Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

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PRCTICA
Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo
espectrofotomtrico.

Nombre: Rodrguez Elizarraras Miguel ngel

Grupo: 5QM1
Seccin: 2
Fecha de entrega: 27-oct-15
Nombre profesora: Marco
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Objetivos
Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetaspara el
espectrofotmetro.
Manejar algunos de los parmetros que intervienen en el establecimiento de un
mtodo espectrofotomtrico.
Establecer las condiciones ptimas de losparmetros probados para la aplicacin
del mtodo.
Fundamento
El fundamento del equipo se basa en la cantidad de luz que es absorbida y en la cantidad
de luz que es transmitida cuando se le incide un haz de luz monocromada a una muestra
colorida, la resultante de la suma de la luz transmitida ms la absorbida nos da igual a la
intensidad de la luz que le hacemos incidir. La eleccin de tubos adecuados se
fundamenta en escoger los que sean de paredes pticamente equivalentes y dimetros
regulares equivalentes. La reaccin se fundamenta en la formacin de un complejo
colorido entre el ion frrico presente en algn tipo de muestra con el tiocianato, este
complejo es de color rojo y puede cuantificarse a 480 nanmetros.
Determinacin de Hierro. (Mtodo del Tiocianato.)
El hierro reacciona con el tiocianato dando un compuesto, soluble, de color rojo intenso;
el hierro ferroso no reacciona con el tiocianato. Generalmente se supone que el color se
debe al tiocianato frrico. El ion frrico, Fe+++, da con el tiocianato distintos complejos de
color rojo. El complejo que predomina en solucin depende de la concentracin del
tiocianato. Al aumentar la concentracin de tiocianato, aumenta la longitud de onda que
corresponde a la absorcin mxima. Hay que emplear gran exceso de tiocianato para
aumentar la intensidad de la coloracin. Deben estar presentes cidos fuertes (cido
clorhdrico o ntrico, concentracin 0.05 - 0.5 N) para evitar la hidrlisis del ion frrico. No
se recomienda el empleo de cido sulfrico porque los iones sulfato forman complejos
(poco estables) con el ion frrico.

+6
+3 -
Fe(aq) + SCN (FeSCN)(aq)
DATOS EXPERIMENTALES
Tabla 1. Seleccin de tubos para ser usados como celdas.

Tubo No. %T400 (H2O) Tubo No. %T400 (H2O) Tubo No. %T400 (NiSO4)

1 95 16 94.6 1 24.2

2 94.2 17 94.8 2 24

3 94.6 18 96.2 3 23.8

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4 95 19 95 4 23.6

5 94.2 20 95.2 5 24.4

6 94.3 6 24.6

7 95 7 24.6

8 96.2 8 24.8

9 96.4 9 23.4

10 95 10 23.6

11 93.8 11 23.4

12 94.2 12 23.8

13 96.4 13 24

14 95.2 14 24.6

15 95 15 24.8

-Explique, Qu son las superficies pticas equivalentes y el dimetro interno equivalente?

Las superficies pticas equivalentes de un conjunto de cubetas son aquellas que estn
libres de imperfecciones en la superficie, poseen una superficie homognea, paredes de
igual grosor, desvan la luz y producen efectos pticos idnticos o similares. El dimetro
interno equivalente se refiere a que la luz atraviese la misma distancia en todas las celdas,
es decir, que el paso de luz sea el mismo en todos los tubos.

Tabla 2. Curva de calibracin de Fe+3 por el mtodo de NH4SCN.

Ejemplo del clculo de la A ajustada

(Concentracin del ion Fe+3)(Pendiente)
(0.0697)(0.1502): 0.0101

Tubo No. Fe3+ (g/mL) A480 A ajustada por regresin

lineal

1 0 0 0

2 0.0697 0.005 0.0104

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3 0.1743 0.024 0.0261

4 0.3487 0.076 0.0523

5 0.6974 0.112 0.1011

6 1.0461 0.183 0.1571

7 2.4411 0.420 0.3666

8 3.8360 0.620 0.5761

9 5.2309 0.847 0.7856

10 6.6258 1.059 0.9951

11 8.0207 1.265 1.2047

12 9.4157 1.410 1.4142

13 10.8106 1.594 1.6237

Curva de calibracin de fe+3 por el mtodo del

NH4SCN
1.8

1.6
y = 0.1502x + 0.025
1.4
R = 0.9971

1.2
Absorbancia

1
Fe+3, curva de calibracin
0.8
Linear (Fe+3, curva de
0.6
calibracin )
0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12
Concentracion de Fe3+ (g/mL)
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-Sigue esta reaccin la ley de Bouger y Beer? Explique.

Podemos concluir que el coeficiente de correlacin de la curva de calibracin se aproxima
al valor de uno, todos los puntos siguen una tendencia lineal, por lo cual existe una
relacin de proporcionalidad entre la absorbancia y la concentracin del in frrico y por
lo tanto se cumple con la ley de Bouger y Beer.

-Comente acerca de la sensibilidad del mtodo, el intervalo de concentracin y escala de

lectura til del aparato.
Como sabemos el valor de la pendiente determina la sensibilidad del mtodo, en este caso
se tiene una pendiente con un valor de 0.1502, es decir, se produce un cambio de
absorbancia de 0.1502 por cada incremento de concentracin de analito de una unidad (1
g/mL). Con respecto al Intervalo de concentracin, se tiene que este va de 0.06973-
10.8106 g/mL de in frrico, que corresponde al intervalo donde se obedece la ley de
Bouger y Beer; la escala til de absorbancia es de 0.005-1.594.

Tabla 3.1 Mtodo de Ringbom para determinar el %Ep.

Tubo No. Fe3+ (g/mL) Log(Fe3+) A480 %T Absorbancia

1 0 0 0 0 0

2 0.0697 -1.1567 0.005 98.85 1.15

3 0.1743 -0.7587 0.0246 94.49 5.51

4 0.3487 -0.4575 0.076 83.94 16.06

5 0.6974 -0.1565 0.112 77.26 22.74

6 1.0461 0.0195 0.183 65.61 34.39

7 2.4411 0.3875 0.420 38.01 61.99

8 3.8360 0.5838 0.620 23.98 76.02

9 5.2309 0.7185 0.847 14.22 85.78

10 6.6258 0.8212 1.059 8.72 91.28

11 8.0207 0.9042 1.265 5.43 94.57

12 9.4157 0.9738 1.410 3.89 96.11

13 10.8106 1.0338 1.594 2.54 97.46

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Metodo de ringbom para determinar el % Error

120

100

80
Absorbancia

60
% Error

40

20

0
-1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5
Log(Fe3+)

* Intervalo de Fe3+ [0.0195-0.7185] su absorbancia [34.39-85.78]

Ya que en esta parte el intervalo se mantiene en una relacin lineal entre A y el Fe3+
cumpliendo con la ley de Bouger y Beer.
* Determinacin de la pendiente:
m: 73.51 %Error: 230.3/73.51
%Error: 3.1329
Tabla 3.2 Lmite de deteccin del mtodo
Numero Fe3+ (g/mL) Y Yi (y-yi)2

1 0 0 0 0

2 0.0697 0.005 0.0104 0.00002916

3 0.1743 0.0246 0.0261 0.00000225

4 0.3487 0.076 0.0523 0.00056169

5 0.6974 0.112 0.1011 0.00011881

6 1.0461 0.183 0.1571 0.00067081

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7 2.4411 0.420 0.3666 0.00285156

8 3.8360 0.620 0.5761 0.00192721

9 5.2309 0.847 0.7856 0.00376996

10 6.6258 1.059 0.9951 0.00408321

11 8.0207 1.265 1.2047 0.00363609

12 9.4157 1.410 1.4142 1.764E-05

13 10.8106 1.594 1.6237 0.00088209

: 0.01855048

Sy/x = (0.01855048/13-2)^1/2: 0.04106

Curva de calibracion entre Observada y calculada(LDD)

1.8 y = 0.1502x + 0.025
1.6 R = 0.9971

1.4
1.2
Absorbancia

1
Y
0.8
Yi
0.6
Linear (Y)
0.4
0.2
0
0 2 4 6 8 10 12
Concentracin Fe3+

LDD=3SBb
LDD= (3)( 0.04106)/(0.1502)= 0.8201 g/mL Fe3+
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Tabla 4. Efecto del tiempo en la estabilidad del color

Tiempo (min) A480

0 0.964

30 0.911

60 0.869

90 0.827

120 0.703

Estabilidad del color con respecto al tiempo

1.2

0.8
Absorbancia

0.6
Estabilidad del color con
respecto al tiempo
0.4

0.2

0
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo

-Es el color estable?

No, ya que se observa que el color va disminuyendo con respecto al tiempo
-Cul es el tiempo ptimo para hacer las lecturas?
Entre los 60 y 120 minutos, ya que en este intervalo es donde se observa menor variacin
entre los datos.
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Tabla 5. Efecto de la concentracin de SCN- en la determinacin de Fe3+

Tubo No. SCN- (g/mL) Fe3+ (g/mL) SCN/Fe3+ A480

1 0 0 0 0

2 145 20.925 86.752 0.132

3 713 20.925 231.338 0.247

4 2204 20.925 867.521 0.428

5 3248 20.925 2891.736 0.588

6 5307 20.925 5783.47 0.621

7 12180 20.925 8675.205 0.705

8 17980 20.925 11566.94 0.764

9 24563 20.925 14458.67 0.760

Efecto de la concentracin de SCN- en la

determinacin de Fe3+
0.9

0.8

0.7

0.6
Absorbancia

0.5

0.4 Efecto de la concentracin de

SCN- en la determinacin de Fe3+
0.3

0.2

0.1

0
0 5000 10000 15000 20000
SCN/Fe3+
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-Qu concertacin de tiocianato recomienda?
Se recomienda una concentracin saturada de tiocianato, porque se observ en la grfica
que a concentraciones muy altas en nuestro caso a partir de 8675.205 se da la mayor
absorbancia por parte del complejo colorido.

Tabla 6. Efecto del pH en el desarrollo de color de la reaccin entre el Fe3+ y el SCN-.

Tubo No. pH A480

1 - -

2 1 0.808

3 1 0.918

4 1 0.907

5 6 0.013

6 8 0.012

Efecto del pH en el desarrollo de color de la reaccin entre el Fe3+ y el

SCN-.
1.2

0.8
Absorbancia

0.6
Efecto del pH en el desarrollo
de color de la reaccin entre el
0.4 Fe3+ y el SCN-.

0.2

0
0 2 4 6 8 10

-0.2
pH
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-De qu manera influye el pH en el sistema colorido?
La forma en la que el pH influye en el sistema es un pH cido favorece la reaccin al haber
una concentracin de H+ en el medio, sin embargo, conforme aumenta el pH, la
concentracin de OH se va incrementando y al ser ms electronegativo este in, compite
con el SCN- formando un producto de reaccin diferente al deseado.
Cul es el pH recomendado para que se efectu la reaccin?
El pH recomendado es de 1 a 3, ya que observamos los puntos ms altos de absorbancia
en estos valores de pH.

Tabla 7. Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta

Anin A480 Inicial A480 Final

Fluoruro 0.893 0.885

Oxalato 0.915 0.201|

Tartrato 0.895 0.551

Fosfato 0.903 0.840

Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta

1
0.9
Fluoruro inicial
0.8
0.7 Fluoruro final
Absorbancia

0.6 Oxalato inicial

0.5
Oxalato fianal
0.4
0.3 Tartrato inicial
0.2 Tartrato fianal
0.1
0 Fosfato inicial
1 Fosfato final
Anin

Cul es el efecto de los diferentes aniones sobre la reaccin entre el in frrico y el

tiocianato?
El efecto es una competencia entre algunos aniones, como el tartrato y oxalato por el
hierro mientras que el fluoruro y el fosfato no presentan algn efecto.
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A qu se debe ese efecto?

A la diferencia de electronegatividades, mientras mayor sea la electronegatividad del
anin en comparacin con la del SCN-, se favorecer el desarrollo otra reaccin a la que se
quiere estudiar.

Tabla 8. Parmetros ptimos para el mtodo del tiocianato de amonio para determinar
iones frricos.

Parametro Valor Optimo

pH
Tiempo
Concentracin de SCN-
Lmite de concentracin con % Ep minimo
Aniones que interfieren (en orden
creciente)
Lmite de deteccin del mtodo (LDD)
1-3
60 y 120 minutos
Una concentracin saturada de tiocianato, porque
se observ en la grfica que a concentraciones muy
altas en nuestro caso a partir de 8675.205 se da la
mayor absorbancia por parte del complejo colorido.
3.13%
Tartrato y Oxalato
0.8201 g/mL Fe3+

Discusiones
Empezamos con la seleccin de los tubos para ser usados como cubetas y se toman como
criterios el que la superficie de los mismos sea homognea y de igual grosor, para que de
esta manera se produzca una dispersin de la luz anloga en todos los tubos, esto se logr
al fijar un valor de transmitancia arbitrario (%T=95) de tal forma que la lectura del aparato
no fuera mayor a 2%T. En nuestro caso los 20 tubos seleccionados entraron en los
criterios ya mencionados, una vez realizado esto se procedi a realizar una curva de
calibracin de fe3+ por el mtodo de NH4SCN donde existe una tendencia lineal en la
curva tipo, as que podemos decir que la curva cumple la ley de Bouger y Beer, lo que
podemos comprobar observando la ecuacin obtenida a partir del grfico, en particular el
valor de R2 o sea del coeficiente de correlacin el cual es muy cercano a uno. Para
el mtodo de ringbom se determinar el intervalo ptimo de concentraciones y se realiz la
linealizacin de la curva para marcar el intervalo ptimo de concentraciones y obtener la
ecuacin de la recta para el clculo del error fotomtrico que fue de 3.13% lo que nos
indica que se realiz un trabajo aceptable ya que el porcentaje del error fotomtrico debe
de ser menor o igual al 5% porque ese es el error que manejan los espectrofotmetros
que se encuentran para uso en el laboratorio.
El lmite de deteccin del analito se puede definir como la concentracin de analito que
proporciona una seal igual a la seal del blanco ms tres veces la desviacin estndar del
blanco. Esto nos sirve para calcular la concentracin mnima de analito que puede
detectar nuestro mtodo espectrofotomtrico, el cual se calcul mediante la desviacin
estndar del blanco y al sustituirlo en la ecuacin se encontr que este es de 0.8201
g/mL.
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Una vez realizado esto se procedi a estudiar algunos factores que afectan el diseo de un
mtodo espectrofotomtrico, entre los cuales se tienen los siguientes:
-Estabilidad del color en funcin del tiempo: la formacin de color se llev a cabo de
manera rpida experimentando un desvanecimiento al incrementarse el tiempo de
reposo, probablemente debido a la descomposicin por la luz y/o por el calor, por lo cual
no es estable el color. Lo ideal sera que la reaccin de formacin de color sea rpida para
que los resultados analticos puedan obtenerse con rapidez, y que las especies coloreadas
sean estables con el tiempo de forma que no sea necesario realizar el anlisis en un
tiempo prefijado.
-Efecto de la concentracin del cromgeno: se encontr que la concentracin de
tiocianato ptima para esta reaccin debe ser una concentracin saturada de tiocianato,
porque se observ en la grfica que a concentraciones muy altas en nuestro caso a partir
de 8675.205 se da la mayor absorbancia por parte del complejo colorido ya que a esta
concentracin la reaccin es prcticamente completa al haber cantidades
estequiomtricas de los reactivos, provocando que la adicin de ms cromgeno de cmo
resultado pequeos incrementos de la absorbancia. Si por el contrario, la reaccin no es
completa, la adicin de cantidades crecientes de cromgeno, desplazar el equilibrio hacia
la formacin de ms especie coloreada, provocando un aumento en la absorbancia.
-Efecto del pH: En nuestro caso el pH ptimo para que se lleve a cabo la reaccin es de 1-
3, al ir aumentando el pH, se incrementa la cantidad de OH en el medio y al ser esta
especie ms electronegativa que el tiocianato se favorece otra reaccin a la que se
pretende estudiar. Cuando el control de pH es muy crtico se deben utilizar soluciones
reguladoras, o bien, ajustar el pH al valor deseado con ayuda de un potencimetro.
*Efecto de algunos aniones: En este caso la diferencia de electronegatividades de algunos
aniones produce reacciones indeseables que modifican la formacin del color; tal es el
caso del Tartrato y del oxalato que al ser ms electronegativos que el tiocianato,
reaccionan con el Fe3+ originando otra sustancia con coloracin diferente. En el caso del
fosfato y fluoruro se produce una disminucin pequea en la absorbancia, ya que la
mayor parte del fierro reacciona con el tiocianato y esto nos indica que no hay una gran
diferencia en electronegatividades entre estos dos aniones.

Conclusiones
Es posible usar tubos normales de ensaye como cubetas siempre y cuando
cumplan con ciertas caractersticas.
Los parmetros que pueden interferir en un mtodo espectrofotomtrico son: pH,
tiempo, temperatura, concentracin del cromgeno, etc
La grfica de Ringbom permite determinar los lmites de concentracin donde se
presenta el mnimo error fotomtrico.
Bibliografa

Ayres. G.H. 1970. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Harla. Mxico,
D.F. Pp. 475-488.
Miller, J.C & J.N. Miller. 2002. Estadstica y Qimiometra para Qumica Analtica. 4
edicin. Editorial Prentice Hall. Mxico, Pp. 125-130.