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2-1008 Ferrari Alcoholemia PDF
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su interpretacin forense.
Clculos retrospectivos, prdida o generacin en
tejidos humanos e indicadores biolgicos de
ingesta. Breve revisin.
El presente artculo es una revisin del autor del trabajo publicado en la revista
Ciencia Forense Latinoamericana 2 (1-2) 20-35 (2008)
Resumen
La determinacin de alcohol etlico en humores o tejidos humanos es una de las prcticas
analticas ms frecuente en un laboratorio forense.
Su determinacin posee consecuencias legales importantsimas, tanto en individuos vivos
(conductores de vehculos bajos los efectos del alcohol, accidentes laborales y lesiones graves)
como en casos criminales: muertes violentas, suicidios, violaciones o abusos deshonestos.
En la presente revisin se abordan diversos aspectos relacionados a la toma de las muestras
biolgicas para anlisis, su correcta preservacin y los mtodos analticos ptimos,
consensuados por la comunidad cientfica internacional, tal como la cromatografa de gases con
detector de ionizacin de llama (GC-FID). Asimismo, los factores internos y exteriores a las
muestras que pueden generar resultados conflictivos a la hora de interpretar los guarismos,
tales como prdidas y generacin de alcohol en el organismo humano como tambin en los
recipientes donde son resguardadas las muestras. Se acepta hoy que la presencia de bacterias,
ciertos hongos y levaduras pueden generar etanol en determinadas condiciones. Por otro lado,
la existencia de cmara de aire relevante o deficiente cierre de los recipientes determinan
prdidas considerables de este compuesto. Se sealan modelos recientes de prediccin de
prdidas.
Se describen, tambin, los principios aplicados en la determinacin de la alcoholemia
retrospectiva o retrgrada con algunos ejemplos y la aplicacin prctica de los coeficientes y
r de Widmark. Por ltimo se discuten la aplicacin de parmetros o indicadores de ingesta
aguda y/o crnica de alcohol tal como el etilglucurnido (EtG) o Etilsulfato (EtS) y otros ms
que han sido recientemente estudiados.
Es bien conocido que el etanol puede producir en el hombre formas clnicas del estado de
inconciencia o disminucin de reflejos, consignndose datos estadsticos que dan cuenta de su
relevancia crimingena (1-3). La casustica internacional avala la importante incidencia del
alcohol en accidentes de trnsito o en lugares de trabajo. As Jnsson et al (4) informaron que
en Suecia el etanol constitua la primer sustancia encontrada en autopsias, quintuplicando, en
el mejor de los casos, el resto de compuestos listados por los investigadores. En los Estados
Unidos de Amrica la mitad de los accidentes automovilsticos en la dcada de los noventa,
involucraba personas que conducan bajo los efectos del alcohol (3). En Argentina,
Goldaracena et al. ofrecieron una contribucin en la que demostraron que el 16% de 926
conductores de distintos tipos de vehculos y sobre una ruta nacional de trnsito fluido, posean
etanol en el aire espirado en tenores de 0,1-0,5 g/L (14,7% de conductores) y mayores a 0,5
g/L (1,6% de conductores) (5).
Cabe sealar que los efectos txicos no se limitan a consideraciones meramente forenses. A
los ya conocidos efectos clnicos adversos, agudos y crnicos, cabe consignar estudios
recientes en los que se sugiere que la bioactivacin del etanol, promoviendo la formacin de
especies qumicas reactivas tales como el acetaldehido y los radicales 1 hidroxietilo, podran
inducir al cncer o bien una accin relevante en la toxicidad reproductiva en el hombre (6,7).
En cuanto a los productos menores de biotransformacin, estos se encuentran bajo
investigacin en la actualidad siendo promisorios, especialmente el etilgucurnido, etilsulfato,
metabolitos de serotonina y esteres de cadena corta formados por reaccin entre el alcohol y
los cidos grasos respectivos (8-10).
Las matrices biolgicas usadas para el dosaje de etanol constituyen un tema relevante, tanto
en las prcticas efectuadas a individuos vivos como tambin en los casos post-mortem. En
estos ltimos, la mayor diversidad de matrices analizadas ayuda a una mejor interpretacin
respecto de la verdadera impregnacin de alcohol en un individuo previo al bito. Sin embargo,
en la prctica diaria debe elegirse la matriz ms apropiada extrada de sitios o zonas
preestablecidas, como veremos luego, para el caso de sangre o algunos rganos. La
preservacin de las mismas y su correcto envasado y envo al laboratorio facilitarn la
estabilidad de la muestra evitando ulteriores errores en la interpretacin de los guarismos
obtenidos de la metodologa analtica (11).
Los mtodos analticos utilizados en nuestro hemisferio dependen del grado de complejidad del
laboratorio que realizan la prctica, prevaleciendo los mtodos enzimticos, de microdifusin y
los de cromatografa gaseosa con detector de ionizacin de llama (GC-FID) previo aislamiento
por el mtodo del espacio cabeza (head space), este ltimo el ms recomendado (12-14).
Asimismo, han sido publicadas investigaciones que dan cuenta de la posible interaccin entre
el etanol y monxido de carbono en incendios. Algunos autores han sostenido que no existe
correlacin entre ambos analitos en estos episodios, aunque otros le han atribuido al etanol un
efecto protectivo contra los efectos txicos del monxido de carbono (15,16)
Finalmente, el clculo retrospectivo de alcohol en el hombre reviste una importancia forense
capital a la hora de evaluar grado de impregnacin de alcohol n minutos u horas antes de la
toma de muestra. Los clculos y limitaciones de la ecuacin de Widmark son analizados con
cierta profundidad y en el contexto de un caso que se investiga.
A continuacin desarrollaremos con un poco ms de extensin los tpicos consignados.
a.- Sangre:
Generalmente, se remite al laboratorio sangre entera. Esta debera extraerse de venas
externas al tracto gastrointestinal, como la vena femoral. Algunos autores han preconizado la
extraccin intracardaca (18). Sin embargo varios expertos han advertido que el etanol puede
difundir desde el estmago a la sangre cardaca por lo que concluyen que la sangre tomada de
la cavidad cardaca o cavidad pleural no resulta adecuada para la estimacin de la
concentracin de alcohol (19,20).
La mayora de los autores recomiendan no extraer sangre de venas prximas al tracto
gastrointestinal en personas fallecidas, debido a la posible difusin del alcohol desde el
estomago al medio circundante o bien la migracin de bacterias desde el intestino al
mesenterio.
Takayasu et al (21) estudiaron la difusin postmortem del alcohol desde el estmago hacia
otros tejidos abdominales a dos temperaturas (5C y 30C), utilizando ratas a las que se instil
por va peroral etanol marcado con deuterio (etanol-d6). Los investigadores encontraron que el
etanol-d6 difunda gradualmente hacia los rganos vecinos al estomago, especialmente el
lbulo izquierdo heptico, rin izquierdo y vescula biliar, alcanzando una concentracin de 1-
2 g/L aproximadamente a las dos temperaturas ensayadas. En el experimento, notaron tambin
que luego de 24 hs a 30C exista generacin de etanol en los rganos ensayados excepto en
la vescula biliar y con valores de 0.33-0.85 g/L.
La cantidad de sangre necesaria para el anlisis cuantitativo depender del mtodo elegido.
Dado el uso extendido de la cromatografa gaseosa con detector de ionizacin de llama con el
procedimiento denominado espacio-cabeza (head space), puede disponerse de 1 ml de sangre
para el estudio por esta metodologa. Sin embargo es deseable que sean tomados unos
cuantos mililitros ms para ulteriores repeticiones y resguardo para posible repericias como
contraprueba solicitadas por la judicatura.
La muestra hemtica debe depositarse en un frasco rigurosamente limpio y hermticamente
cerrado, evitando la existencia de cmara de aire. El preservante de eleccin es el fluoruro de
b. Orina
La muestra para casos postmortem se toma punzando la vejiga con una jeringa estril. En
forma similar a la recoleccin sangunea, es colocada en recipientes de capacidad adecuada
segn el volumen del fluido existente. En caso de encontrarse la vejiga vaca intentar obtener
10 ml de orina por puncin de la pelvis renal.
Enviar como mnimo 10 m1, pero es conveniente remitir toda la existente en vejiga en casos
post-mortem. Rotular y cerrar perfectamente. Colocar da, mes y hora de emisin recoleccin
y fecha y hora del presunto ilcito por el que se pide la determinacin. (v. g. hora de accidente
vehicular). No agregar ninguna sustancia como conservante. Refrigerar a 4 C.
Inmediatamente despus de la recoleccin en individuos vivos, debe medirse la temperatura
(que debe estar entre 32 y 38C dentro de los cuatro minutos de su recoleccin) y el pH. Si se
sospecha cualquier adulteracin se debe notificar al laboratorio. La orina debe chequearse para
constatar precipitados, color, si tiene espuma, etc. Se recomienda tambin la determinacin de
creatinina (18080 mg/dl: normal; 10-30mg/dl: probablemente esta diluida; 10mg/dl: diluida) y la
determinacin de la densidad relativa (1.002-1.020: normal).
c. Humor vtreo:
La muestra se toma resecando completamente el globo ocular o bien a travs de una puncin
del mismo con aguja y jeringa, aunque cabe acotar que muchas veces se remite humor acuoso
y no humor vtreo, ya que la densidad de este ltimo hace dificultosa la extraccin. Colocar en
viales de capacidad adecuada, sellar, rotular y colocarlo en refrigeracin hasta su ingreso al
laboratorio.
Esta matriz es apropiada en casos postmortem en los que diversos tejidos entran en etapa de
putrefaccin relevante. Adems, resulta aconsejable en casos de muertes traumticas (vg:
accidentes de trnsito) en los que existe difusin abdominal de sangre procedente de otros
compartimentos u rganos o bien cuando la muestra hemtica no se encuentra disponible. Por
otro lado la correlacin con los guarismos en sangre ha sido ampliamente estudiada,
destacndose una alta correlacin (r>0.95) entre la concentracin de alcohol etlico en sangre y
en humor vtreo (24). El egregio profesor sueco AW Jones en su reciente revisin refiere la
opinin de ciertos autores que recomiendan el factor de 0.81 para computar la concentracin
de alcohol en sangre total indirectamente, desde la determinacin analtica de etanol en humor
vtreo.
Por ltimo ha sido tambin aconsejado su uso como matriz preferencial en casos de cuerpos
embalsamados. (24-26)
e. Testculo:
Esta matriz puede considerarse no convencional o alternativa. Sin embargo, podra constituir
un espcimen valioso en casos de muertes traumticas (Vg.: accidentes automovilsticos)
donde resulte imposible obtener la muestra sangunea o bien la gnesis del trauma provoque
la dilucin de la sangre con lquidos corporales. Piette et al de la Universidad de Gent
mostraron que existe correlacin entre el alcohol determinado en sangre y en testculo. Siendo
este ltimo un tejido externo al abdomen es dable suponer que la difusin de alcohol desde el
estmago no existir o no ser relevante.
En un estudio muy reciente del argentino L. Quintans (7) se investig los niveles de etanol in
vivo en ratas intoxicadas en forma aguda con etanol. Luego de la administracin de una dosis
nica de etanol por va oral los niveles testiculares siguieron una curva con un mximo a una
hora de administracin en cantidades comparables al hgado y descendiendo a niveles
mnimos hacia las 24 horas. En la Figura I puede observarse la curva de absorcin eliminacin
de etanol en tres tejidos incluido el testculo. Asimismo se observa que las concentraciones
alcanzadas en caso de intoxicacin aguda en ratas son comparables a la obtenida en casos
similares en humanos.
Tabla1: Matrices biolgicas susceptibles de anlisis alcohlico postmortem, cantidades que se recomiendan remitir
al laboratorio y marcadores o indicadores de ingesta
Muestra cantidad Analitos investigados
Sangre 5 ml - 10 ml Etanol, etilglucurnido,
metabolitos de serotonina
Humor vtreo Aprox. 2 ml Etanol
orina Mn. 10 ml Etanol, metabolitos de
serotonina,etilglucuronido
etilsulfato
Cerebro, hgado 100g sector interno Etanol
Saliva 1-2 ml Etanol, etilglucurnido,
etilsulfato
pelos 1 - 2g Etilglucurnido
Investigaciones futuras, podrn aportar mayores datos sobre produccin postmortal de etanol
en este tejido. Asimismo, su posible aplicacin en casos forenses en los que estn
involucrados traumas, dada la concentracin de alcohol alcanzada a distintos tiempos y el tipo
de cintica (similar a la de sangre) y su correlacin con los guarismos en el tejido hemtico.
Etanol in vivo
4000
3500
Plasma
g etanol / g tejido o ml plasma
Testculo
3000
Hgado
2500
2000
1500
1000
500
0
0 3 6 9 12 15 18 21 24
Tiempo (hs)
e. vsceras
Los tejidos viscerales constituyen una opcin de segunda instancia, especialmente en aquellos
casos en los que no se dispone de sangre, orina o humor vtreo.
Los ms utilizados por investigadores forenses han sido el hgado, cerebro e inclusive vescula
biliar o la misma bilis. El inconveniente en el uso de rganos dentro del tracto gastrointestinal
radica en la posible contaminacin de alcohol por difusin desde el estmago a la cavidad
abdominal y por ende a los rganos perifricos; o bien la migracin de bacterias, especialmente
Escherichia coli, responsable de la produccin postmortem de etanol, en sustratos ricos en
azcares, tal como se encuentran en el tejido heptico.
De hecho, algunos autores consignan que sera conveniente extraer muestras de hgado de
sectores profundos o interiores del lbulo derecho, por estar este ltimo menos expuesto a los
productos migrados desde el estmago (19-21).
Respecto del cerebro puede aplicarse el mismo criterio que para el hgado, tomando sectores
internos, inclusive el cerebelo. Es recomendable efectuar en forma urgente la autopsia y
extraer la muestra colocndola en recipiente perfectamente limpio y hermtico e
inmediatamente congelado hasta su ulterior anlisis.
Una vez recolectada la muestra debe colocarse en recipientes perfectamente limpios, sin el
agregado de ningn conservante, enfrindose inmediatamente a temperaturas debajo de los
4C y enviadas inmediatamente al laboratorio, evitando demoras que podran atentar contra la
indemnidad del espcimen. Esto ltimo no es un detalle menor en nuestro hemicontinente, ya
3 a. Procedimiento
Cada muestra de sangre u otro fluido disponible se preparan, previa agitacin para
homogeneizar, colocndose en un frasco de vidrio de 10 ml de capacidad perfectamente
limpio, agregndose:
1 ml de sangre entera.
1 ml de n-propanol 1 g. %o, (o preferentemente Pert- butanol para muestras postmortem como
estndar interno
1 ml de solucin saturada de K2 CO3, como agente liberante.
C patrn F1 A patrn
F2 = ------------------ - -------------------- (ecuacin )
C stand int A stand int
A patrn 1 C patrn F1
--------------- = ----- ---------------- - ------
A stand int F1 C stand int F2
De modo que en una grfica de A patrn/A stand int. Vs. C patrn/C stand int obtenemos:
En base a las reas obtenidas en los cromatogramas utilizados en cada calibracin, a travs de
una computadora utilizando un programa (Vg. QuatroPro), se calculan y comparan diferentes
regresiones.
2,4
concentracin de etanol en sangre
2,0
1,6
1,2
Ct
0,8
C
0,4 Cm
0,0
0 2 4 6 8 10
Tiempo (horas)
La primer parte indica una alcoholemia ascendente, que se manifiesta en la etapa de absorcin
de alcohol desde el tracto gastrointestinal a la sangre y dura entre 90 a 120 minutos
aproximadamente. Si la absorcin es rpida (como sucede con las bebidas de alta graduacin
alcohlica o libacin en estado de ayunas) la curva de absorcin semejar ms una vertical
(lnea trazos cortados a la izquierda). Caso contrario, por ejemplo cuando se encuentran
alimentos en el estmago al momento de la libacin, poseer menor pendiente (lnea de trazos
a la derecha). La zona de meseta indica un equilibrio entre el ingreso por difusin y eliminacin
oxidativa.
Lo antedicho ha sido confirmado con las experiencias del investigador sueco AW Jones (41)
quien refiere una experiencia publicada en el ao 1984 en la que estudi 48 voluntarios sanos
a los que se administr 0,68 g/KG de etanol mediante libacin de whisky. En esta contribucin
el autor ilustra con 48 grficos el comportamiento de la curva absorcin-eliminacin. En algunos
casos se observa la rpida absorcin del etanol en pocos minutos y en otros en cambio se
observan una lnea ascendente con meseta prxima a los 120 minutos.
Prolongando hacia atrs la lnea correspondiente a la eliminacin, hasta cortar el eje de
ordenadas, obtendremos el valor Co, correspondiente a la alcoholemia mxima terica,
suponiendo absorcin inmediata y total de todo el Alcohol. Este valor debera ser igual a la
dosis de alcohol tomada por Kg de peso del individuo. Pero, experimentalmente se comprob
que esto no sucede, sino que la relacin D/Co es aproximadamente 0.7 para hombres y 0.6
para mujer, debido a la desigual distribucin del etanol en los diferentes tejidos corporales. Esta
relacin D/Co suele definirse como Volumen de Distribucin.
El coeficiente (en el grfico) puede obtenerse mediante la relacin: C/ t, es decir:
Ct - Cm
= tg =
t2 - t1
Despejando:
Ct = Cm + t
Siendo:
Ct: alcoholemia en el momento del hecho.
A= Ct p r
Siendo:
p: peso del individuo.
r: constante de Widmark, que relaciona la concentracin de etanol en el cuerpo / concentracin
en sangre.
Sustituyendo en la ecuacin la expresin correspondiente a Ct, hallada ms arriba:
A = (Cm + t) p r
A continuacin, mediante un ejemplo, procederemos a calcular la alcoholemia retrospectiva y la
cantidad de alcohol en el cuerpo, que nos permitir inferir cuanta bebida alcohlica de una
graduacin determinada pudo haber tenido el imputado en el momento del hecho delictivo.
Supongamos que se trata de un homicidio culposo por accidente vehicular en el que el
conductor es detenido y la muestra sangunea extrada seis horas despus del hecho. El
informe de Laboratorio arroja el siguiente valor: 0.8 gramos de alcohol etlico por 1000 ml de
sangre. Aplicando la frmula para obtener la alcoholemia en un tiempo t de seis horas:
Ct= Cm + t
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