“UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA”

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA
AMBIENTAL
Informe de laboratorio: “RECUENTOS DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS”

ALUMNA:

PARACTA GARCÍA, Dariela

INGENIERA:

CLAVIJO KOC, Claudia

CURSO:

Microbiología General

CICLO - TURNO:

III Ciclo – Mañana

Tacna – Perú
2014
 1. OBJETIVO
 Realizar un recuento de microorganismos por el método recuento en placa.
 Realizar un recuento de microorganismos por el método del número más probable (NMP).

2. FUNDAMENTO TEORICO
Se trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el alimento. Este número no
guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo que no puede usarse como índice de
su presencia y sólo debe considerarse un indicador de las características higiénicas generales del
alimento.

Dependiendo de las características del medio utilizado (medio rico, medio limitado en nutrientes
para medida de la flora no láctica de alimentos fermentados) y de las condiciones de incubación
(mesófilos, psicrófilos) los microorganismos analizados serán miembros de poblaciones diferentes.
En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios
facultativos); aunque, en ciertas situaciones (alimentos envasados al vacío), puede ser de interés
hacer recuentos de anaerobios totales.

- Se han desarrollado técnicas que hacen posible la automatización del proceso.

- Hay cuatro técnicas biológicas básicas técnicas de recuento de viables:.

1. Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).

2. Determinación del número más probable.
3. Métodos basados en la reducción de colorantes por viables.
4. Contaje microscópico directo.

1.- CONTAJE DE PLACA: Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento
que se analiza. El resultado es función de una serie de factores como son el método de muestreo,
el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las características del medio de cultivo. Los
cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay que considerar que los
cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable formará una colonia, el
plaqueo puede hacerse en una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va
depositando concentraciones progresivamente más diluídas de la muestra.

2.- FILTROS DE MEMBRANA: utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son filtros con un
poro de 0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca el filtro sobre
una placa del medio de cultivo apropiado. La muestra puede haber sido procesada para
epifluorescencia previamente, lo que facilita el recuento (la epifluorescencia se puede provocar
con naranja de acridina que tiñe específicamente los ácidos nucleicos).

3.- MICROCOLONIAS EN DEFT: DEFT son las iniciales en ingñlés de Direct Epifluorescence Filter
Technique (técnica deepifluorescencia directa en filtro). En esta técnica las bacterias se filtran para
retenerlas en una membrana apropiada que posteriormente se trata con un agente fluorescente
(como la naranja de acridina) para teñir las células bacterianas (se somete el filtrado a un
tratamiento previo con detergentes para destruir las células somáticas). La detección de los
microorganismos ha de hacerse mediante microscopía de fluorescencia o por cualquier otro
método de medida de la epifluorescencia. En ciertos casos, las membranas se incuban para
producir colonias que son más fácilmente dtectables.

4. CONTAJE DE MICROCOLONIAS AL MICROSCOPIO: Se añade un pequeño volumen de agar-

cultivo a un porta y se incuba para seguir la formación de microcolonias al microscopio.

5.- GOTITAS DE AGAR: Se hacen diluciones de la muestra (solución madre) y se depositan gotitas
de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo + agar). Se examina el crecimiento de las colonias en
las gotitas tras la incubación.

6.- FILMS SECOS (PETRIFILM): Son películas deshidratadas de medios de cultivos generales o
selectivos en las que se deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el medio. Tras la incubación se
hace el recuento.

7.- MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE: Basado en series de diluciones y cálculo estadístico
del número de bacterias presentes en las diluciones más altas. Se puede hacer con 3 ó 5 tubos. El
método es popular aunque poco exacto.

8.- MÉTODOS BASADOS EN LA REDUCCIÓN DE COLORANTES: Usando azul de metileno o

resazurina. Colorantes reducidos por las bacterias; al reducirse cambian de color y esto es
medible. Usado en medios líquidos (lácteos).

9.- TUBOS RODANTES: son tubos herméticamente cerrados en los que haciéndolos girar se forma
una fina capa de agua. Utiles para recuento de anaerobios.

10.- CONTAJE MICROSCÓPICO DIRECTO: Usando cámaras de cuenta, se coloca un volumen

determinado y se recuentan las bacterias.
 3. MATERIALES: REACTIVOS Y EQUIPOS
MATERIALES MATERIALES

Matraces de 250
Probeta
ml

Solución salina Caldo Brilla

Agar PCA Incubadora

Pavilo Placas de Petri

Papel kraft Algodón

Pipetas Cocina

micropipetas Asa drigalski

Beakers de 500
vainitas
ml
4. METODOLOGÍA
Procedimiento Experimental

1.- Licuar los medios de cultivo (agar PCA), en la cocinilla, luego esperar que el medio de cultivo
tenga una temperatura de 45°C, reservar en la incubadora a 50°c para que no se solidifique.

2.- Pesar 10g de la muestra y agregarla asépticamente a un matraz con 90 ml de diluyente y así se
obtiene la primera disolución (10-1)

3.- De la primera disolución, se toma con una pipeta estéril 1ml y se coloca en un tubo de ensayo
con 9ml de diluyente; así se obtiene la segunda disolución (10-2).

4.- Hacemos esto sucesivamente hasta obtener la solución necesaria (Se realizó hasta 10)

5.- Luego de tener la muestra:

 INCORPORACION: Agregar 1ml de cada disolución en dos placas y luego verter el medio
licuado a 45°C y homogenizar la muestra con el medio.
 DISEMINACION: Agregar 0.1 ml de la disolución en placas con agar solidificado por
duplicado.
 Para la técnica del número más probable (NMP), sembrar la disolución 10-1 en 3 tubos y
10-2 em3 tubos y 10-3 en tres tubos obteniendo 9 tubos.

5.-Finalmente dejar solidificar los medios sembrados por incorporación e incubar las placas con
PCA 30°C y a 35°C los tubos coliformes.

5.- Finalmente dejamos solidificar los medios sembrados por incorporación e incubar las placas
con PCA 30°C y a 35°C los tubos coliformes.

6.- Realizar la lectura de las placas a las 48 horas. El recuento de las placas se realizara contando el
número de colonias entre las placas que se encuentran entre (30-300), obtener el promedio
década dilución y multiplicar por el inverso de cada dilución, convertir todas las diluciones a un
mismo factor y obtener el promedio final. EL resultado se da en 2 dígitos.

DISOLUCIONES
Disolución 10-1 Disolución 10-2
1. Placa “a” incontable 1. Placa “a” incontable
2. Placa “b” incontable 2. Placa “b” incontable
Disolución 10-4 Disolución 10-5
1. Placa “a” incontable 1. Placa “a” 46
2. Placa “b” 4x 320 2. Placa “b” 43
4x320x10 =128 x 105
4

46x105= 46 x 105
Resultado final 87 x 105 ufc/g
5. RESULTADOS
 INCORPORACION POR PCA
 Para el proceso de incorporación:
 Alimento: vainitas
 Temperatura: 30°C
 Tiempo: 3 días
 Son 2 placas por dilución

Existen alrededor de 910 000 000 de bacterias en vainitas.

7. CONCLUSIONES
 Se logró identificar como hacer los procedimientos de diseminación e incorporación.
 Se identificó por incorporación 91 x107 ufc/g bacterias.
 Los métodos usados nos arrojaron que las vainitas estaban contaminadas.
 Se debe considerar la característica del producto a estudiar para aplicarle el método
correcto.

8. BIBLIOGRAFÍA
 http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-
metodos%20de%20recuento.htm
 http://es.slideshare.net/LuisaMaraMorenoMoreno/laboratorio-6-recuento-de-
microorganismos-aerobios-en-productos-farmaceuticos
 http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf