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Cultivos Celulares II Euge PDF
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El trmino genrico cultivo de tejidos vegetales involucra a diferentes tcnicas de cultivo de material
vegetal diverso, incluyendo a los protoplastos (clulas desprovistas de su pared celular), clulas,
tejidos, rganos y plantas completas. Mediante stas y otras tcnicas de cultivo, es posible obtener
plantas libres de microbios en un medio nutritivo asptico (estril) en condiciones ambientales
controladas. Tambin se lo conoce como cultivo in vitro de plantas por realizarse en recipientes de
vidrio (hoy tambin de otros materiales).
Las primeras experiencias relacionadas con el cultivo de tejidos vegetales se remontan a 1902, pero
recin en 1922 se logr el primer experimento exitoso: la germinacin in vitro de semillas de orqudeas.
Luego de la germinacin, las plntulas obtenidas se transfirieron a un medio de cultivo en condiciones
aspticas, y as se mantuvieron protegidas del ataque de patgenos (hongos, virus y bacterias).
Hoy esta tcnica tiene numerosas aplicaciones, algunas de ellas se ilustran en la Figura 1:
Propagacin masiva de plantas, especialmente para especies de difcil propagacin por otros
mtodos, o en vas de extincin
Clonacin de individuos de caractersticas agronmicas muy deseables durante todo el ao
Obtencin de plantas libres de virus
Produccin de semillas sintticas
Conservacin de germoplasma (conjunto de individuos que representan la variabilidad gentica
de una poblacin vegetal)
Obtencin de metabolitos secundarios
Produccin de nuevos hbridos
Mejora gentica de plantas (incluyendo obtencin de plantas transgnicas)
Germinacin de semillas.
Produccin de haploides.
Estudios fisiolgicos diversos.
Figura 1. Algunas aplicaciones del cultivo de tejidos en plantas. A la izquierda, micropropagacin de violeta
africana a partir de trozos de hojas desinfectados e introducidos en condiciones de esterilidad. A la derecha,
semillas sintticas formadas por embriones somticos obtenidos por cultivo de clulas, encapsulados en una
matriz inerte (como el alginato de calcio). Fotografa tomada de http://www.sp.edu.sg/schools/cls/bioline_08.htm
La reproduccin asexual de plantas por cultivo de tejidos es posible gracias a que, en general, varias
clulas de un individuo vegetal poseen la capacidad necesaria para permitir el crecimiento y el
desarrollo de un nuevo individuo completo, sin que medie ningn tipo de fusin de clulas sexuales o
gametas. Esta capacidad se denomina totipotencialidad celular, y es caracterstica de un grupo de
clulas vegetales conocidas como clulas meristemticas, presentes en los distintos rganos de la
planta. La potencialidad de una clula diferenciada (una clula de conduccin, epidrmica, etc.) para
generar tejidos nuevos y eventualmente un organismo completo, disminuye con el grado de
diferenciacin alcanzado por esa clula, pero puede revertirse parcial o completamente segn las
condiciones de cultivo a las que se la someta. Las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas
sobre medios de cultivo adicionados con hormonas vegetales, pueden dividirse dando dos tipos de
respuesta:
una desdiferenciacin celular acompaada de crecimiento tumoral, que da lugar a una masa de
clulas indiferenciadas denominada callo, la cual bajo las condiciones adecuadas es capaz de
generar rganos o embriones somticos (llamados as porque son estructuras similares a un
embrin, pero que no se originaron por unin de gametas),
una respuesta morfogentica por la cual se forman directamente rganos (organognesis) o
embriones (embriones somticos).
La primera respuesta se conoce como organognesis o embriognesis indirecta (mediada por un
estado de callo) mientras que la segunda respuesta se considera organognesis o embriognesis
directa.
El cultivo in vitro consiste en tomar una porcin de una planta (a la que se denominar explanto, como
por ej. el pice, una hoja o segmento de ella, segmento de tallo, meristema, embrin, nudo, semilla,
antera, etc.) y colocarla en un medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donde se
regenerarn una o muchas plantas.
La formulacin del medio cambia segn se quiera obtener un tejido desdiferenciado (callo), crecer
yemas y races, u obtener embriones somticos para producir semillas artificiales.
El xito en la propagacin de una planta depender de la posibilidad de expresin de la potencialidad
celular total, es decir, que algunas clulas recuperen su condicin meristemtica. A tal fin, debe
inducirse primero la desdiferenciacin y luego la rediferenciacin celular. Un proceso de este tipo
sucede durante la formacin de las races adventicias en el enraizamiento de estacas, la formacin de
yemas adventicias, o cuando se busca la propagacin de begonias, violeta africana (ver figura 1) o
peperonias mediante porciones de hojas. Uno de los factores ms importantes a tener en cuenta para
lograr la respuesta morfogentica deseada es la composicin del medio de cultivo.
No existen dudas que en todo intento de propagacin vegetal, ya sea in vitro o in vivo, el carcter del
proceso de diferenciacin depende del genoma de la especie, y que est regulado por el balance
hormonal propio y por el estado fisiolgico del rgano, tejido o clula puesta en cultivo. Sin embargo,
tambin se sabe que ese balance puede ser modificado por el agregado de compuestos que imiten la
accin de las hormonas vegetales. Estos compuestos se denominan reguladores del crecimiento, y
se emplean en los medios de cultivo para conseguir la micropropagacin de una planta.
La totipotencialidad celular es clave en el desarrollo de plantas genticamente modificadas o
transgnicas. Una vez realizada la transformacin, ya sea por Agrobacterium o por el mtodo de
biobalstica, el paso siguiente es el cultivo in vitro, con el fin de obtener, a partir del explanto inicial
transformado, plntulas que lleven el transgn en todas sus clulas (Figura 2).
En los protocolos utilizados durante el cultivo in vitro se pueden distinguir las siguientes etapas
(sintetizadas en la Figura 3):
1) Eleccin de la planta y/o tejido donante de explantos.
2) Establecimiento, que consiste en la desinfeccin de los explantos (generalmente con hipoclorito
de sodio) y su posterior adaptacin al medio artificial de modo de inducir callo, brote, raz o
embrin somtico segn se desee.
3) Multiplicacin, para generar una masa vegetal suficiente para la regeneracin del nmero de
plantas necesarias.
4) Enraizamiento, en la que se busca la formacin de races con el fin de convertir los brotes o
embriones somticos en plntulas completas.
5) Rusticacin, que es la aclimatacin de las plntulas obtenidas in vitro a las condiciones
ambientales ex vitro (suelo o algn sustrato inerte)
El xito de la tcnica depende de muchos factores, entre ellos la edad de la planta (a mayor edad,
menor potencial de regeneracin), el genotipo y las condiciones ambientales.
Entre las ventajas del cultivo in vitro de material vegetal, se pueden incluir los tiempos ms cortos, y la
posibilidad de ocupar un espacio mucho ms pequeo que si se desea propagar material en tierra.
La micropropagacin
La propagacin de plantas in vitro es una tcnica muy
utilizada en cultivos de importancia econmica. Permite
cultivar clulas, tejidos, rganos, semillas, embriones y
obtener individuos selectos en forma rpida. Los cultivos
son realizados por personal especializado en medios
especficos (hormonas, minerales, vitaminas, fuente de
carbono, agente gelificante, agua, etc.) y condiciones
ambientales controladas (temperatura, humedad y luz)
(Figura 5). Una vez ajustados los protocolos para la
especie o cultivo de inters, es posible automatizar el
proceso de modo de llevarlo a mayor escala de
produccin.
La micropropagacin (propagacin clonal por cultivo in
vitro) constituye uno de los mtodos biotecnolgicos que
mayores logros ha aportado al desarrollo de la Figura 5. La micropropagacin vegetal. A
agricultura, ya que se la usa en la produccin masiva de partir de una planta madre se obtienen
especies hortcolas, aromticas, medicinales, frutcolas, numerosos explantos que, sujetos a
ornamentales y forestales. condiciones y medios de cultivo adecuados,
darn lugar a nuevas plantas iguales a la
planta original, permitiendo su multiplicacin.
Entre las ventajas de la micropropagacin se pueden mencionar:
- Posibilita incrementar rpidamente nuevos materiales.
- Permite controlar las condiciones ambientales, debido a su independencia de los mismos (luz,
temperatura y humedad controlada).
- Permite estudiar diversos procesos fisiolgicos.
- Evita el riesgo de contaminacin con patgenos, ya que se realiza en medios esterilizados.
- Se pueden obtener gran cantidad de individuos en espacios reducidos.
- Permite la obtencin de individuos uniformes.
- Facilita el transporte del material.
El cultivo de meristemas
En la yema apical se encuentran un grupo de clulas que conforman el meristema apical (tiene un
tamao entre 0,01 y 0,3 mm), tejido embrionario que tiene la capacidad de formar todos los tejidos de
la planta. A partir de ellos se pueden regenerar plantas completas (Figura 6).
Figura 6. Cultivo de meristemas. A partir de un meristema aislado se puede obtener una planta completa.
Adaptado de Biotecnologa, UNQ 2006.
Fuentes consultadas
Muoz de Malajovich, M. A. (2006) Biotecnologa. Editorial Universidad Nacional de Quilmes
Barcel et al. (1980) Fisiologa vegetal. Editorial Pirmide
Barthelemy R, Dawson J, Lee A (1977) Tcnicas para el laboratorio de biologa. Compaa
Editorial Continental
Devlin, R. (1976) Fisiologa vegetal. Editorial Omega.
Pierik, R.L.M. (1987) In vitro culture of higher plants. Editorial Martinus Nijhoff Publishers
Strasburger, E. (1981) Tratado de Botnica. Editorial Marn