 enzimas (2
unidades de la malato deshidrogenasa y 2 unidades de la aspartato transaminasa).

El ciclo de Krebs tiene lugar en las mitocondrias de las plantas y animales, mientras que
en los procariotas ese ciclo ocurre en el citosol; se hace, pues en todos los organismos
aerobios. El punto de entrada de todos los combustibles al ciclo de Krebs a través del
intermediario metabólico acetil CoA; éste se condensa con una molécula de oxalacetato,
para dar citrato, de allí el nombre de ciclo del ácido cítrico, y como da origen a otros
ácidos tricarboxílicos, también se llama ciclo de los ácidos tricarboxílicos. El
oxalacetato que se desprende en forma de CO2 corresponde al oxalacetato y no al último
acetilo incorporado.

En consecuencia, el oxalacetato que se regenera al final del ciclo no contiene los

mismos átomos de carbón que el oxalacetato original. En cada vuelta del ciclo se oxida
un residuo acetil CoA a dos moléculas de CO2; simultáneamente se reducen 4
coenzimas 3 NAD+ a 3 NADH y 1 FAD a 1 FADH2. Además se genera un GTP a partir
de GDP + fosfato inorgánico que dará posteriormente un ATP3.

La velocidad de las enzimas para regular el ciclo depende básicamente de la cantidad de

ATP; si hay demasiado, la velocidad de ciclo disminuye y, si por el contrario hay
exceso de ADP la velocidad del ciclo aumenta4. El ciclo de Krebs representa la vía final
común de la oxidación aeróbica de todos los sustratos de la dieta (proteínas, lípidos y
carbohidratos) con producción de CO2 como desecho, reducción de coenzimas que van
a transportar átomos de hidrógeno y electrones que se utilizarán en la cadena
respiratoria para la formación de ATP y de una molécula de GTP que reaccionará con el
ADP y formará ATP. Así se resume la utilidad y la productividad del ciclo.

Cada molécula de NAD+ acepta 2 electrones y 1 protón. El protón y uno de los

electrones se une a un átomo de carbono de la molécula de NAD+; el otro electrón
neutraliza la carga positiva. Esta forma reducida de NAD+ se denomina NADH. El
NADH es el principal intermediario entre el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria.

Algunos insectos no tienen L-lactato deshidrogenasa y son completamente dependientes

de la lanzadera del glicerol-3-fosfato para regeneral el NAD+ citosólico.

4. Consulte la vía de la glicolisis y determine los pasos irreversibles de esta

vía?

La glucólisis es la vía metabólica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y así

obtener energía para la célula. Consiste esta ruta en 10 reacciones enzimáticas que
convierten a la glucosa en dos moléculas de piruvato, el cual es capaz de seguir otras
vías metabólicas y así continuar entregando energía al organismo. Es la vía inicial del
catabolismo (degradación) de carbohidratos.

Etapas de la glucólisis

La glucólisis se divide en dos partes principales y diez reacciones enzimáticas, que se

describen a continuación.

Fase de gasto de energía (ATP)

Esta primera fase de la glucólisis consiste en transformar una molécula de glucosa en

dos moléculas de gliceraldehído. Hasta el momento solo se ha consumido energía
(ATP), sin embargo, en la segunda etapa, el gliceraldehído es convertido a una molécula
de mucha energía, donde finalmente se obtendrá el beneficio final de 4 moléculas de
ATP.

1er paso: Hexoquinasa

La primera reacción de la glucólisis es la fosforilación de la glucosa, para activarla

(aumentar su energía) y así poder utilizarla en otros procesos cuando sea necesario. Esta
activación ocurre por la transferencia de un grupo fosfato del ATP, una reacción
catalizada por la enzima hexoquinasa,[7] la cual puede fosforilar (añadir un grupo
fosfato) a moléculas similares a la glucosa, como la fructosa y manosa.

Las ventajas de fosforilar la glucosa son 2: La primera es hacer de la glucosa un

metabolito más reactivo, mencionado anteriormente, y la segunda ventaja es que la
glucosa-6-fosfato no puede cruzar la membrana celular -a diferencia de la glucosa-ya
que en la célula no existe un transportador de G6P. De esta forma se evita la pérdida de
sustrato energético para la célula.

Técnicamente hablando, la hexoquinasa sólo fosforila las D-hexosas, y utiliza de

sustrato MgATP2+, ya que este catión permite que el último fosfato del ATP (fosfato
gamma, γ-P o Pγ) sea un blanco más fácil para el ataque nucleofílico que realiza el
grupo hidroxilo (OH) del sexto carbono de la glucosa, lo que es posible debido al Mg2+
que apantalla las cargas de los otros dos fosfatos.

2o paso: Glucosa-6-P isomerasa

Éste es un paso importante, puesto que aquí se define la geometría molecular que
afectará los dos pasos críticos en la glucólisis: El próximo paso, que agregará un grupo
fosfato al producto de esta reacción, y el paso 4, cuando se creen dos moléculas de
gliceraldehido que finalmente serán las precursoras del piruvato.

En esta reacción, la glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa-6-fosfato, mediante la

enzima glucosa-6-fosfato isomerasa. La isomerización ocurre en una reacción de 4
pasos, que implica la apertura del anillo y un traspaso de protones a través de un
intermediario cis-enedio
Puesto que la energía libre de esta reacción es igual a +1,7 kJ/mol la reacción es no
espontánea y se debe acoplar.

3er paso: Fosfofructoquinasa

Fosforilación de la fructosa 6-fosfato en el carbono 1, con gasto de un ATP, a través de

la enzima fosfofructoquinasa-1 (PFK1). También este fosfato tendrá una baja energía de
hidrólisis. Por el mismo motivo que en la primera reacción, el proceso es irreversible. El
nuevo producto se denominará fructosa-1,6-bifosfato.

La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la glucólisis.

Como hay otros sustratos aparte de la glucosa que entran en la glucólisis, el punto de
control no está colocado en la primera reacción, sino en ésta. La fosfofructoquinasa
tiene centros alostéricos, sensibles a las concentraciones de intermediarios como citrato
y ácidos grasos. Liberando una enzima llamada fosfructocinasa-2 que fosforila en el
carbono 2 y regula la reacción.

4o paso: Aldolasa
La enzima aldolasa (fructosa-1,6-bifosfato aldolasa), mediante una condensación
aldólica reversible, rompe la fructosa-1,6-bifosfato en dos moléculas de tres carbonos
(triosas): dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehído-3-fosfato. Existen dos tipos de
aldolasa, que difieren tanto en el tipo de organismos donde se expresan, como en los
intermediarios de reacción.

Esta reacción tiene una energía libre (ΔG) entre 20 a 25 kJ/mol, por lo tanto en
condiciones estándar no ocurre de manera espontánea. Sin embargo, en condiciones
intracelulares la energía libre es pequeña debido a la baja concentración de los sustratos,
lo que permite que esta reacción sea reversible.

5o paso: Triosa fosfato isomerasa

Puesto que sólo el gliceraldehído-3-fosfato puede seguir los pasos restantes de la
glucólisis, la otra molécula generada por la reacción anterior (dihidroxiacetona-fosfato)
es isomerizada (convertida) en gliceraldehído-3-fosfato. Esta reacción posee una energía
libre en condiciones estándar positiva, lo cual implicaría un proceso no favorecido, sin
embargo al igual que para la reacción 4, considerando las concentraciones intracelulares
reales del reactivo y el producto, se encuentra que la energía libre total es negativa, por
lo que la dirección favorecida es hacia la formación de G3P.
Éste es el último paso de la "fase de gasto de energía". Sólo hemos gastado ATP en el
primer paso (hexoquinasa) y el tercer paso (fosfofructoquinasa-1). Cabe recordar que el
4to paso (aldolasa) genera una molécula de gliceraldehído-3-fosfato, mientras que el 5to
paso genera una segunda molécula de éste. De aquí en adelante, las reacciones a seguir
ocurrirán dos veces, debido a las 2 moléculas de gliceraldehído generadas de esta fase.
Hasta esta reacción hay intervención de energía (ATP).
Fase de beneficio Energético

6o paso: Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa

Esta reacción consiste en oxidar el gliceraldehído-3-fosfato utilizando NAD+ para
añadir un ion fosfato a la molécula, la cual es realizada por la enzima gliceraldehído-3-
fosfato deshidrogenasa o bien, GAP deshidrogenasa en 5 pasos, y de ésta manera
aumentar la energía del compuesto.

Técnicamente, el grupo aldehído se oxida a un grupo acil-fosfato, que es un derivado de

un carboxilo fosfatado. Este compuesto posee una energía de hidrólisis sumamente alta
(cercana a los 50 kJ/mol) por lo que se da inicio al proceso de reacciones que permitirán
recuperar el ATP más adelante.

Mientras el grupo aldehído se oxida, el NAD+ se reduce, lo que hace de esta reacción
una reacción redox. El NAD+ se reduce por la incorporación de algún [H+] dando como
resultado una molécula de NADH de carga neutra.

7o paso: Fosfoglicerato quinasa

En este paso, la enzima fosfoglicerato quinasa transfiere el grupo fosfato de 1,3-
bisfosfoglicerato a una molécula de ADP, generando así la primera molécula de ATP de
la vía. Como la glucosa se transformo en 2 moléculas de gliceraldehído, en total se
recuperan 2 ATP en esta etapa. Nótese que la enzima fue nombrada por la reacción
inversa a la mostrada, y que ésta opera en ambas direcciones.

Los pasos 6 y 7 de la glucólisis nos muestran un caso de acoplamiento de reacciones,

donde una reacción energéticamente desfavorable (paso 6) es seguida por una reacción
muy favorable energéticamente (paso 7) que induce la primera reacción. En otras
palabras, como la célula se mantiene en equilibrio, el descenso en las reservas de 1,3
bifosfoglicerato empuja a la enzima GAP deshidrogenasa a aumentar sus reservas. La
cuantificacion de la energía libre para el acople de ambas reacciones es de alrededor de
-12 kJ/mol.

Ésta manera de obtener ATP sin la necesidad de O2 se denomina fosforilación a nivel de

sustrato.

8o paso: Fosfoglicerato mutasa

Se isomeriza el 3-fosfoglicerato procedente de la reacción anterior dando 2-
fosfoglicerato, la enzima que cataliza esta reacción es la fosfoglicerato mutasa. Lo único
que ocurre aquí es el cambio de posición del fosfato del C3 al C2. Son energías
similares y por tanto reversibles, con una variación de energía libre cercana a cero.

9o paso: Enolasa
La enzima enolasa propicia la formación de un doble enlace en el 2-fosfoglicerato,
eliminando una molécula de agua formada por el hidrógeno del C2 y el OH del C3. El
resultado es el fosfoenolpiruvato.
10o paso: Piruvato quinasa
Desfosforilación del fosfoenolpiruvato, obteniéndose piruvato y ATP. Reacción
irreversible mediada por la piruvato quinasa.

El enzima piruvato quinasa es dependiente de magnesio y potasio. La energía libre es de

-31,4 kJ/mol, por lo tanto la reacción es favorable e irreversible.

El rendimiento total de la glucólisis de una sola glucosa (6C) es de 2 ATP y no 4 (dos

por cada gliceraldehído-3-fosfato (3C)), ya que se consumen 2 ATP en la primera fase,
y 2 NADH (que dejarán los electrones Nc en la cadena de transporte de electrones para
formar 3 ATP por cada electrón). Con la molécula de piruvato, mediante un paso de
oxidación intermedio llamado descarboxilación oxidativa, mediante el cual el piruvato
pasa al interior de la mitocondria, perdiendo CO2 y un electrón que oxida el NAD+, que
pasa a ser NADH más H+ y ganando un CoA-SH (coenzima A), formándose en acetil-
CoA gracias a la enzima piruvato deshidrogenasa, se puede entrar al ciclo de Krebs
(que, junto con la cadena de transporte de electrones, se denomina respiración.
 BIBLIOGRAFIA

 http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol25No2/celulas.html

 http://www.xuletas.es/ficha/protocolo-10/

 http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CELEX:31990R267
6:ES:HTML

 http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp10a.pdf

 http://es.wikilingue.com/pt/%C3%81cido_tricloroac%C3%A9tico
 INTRODUCCION

La glucólisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ó a ácido
láctico dependiendo del organismo que lo efectúe, como siendo en el primer caso las
levaduras las responsables.

Ambas rutas de fermentación son similares hasta la formación de piruvato, manteniendo

idénticas las etapas de conservación de energía que conducen a la formación de ATP.

La glucólisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que conduce

a la producción de Acetil-Co-A y a su oxidación en el ciclo del ácido cítrico, sino que
también proporciona una vía importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada
de los alimentos. La característica de la glucólisis de proporcionar ATP en ausencia de
oxígeno es de significado crítico biomédico, porque permite al músculo esquelético
hacer un trabajo sumamente eficiente aún cuando la oxidación aeróbica se vuelva
insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucolítica pueden sobrevivir a
episodios de anoxia. Inversamente el músculo cardíaco, que está adaptado al trabajo
aeróbico, tiene una capacidad glucolítica relativamente deficiente y supervivencia
escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un número pequeño de enfermedades en las
que las enzimas del sistema glucolítico como por ejemplo la piruvatocinasa muestran
actividad deficiente; estas anomalías se manifiestan principalmente como anemias
hemolíticas. En las células cancerosas que proliferan con rapidez, la glucólisis procede a
una velocidad mucho mayor que la requerida por el ciclo del ácido cítrico, por tanto, se
produce más piruvato que el puede ser metabolizado. El resultado es una producción
excesiva del lactato, que favorece un entorno local relativamente ácido en el tumor,
situación que puede tener implicaciones con ciertos tipos de terapéutica contra el
cáncer. También se produce acidosis láctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.
OBJETIVOS

 Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura

 Observar la fermentación de piruvato, mediante cambios de color

MATERIALES

 4 tubos de ensayo
 2 tubos de centrifuga
 Beaker de 400 ml
 Pipetas de 5 ml
 Balanza
 Calentador
 Pinzas para tubo de ensayo
 Termómetro
 Espátula
 Solución de glucosa
 Levadura
 Fosfato de sodio dibásico 0,5 M
 Fosfato de potasio monobásico 0,5 M
 Acido tricloroacetico 10%
 2,4 dinitrofenilhidracina saturado en HCL 2M
 NAOH 10%
 TEORIA RELACIONADA

Fermentación.

Es la extracción de energía del piruvato en ausencia de oxígeno. Hay dos tipos de

fermentación: la fermentación alcohólica y la fermentación láctica o ácida. En ambos
casos la fermentación produce dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa que
se rompe.

Las levaduras son hongos unicelulares que en presencia de oxígeno tienen respiración
aeróbica pero en ausencia de ese gas, cambian a respiración anaeróbica. Las levaduras
llevan a cabo la fermentación alcohólica, que es aquella que con vierte el piruvato en
dióxido de carbono y etanol (alcohol), por eso se ha dado el nombre de fermentación
alcohólica.

La fermentación alcohólica es un importante recurso económico. Los panaderos usan la

fermentación alcohólica de la levadura para producir pan. Cuando la levadura rompe los
carbohidratos de la pasta de harina, libera CO2 y este forma burbujas en la pasta y esta
crece (esas burbujas son los espacios llenos de aire en la masa del pan). Cuando se
hornea el pan la levadura muere y el alcohol se evapora.

La fermentación alcohólica se utiliza en la producción de vinos, cervezas, ron y otras

bebidas alcohólicas, y en la producción de etanol que se usa para producir la mezcla de
gasohol o gasolina-alcohol, usada como combustible de motor en algunos países.

Las células animales no desarrollan la fermentación alcohólica, aunque algunas como

las células musculares, pueden convertir al piruvato en ácido láctico. La respiración
anaeróbica que produce esta sustancia se denomina fermentación láctica (porque
produce ácido láctico).

Durante un ejercicio violento, puede suceder que la respiración no provea suficiente

oxígeno para suplir las necesidades de las células, y entonces las células musculares
continúan trabajando y cambian a respiración anaeróbica, produciendo ácido láctico.

Luego de un ejercicio fuerte sobreviene la fatiga muscular y sentimos dolor, ese dolor se
debe a la producción de ácido láctico y su acumulación en los músculos. La mayoría de
ese ácido se moviliza a la sangre y en el hígado se convierte otra vez en piruvato.
Cuando tenemos un calambre, el cual produce un dolor tras una contracción fuerte de un
músculo, esta se debe a una acumulación de ácido láctico producida por la contracción
que ocurrió a expensas de respiración anaeróbica por las células del músculo.