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TEMA 14

ANLISIS TOXICOLGICO (I)


GENERALIDADES

INTRODUCCIN
El anlisis toxicolgico forma parte de la Toxicologa: Ciencia que estudia los venenos o
txicos en lo referente a sus propiedades, accin fisiolgica, efectos nocivos y
determinacin.
Los trminos txico y veneno tienen el mismo significado, pero se usan en situaciones
distintas:
- Si la sustancia se utiliza intencionadamente con fines lesivos, bien porque se le
administre a una persona y porque una persona se la autoadministra, se le denomina
veneno y se habla de envenenamiento.
- Si la sustancia se introduce en el organismo accidentalmente, sin intencin de hacer
dao, se denomina txico y se habla de intoxicacin.
La toxicologa est relacionada con distintas reas fundamentales y ramas aplicadas:

Anlisis toxicolgico: Conjunto de procesos analticos que tienen como objetivo el
aislamiento, identificacin y cuantificacin de los txicos para permitir el diagnstico
de la intoxicacin.
La mecanstica es el rea que estudia los mecanismos de accin txica de las distintas
sustancias. Estudia rgano por rgano.
- Definiciones de reas relacionadas con la toxicologa:
Toxicologa reguladora: se encarga de decidir el nivel de riesgo de un
compuesto qumico, es decir, el nivel al cual las sustancias qumicas pueden
ocasionar algn dao.
Toxicologa Alimentaria: Estudia la naturaleza, las fuentes y la formacin de
sustancias txicas en los alimentos, sus efectos nocivos, sus mecanismos de
accin y la prevencin de intoxicaciones.
Toxicologa Ambiental: Estudia los efectos adversos y dao a los sistemas
biolgicos producidos por las substancias y contaminantes ambientales.
Cuando este estudio se realiza en poblaciones, comunidades y ecosistemas se
denomina Ecotoxicologa (integra toxicologa y ecologa).
Toxicologa Ocupacional: Estudia los efectos adversos debidos a intoxicaciones
que se producen en empresas, industrias y en cualquier medio laboral.
Problemas de toxicidad en el trabajo.
Toxicologa Clnica: Estudia los efectos adversos que originan los txicos y su
tratamiento. Se trata de toxicologa clnica humana y veterinaria.
Toxicologa Forense: Rama de la Toxicologa relacionada con aspectos judiciales
y legislativos. Entre otros, abarca el control de frmacos y drogas, alimentos y
contaminantes ambientales. Es muy amplia.
TIPOS DE INTOXICACIONES
- Por medicamentos: origen iatrognico (todo lo que tenga que ver con
medicamentos).
- Por productos agrcolas: plaguicidas, frecuente en el campo, o disolventes en los que
estn disueltos.
- Social: alcohol, drogas.
- Alimentaria: alimentos en malas condiciones, siendo la salmonellosis la ms
importante. Suele producirse de forma colectiva en celebraciones.
- Gentica: como gliadinas en celiacos. La sufren personas que no sean capaces de
sintetizar alguna enzima para metabolizar algunas sustancias.
- Endmica: presencia de un txico en una zona como riego de cultivos con agua
contaminada, por ejemplo, con cadmio (osteoporosis). Ha habido accidentes por
fumigaciones.
El caso ms llamativo es el de la enfermedad de minamata: En Japn, en la Baha de
Minamata, se instal a principios del s. XX una petroqumica (CHISSO) que fabricaba
acetaldehdo (CH3-CHO), entre otras cosas para la fabricacin de plstico. Entre 1932 y
1968 se vertieron entre 30 y 80 Tm (toneladas mtricas) de Hg al agua de la baha.
Los peces se contaminaron con metilmercurio y los primeros sntomas fueron
percibidos en los pjaros que caan y los gatos (gatos que bailan). Se mantuvo un
silencio en el pueblo debido a que desde la construccin de la petroqumica viva de
ella. Antes era un pueblo pesquero.
ste fue uno de los primeros casos de intoxicacin endmica.
CONCEPTO DE TOXICIDAD
Toxicidad: Capacidad intrnseca que posee un agente qumico de producir efectos
adversos sobre un rgano.
Xenobiticos: Sustancias extraas al organismo: frmacos, drogas, productos
qumicos, etc (lo contrario a compuestos endgenos).
Dosis txica: Cantidad de sustancia que produce una accin nociva o
indeseable en el organismo. Como depende del peso de la persona se habla de:
Coeficiente de toxicidad: dosis txica por kg de peso.
Dosis letal: Cantidad de sustancia que produce la muerte.
Dosis letal 50 (LD50): Cantidad de sustancia que mata al 50% de los animales
con los que se experimenta su accin. Se utilizan cabras, conejos, ratas y se
extrapola a personas.
- Modificaciones de la tolerancia:
Idiosincrasia: Intolerancia, congnita o hereditaria, a una sustancia, que se
pone de manifiesto a dosis que normalmente no produciran reacciones
anormales. No se cura, como es el caso de la llamada "alergia" a la penicilina.
Alergia: Intolerancia a una sustancia por hipersensibilidad. Se produce en el
organismo despus de ponerse varias veces en contacto con la sustancia que
provoca la reaccin. La alergia puede desaparecer por insensibilizacin.
Hbito: Acostumbramiento a un txico por la administracin repetida en
pequeas dosis.
Por ejemplo, la dosis txica de la cocana es de 1.2-1.4 g/da, pero los
cocainmanos pueden tolerar hasta 5 g/da.

PROBLEMTICA DEL ANLISIS TOXICOLGICO CLNICO
Constituye un rea analtica muy compleja, pero esencial dentro de las distintas etapas
que abarcan el diagnstico y tratamiento de intoxicaciones o envenenamientos.
Su complejidad se debe a:
- El elevado nmero de sustancias qumicas (frmacos, drogas, productos de uso
domstico, industrial y agrcola) que pueden causar efectos nocivos, directamente o a
travs de sus metabolitos.
- Frecuentemente:
El tamao de muestra disponible es limitado: Microanlisis ( 10 mg).
La concentracin de analito en la muestra es pequea: Anlisis de trazas ( 100
g/g, ppm).
El tiempo disponible para realizar el anlisis es corto, se requieren los
resultados cuanto antes.
TIPOS DE MUESTRAS
- Orina:
Ensayos preliminares en el screening de txicos.
Se determinan metabolitos de drogas. No se debe buscar cocana, por ejemplo, en
orina, sino sus metabolitos.
Se debe tomar, antes del tratamiento, 50 mL como mnimo y no se aaden
conservantes.
Caractersticas:
La concentracin es mayor que en sangre, que puede ser incluso 100 veces
mayor.
Est exenta de protenas.
Presenta la desventaja de que hay txicos que se eliminan como metabolitos
comunes.

- Sangre:
Ensayos cualitativos y cuantitativos: es una de las muestras ms tiles para la
identificacin y, especialmente, para el anlisis cuantitativo.
Las muestras ms representativas son la sangre total y el plasma.
Si se realiza la determinacin en plasma se utilizan tubos con fluoruro sdico (NaF)
como anticoagulante. Si se sospecha de intoxicacin con plomo (Pb) se utiliza AEDT.
- Contenido gstrico:
Se determina el txico sin metabolizar, sin modificar.
La muestra se consigue por vmito, aspirado gstrico o lavado gstrico (primer lavado,
500 mL).
Caractersticas:
Pueden ser necesarios procedimientos de homogeinizacin, filtracin y/o
centrifugacin.
No representa el grado de intoxicacin debido a que se mide el txico no
absorbido.
Se pueden encontrar incluso tabletas o cpsulas enteras.
- Humor vtreo:
Muy til en la determinacin de drogas y alcohol. Fcil accesibilidad. Muy utilizado
ltimamente en difuntos.
Se sita entre la retina y el cristalino y tiene un volumen suficiente, de 2 a 5 mL por
ojo. Se punza el ojo para su extraccin.
Caractersticas:
No tiene muchas protenas.
Presenta pocas enzimas.
Est protegido de la circulacin general.
Es resistente a la contaminacin bacteriana.
- Saliva:
Al igual que el humor vtreo es muy til en la determinacin de drogas y alcohol, tiene
fcil accesibilidad y es muy utilizado ltimamente. Ambos tienen un uso relativamente
reciente.
Existe una correlacin de los anlisis sricos con drogas de abuso y psicofrmacos.
Se usas, recientemente, kits comerciales para la deteccin de drogas.
- Pelo:
Deteccin de drogas en consumidores crnicos y txicos minerales.
Para los iones metlicos es difcil obtener la correlacin entre la cantidad de txico
ingerida y la encontrada en el pelo porque una parte del txico puede ir unida a la
melanina y, dependiendo del color de pelo de la persona, puede variar la cantidad de
droga encontrada.
Mide la exposicin prenatal a drogas o txicos minerales y refleja el estado promedio
de los elementos minerales del organismo durante su crecimiento.
- Hgado:
Se encuentra mayor nivel de txicos que en sangre. Se acumulan los txicos
hidrofbicos.
Es especialmente til cuando no se puede disponer de la sangre en el caso de muerte.
Se debe evitar la contaminacin por bilis y la adicin de conservantes.
- Meconio (primera deposicin del recin nacido):
Es la primera deposicin del beb. Est formado por el lquido amnitico, lanugo (vello
fino que se desprende al nacer), bilis y clulas que se han desprendido de la piel y del
tracto intestinal.
Deteccin de drogas durante la gestacin.
Se realiza el anlisis cuando el beb nace con sndrome de abstinencia.
- Otros:
Cerebro:
Especialmente casos de inhalacin.
Rin:
Especialmente en intoxicacioness por metales y txicos que se acumulen en los
riones.
Bilis:
Txicos que se eliminan por va biliar. En sobredosis por opiceos se acumulan
altas concentraciones de glucurnidos.
REQUISITOS
- Conocimiento de la situacin en la que se ha producido el problema.
- Colaboracin entre el clnico y el laboratorio.
- Personal cualificado.
- Disponibilidad de instrumentacin adecuada, preferentemente automatizada
(miniaturizacin, rapidez de resultados).


Utilizacin de :
Mtodos de screening de analito de respuesta rpida:
Mtodos cualitativos que ponen de manifiesto la presencia o ausencia en la
muestra de una sustancia o grupo de sustancias, a partir de un determinado
nivel de concentracin, sin proceder a la cuantificacin.
Mtodos confirmatorios:
Mtodos cuantitativos ms lentos y laboriosos que confirman la presencia del
txico y lo cuantifican.
ETAPAS DE UN ANLISIS TOXICOLGICO
- Deteccin: mtodo de screening.
Normalmente, un mtodo de screening se basa en la interaccin de un grupo funcional
de una sustancia con un reactivo. Si otras sustancias presentes en la muestra
contienen el mismo grupo tambin dara positivo el ensayo.
- Identificacin y cuantificacin: mtodo confirmatorio
- Interpretacin de los resultados en el contexto del problema teniendo en cuenta la
informacin disponible.
MTODOS DE SCREENING DE ANALITO
El objetivo es la deteccin y no la cuantificacin.
Deben ser selectivos, sensibles y rpidos.
Respuesta binaria S/NO: Indica si el txico est presente en la muestra por encima de
un nivel de concentracin preestablecido denominado nivel de corte.
El nivel de corte (cut-off) se establece a partir del lmite de deteccin (LOD) del
mtodo (aunque la respuesta es cualitativa tiene connotaciones cuantitativas).
Normalmente, el nivel de corte se establece en 4 LOD.
Los resultados positivos deben confirmarse con un mtodo cuantitativo o mtodo
confirmatorio.
El mtodo no debe dar lugar a falsos negativos, es decir, muestras que contienen el
analito por encima del cut-off y, al someterlas al mtodo de screening, sale negativo.
- Tratamiento de muestra
Aunque hay mtodos de screening que permiten el anlisis directo, pueden ser
necesarias etapas de:
Hidrlisis (cida, bsica o enzimtica) para separar el txico de sus conjugados.
Extraccin para separar el txico de la matriz de la muestra: ELL o SPE.
- Tipos de mtodos:
Ensayos de color (o a la gota)
Basados en la aparicin de un color caracterstico cuando la muestra se pone en
contacto con un reactivo qumico.
Son simples, rpidos y econmicos.
Son slo orientativos y, en general, poco seguros.
Requieren la utilizacin de muestras controles.
Existen kits comerciales: Tecnologa de reactivos secos.
Ensayo de MARQUIS:
Reactivo: cido sulfrico concentrado + formaldehdo (estable varias
semanas protegido de la luz).
Coloraciones:
- Herona: Rojo oscuro-morado
- Metadona: Amarillo-Rosado
- Anfetaminas: Marrn oscuro
- Extsis: Prpura a Negro
Ensayo de Scott para cocana
Reactivos:
1. Disolver 1,0 g de tiocianato de cobalto en 50 ml de cido actico
al 10% (vol / vol) y aadir 50 ml de glicerina.
2. cido clorhdrico (concentrado).
3. Cloroformo.
Etapas:
1. Colocar una pequea cantidad (no ms de 1 mg) del material
sospechoso en un tubo de ensayo. Aadir cinco gotas del
reactivo 1 y agitar el tubo de ensayo durante diez segundos. La
cocana y sustancias conexas producen un precipitado azul y una
solucin azul.
2. Aadir una gota del reactivo 2 y agitar la mezcla durante algunos
segundos. La solucin azul debera volverse rosa. Si el color azul
no vara, adase otra gota. Si el color sigue sin alterarse, repetir
el ensayo con una muestra ms pequea de material
sospechoso.
3. Aadir cinco gotas del reactivo 3 y agitar. Si hay cocana
presente, la capa inferior de cloroformo se volver de un intenso
color azul, mientras que la capa superior adquirir una tonalidad
rosa.
Resultados:
Para considerar que un ensayo para la determinacin de cocana ha
dado un resultado positivo es necesario que se haya obtenido un
resultado positivo en cada una de las etapas. Son pocas las drogas,
sujetas o no a fiscalizacin, que producen una secuencia de color similar.

Tcnicas cromatogrficas:
Cromatografa en capa fina:
Rpida y simple.
Cromatofolios comerciales con estndares de txicos (drogas).
Cromatografa en columna:
Aunque LC y GC se utilizan normalmente en mtodos confirmatorios,
tambin se utilizan en algunos mtodos de screening.
Tcnicas de inmunoensayo:
Normalmente, permiten el anlisis directo (sangre, orina).
Se necesita informacin previa sobre potenciales txicos.
Existen kits comerciales.
Riesgo de reacciones cruzadas (compuestos con estructuras similares).
MTODOS CONFIRMATORIOS
Basados normalmente en GC y LC con MS o MS/MS
- Permiten diferenciar dos o ms especies con el mismo tiempo de retencin mediante
los espectros de masas.
- Normalmente se utilizan en laboratorios de referencia.
Otros mtodos:
- Investigacin de las manchas separadas en CCF mediante FTIR, RMN o MS.



TEMA 15
ANLISIS TOXICOLGICO (II)
DETERMINACIN DE ESPECIES TXICAS

INTRODUCCIN
Con fines analticos, las sustancias txicas pueden clasificarse segn el mtodo
utilizado para separarlas de la matriz de la muestra:
- Sustancias gaseosas y voltiles:
Las sustancias gaseosas son los gases a temperatura ambiente (CO, HCN, Cl2) y las
voltiles aqullas que pasan al estado gaseosa a temperatura inferior a 100 C, como
algunos disolventes orgnicos (etanol, metanol, acetona).
Destilacin
Microdifusin
Espacio de cabeza.
- Sustancias orgnicas no voltiles:
Son frmacos, drogas, plaguicidas, etc.
Extraccin lquido-lquido (LLE).
Extraccin en fase slida (SPE).
- Sustancias inorgnicas:
Pueden ser iones metlicos o aniones inorgnicos.
Eliminacin de la materia orgnica

DETERMINACIN DE TXICOS EN MUESTRAS CLNICAS
SUSTANCIAS GASEOSAS Y VOLTILES
La identificacin puede ser fcil si se conocen las circunstancias en las que se ha
producido el problema. Si no se tiene informacin supondra un problemas porque,
cuando se vaya a analizar la muestras, si es voltil, se puede perder. Si es gas con ms
razn.



Separacin de la matriz de la muestra:
- Destilacin:
Simple, fraccionada, al vaco, por arrastre en corriente de vapor: el txico se recoge en
una disolucin colectora.
- Espacio de cabeza (seguida de GC):
Muy utilizada hoy en da.
- Microdifusin (cmara de Conway):
Muy simple y rpida.
La cmara de Conway es una clula de porcelana que
tiene un anillo concntrico. Tiene una tapadera
hermtica que se cierra tras colocar la muestra y la
disolucin atrapante. Posteriormente se calienta de
manera que el analito voltil pasa del anillo
(muestra) al centro (disolucin atrapante). En la
determinacin se analiza la disolucin atrapante.
- SUSTANCIAS GASEOSAS:
Sustancias gaseosas ms determinadas: CO y HCN.
MONXIDO DE CARBONO (CO):
Es el txico gaseoso ms frecuente, producido por la transformacin
incompleta de los combustibles al quemarlos en ambientes poco ventilados .
Se combina con la hemoglobina originando carboxihemoglobina, desplazando
al oxgeno ya que su enlace es unas 210 veces ms fuerte.
Determinacin
Separacin del CO de la hemoglobina y cuantificacin por GC o NDIR.
Determinacin fotomtrica de la carboxihemoglobina.


CIANUROS (CN
-
):
Inhibidor de la enzima citocromo oxidasa, implicada en la respiracin y que
contiene hierro, elemento muy apetecible por el cianuro.
Olor a almendras amargas, que tienen un glucsido cianognico, la amigdalina.
Determinacin
Electrodo selectivo:
Para separar el analito de la matriz de la muestra se utiliza
microdifusin (cmara de Conway) y NaOH como disolucin colectora.
Problema: interfieren sulfuros en el electrodo selectivo. Se evita
adicionando plomo (formacin de PbS, color blanco).
- SUSTANCIAS VOLTILES
Hay muchos casos de intoxicacin por sustancias voltiles en industrias debido a los
disolventes orgnicos. En nios puede producir efectos txicos el pegamento al ser
olido.
METANOL
Es de los que producen ms frecuentemente una intoxicacin. Su punto de
ebullicin es de 65 C.
Es muy utilizado en pinturas, barnices y disolventes de pinturas.
Bebidas alcohlicas adulteradas (Ginebra de garrafn).
Origina metabolitos txicos: formaldehdo y cido frmico (nervio ptico,
pncreas, acidosis metablica).
ADH
+
Si se produce una intoxicacin con metanol se trata a la persona intoxicada con
bicarbonato para subir el pH. Tambin con etanol, que es el sustrato favorito de
la ADH (alcohol deshidrogenasa).
Determinacin
Espacio de cabeza y GC
Microdifusin y fotometra
Oxidacin a formaldehdo con permanganato en medio sulfrico
(screening).
Reaccin del formaldehdo con cido cromotrpico: Color violeta
(580 nm)
ETANOL
Es una de las sustancias ms frecuentes en intoxicaciones de tipo social .
Es fcil de identificar por los sntomas.
Determinacin
Espacio de cabeza y GC-FID
Mtodo enzimtico:
ADH
+
+
+ +
+

Se puede utilizar hidracina como atrapante.
Esta reaccin est relativamente desplazada hacia la izquierda. Se utiliza
una reaccin acoplada para desplazarla a la derecha. Se utiliza AlDH:
AlDH
+
+
+ +
+

SUSTANCIAS ORGNICAS NO VOLTILES
Analitos
Frmacos y drogas
Plaguicidas
Separacin de la matriz
Extraccin lquido-lquido
Extraccin en fase slida
Antes de la separacin de la matriz se debe llevar a cabo la ruptura del enlace analito-
matriz mediante hidrlisis cida o enzimtica.
- FRMACOS Y DROGAS
Mtodos de screening:
Inmunoensayo
CCF (cromatografa en capa fina)
Ensayos de color
Mtodos confirmatorios:
GC-MS (si se puede derivatizar)
LC-MS
RIA (radioinmunoensayo)
Muestras:
Orina, sangre, saliva, pelo, jugo gstrico, tejidos.
FRMACOS
CIDO ACETILSALICLICO (ASPIRINA)
Intoxicaciones accidentales en nios. La aspirina infantil est retirada del
mercado por su relacin con el sndrome de reye: problema que origina muerte
sbita. Es una encelopata aguda con fallo heptico.
Se metaboliza rpidamente a salicilato y otros metabolitos.
La aspirina es un antipirtico a bajos niveles, pero a altos niveles (sobredosis)
provoca la estimulacin del sistema nervioso central (sofocos, fiebre).


Determinacin
Mtodo de screening:
Fotometra:
Formacin de un complejo violeta de salicilato con Fe(III).
Poco selectivo pero muy sensible y no origina falsos negativos.
Mtodo confirmatorio:
LC-UV (250 nm)
ACETAMINOFENO (PARACETAMOL)
Utilizado como alternativa al cido acetilsaliclico
(antiagregante plaquetario) despus de una operacin.
No reacciona con hierro.
Sobredosis. Toxicidad en el hgado (hepatotxico: 15 g).
Dosis letal: 0,5 g/Kg.
La N-acetilcistena es el antdoto utilizado cuando hay intoxicacin.

Determinacin
LC-UV (250 nm)
Determinacin simultnea de salicilato y acetaminofeno.
BENZODIACEPINAS
Son una familia de sustancias utilizadas con fines teraputicos como sedantes,
hipnticos (producen sueo) y anticonvulsivos:
- Diazepam (Valium)
- Lorazepam (Orfidal) Efectos txicos: 2 g/mL
- Clorazepam (Tranxilium)
Metabolismo de las benzodiacepinas (en orina se encuentran los metabolitos
correspondientes):

Determinacin
Se realiza en sangre y orina.
1. Medio bsico y extraccin con tolueno-hexano-alcohol amlico.
2. Evaporar a sequedad (el tolueno interfiere en la medida) y disolver en
metanol.
3. LC con gradiente metanol-agua.
4. Deteccin UV (240 nm).
BARBITURATOS
Sustancias utilizadas con fines teraputicos como sedantes ansiolticos,
hipnticos y en tratamiento de psicosis. Utilizadas tambin con fines suicidas .
Se excretan en orina prcticamente invariables o conjugado a glucurnidos (no
se producen metabolitos):

Determinacin
Mtodo de screening:
CCF
EMIT (tambin puede ser utilizado como mtodo de screening.
Otros
Mtodo confirmatorio:
GC-FID o GC-NPD (determinacin de nitrgeno y fsforo).
LOD: 500 pg/mL.
Suero: extraccin con diclorometano (CH2Cl2) y formacin de
derivados metilados con hidrxido de trimetilfenilamonio.
LC-UV
Menos sensible. LOD: 1 g/mL.
Inmunoensayo (RIA)
LOD: 10 g/mL.
DROGAS
ANFETAMINAS
Estimulantes potentes del sistema nervioso central, muy utilizadas como drogas
(propiedades alucingenas).
Se han utilizado como supresores del apetito y como antidepresivos.
Tipos:
A) Anfetamina (metilfenetilamina)
Centramina o Simpatina: sulfato de anfetamina
B) Metanfetamina (dimetilfenetilamina)
CRISTAL (ice): metanfetamina cristalina. Dosis letal: 1 g.
SHAB (Asia Oriental)
C) 3,4-Metilendioximetanfetamina (MDMA)
EXTASIS (ecstasys)

Metabolismo de anfetaminas

Determinacin de anfetaminas
GC-ECD o GC-MS
Extraccin con tolueno y derivatizacin con cloruro de tricloroacetilo.
LOD: ng/mL.
LC-UV
LOD: ng/mL.
Inmunoensayo (kits comerciales de screening).
Determinacin de anfetaminas metilendioxiladas
LC-UV, LC-fluorimetra
LOD: ng/mL.
GC-MS
LOD: ng/mL.
Inmunoensayo
XTASIS LQUIDO (CIDO -HIDROXIBUTRICO, GHB)
No tiene relacin con las pastillas de xtasis.
Precursor del cido -aminobutrico (GABA) que es un
neurotransmisor.
Droga psicotrpica sedante.
No tiene ni olor ni sabor, slo un poco a salado. En los aos 80 era una
sustancia permitida que usaban los culturistas. Primero provoca una subida de
dopamina seguida de un bajn.
Determinacin
GC-MS o GC-FID
Tratamiento de muestra con cido sulfrico concentrado para la
ciclacin del GHB a -butirolactona.
Espacio de cabeza (10 min a 70 C)
OPICEOS
Sustancias analgsicas que tienen un efecto sedante sobre el sistema nervioso
central. Son alcaloides, es decir, sustancias de origen vegetal que llevan
nitrgeno y tienen carcter bsico.

- Morfina
Fue el primero que se aisl (1803) y su nombre se debe a Morfeo, dios del
sueo:
Se obtuvo del opio (ltex seco o semiseco obtenido de las
cpsulas inmaduras de la Papaver somniferum).
El opio contiene aproximadamente un 9,5% de morfina,
junto con otros alcaloides (noscapina, codena, papaverina).
- Codena
Es la metilmorfina y tiene efecto broncodilatador. Al metilarse la morfina,
pierde o reduce el efecto hipntico.
- Herona
Es diacetilmorfina (caballo), una droga semisinttica que
crea adicin inmediata. BAYER acetil la morfina por
primera vez.
Determinacin
GC con deteccin:
NPD (tiene nitrgeno)
ECD (derivatizacin previa: derivados clorados)
MS
LC con deteccin:
UV
Electroqumica
Inmunoensayo (RIA)
LOD para morfina en sangre o en plasma:
GC-MS: 20 ng/mL
LC-electroqumica: 1 ng/mL
RIA: 0.1 ng/mL
CANNABINOIDES
Sustancias psicoactivas obtenidas de la planta Cannabis sativa L.
El compuesto ms representativo es el 9-
tetrahidrocannabinol (THC), poco soluble en agua
y soluble en disolventes orgnicos.
Se consume como:
- Marijuana:
Mezcla de hojas secas y frutos inmaduros de la planta. Contiene menos de
5% de THC.
- Hachis (hashish):
Capa resinosa de las flores y hojas de la planta. Contiene hasta un 15% de
THC.
El THC se metaboliza por completo quedando los metabolitos almacenados,
eliminndose poco a poco por la orina y las heces durante un periodo de
tiempo largo. Se determinan sus metabolitos.

El producto final tiene cierta solubilidad en agua y se puede eliminar por
orina.
Determinacin
GC-MS
LOD: 1 ng/mL
LC-MS
LOD: 2.5 ng/mL
RIA y otros inmunoensayos
LOD: 2 ng/mL
COCANA
Alcaloide psicoestimulante (produce euforia,
sociabilidad e hiperactividad).
CRACK: una parte de cocana y dos partes de
bicarbonato sdico.
Se obtiene de la coca: hojas secas de Erythroxilum coca.
Sus principales metabolitos en orina son la benzoilecgonina y la ecgonina:

Dosis letal: 1.2-1.4 g/da.
Determinacin
Inmunoensayo:
RIA
LOD: 2 ng/mL
FPIA (inmunoensayo por polarizacin de la fluorescencia).
GC-MS
LOD: 5 ng/mL
LC-UV
LOD: 1 g/mL
LSD
Dietilamida de cido lisrgico.
Se extrae del cornezuelo de centeno (hongo del centeno).
- PLAGUICIDAS
Constituye un grupo muy numeroso de compuestos: insecticidas, herbicidas,
rodenticidas, fungicidas, acaricidas, etc.
Se producen 5-10 millones de toneladas anualmente: 70% para usos agrcolas y 30%
para usos domsticos y otros usos.
Se han descrito numerosas intoxicaciones accidentales en campo o en fbricas.
Aunque el plaguicida no sea txico, la formulacin en la que se prepara incluye
sustancias transportadoras, disolventes orgnicos, aditivos e impurezas que pueden se
potencialmente txicos.
La determinacin de plaguicidas puede tener inters en:
- Anlisis forense
- Diagnstico de urgencia
- Control de poblaciones expuestas
- Contaminacin ambiental

Sales de cobre: adicin a olivo para combatir el hongo Verticilium.
Warfarinas: impiden la coagulacin de la sangre (inhiben la sntesis de los factores de
coagulacin dependientes de la vitamina K).


Determinacin
Muestras:
Clnicas: sangre, orina, lavado gstrico, vsceras
No clnicas: formulacin del plaguicida, alimentos, agua, aire, suelos
Separacin del plaguicida de la matriz de la muestra:
Extraccin con un disolvente: ter, acetonitrilo, cloroformo, acetona (segn
solubilidad).
Purificacin del extracto:
Clean up: extraccin con disolventes o columna de adsorcin (florisil, gel de
slice, almina, carbn activo).
Mtodos de screening:
CCF, ensayo de color, tcnicas espectroscpicas, inmunoensayo competitivo,
MS.
Mtodos cuantitativos:
GC-MS
LC-MS
ESPECIES METLICAS
Utilizadas con fines homicidas: arsnico, talio (favorece el cruce entre sistemas para la
fosforescencia).
Numerosas intoxicaciones accidentales: Industrias de electroplateado, de productos
agrcolas, fundiciones, aleaciones, bateras, cermicas, vidrio, pinturas, etc.
Especies ms problemticas: cadmio, aluminio, plomo, arsnico, mercurio, selenio,
talio, antimonio.
Determinacin
Digestin cida (normal), calcinacin directamente si se sabe que no hay
problemas de prdidas.
Preconcentracin.
Tcnicas espectroscpicas atmicas.



DETERMINACIN DE ESPECIES TXICAS EN ALIMENTOS
ALIMENTOS CON SUSTANCIAS TXICAS DE ORIGEN NATURAL
Se originan en el metabolismo de animales, plantas o microorganismos utilizados como
alimentos o presentes en los alimentos.
Pueden originar intoxicaciones severas.
Alimentos marinos:
Biotoxinas en moluscos y pescados. Parece que presentes en el placton con el
que se alimentan estos animales. Originan mareas rojas:
Mitilotoxina (toxina del mejilln): bloquea la permeabilidad del sodio en las
clulas nerviosas y musculares produciendo parlisis y puede que la muerte.
Determinacin
Se determinan mediante LC o CE (electroforesis capilar) con deteccin
fluorimtrica (muchos son fluorescentes) o MS.
Plantas superiores:
Glucsidos cianognicos:
Su toxicidad depende de la actividad hidroltica de las bacterias y del pH
gastrointestinal para liberar HCN.
Amigdalina

Linamarina

Determinacin
LC-MS
cido ercico (aceite de colza):
Retraso en el crecimiento, dao heptico y renal .
Determinacin
GC-MS


Hongos superiores:
Existen hongos citotxicos, hepatotxicos, hemolticos, neurotxicos y
alucingenos. Incluso la coccin no consigue destruir los txicos.
El ms conocido es la Amanita Phalloides en la que existen tres tipos de
toxinas:
Amatoxinas: -, - y -amanitina
Octapptidos cclicos de ncleo indlico resistentes a la coccin y
desecacin muy hepatotxicos.

Falotoxinas: Falina, faloidina, falisacina, falacidina, falacina, falisina,
faloina, profaloina
Heptapptidos cclicos formados por siete aminocidos unidos en
cadena cerrada y formando un doble ciclo medi ante un enlace entre
triptfano y cistena. Muy hepatotxicas.
Son un poco menos txicas que las amatoxinas.

Virotoxinas: Viroidina y desoxiviroidina
Pptidos monocclicos que no actan por va oral.

Determinacin
LC-MS
LC-MS/MS
Sustancias antinutritivas:
Compuestos que producen un dficit nutricional por interferir en la asimilacin
de nutrientes como protenas, aminocidos, especies inorgnicas o vitaminas:
Oxalatos:
Inhiben la absorcin del calcio. El oxalato precipita como oxalato clcico
y forma piedras en el rin.
Cantidad en espinacas: 6 g/kg
Cantidad en remolacha: 5 g/kg
Determinacin
La extraccin de oxalatos en espinacas se realiza mediante la
precipitacin con calcio (CaC2O4) y filtracin.
Se adiciona, posteriormente, H2SO4 formndose C2O4
2-
y se valora con
MnO4
-
hasta la aparicin de color rosa.

+
+

+
+
+


Lectinas:
Inhiben la absorcin de aminocidos como la tirosina.
Estn presentes en las plantas leguminosas.
No suelen causar problemas en dietas normales.

Priones:
Originan enfermedades neurodegenerativas letales (encefalopatas
espongiformes transmisibles, EETs).


Diagnstico de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (vacas locas):
Deteccin de la protena 14-3-3 en lquido cefalorraqudeo mediante
inmunoblot y otros inmunoensayos.
CONTAMINANTES BIOLGICO
Contaminacin de los alimentos por bacterias y microhongos:
Infecciones bacterianas:
Producidas por las propias bacterias. Ejemplo: salmonella.
Intoxicacin bacteriana:
Originada por toxinas producidas por bacterias:
Toxinas, producidas por el Clostridium botulinum causante del
botulismo.
Enterotoxinas, producidas por el Staphyloccus aureus.
Intoxicacin por microhongos:
Micotoxinas: pueden ser cancergenas, nefrotxicas (producen enfermedades
en el rin), hepatotxicas, teratognicas (producen malformaciones en el
feto).
Determinacin
Inmunoensayo
LC
Tipos de MICOTOXINAS:
AFLATOXINAS:
Son las ms importantes. Estn producidas por Aspergillus flavus y Aspegillus
parasiticus presentes en cereales, como el maz, y frutos secos, como los
cacahuetes.

B = blue.
G = green.
M = milk. Son metabolitos de la B1. Se
encuentran, normalmente, en la leche
como metabolito.




Determinacin
Extraccin: acetonitrilo-agua normalmente.
Clean-up: inmunoafinidad, fluidos supercrticos.
Preconcentracin: SPE.
LC-Detector fluorimtrico (son fluorescentes), UV, MS.
Tambin: Inmunoensayos.
Las fbricas de frutos secos y envasados estn obligadas a tener kits
comerciales.

OCRATOXINAS:
Son menos frecuentes que las aflatoxinas. Estn producidas por hongos de los
gneros Aspergillus y Penicillium que pueden crecer de forma natural en
alimentos como cereales, caf, cacao, cerveza, frutos desecados, vino, zumo de
uva y especias.
Tienen efectos nefrotxicos, inmunosupresores, carcinognicos y teratognicos
en los animales de experimentacin estudiados.
Ocratoxina A

Ocratoxina B

Ocratoxina C

Determinacin
Prcticamente igual que las aflatoxinas (extraccin, clean-up...).
LC-fluorimetra (tambin son fluorescentes) o LC-MS
Inmunoensayo
CONTAMINANTES QUMICOS
- IONES METLICOS
Contaminantes inorgnicos de inters en toxicologa alimentaria:

- SUSTANCIAS ORGNICAS:
Plaguicidas
Residuos de frmacos veterinarios: hormonas, antibiticos (muy controlados).
Existen casos de fraude para engordar a los animales.
Ejemplos:
Clembuterol: engorde no hormonal.
Testosterona
Determinacin
LC-MS y LC-MS/MS (termolbiles, no se pueden volatilizar)
GC-MS, GC-MS/MS
ADITIVOS ALIMENTARIOS
Aunque se consideran sustancias seguras, se han producido casos de hipersensibilidad
o alergia (cido benzoico).
Existen factores que pueden modificar la toxicidad de estos compuestos: insuficiencia
renal o heptica, alergia, edad (personas mayores, nios).
Un mismo aditivo puede existir en varios tipos de alimentos, producindose una mayor
ingesta diaria del mismo.
TXICOS FORMADOS DURANTE EL PROCESADO, PREPARACIN Y ALMACENAMIENTO
DE LOS ALIMENTOS Y EN EL PROPIO CONSUMIDOR
- Compuestos formados a temperaturas elevadas:
Hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs): cancergenos.
Formados en los alimentos (carne, pescado) asados a > 300 C.
Presentes en alimentos ahumados (humo de la pirlisis de la madera).
Aminas heterocclicas: potencialmente cancergenas.
Formadas a partir de protenas presentes en alimentos al tratarlos a altas
temperaturas (> 250 C).
Acrolena (2-propenal): irritante nasal, ocular y bronquial.
Formada al calentar grasas a temperatura elevadas (aceite
refrito).
- Nitritos:
Formados por reduccin bacteriana de nitratos.
- Nitrosaminas:
Formadas a partir de nitritos y aminas presentes en los alimentos.

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