DGEST ITM SEP

INSTITUTO TECNOLGICO DE MORELIA

Jos Mara Morelos y Pavn

TURBIDIMETRA
Y
NEFELOMETRA

Qumica analtica II
Eliel Rafael Romero Gracia

INGENIERA BIOQUMICA

5st SEMESTRE

MARA CRISTINA VIEYRA BRAVO

No control: 09120036

Mircoles 04 de Mayo del 2011

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 Contenido
INTRODUCCIN............................................................................................................................................................. 3

Cmo diferenciar la turbidimetra y la nefelometra? ............................................................................ 5

DEFINICIONES ............................................................................................................................................................... 6

Turbidimetra ............................................................................................................................................................ 6

Nefelometra .............................................................................................................................................................. 6

Eleccin entre turbidimetra y nefelometra ................................................................................................ 7

TURBIDIMETRA ........................................................................................................................................................... 8

Dispersin de la radiacin por partculas en disolucin ......................................................................... 8

Turbidimetra fundamento .................................................................................................................................. 8

Turbidmetros ........................................................................................................................................................... 9

NEFELOMETRA ......................................................................................................................................................... 10

Procedimiento analtico .......................................................................................................................................... 11

Relacin matemtica ........................................................................................................................................... 12

Nefelmetro ............................................................................................................................................................ 13

TURBIDIMETRA VS NEFELOMETRA .............................................................................................................. 14

Tamao de las partculas dispersantes........................................................................................................ 14

Seleccin de la longitud de onda..................................................................................................................... 14

Preparacin de la muestra ................................................................................................................................ 14

APLICACIN ................................................................................................................................................................. 15

Imunoprecipitacin.............................................................................................................................................. 15

Inmunodifusin radial ........................................................................................................................................ 15

Inmunodifusin doble o tcnica de Ouchterlony..................................................................................... 16

CONCLUSIN ............................................................................................................................................................... 17

REFERENCIAS ............................................................................................................................................................. 17

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 INTRODUCCIN

Los mtodos pticos de anlisis cubren un amplio campo de aplicaciones debido a su rapidez,
a la gran gama de instrumentacin disponible y sus grandes posibilidades de automatizacin.

Los mtodos no espectroscpicos son aquellos en los que no hay intercambio de energa, sino
cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica

La dispersin de radiacin es un fenmeno fisicoqumico al incidir una radiacin sobre una

superficie slida, lquida o gaseosa y ser dispersa en diferentes direcciones debido a la
difraccin y reflexin de la radiacin por las distribucin y orientacin de las molculas sobre
las cual inside la radiacin.

Cuando un haz de luz choca con una partcula en suspensin parte de la luz se dispersa, parte
de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe. La dispersin de la luz depende de: la longitud
de onda de la luz, del tamao de la partcula y del ndice de refraccin de la partcula en
relacin con el medio que la rodea.

La dispersin de la luz se puede medir por turbidimetra o por nefelometra.

La turbidimetra mide la disminucin de la luz transmitida a travs de una suspensin de

partculas utilizando para ello un espectrofotmetro (detector en la misma direccin del haz
de luz, se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una
buena disminucin de la luz transmitida) ejemplo:

- Determinacin de protenas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las protenas
precipiten con TCA o cido sulfosaliclico).

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La nefelometra: mide la luz dispersada en direccin distinta a la luz emitida (generalmente
con ngulos que oscilan entre 15 y 90). Utiliza como instrumento el nefelmetro en el que el
detector se ubica con un ngulo que oscila entre 15 y 90 ejemplo:

- A 90). Se suele utilizar para concentraciones ms diluidas.

La turbidimetra y la nefelometra tienen una gran variedad de aplicaciones y permite trabajar

con muestras gaseosas, liquidas e incluso con slidos transparentes. La formacin de
precipitados difciles de filtrar, como por ejemplo los gelatinosos o los de tamao de partcula
muy pequeo, suelen proporciona suspensiones ideales para la aplicacin de tcnicas basadas
en la dispersin de la luz que sustituye a las tcnicas gravimtricas. Este tipo de aplicaciones
son frecuentes en laboratorios analticos, laboratorios clnicos y en plantas de procesos. Uno
de los principales campos de aplicacin reside en estudios de polucin de aire y agua, donde

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las dos tcnicas se usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de aguas
potables, efluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de aguas ambientales.

Las medidas de dispersin de la luz se utilizan tambin para determinar la concentracin de

humos, polvo, niebla, aerosoles, etc.

A pesar de que los trminos turbidimetra y nefelometra suelen restringirse a aquellas

aplicaciones en las que se mide la concentracin de partculas en suspensin existen tambin
otros tipos de aplicaciones basados en las medidas de dispersin de la luz. Entre ellas
podemos citar la determinacin de la forma y tamao de las partculas as como la de los
pesos, moleculares (especialmente en el caso de polmeros).

Cmo diferenciar la turbidimetra y la nefelometra?

Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de partculas
slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia La turbidez
es la propiedad ptica de una muestra que hace que la radiacin sea dispersada y absorbida
ms que transmitida en lnea recta a travs de la muestra. La turbidez es ocasionada por la
presencia de materia suspendida en un lquido. Hay dos mtodos para medir la turbidez de
una muestra, la turbidimetra y la nefelometra. Son dos tcnicas complementarias que se
utilizan para el anlisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.

La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la direccin de

la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en cualquier ngulo.

En la turbidimetra se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega a
la disolucin. En cambio, en la nefelometra la medida de la intensidad de luz se hace con un
ngulo de 90 con respecto a la radiacin incidente. El instrumento usado en la nefelometra,
el nefelmetro se asemeja al fluormetro. En cambio en turbidimetra se utiliza el
turbidemetro que es un fotmetro de filtro.

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 DEFINICIONES

Turbidimetra

Es un mtodo en el que se mide la disminucin de la potencia de la radiacin transmitida

debido a la dispersin. Se mide en un espectofotmetro UV/Vis.

Para determinar la concentracin del analito mediante este mtodo aplicamos:

En donde T es la transmitancia medida , es la intensidad de la fuente de radiacin

transmitida, es la intensidad de la radiacin de la fuente transmitida por un blanco. La
relacin entre y la concentracin de las partculas dispersas es similar a la proporcionada
por la ley de Beer:

Siendo la concentracin de las partculas dispersantes expresada como masa por unidad de
volumen; es la longitud del camino ptico y es una constante que depende de varios
factores: tamao, forma de las partculas dispersantes y la longitud de onda.

Nefelometra

Es un mtodo para medir la intensidad de una radiacin dispersa en un ngulo de 90 C con

respecto a la fuente. Se mide en un espectrofluormetro.

Para determinar la concentracin de analito en este mtodo aplicamos:

Donde es una constante emprica del sistema, es la intensidad de la fuente de radiacin

incidente. El valor de depende de una curva de calibracin preparada, usando una serie de
patrones de concentracin conocida.

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Eleccin entre turbidimetra y nefelometra

La eleccin entre turbidimetra y nefelometra viene dada por dos factores:

- Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la radiacin

procedente de la fuente. Cuando la concentracin de partculas dispersantes en la
disolucin es pequea, ser muy similar a . Por lo que la mejor eleccin cuando la
muestra contiene pocas partculas dispersantes es la nefelometra. La turbidimetra es
una buena tcnica para cuando las muestras contienen grandes concentraciones de
partculas dispersantes.
- Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de la radiacin
dispersada a 90C es mayor si las partculas son bastante pequeas para que se
produzca una dispersin Rayleigh. Si las partculas son mayores la intensidad de la
dispersin disminuir a 90C. En turbidimetra la seal consiste en la disminucin
relativa de la radiacin transmitida, por lo que el tamao de las partculas
dispersantes es menos importante.

Generalmente, nefelometra y turbidimetra se utilizan en el anlisis de la calidad qumica del

agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento. Tambin se
utilizan para la determinacin de iones sulfato.

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 TURBIDIMETRA

Dispersin de la radiacin por partculas en disolucin.

Cuando un haz de luz monocromtica, de longitud de onda no absorbible choca contra las
partculas de una sustancia que est en suspensin, cambia la direccin de propagacin del
haz de luz (en realidad slo cambian de direccin algunos fotones del haz). Este efecto es
usado para determinar la presencia de un analito en suspensin ya que ese cambio de
direccin del haz y de su intensidad depende de muchos factores que una vez relacionados y
cuantificados permiten obtener los valores buscados.

Cuando un haz de radiacin monocromtica de una longitud de onda determinada , es

enfocada sobre un medio que contiene partculas de dimensiones menores a 3/2 , se
observa dispersin de radiacin en todas las direcciones del espacio. Si la partcula presenta
mayores tamaos, la radiacin puede ser reflejada o refractada. Existen dos tipos de
dispersin:

1. Elstica: radiacin es absorbida por el analito y reemitida sin cambios en la energa

de la radiacin. Es el caso de la dispersin Raileigh o las dispersiones de grandes
partculas.

2. Inelstica: la radiacin es absorbida y reemitida con cambios en su energa.

Turbidimetra fundamento

La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de visible o violeta. Cuando la

concentracin de partculas en suspensin se mide por turbidimetra, la suspensin se pone
en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite realizar las medidas de las energa
incidentes y transmitidas. La fuente de radiacin ms frecuentemente usadas es la lmpara de
wolframio, pero pueden utilizarse otras fuentes de radiacin visible. Si ponemos en la cubeta
suspensiones coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultados
dando valores excesivamente altos. Los Turbidmetros pueden incorporar cualquier detector
que sea sensible a la longitud de onda transmitida.

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Existe una relacin matemtica determinada experimentalmente:

Donde:

P: es la energa de la radiacin transmitida.

P: es la energa de la radiacin incidente.
b: espesor de la cubeta.
C: concentracin de partculas disertantes por unidad de volumen.
f : constante que depende del tamao partcula y longitud de onda.

Si aplicamos logaritmos, el trmino , es lo que se conoce como turbidez. Si a ese

logaritmo se le denomina como , sabiendo que T= It/Io=P/P` ; entonces,
deducido de la expresin anterior, y tomando como una constante, tenemos que:

Turbidmetros

Casi todas las medidas turbidimetricas se realizan con colormetros o espectrofotmetros

ordinarios. Tambin pueden usarse instrumentos visuales sencillos, tales como el
trubidmetro Parr o el colormetro Duboscq.

La presente imagen representa el esquema de un trubidmetro, el Du Pont Modelo 430. Este

turbidmetro, que es mucho ms sensible que los Turbidmetros ordinarios para
concentraciones bajas de materia en suspensin, se basa en el hecho de que la dispersin
provoca un cambio en el plano de polarizacin de la luz.

Diagrama esquemtico de un
trubidmetro Du Pont modelo
430.

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El haz incidente se convierte en luz polarizada en un plano mediante el polarizador primario.
Despus de atravesar la muestra el haz se divide en dos, mediante un espejo semi-plateado, y
se detecta con dos fototubos separados. Cuando la disolucin de la muestra no tiene partculas
en suspensin, la fotoclula 1 da una respuesta mxima y la fotoclula 2 da una respuesta
mnima nula. La relacin entre la seal 2 y la seal 1 es una media de la concentracin de las
partculas en suspensin. Al aumentar la concentracin de las partculas en suspensin en la
muestra, aumenta la seal de la fotoclula 2 y disminuye la de la fotoclula 1 y por esto la
razn de las dos seales permite una medida sensible de la turbidez. Este sistema de doble
haz minimiza el problema debido a la absorcin por las partculas de la disolucin pero tiene
el inconveniente de que no puede usarse cuando la disolucin contiene sustancias
pticamente activas. Este instrumento puede usarse tanto para muestras individuales como
para control en continuo de corrientes de fluidos.

NEFELOMETRA

Se basa en la deteccin de los complejos Ag-Ab, por la refraccin que dichos complejos
producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antgeno y el anticuerpo
correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos lser y se establece una relacin entre la
cantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.

La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la radiacin que

atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que
existe una suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante,
solo es afectada la direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la
misma en cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas suspendidas,
su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del medio dispersante, y la
longitud de onda de la radiacin dispersada. La relacin entre variables y es ms factible un
tratamiento terico, pero debido a su complejidad raras veces se aplica a problemas analticos
especficos.

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El procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3 factores:

1. La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.

2. Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla,

concentracin de los reactivos, duracin del estado de reposo y la fuerza inica.

3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si
estn coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico en la que
la absorcin del medio se reduzca al mnimo.

En las muestras se agregan agentes tensoactivos (como gelatina), para prevenir la coagulacin
del coloide. Slo se obtienen datos confiables si se controlan escrupulosamente las variables
que afectan el tamao de partculas.

Procedimiento analtico

Se basa en la dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz
atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersin no
supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la direccin de la propagacin,
porque la intensidad de la radiacin es la misma en cualquier ngulo. La intensidad depende
de: el nmero de partculas sus pendidas, su tamao, su forma, los ndices refractivos de la
partcula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. Cuando la
concentracin de una suspensin de partcula es baja es preferible medirla por este mtodo.
En este caso la suspensin se coloca en una cubeta colocada como se muestra en la figura
siguiente.

Fuente Filtro Cubeta Detecto

|
r

El instrumento permite la medida de la intensidad de la dispersin S, la cual est relacionada

con la concentracin. Las fuentes de radiacin que se utilizan son de lser helio-nen,
lmparas de halgenos y lmparas de xenn, siendo el ms frecuente el primero.

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Este consiste en un tubo largo y estrecho en el cual se introduce una mezcla de gas formada
por 7 partes de helio y 1 parte de nen al que se le aplica un voltaje para producir una
descarga elctrica.

Relacin matemtica
La relacin matemtica entre la intensidad de dispersin, S y la concentracin de partculas
suspendidas es raramente utilizada es suficiente con saber que existe una relacin lineal entre
ellas a bajas concentraciones. Sin embargo la relacin matemtica que cumplen es

Donde:

C: es la concentracin en%

: es la radiacin dispersada

: es la radicacin de la fuente incidente

: es una constante

|
P
Fuente C Cu Cr
ngulo

S
Tf
C: filtro
Cu: cubeta (v. superior)

Cr: colector de radiaciones negro

Tf: tubo fotomultiplicador

El valor del ngulo oscila entre 30 y 70, su valor depende de la aplicacin especfica
seleccionada.

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Nefelmetro

Un nefelmetro es un instrumento para medir

partculas suspendidas en un lquido. Esto lo hace
empleando una fotocelda colocada en un ngulo
de 90 con respecto a una fuente luminosa.
La densidad de partculas es entonces una
funcin de la luz reflejada por las partculas a la
fotocelda. Cuanta ms luz se refleje en una
determinada densidad de partculas depende de
las propiedades de las partculas como su forma,
color y reflectividad. Estableciendo a una
correlacin de trabajo entre turbidez y slidos
suspendidos (que ms til, pero generalmente
una ms difcil de cuantificacin de partculas)
debe ser establecido independientemente para
cada situacin.

A los nefelmetros usados en las pruebas de calidad del agua, comnmente se les
llaman turbidmetros. Sin embargo, pueden haber diferencias entre los modelos de
turbidmetros, dependiendo del arreglo geomtrico de la fuente luminosa con respecto a la
fotocelda. Un turbmetro nefelomtrico siempre monitorea la luz reflejada por las partculas y
no la atenuacin debida a la turbidez.

Nefelmetro C-102

Este nefelmetro realiza un anlisis de agua casi completo: cloro libre y

total, bromo, pH, hierro, yodo y cido cianrico. En el modo de medicin
de turbiedad puede elegir entre los valores de calibracin dados o los
valores definidos por el usuario. Por medio del reloj de tiempo real
integrado puede recuperar presionando la tecla los ltimos datos de
calibracin. En el rango de medicin de turbiedad se puede poner un
punto de calibracin libre entre 0,0 y 50,0 NTU (NTU Nephelometric
Turbidity Unit = FTU Formazin Turbidity Unit / Ratio 1:1). La turbiedad
se mide con el mtodo USEPA.

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 TURBIDIMETRA VS NEFELOMETRA

Tamao de las partculas dispersantes

Para nefelometra, la intensidad de la radicacin dispersada a 90 ser mayor cuanto menos

sea el tamao de las partculas. Para partculas mayores, la intensidad de la dispersin a 90
disminuye. Cuando se usa una fuente de radicacin de UV/VIS, el tamao de partcula optimo
para nefelometra es de 0.1 a 1 m. para turbidimetra, fenmeno menos dependiente de la ,
en cambio el tamao de las partculas es menos importante; en este caso la seal es la
disminucin relativa de la radiacin trasmitida. De hecho, las medidas turbidimetricas son
aun posibles cuando el tamao de las partculas dispersantes producen un aumento de la
reflexin y refraccin (aunque la relacin lineal entre la seal y la concentracin de las
partculas dispersantes no puede mantenerse mucho ms).

Seleccin de la longitud de onda

Con esta seleccin se minimiza las posibles interferencias

1. Turbidimetria: como se mide la radiacin trasmitida a travs de la muestra, es

necesario evitar la absorcin de la radiacin por la muestra.
2. Nefelometra: la absorcin de la radiacin incidente no es un problema excepto su
induce fluorescencia en la muestra. Sin una muestra fluorescente no hay necesidad de
seleccin de , y puede usarse una fuente de luz blanca.

Preparacin de la muestra

La intensidad de la radiacin dispersada est influenciada por la forma y tamao de las

partculas. Para un anlisis cuantitativo es necesario, por lo tanto mantener la distribucin de
las partculas uniformemente en la muestra y los patrones. La mayora de los mtodos de
turbidimetra y nefelometra depende de la formacin de partculas por precipitacin.

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 APLICACIN

Imunoprecipitacin

La imunoprecipitacin cuantificada por turbidimetra o nefelometra se emplea hoy en ls

laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumtide.

- Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partculas que produzcan una
dispersin de luz no deseada ej. lipoprotenas, quilomicrones Tambin puede
interferir la suciedad.
- La intensidad de la luz dispersada. Las protenas suelen tener un pico de absorcin en
el ultravioleta y los cromgenos del suero entre 400-425nm; por todo ello se suele
trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.

Muy frecuentemente, para cuantificar protenas concretas, se utilizan anticuerpos que

reaccionan con dichas protenas de la muestra, en este caso se habla de inmunoturbidimetra
e inmunonefelometra.

Cuando se ponen en contacto un Ag y un Ac especfico contra ese antgeno ambos reaccionan y

forman un complejo Ag-Ac. Inicialmente los complejos se forman rpidamente pero, existe
una segunda fase de crecimiento de complejos ms lenta y, es precisamente en sta fase en la
que aparece la dispersin de la luz. As, en la inmunoturbidimetra e inmunonefelometra se
mide la dispersin de la luz provocada por los complejos Ag-Ac. En ocasiones los Ac se unen a
bolitas de ltex para aumentar el tamao de los complejos (inmuno-anlisis potenciados).

La inmunoprecipitacion, se utilizan partculas de ltex recubiertas con IgG. Existen muchos

equipos comerciales para como analizadores automticos de bioqumica o nefelmetros
automticos, y sus mtodos estn estandarizados con calibradores que se basan en
preparaciones de referencia.

Inmunodifusin radial
En este caso se aade un antisuero especfico a la agarosa que, a su vez, se vierte sobre placas.
Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estndares de protenas y problemas
(antgenos). El antgeno difunde en el gel durante varias horas y va reaccionando con el Ac. En
la zona de equivalencia se produce un anillo de precipitacin

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Inmunodifusin doble o tcnica de Ouchterlony

Se forman pozos en el gel de agarosa, generalmente en patrn de roseta. Sedepositan

antisueros especficos en los pozos centrales y los estndares de protenas y los problemas en
los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el gel, donde el anticuerpo y el antgeno
alcanzan la equivalencia, se forman bandas de precipitados insolubles. La posicin y forma de
la banda se determinan segn la concentracin del antgeno y del anticuerpo, y sus tamaos.
La distancia de las bandas con respecto al anticuerpo es directamente proporcional a la
cantidad de antgeno presente.

Determinacin de protenas en orina y de anticuerpos en suero

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 CONCLUSIN

Los mtodos pticos de anlisis cubren un amplio campo de aplicaciones dentro de las
Tcnicas basadas en la dispersin de radiacin tenemos la turbidimetra y la nefelometra. Las
cueles nos regularmente utilizadas en control de calidad, pero gracias al avances de diversas
maquinarias, nos es posible poder aplicar estos mtodos de anlisis dentro de otras ramas
cientficas, ya sean salud o investigacin.

Estas dos tcnicas estn basadas generalmente en la formacin de un precipitado, del cual se
parte para el anlisis.

Ambas tcnicas permiten la descripcin y anlisis ptico una muestra. Y el uso de estas
tcnicas de investigacin depende de las necesidades del investigador. Las diferencias entre
las dos tcnicas son especificas y permiten le anlisis desde dos campo de la ptica muy
importante dentro de los laboratorios. La turbidimetra y la nefelometra se acoplan para un
mejor enfoque del anlisis.

REFERENCIAS

L. Hernndez, C. Gonzlez, Introduccin al Anlisis Instrumental. Editorial: Ariel

Ciencia (2002)
R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, Anlisis de los Alimentos. Editorial Acribia. S.A
McPherson RA, Pincus MR, eds. Henry's Clinical Diagnosis and Management by
Laboratory Methods. 21st ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2006.
http://webs2002.uab.es/ipividori/qca%20analii/T7.pdf
Florkin, M. y Stotz, E., Comprehensive Bichemistry, Vol 3, Methods for the Study of
Molecules, Amsterdam, Elservier, 1963.
Van Holde, K. E., Physical Biochemistry, Englewood Cilffs; N. J., Preentice Hall, 1971.

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