UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL PEREIRA

PERFIL LIPIDICO

Requisitos Preliminares:
La persona que se va a someter a una prueba de suero o sangre para perfil
lipídico, debe moderar la ingestión de grasas al máximo durante el día
anterior. La última comida debe ser a las 7:00 p.m (no debe tener un ayuno
mayor a 14 horas) y no debe ingerir alcohol 72 horas antes de la prueba.

TRIGLICERIDOS
Fundamento del método. El glicerol liberado en la hídrolis de los
trigliceridos, catalizado por la lipoproteinlipasa, se convierte mediante la
glicerolquinasa, en glicerol-3-fosfato, que se oxida a la dihidroxiacetona. El
peróxido de hidrogeno oxida al cromógeno (ácido 3,5-dicloro-2-
hifroxibencensulfónico/4-aminofenona ) a un compuesto de color rojo.
lipasa
Trigliceridos + 3 H2O -------------------- glicerol + 3 RCOOH

Glicerol + ATP --------------------------- glicerol -3- fosfato + ADP

glicerolfosfatooxidasa

glicerol-3-fosfato+ O2 ------------------------ dihidroxiacetonafosfato+H2O2

H2O2 + 4-aminofenona + 4-clorofeno ---------- 4 p-benzoquinona-monoimino)-

fenazona+ 2 H2O + HCl

PROCEDIMIENTO
Pipetear en las celdas:
Tubo Blanco Patrón Muestra
Reactivo 1000 µl 1000 µl 1000 µl
Muestra ----------- ----------- 10 µl
Patrón ----------- 10 µl -----------

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- Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos.

- Leer la absorbancia de la muestra y del patrón frente al blanco del
reactivo a 500 ± 10 nm.

Cálculo:
Absorbancia muestra
Concentración triglicérido = ---------------------------- x concentración patrón
Absorbancia patrón

Valores de concentración del patrón: 200 mg/l ó 2.28 mmol/l

Valores normales: El intervalo de referencia existente en la literatura para la

mayoría de los métodos enzimáticos es de hasta 170 mg/dl (1.92 mmol/l ).
Sin embargo se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
márgenes de referencia.

Observaciones: El método es lineal hasta 1000 mg/dl (11.3 mmol/l) de

triglicéridos. Para concentraciones superiores diluir la muestra mezclando
0.1 ml del suero sanguíneo con 0.4 ml de solución salina fisiológica, repetir la
determinación y multiplicar el resultado por 5.

COLESTEROL TOTAL
El colesterol es un esteroide de alto peso molecular. El colesterol de la dieta
se absorbe parcialmente y también se sintetiza en el hígado y otros tejidos. Se
transporta en el plasma en las lipoproteínas, se excreta a la bilis como tal o
tras su transformación en ácidos biliares.

Fundamento: Los esteres del colesterol son hidrolizados por la colesterol

éster hidrolasa a colesterol libre y ácidos grasos. El colesterol libre existente,
conjuntamente con el producido por esta reacción, es oxidado por la

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colesterol oxidasa a colesterona y peróxido de hidrógeno. Este ultimo en

presencia de peroxidasa oxidasa el cromógeno ( 4- aminofenazona/fenol ) a
un compuesto de color rojo.

colesterolesterasa
Esteres de colesterol + H2O ----- ------ ----------------- colesterol + RCOOH
colesteroloxidasa
Colestero + O2 ------------------------- colesterona + H2O2

colesterol-peroxidasa
2 H2O2 + 4-aminofenona + fenol ---------------------- 4(benzoquinona-
monoamino) fenazona

PROCEDIMIENTO
Pipetear en las celdas:
Tubo Blanco Patrón Muestra
Reactivo A 1000 µl 1000 µl 1000 µl
Muestra ----------- ----------- 10 µl
Patrón ----------- 10 µl -----------

- Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.

- Leer la absorbancia de la muestra y del patrón contra el blanco de
reactivo a una longitud de onda de 500 ± 10 nm.

Cálculo:
Absorbancia muestra
Concentración de colesterol = --------------------------- x concentración patrón
Absorbancia patrón

La concentración del patrón más usada es 200 mg/dl o 5.18 mmol/l

Valores normales:
Suero adultos: 150 - 250 mg/dl o 3.89 - 6.48 mmol/dl

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La concentración de colesterol esta sujeta a la edad, sexo, dieta, raza. Por eso
se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios márgenes de
referencia.

Observaciones.
El método es lineal al menos hasta 500 mg/dl de colesterol, para
concentraciones mayores mezclar 0.1 ml de suero con 0.2 ml de solución
salina fisiológica, repetir el ensayo y multiplicar resultado por 3. Un ligero
color rosa en la solución reactiva, por el envejecimiento no afecta los
resultados de la prueba. Desechar la solución si la absorbancia es superior a
0.10.

COLESTEROL HDL
Las HDL (lipoproteinas de alta densidad) participan en la captación del
colesterol de los tejidos y en su transporte hacia el hígado donde se eliminan
en forma de ácidos biliares.

Fundamento. En el suero o plasma, las HDL se separan de los quilomicrones

de las lipoproteinas de muy baja densidad (VLDL) y de las lipoproteinas de
baja densidad (LDL) por la acción de un reactivo de precipitación (ácido
fofotungstico-cloruro de magnesio). Después de centrifugar, se determina el
contenido de colesterol en la fracción HDL que permanece en el
sobrenadante por el método colorimétrico enzimático, utilizando
colesterolestearasa, colesteroloxidasa, peroxidasa y el 4-aminofenazona-
fenol.

PROCEDIMIENTO
A. Para hacer la determinación del colesterol HDL es necesario hacer una
separación de este en el suero mediante un proceso de precipitación.

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Precipitación:
- Pipetear en un tubo de centrífuga 0.2 ml de suero (muestra) y 0.5 ml
de reactivo A.
- Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 min.
- Centrifugar durante 10 min a 4000 r.p.m.
- Recoger con cuidado el sobrenadante. Asegúrese de que el
sobrenadante sea claro.

B. Pipetear en las celdas:

Tubo Blanco Patrón Muestra
Agua destilada 100 µl ----------- -----------
Patrón HDL ----------- 100 µl -----------
Sobrenadante muestra ----------- ----------- 100 µl
Reactivo A 1000 µl 1000 µl 1000 µl

- Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.

- Leer la absorbancia de la muestra y del patrón contra el blanco a una
longitud de onda de 500 ± 20 nm.

Cálculo de colesterol HDL:

Absorbancia muestra
Concentración HDL = -------------------------- x concentración de patrón x 2
Absorbancia patrón

La concentración del patrón más usada es 52,5 mg/dl o 1.36 mmol/l .

Cálculo del colesterol VLDL:

Triglicéridos
VLDL = ------------------
5

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Cálculo del colesterol LDL:

Colesterol LDL (mg/dl) = Colesterol total - VLDL - Colesterol HDL

ESTRATEGIAS DE EVALUACIÓN:
- Qué son lipoproteínas y cuál es su participación en el metabolismo de
los ácidos grasos.
- Qué enfermedades se pueden presentar por deficiencias en el
metabolismo de los lípidos.

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