PROCEDIMIENTO:

EXPERIENCIA Nª 1:

Muestra de Secreción faríngea

 Realizar la toma de muestra de hisopado faríngeo.

 Tocar suavemente una esquina de la superficie del medio Agar Sangre y Manitol
salado con el hisopo con que se tomó la muestra
 Con el asa anillo realizar la siembra de la muestra por agotamiento en estría
 Con el mismo hisopo realizar un extendido en una lámina portaobjetos fijar hacer una
coloración Gram
 Observar a 100X.
 El mismo procedimiento se realiza con la muestra de secreción y sembrar por
agotamiento en una placa de agar manitol salado y agar sangre.
 Incubar las placas cultivadas a 35 - 37ºC por 18 a 24 hrs.

II PARTE: PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACION DE STAPHYLOCOCCUS

PROCEDIMIENTO

PRUEBA DE LA CATALASA:

 En una lámina portaobjetos colocar una gota de peróxido de hidrógeno (agua

oxigenada)
 Con un aplicador de madera o asa de siembra coger una porción del centro de la
colonia sospechosa y realizar una emulsión
 Observar la presencia o no de burbujas

PRUEBA DE LA COAGULASA:

 En un tubo con caldo nutritivo estéril (0.5 ml) colocar una porción de la colonia
sospechosa (catalasa positiva) y realizar una emulsión
 Agregar en el caldo 0.5 ml de plasma citratado
 Incubar a 37ºC por 2 a 4 hrs.
 Realizar la observación: formación de coágulo.

PROCEDIMIENTO DE LA NOVOBIOCINA

Preparar una suspensión (equivalente al estándar 0.5 de McFarland) del

microorganismo en agua destilada.
- Sembrar con un hisopo estéril en forma siembra en césped sobre la placa de Mueller
Hinton - Colocar con la pinza un disco de novobiocina en el centro
- Incubar a 35ºC durante por 24 horas

PRUEBA DE LA CATALASA
INTERPRETACIÓN:

La rápida aparición y producción sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica

una reacción positiva.

CATALASA (+): Presencia de burbujas

FUNDAMENTO:

La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en

oxígeno y agua.

H2O2 ………….H2O + O2 (burbujas de gas)

De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un
producto final del metabolismo aerobio de los azúcares. Staphylococcus son
productores de catalasa por lo tanto son catalasa (+).

PRUEBA DE LA COAGULASA:

INTERPRETACIÓN:

La reacción se considera positiva ante cualquier grado de coagulación visible dentro

del tubo. La reacción se observa mejor inclinando el tubo. Si es positiva, el coagulo
permanece en el fondo del tubo. Las bacterias fuertemente coagulasa positivas
pueden producir un coagulo en 1 a 4 horas; por lo tanto, se recomienda observar el
tubo a intervalos de 30 minutos durante las primeras 4 horas de la prueba. Algunas
cepas de S. aureus pueden formar fuertes fibrinolisinas que disuelven el coagulo
recién formado. Por consiguiente, pruebas positivas pueden pasar inadvertidas si no
se observa el tubo a intervalos frecuentes. Otras cepas de S. aureus pueden producir
sólo suficiente coagulasa como para dar una reacción positiva tardía luego de 18 a
24horas de incubación; por lo tanto, todas las pruebas negativas a las 4 horas, deben
observarse después de las 18 a 24 horas de incubación.

Fundamento:
S.aureus posee dos tipos de coagulasa:

a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la

pared celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación
de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma
citratado (test en lámina)

b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor

(CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno
produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

Izquierda: crecimiento de Staphylococcus se puede demostrar

por la turbidez del medio líquido.

Derecha: presencia de streptococcus donde el medio liquido

es más transparente.

PRUEBA DE LA NOVOBIOCINA:

En la prueba de la novobiocina La secreción faríngea tubo un halo de 30mm donde se

confirma que no se trata de un Staphylococcus saprophyticus (especies resistentes),
sino de un Staphylococcus aureus o epidermidis.

 Se concluye que con las pruebas de catalasa, coagula y de la novobiocina se

trata de un Staphylococcus aureus