Calibración Espectrofotometros

Curso de Calibración de Espectrofotómetros UV-Vis
Curso de Calibración de
Espectrofotómetros
Ultravioleta-Visible
• Guillermo Valencia Luna
Laboratorio de Propiedades Ópticas de los

Materiales
Dirección de Óptica y Radiometría
Dirección General de Metrología Física
Centro Nacional de Metrología
km 4.5 carretera a los Cués.
El Marqués, Querétaro.
(442) 2-11-05-00
PROPOSITO
Este curso permite al CENAM transferir el conocimiento

relacionado con la calibración de espectrofotómetros UV-Vis a
todo aquel usuario que requiere de evaluar el funcionamiento
de su instrumento y determinar la incertidumbre de medida.
IMPORTANCIA
La falta de normas y guías referentes a la calibración de espectrofotómetros

UV-Vis, origina que los usuarios de estos instrumentos acepten servicios de
pruebas diversas, que algunas veces no son suficientes para determinar el
funcionamiento de su instrumento y determinar la incertidumbre de medida.
Los conocimientos y habilidades adquiridas en este curso permitirán a los
usuarios de los espectrofotómetros UV-Vis establecer un proceso de
calibración y estimar la incertidumbre de la calibración.
También permite aquellos asistentes interesados en esquemas de acreditación
que puedan generar evidencia y observen la aplicación de la guía ISO 17025 o
NMX-EC-17025-IMNC para la calibración del instrumento.
OBJETIVO
Al finalizar el presente curso el asistente tendrá los conocimientos sobre

los métodos, instrumentos, materiales de referencia; elementos
necesarios, que le permitirán desarrollar las competencias técnicas para
realizar la calibración de un espectrofotómetro UV-Vis y estimar la
incertidumbre de la calibración.
CONTENIDO
UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis.
Lección 1 Vocabulario, símbolos, definiciones y breve repaso de la teoría.
UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis.
Lección 1 Partes principales del espectrómetros UV-Vis.

Lección 2 Características de los espectrómetros UV-Vis.
UNIDAD 3 Calibración del espectrofotómetro UV-Vis.
Lección 1 Términos básicos de metrología.

Lección 2 Variables de influencia en la medición realizada por el instrumento.
Lección 3 Materiales de referencia certificados empleados en la calibración.
Lección 4 Estimación de la incertidumbre de la calibración.
CONTENIDO
UNIDAD 4 Método-Procedimiento de calibración del espectrofotómetro UV-Vis.
Lección 1 Práctica de la calibración de la escala de longitud de onda.

Lección 2 Práctica de la calibración de la escala fotométrica.
Lección 3 Estimación de la incertidumbre para las calibraciones de las prácticas
de laboratorio.
UNIDAD 5 Informe de los resultados de calibración.
Lección 1 Contenido del certificado de calibración del espectrofotómetro UV-Vis.

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis
Introducción Los usuarios de las espectrofotómetros UV‐Vis suelen emplear términos y
símbolos promovidos por los fabricantes de los instrumentos que emplean un
lenguaje sin correspondencia al Sistema Internacional de Unidades, por lo que
se revisará el vocabulario, símbolos, definiciones y la teoría aplicables a las
mediciones de la técnica de análisis de Espectrofotometría UV‐Vis con la
finalidad de homologar el vocabulario empleado por los analistas de esta
técnica de análisis.
Objetivo El asistente conocerá el vocabulario, símbolos y definiciones internacionales.
El asistente repasará la teoría sobre el principio de la medición aplicables a la
técnica de análisis.
Visión general Se abordaran conceptos relacionados con la técnica instrumental acorde a

normas de la Commission Internationale de L’Eclairage (CIE) y la American
Society for Testing Materials (ASTM).
Estructura de la Lección 1. Vocabulario, símbolos, definiciones y breve repaso de la teoría.
Unidad
Unidad 1
Conceptos básicos de Espectrofotometría
UV-Vis.

Métodos Ópticos de Análisis.

Son métodos que se basan en la medición de la
radiación electromagnética que interacciona con la
materia.
9

Radiación Electromagnética.
Es la propagación de la energía a través del espacio
sin el soporte de la materia.
 Teoría ondulatoria
El comportamiento de la radiación
se atribuye a su naturaleza ondulatoria.
 Teoría cuántica
La radiación también se comporta como
pequeños haces de energía o como
partículas, llamadas fotones.
10

Longitud de onda []

Se define como la distancia
en la dirección de /
propagación de una onda
periódica entre dos puntos
: Velocidad de la luz
sucesivos cuya fase es la
misma. : Frecuencia
Equivalencias
Donde la frecuencia es 1 m = 1 000 nm = 10 000 Å = 10-4 cm = 10-6 m
definida como el número de 1 Å = 0,1 nm = 10-8 cm = 10-10 m
1 nm = 10-7 cm = 10-9 m
ciclos por segundo. La
unidad común es el Hertz.
11

Espectro Electromagnético.
10-14 10-12 10-10 10-8 10-6 10-4 10-2 10 102 104 Longitud de Onda (m)
1022 1020 1018 1016 1012 1010 108 106 104 102 Frecuencia (Hz)
Rayos Rayos X Rayos Micro Ondas de
ultravioleta Rayos
gama Ondas radio
infrarrojo
380 nm a 750 nm
Luz visible
12

Interacción de la energía con la materia.

 Fenómeno
o Transmisión
o Absorción
o Reflexión
o Refracción
o Dispersión
o Difracción
o Polarización
 Tipos de materiales
o Transparentes
o Translucidos
o Opacos
13

Teoría de absorción
E =  Eelectrónica +  Evibracional +  Erotacional +  Etranslacional
14

Transmitancia []
Magnitud que relaciona la energía
radiante que atraviesa una muestra (I)  = It / I 0
y la energía radiante que incide sobre
ella (Io).
Transmitancia regular (r) Transmitancia difusa (d)
I0 It I0 It
Material Material
transparente translucido
15

Absorbancia [A]
Es el logaritmo base 10 del inverso de la transmitancia.
A = -log10[I/I0] = -log10[] = log10[1/] = 2-log10[(%)]
16

Reflectancia []
Medida de la energía radiante que es  = Ir / I 0
parcialmente proyectada en otras
direcciones sin cambio en la frecuencia al
incidir sobre una superficie.
Reflectancia especular (e) Reflectancia difusa (d) 17


Refracción
Es el cambio de dirección que experimenta
una onda al pasar de un medio material a
otro.
Índice de Refracción [n]

Es el cociente de la velocidad de la luz
en el vacío y la velocidad de la luz
en el medio cuyo índice se calcula.
18

Espectrofotometría UV-Vis-NIR
Es un método óptico que mide directamente la luz
transmitida por las sustancias.
Refractometría
Es un método óptico que mide directamente el índice de
refracción de las sustancias.
Polarimetría
Es un método óptico que mide la rotación óptica angular
producida sobre un haz de luz polarizada linealmente al pasar
por una sustancia ópticamente activa.
19

Aplicaciones de la Espectrofotometría UV-Vis-NIR

Análisis Cualitativo 100
90
80
Transmitancia(%)
70
60
I 50
 40
30
I0 20
10
I0 I 0
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400 2600
Longitud de Onda (nm)
Análisis Cuantitativo
67
66
Transmitancia (%)
65
1
64
A  log  63
 
62
61
60
A  lC 553 553.5 554 554.5 555 555.5

556 556.5 557
20

Aplicaciones de la Espectrofotometría UV-Vis-NIR
Determinación de estructuras
Estudios cinéticos
Determinación de pesos moleculares
Valoraciones fotométricas
Determinación de fórmulas empíricas
Determinación de constantes de disociación de ácidos y bases
21
UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis
Introducción Los espectrofotómetros UV‐Vis poseen distintas características originadas por
las diversas configuraciones de diseño, las cuales determinan la exactitud e
incertidumbre de sus escalas de medición.
Objetivo El asistente conocerá las partes que componen un espectrofotómetro UV‐Vis y

sus características.
Visión general Mediante esquemas de diversos diseños de espectrofotómetros UV‐Vis se

mostrarán las partes del instrumento y las características instrumentales que
se derivan de esto.
Estructura de la Lección 1 Partes principales del espectrofotómetro UV‐Vis.

Unidad Lección 2 Características de los espectrómetros UV‐Vis.
Unidad 2
El Espectrofotómetro UV-Vis.

FOTÓMETRO
Es un instrumento provisto de filtros para seleccionar una

zona estrecha de longitudes de onda y de una fotocélula o
fototubo para medir la intensidad de la radiación.
ESPECTROFOTÓMETRO
Instrumento diseñado para medir la energía radiante o flujo

radiante transmitido, absorbido o reflejado por un material en
función de la longitud de onda de dicha energía en la región
UV-Vis.
24

COLORÍMETRO
Instrumento empleado en el análisis

de color.
Tipos: Triestímulos (máscaras,
filtros), Comparadores visuales y
Espectrofotómetros de esfera.
25

Los compartimentos de las cuales esta compuesto un

espectrofotómetro son:
1) Compartimento de lámparas (fuente de energía radiante)

2) Monocromador
3) Compartimento de muestra
4) Compartimento de detección (detector asociado a un transductor)
Detector
Fuente de Monocro_ Compartimento de

Radiación mador Muestra
26

Compartimento de Lámparas
Esta provisto de fuentes de radiación que emitan en la región

ultravioleta y visible del espectro electromagnético.
Características de fuentes de radiación:
• Deben producir un haz de radiación cuya potencia sea suficiente

para facilitar la detección y medida.
• La señal de salida de la fuente de radiación debe ser estable.
Tipos de fuentes:
• Fuentes térmicas
• Fuentes de descarga eléctrica
27

Lámpara de Tungsteno ( Fuentes térmicas)

Consiste en calentar sólidos hasta la incandescencia. La radiación es
debida a la temperatura del sólido y prácticamente independiente de su
naturaleza.
La más comúnmente usada es la de filamento de tungsteno, emite en la
zona visible e infrarrojo cercano, el alcance de longitud de onda es de
320 nm a 2500 nm.
28

Lámpara de Deuterio (Descarga eléctrica)

Se hace pasar una corriente de electrones a través de un gas y las
colisiones entre los electrones y las moléculas gaseosas provocan la
excitación electrónica, vibracional y rotacional de dichas moléculas. El
espectro emitido por gases a presiones altas es continuo.
La más comúnmente usada es la de deuterio. El alcance en el espectro
de longitud de onda es de 190 nm a 370 nm.
29

Monocromador
Es usado para aislar una franja estrecha de longitudes de onda del

amplio espectro que nos proporciona la fuente de radiación.
Componentes principales:
• Elementos de dispersión. Pueden ser:

• a)rejillas de difracción b)prismas c)filtros.
• Óptica para la formación de la imagen.
• Formado por lentes para colimar el haz
• y espejos para direccionar el haz a las
• rejillas y rendijas de salida.
• Rendijas de entrada y salida.
• Caja negra.
30

Monocromador
Respuesta Espectral de Filtro V(
Filtros de pasa banda: 100
T ra n s m ita n c ia (% T )
90
80
Se basan en la absorción selectiva 70

60
50
de las longitudes de onda. Como 40
30
son los filtros de corte y filtros de 20
10
banda 0
184 496 808 1120 1432 1744 2056 2368 2680 2992
Respuesta Espectral de Filtro de Interferencia

Filtros de interferencia:
100
90
80
Se basan en el fenómeno de
Transmitancia (T)
70
60
interferencia óptica para producir 50

40
bandas relativamente estrechas de 30

20
radiación. 10
0
200
226
252
278
304
329
355
381
407
433
459
485
511
537
563
588
614
640
666
692
718
744
770
796
822
847
873
899
31

Monocromador
Elementos Dispersores
Prismas:
Se construyen de diferentes
materiales de acuerdo a la longitud
de onda en la que serán utilizados.
Son utilizados para la dispersión de
radiación ultravioleta, visible e
infrarroja.
Rejillas:
• Rejillas de transmisión
• Rejillas de reflexión
32

Rendija
La rendija de entrada delimita la porción de
luz que será analizada y la rendija de salida
define la región de longitudes de onda que
será analizada, y en conjunto determinan el
ancho de banda espectral
33

Compartimento de muestras
Es el lugar donde se coloca la muestra.
34

Celdas
Son los recipientes en los que se van a contener

materiales líquidos.
Características
• Construidas de un material que permita

el paso de la radiación de la región
espectral de interés.
• Las ventanas perfectamente perpendiculares
a la dirección del haz planas para evitar
perdidas por reflección refracción, y estar
pulidas para evitar dispersión del haz de luz .
35

Identificación Alcance en
del material longitud de onda
UV 170 nm a 2700 nm Celdas de 10 mm de longitud del camino óptico
OG 334 nm a 2500 nm volumen 3,5 ml
NIR 220 nm a 3800 nm
PS 340 nm a 750 nm
Celdas de 20 mm y 50 mm de longitud de camino

volumen 7,0 ml y 17,5 ml
OG NIR
UV UV
UV
OG
OG UV
36

Monturas
Las portaceldas son
monturas que nos
sirven para sujetar la
celda en la que se
encuentra contenida la
muestra a medir.
Otros monturas son

aquellas que nos
permiten sujetar
muestras sólidas
translúcidas como son:
películas, vidrios,
plásticos, etc.
37

Compartimento de Detectores
Esta constituido: Por un detector, un amplificador y un dispositivo de

lectura.
Sirve para detectar y medir la radiación que es transmitida por el área
de muestra.
Características de detectores
• Sensibilidad
• Linealidad de la respuesta con la intensidad de la radiación
• Tiempo de respuesta
• Influencia de la longitud de onda en la respuesta
• Capacidad de amplificación de la señal de salida
• Estabilidad.
38

Sistema de detección
Tipos de detectores
Detectores Detectores
de fotones térmicos
• Celdas fotovoltaicas • Sulfuro de Plomo(PbS) Longitud de onda (m)
(350 nm a 750 nm) (800 nm a 3500 nm)

• Fototubos
(180 nm a 1000 nm)
• Tubos fotomultiplicadores
(180 nm a 850 nm)
•Fotodiodos de silicio
(250 nm a 1100 nm)
• Semiconductores
(800 nm a 3200 nm)
Longitud de onda (nm)
39

Clasificación de los espectrofotómetros
• Diseño óptico
• Un solo haz
• Doble haz
• Región de trabajo
• Visible
• UV-Vis
• UV-Vis-NIR
• Forma de Operarlos
• Manuales
• Automatizados
40

Espejo de la
Lámpara lámpara de
Lente hidrógeno Detector
Rendija de entrada Lámparas
Red de Cubeta de la
Espejo de la muestra o la
Rendija de salida Objetivo superficie
lámpara de referencia
de aluminio
Fototubo wolframio
Obturador
Lente
Prisma condensadora
Espejo de
entrada
Rendijas
Leva de longitudes de onda
Filtro
Espejo
colimador
41

Espectrofotómetro de arreglo de diodos
Sistema de
dispersión
Sistema de
Fuente de detección
Radiación
Compartimiento
de Muestra
42

Espectrofotómetro de LED
Fuente de Sistema de
Radiación detección
monocromática
Compartimiento
de Muestra
43

Proceso de medición
Haz simple Doble haz

•Un haz pasa a través de
la muestra al mismo
• Ajustar el medidor cuando
tiempo que otro haz pasa
no llega radiación al
a través de un blanco que
detector.
nos da la señal de
• Ajustar el medidor
referencia.
cuando llega radiación sin
• Ajustar el medidor
muestra.
cuando llega radiación al
• Medir Muestra.
detector sin muestra ni
blanco en ambas
La potencia de la fuente y la
portaceldas
sensibilidad del detector deben
• Introducir Referencia
permanecer constantes durante
y muestra en portaceldas
todo el proceso.
respectivas y realizar
medición.
44

 Espectrofotómetro UV-Vis - Especificaciones técnicas.

 Alcance operacional
 Ancho de banda espectral
 Resolución
 Exactitud
 Reproducibilidad
 Repetibilidad
 Luz extraviada
 Ruido
 Estabilidad
45

 Ejemplo de Especificaciones Técnicas Espectrofotómetro

UV-Vis.
46


UV-Vis.
47

48
UNIDAD 3 Calibración del espectrofotómetro UV-Vis
Introducción El termino “calibración” suele ser usado para hacer referencia al “ajuste” del
espectrofotómetro UV‐Vis. Ésta “calibración” no determina los errores e
incertidumbre de medición del instrumento, ya que para calibrar se requieren
patrones de referencia certificados.
Objetivo El asistente conocerá el proceso de calibración de un espectrofotómetros UV‐
Vis considerando las variables de influencia en la medición, los materiales de
referencia certificados recomendados y la estimación de la incertidumbre en la
calibración.
Visión general Mediante representaciones gráficas se mostrará la influencia en la medición
que tienen las características de los espectrofotómetros UV‐Vis, así como los
materiales de referencia certificados para evaluarlas y sus propiedades.
También, se abordara el tratamiento para representar la incertidumbre de
medida de estas características.
Estructura de la Lección 1 Términos básicos de metrología.
Unidad Lección 2 Variables de influencia en la medición realizada por el instrumento.
Lección 3 Materiales de referencia certificados empleados como patrones de
referencia en la calibración.
Unidad 3
Calibración del Espectrofotómetro UV-Vis.
UNIDAD 3 Calibración del Espectrofotómetro UV-Vis

Calibración
Conjunto de operaciones que establecen, bajo
condiciones específicas, la relación entre los
valores de una magnitud indicados por un
instrumento o sistema de medición, o los valores
representados por una medida materializada o
material de referencia y los valores
correspondientes de la magnitud, realizados por
los patrones.
51

Calibración
Operación que bajo condiciones especificadas
establece, en una primera etapa, una relación
entre los valores y sus incertidumbres de medida
asociadas obtenidas a partir de los patrones de
medida, y las correspondientes indicaciones con
sus incertidumbres asociadas y, en una segunda
etapa, utiliza esta información para establecer una
relación que permita obtener un resultado de
medida a partir de una indicación.
52

Ajuste
Operación de llevar un instrumento de medición a
un estado de funcionamiento adecuado para su
uso.
Ajuste de un sistema de medida

Conjunto de operaciones realizadas sobre un
sistema de medida para que proporcione
indicaciones prescritas, correspondientes a valores
dados de la magnitud a medir.
53

Medición
Proceso que consiste en obtener
experimentalmente uno o varios valores
que puedan atribuirse razonablemente a
una magnitud.
54

Magnitud
Propiedad de un fenómeno, de un cuerpo o
de una sustancia que se puede expresar
mediante un número y una referencia.
55

Mensurando
Magnitud que se desea medir.
NOTA. En la segunda edición del VIM y en la IEC
60050-300:2001, el mensurando esta definido
como “magnitud sujeta a medición”.
 Este es el objeto, substancia o fenómeno sobre el que
se determina una característica o magnitud específica.
 Ejemplo:
La temperatura de una muestra determinada de agua
en el punto de ebullición.
56

Valor medido
Valor de una magnitud que representa un
resultado de medida.
Indicación
Valor proporcionado por un instrumento o
sistema de medida.
57

Exactitud de medida
Proximidad entre un valor medido y un valor
verdadero de un mensurando.
Precisión de medida
Proximidad entre las indicaciones o los
valores medidos obtenidos en mediciones
repetidas de un mismo objeto o de objetos
similares, bajo condiciones especificadas.
58

Incertidumbre de medida
Parámetro no-negativo que caracteriza la
dispersión de los valores atribuidos a un
mensurando, a partir de la información que se
utiliza.
Incertidumbre de medición
Parámetro, asociado al resultado de una medición,
que caracteriza la dispersión de los valores que
podrían ser razonablemente atribuidos al
mensurando. 59

Error de medida
Error
Diferencia entre un valor medido
de una magnitud y un valor de
referencia
Error sistemático de medida
Componente del error de medida que, en
mediciones repetidas, permanece
constante o varía de manera predecible.
Error aleatorio de medida

Componente del error de medida que, en
mediciones repetidas, varía de manera
impredecible.
60

Repetibilidad
(de resultados de mediciones)
Proximidad de concordancia
entre los resultados de mediciones
sucesivas del mismo mensurando
realizadas bajo las mismas condiciones
de medición.
Repetibilidad
(de un instrumento de medición)
Aptitud de un instrumento de medición
para proporcionar indicaciones
próximas ...
61

Reproducibilidad de medida
Precisión de medida bajo un
conjunto de condiciones de
reproducibilidad Condiciones de reproducibilidad
diferente
observador
diferente diferente
método instrumento
REPRODUCIBILIDAD
diferente periodos
lugar largos
diferentes
condiciones VERSIÓN VIM 2008
62

Resultado de medida
Conjunto de valores de una magnitud atribuidos a un
mensurando, acompañados de cualquier otra información
relevante disponible.
Corrección (C)
Compensación de un efecto sistemático
estimado. Ycorr  Ymed  C
Factor de corrección (FC)

Factor numérico por el cual se multiplica
el resultado no corregido de una medición
para compensar el error sistemático. Ycorr  FC  Ymed
63

Principio de medida
Fenómeno que sirve como base de una medición
Método de medida
Descripción genérica de la secuencia lógica de
operaciones utilizadas en una medición.
Procedimiento de medida
Descripción detallada de una medición
conforme a uno o más principios de medida
y a un método de medida dado, basado en
un modelo de medida y que incluye los
cálculos necesarios para obtener un
resultado de medida.
64

Sistema de Conjunto de uno o más instrumentos de

medida medida y, frecuentemente, otros
dispositivos, incluyendo reactivos e
insumos varios, ensamblados y
adaptados para proporcionar valores
medidos dentro de intervalos
especificados, para magnitudes de
naturalezas dadas.
65

Patrón de medida
Realización de la definición de una magnitud dada, con un valor
determinado y una incertidumbre de medida asociada, tomada
como referencia
Material de referencia
Material suficientemente homogéneo y estable con respecto a
propiedades especificadas, establecido como apto para su uso
previsto en una medición o en un examen de propiedades
cualitativas
66

Material de referencia certificado

Material de referencia acompañado por la documentación emitida
por un organismo autorizado, que proporciona uno o varios valores
de propiedades especificadas, con incertidumbres y
trazabilidades asociadas, empleando procedimientos válidos.
67

Trazabilidad Metrológica
Propiedad de un resultado de medida por la
cual el resultado puede relacionarse con una
referencia mediante una cadena
ininterrumpida y documentada de
calibraciones, cada una de las cuales
contribuye a la incertidumbre de medida
NOTA: ¡NO es el INSTRUMENTO el que tiene trazabilidad,

SINO el resultado de la MEDICIÓN que se realiza con él!
68

69

Incertidumbre
BIPM CENAM PATRÓN NACIONAL
Comparaciones PATRÓN DE TRANSFERENCIA
PATRONES
PATRÓN DE TRABAJO
NACIONALES
DE OTROS
PAÍSES
PATRÓN DE REFERENCIA
LABORATORIO
SECUNDARIO
PATRÓN DE TRABAJO
ORGANIZACIÓN PATRÓN DE REFERENCIA
PATRÓN DE TRABAJO
INSTRUMENTO DE MEDICIÓN
70

Prueba
Una operación técnica que consiste en la
determinación de una o más características de
un material o instrumento.
Parámetro
Condición susceptible de ser modificado y
cuantificado.
71

Parámetros Instrumentales
 Alcance Fotométrico
 Alcance de Longitud de Onda
 Ancho de banda espectral
 Intervalo de Datos
 Velocidad de Barrido
 Tiempo Promedio de Señal
72

ALCANCE FOTOMÉTRICO
MAGNITUD SÍMBOLO ALCANCE

Absorbancia  0-3
Transmitancia  0% - 100%
Reflectancia  0% - 100%
73

Alcance de Longitud de Onda ()

175 nm a 3300 nm
320 nm a 1100 nm
190 nm a 1100 nm
74

ANCHO DE BANDA ESPECTRAL (ABE)

Característica de la longitud efectiva de
una curva de distribución de intensidad
espectral (diferentes longitudes de onda).
75

Ancho de Banda Espectral (ABE)
Intensidad relativa (%)
76

Efecto del Ancho de Banda Espectral (ABE) en los espectros de

transmitancia de materiales.
100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20
ABE (nm)
10
0,5 1,0 4 8 10 20
0
315 365 415 465 515
77


100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30 ABE (nm)
20 0,5 1,0 4
10 8 10 20
0
400 420 440 460 480 500
78


100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
ABE (nm)
30
0,5 1,0 4 8 10 20
20
10
0
420 440 460 480 500 520 540
79

INTERVALO DE DATOS
Este parámetro determina el tamaño de
los pasos entre cada Longitud de Onda
cuando se realiza un barrido espectral.
En intervalos más pequeños tendremos
más detalles.
80

Efecto del Intervalo de Datos (ID) en los espectros de transmitancia

de materiales.
100
90
80
Transmitancia (%)
70
100
60 90
80
Transmitancia (%)
50 70
60
40 50
40
30 30
ID (nm)
0,05 0,50 1,00 2,00 5,00

20
20 355 360 365 370
ID (nm) Longitud de Onda (nm)
10
0,05 0,50 1,00 2,00 5,00
0
315 335 355 375 395
81

Efecto del Intervalo de Datos (ID) en los espectros de transmitancia

de materiales.
100
90 24
22
Transmitancia (%)
80 20
Transmitancia (%)
18
70 16
14
60 12
0,05 0,50
ID (nm)
1,00 2,00 5,00
10
50 520 525 530

535
40
30
20
ID (nm)
10
0,05 0,50 1,00 2,00 5,00
0
495 505 515 525 535 545
82

VELOCIDAD DE BARRIDO
Este parámetro indica que tan rápido es
barrido el alcance de longitud de onda
seleccionado.
velocidad distancia / tiempo
velocidad barrido = nm/min
NOTA:
 Se obtienen mejores resultado a velocidades de
barrido bajas.
 Velocidades de barrido altas producen errores
mayores.
83

Efecto de la Velocidad de Barrido (VB) en los espectros de

100
90
80
70
60
50
40
30
M áximo de abso rció n
20
100
10
90
0
80
235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245
Lo ngitud de Onda (nm) 70
60
50
40
30
20 M áximo de abso rció n
10
0
235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245
Lo ngitud de o nda (nm)
84

Pruebas
 Estabilidad Fotométrica
 Ruido Fotométrico
 Luz Extraviada
 Linealidad
 Línea Base
85

Estabilidad Fotométrica
Es la variación que presenta una lectura
realizada por el instrumento para sus escalas de
transmitancia y absorbancia en un intervalo de
tiempo determinado.
 Consiste en medir a una longitud de onda dada y a un nivel
de transmitancia dado la variación máxima de
transmitancia, siendo ésta la diferencia entre el pico
máximo y pico mínimo medido en un periodo de tiempo, se
recomienda este sea al menos el tiempo que toma en
volver a ajustarse la línea base.
 La estabilidad fotométrica incrementa el error en la
medición y determina la precisión de la medición del 86
instrumento.

Estabilidad Fotométrica
100.2
100.15
Max EF = Max ‐ Min
100.1
Transmitancia (%)
100.05
100
99.95
99.9 Min
99.85
99.8
0 5 10 15 20
Tiempo (min)
87

Ruido Fotométrico
Es la variación presente en una lectura, de
transmitancia o absorbancia, en un intervalo de
tiempo corto.
 Esta prueba, consiste en medir a una longitud de onda
dada y a un nivel de transmitancia dado la variación
máxima de transmitancia, siendo ésta la diferencia
entre el pico máximo y pico mínimo medido en un
periodo de tiempo corto.
 El ruido fotométrico incrementa el error en la
medición, además de determinar la precisión de la
medición y los límites de detección del instrumento
88

Ruido Fotométrico
100.2
100.15
100.1
Max
Transmitancia (%)
100.05
100
99.95
Mín
99.9
RF = Max ‐ Min
99.85
99.8
0 5 10 15 20
Tiempo (s)
89

100.05
100.04 Estabilidad
100.03 Ruido
Tranmsitancia (%)
100.02
100.01
100
99.99
99.98
99.97
99.96
99.95
99.94
0 2 4 6 8 10 12
Tiempo (minutos)
90

Luz extraviada
Esta prueba determina radiación no deseada que
recorre el camino óptico del haz de luz que sale
del monocromador, que atraviesa a la muestra y
que llega al detector.
 Puede ser evaluada con un filtro opaco o con filtros
ópticos de corte para los cuales su transmitancia es
nula o baja a longitudes de onda específicas.
 Puede producirse por el polvo, por reflexiones, o bien
por defectos en el sistema óptico tales como ralladuras
o roturas.
91

Luz extraviada
100
0.10
Transmitancia (%)
0.08
Transmitancia (%)
80 0.06 0.0006 %
0.04
60 0.02
0.00
380 400 420 440 460
40
20
0
400
380 430 480 530
92

Filtros de selenio
 (%)
Longitud de onda (nm) 1 filtro 2 filtros
400 0,0007 0,0008
500 0,0008 0,0008
Filtros de Cobalto
 (%)
Longitud de onda (nm) 3 filtros 4 filtros
600 0,0004 0,0006
93

Linealidad Fotométrica
Se dice que el detector es lineal cuando la señal
detectada es directamente proporcional al flujo
de radiación incidente.
 La no linealidad fotométrica produce resultados
incorrectos 100
90
Transmitancia Medida (%) 80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Transmitancia Referencia (%)
94

Línea base plana

Determina las variaciones del valor fotométrico a
lo largo de toda la distribución espectral o en el
intervalo espectral deseado con el
compartimento de muestras vacío.
95

Confirmación del Ancho de Banda

Espectral
Determina el intervalo de longitudes de onda, en
nanómetros, que pasan (cruzan) por la rendija
de salida del monocromador del instrumento a
una longitud de onda nominal dada para un
ancho de banda espectral seleccionado.
 El ABE está determinado por el ancho físico de la
rendija de entrada y de salida del monocromador y la
dispersión producida por el elemento dispersante
(rejilla de difracción).
96

Confirmación del ABE

MAX
Transmitancia (%)
ABE = 2 - 1
1Media 2Media
1Min 2Min
1 2
97

Ancho de Banda Ancho de Banda Diferencia

seleccionado determinado
(nm) (nm)
0,1 0,130 0,030

0,5 0,563 0,063
1,0 1,167 0,167
2,0 2,210 0,210
3,0 3,370 0,370
98

• ¿Que son los Material de Referencia?
• ¿Para qué sirven los materiales de referencia?
• ¿Cuál es la diferencia entre un MR y un MRC?
• ¿Cómo se usa un MRC y como se usa un MR?
• ¿Cuáles son los requisitos para un productor de

Material de Referencia (MR) y un Material de Referencia
Certificado (MRC)?
• ¿Cuál es la normativa vigente?

99

Material de Referencia (MR)
“Material o sustancia para el cual el valor de una o de

varias de sus propiedades es lo suficientemente
homogéneo y bien establecido como para ser usado en
la calibración de un instrumento, en la evaluación de un
método de medición o para la asignación de valores a los
materiales”
[2.1 NMX-CH-160-IMNC-2006]
100

Material de Referencia Certificado (MRC)
“Material de referencia, acompañado de un certificado,

para el cual el valor de una (o de varias) de sus
propiedades se ha certificado por medio de un
procedimiento que establece su trazabilidad a una
realización exacta de la unidad en que se expresan los
valores de la propiedad y en el que cada valor certificado
se acompaña de una incertidumbre con un nivel de
confianza declarado”
[2.2 NMX-CH-160-IMNC-2006)]
101

¿Para que sirven los MRC?
• Un MRC es un eslabón (de la cadena de trazabilidad) que entrelaza

los resultados de una medición sobre una muestra real con las
mediciones realizadas en un laboratorio de mayor jerarquía
metrológica (de menor incertidumbre y trazable al SI).
• A través de los MRC se establece una comparabilidad o
equivalencia de las mediciones hechas en un laboratorio con la
mediciones realizadas en cualquier otro laboratorio del mundo
• Por medio de los MRC, las mediciones de campo se convierten en
altamente confiables y mucho menos costosas.
• En la actualidad, los MRC son el mecanismo más práctico para
establecer la trazabilidad y asegurar la calidad de las mediciones en
diversas magnitudes.
102

Normas sobre materiales de referencia:
• NMX-CH-160-IMNC-2006 (ISO Guide 30) “Materiales de Referencia-términos y

definiciones”
• NMX-CH-161-IMNC-2006 (ISO Guide 31) “Materiales de Referencia-contenido de
certificados y etiquetas”
• NMX-CH-162-IMNC-2006 (ISO Guide 32) “Materiales de referencia-calibración en
química analítica y el uso de materiales de referencia”
• NMX-CH-163-IMNC-2006 (ISO Guide 33) “Materiales de referencia-uso de los
materiales de referencia certificados”
• NMX-CH-164-IMNC-2006 (ISO Guide 34) “Materiales de Referencia-requisitos
generales para la competencia de productores de materiales de referencia”
• NMX-CH-165-IMNC-2008 (ISO Guide 35) “Reference Materials-General and
statistical principles for certification”
• NMX-EC-17025-IMNC-2006, Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibración
• NMX-CH-140-IMNC-2002, Guía para la expresión de incertidumbre en las
mediciones
• NMX-Z-055-1997-IMNC, Metrología-Vocabulario de términos fundamentales y
generales
103

Patrón de medida
Realización de la definición de una magnitud dada, con un

valor de la magnitud determinado y la incertidumbre de
medida respectiva, usada como referencia
EJEMPLO 4. Electrodo patrón de hidrógeno con un valor de 7,072 y una incertidumbre
estándar de 0,006.
EJEMPLO 5. Conjunto de soluciones de referencia de cortisol en suero humano con
concentraciones de cortisol y sus incertidumbres de medida certificadas.
EJEMPLO 6. Material de referencia que provee valores certificados con incertidumbres de
medida para la concentración de masa de cada una de diez proteínas diferentes.
[VIM 3er Edición]
104

Certificación de un material de referencia

Procedimiento que establece el (los) valor(es) de una o varias
propiedades de un material o sustancia, por un proceso que
asegura la trazabilidad a una realización exacta de las unidades en
las cuales se expresan los valores de las propiedades, y que lleva a
la emisión de un certificado.
[NMX-CH-160-IMNC-2006]
Certificado de un material de referencia
Es el documento que acompaña a un material de referencia
certificado, donde se declara uno o varios valores de la propiedad
y sus incertidumbres y confirma que se llevaron a cabo los
procedimientos necesarios para asegurar su validez y su
trazabilidad.
105

Informe de certificación
Documento que proporciona información detallada,

complementaria a la contenida en un certificado, por ejemplo, la
preparación del material, los métodos de medición, los factores
que afectan la exactitud, el tratamiento estadístico de los
resultados y la forma en la cual se estableció la trazabilidad.
106

Rol de los MRC en Metrología
• Almacenamiento y transferencia de información, en tiempo y

espacio, similar como sucede con un instrumento de medición.
• Para dar trazabilidad a las mediciones
• En el sistema internacional de unidades (SI).

« Dependencia de las unidades base del SI en sustancias y materiales.
« Realización de unidades derivadas del SI.
« Realización de unidades fuera del SI.
107

Trazabilidad
Propiedad del resultado de una medición o del valor de un

patrón, por la cual puede ser relacionado a referencias
determinadas, generalmente patrones nacionales o
internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de
comparaciones, todas ellas teniendo incertidumbres
determinadas.
En determinaciones de análisis químico cuantitativo:
• Se requiere un MRC lo más similar a la muestra desconocida.
• El MRC será sometido al mismo proceso analítico que la muestra.
NOTA: ¡NO es el INSTRUMENTO el que tiene trazabilidad,
SINO el resultado de la MEDICIÓN que se realiza con él!
108

Homogeneidad
Condición de tener una estructura o una composición uniforme

con respecto a una o más propiedades especificadas.
Se dice que un material de referencia es homogéneo con respecto a una

propiedad especificada si el valor de la propiedad, determinado por ensayos
en muestras de tamaño especificado, se encuentra dentro de los límites de
incertidumbre definidos, aunque las muestras sean tomadas de diferentes
unidades de abastecimiento (botellas, paquetes, etc.) o de una sola unidad de
abastecimiento.
[2.6 NMX-CH-160-IMNC-2006]
109

Continua…
Las mediciones de homogeneidad deben ser realizados bajo

condiciones de repetibilidad.
Condiciones de repetibilidad
condiciones bajo las que se obtienen resultados independientes,
con el mismo método, sobre muestras idénticas, en el mismo
laboratorio, por el mismo operador, y utilizando los mismos
equipos de medición durante un corto intervalo de tiempo.
[3.14 NMX-CH-5725/1-IMNC-2006]
110

Estabilidad
Propiedad de un material de referencia, de mantener el valor de

las propiedad (es) certificada (s), dentro de límites
especificados por un periodo de tiempo determinado, cuando se
almacena o conserva bajo condiciones apropiadas.
El estudio de la estabilidad sirve:
• para determinar la incertidumbre de la medición asociada
a la estabilidad del material,
• también para establecer o especificar las condiciones
apropiadas del almacenaje y del transporte.
111

Caracterización
Determinación de uno o más valores de propiedades físicas,

químicas, biológicas o tecnológicas de un material o sustancia,
que son relevantes para el uso final al que se destinan.
Método
Condiciones Trazabilidad
Equipo de para Evaluación
Ambientale y Método de
medición asignación de datos
s medición
de valor
ESTA ETAPA DEBE REALIZAR CUBRIENDO LOS REQUISITOS DE NMX‐CH‐165‐IMNC‐2008
112

Método de referencia
Método totalmente investigado, que describe clara y

exactamente las condiciones y procedimientos necesarios para
la medición de uno o más valores de las propiedades, que han
demostrado tener exactitud y precisión de acuerdo con su
propósito de uso y que puede, por lo tanto, ser usado para
evaluar la exactitud de otros métodos por la misma medición,
permitiendo en particular la caracterización de un material de
referencia.
113

 Un método primario de medición en el SI, es un método
que tiene la más alta calidad metrológica, cuyo modelo
(ecuación matemática) y realización se describen y se
entienden completamente en términos de las unidades del
SI.
 El uso de un método primario directo da el valor
desconocido de una magnitud sin referencia a un patrón de
la misma magnitud.
 El uso de un método primario relativo da el valor de un
cociente de dos valores de la misma magnitud sin referencia
a un patrón de la misma magnitud.
[CCQM, febrero de 1999]
114

Incertidumbre
Estimación asociada a un valor certificado de una cantidad,

la cual, caracteriza el intervalo de valores dentro del cual se
espera que esté contenido el “valor verdadero” con un nivel
de confianza establecido.
115

Establecimiento
y diseño del
modelo. Uso de
la GUM.
Establecimiento Contribución de
Contribución de de la condiciones
Homogeneidad trazabilidad ambientales y
y Estabilidad otros factores
de influencia
Informe de Certificación
Certificado del MRC
Valor certificado ± incertidumbre
116

Lista de contenidos del Certificado de Material de Referencia

Contenido
Completos completo vs esencial  Esenciales
 Nombre y domicilio del organismo de certificación.
 Título del documento. ◦ Nombre del material.
 Nombre del material. ◦ Productor, fabricante.
 Código y número de lote del material de ◦ Código del material propuesto por el
referencia. producto.
 Descripción del MRC.
◦ Descripción general del material.
 Propósito de uso.
 Instrucciones para uso correcto del MR. ◦ Propósito de uso.
 Situación de riesgo. ◦ Instrucciones para el uso apropiado.
 Nivel de homogeneidad. ◦ Instrucciones para condiciones apropiadas de
 Valor(es) certificado(s) y su(s) incertidumbre(s) almacenamiento.
 Trazabilidad. ◦ Valor(es) certificado(s) de la propiedad, cada
 Valores obtenidos por laboratorios o métodos uno acompañado por una declaración de
individuales. incertidumbre.
 Valores no certificados.
◦ Método(s) usado(s) para obtener valores de
 Fecha de certificación. la propiedad (con detalles completos cuando
 Período de validez. los valores son dependientes del método de
 Información adicional. medición).
 Nombres y firmas de los funcionarios ◦ Período de validez, si es apropiado.
certificadores.
117

• Tierras raras en una matriz de vidrio:

Vidrios Óxido de Holmio, óxido de didimio
• Películas depositadas en vidrio:
Filtros Interferenciales
Materiales de Referencia
Evaluación la escala
de Longitud de Onda
Orgánica: Benceno en etanol
Soluciones líquidas
Inorgánicas: Óxido de Holmio, óxido de didimio
• Películas metálicas depositadas en vidrio
Vidrios • Filtros de Densidad Óptica neutra
• Filtros de corte
Evaluación de la escala
Fotométrica
Soluciones líquidas • Inorgánicas: Dicromato de Potasio,

Yoduro de Potasio, Cobalto-Niquel
118

Filtro óptico; Filtro ocular; Filtro
Elemento óptico, usualmente de transmisión, diseñado para

modificar el flujo radiante o luminoso, la distribución
espectral relativa o ambos, de la radiación que pasa a través de
él.
119

MRC empleados en la calibración de la escala de longitud

de onda
Filtro de óxido de Holmio
100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20 Disolución
10 Vidrio
0
230 280 330 380 430 480 530 580 630 680
120


de onda
Filtro de óxido de Holmio (Disolución)

100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
230 280 330 380 430 480 530 580 630 680
121


de onda
Filtro de óxido de Holmio (Vidrio)

100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
230 280 330 380 430 480 530 580 630 680
122


de onda
Filtro de óxido de didimio
100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20 Vidrio
10 Líquido
0
380 430 480 530 580 630 680 730 780 830 880
123


de onda
Filtro de óxido de didimio (Vidrio)
100
90
T ransm itancia (% )
80
70
60
50
40
30
20
10
0
380 430 480 530 580 630 680 730 780 830 880
124


de onda
Filtro de óxido de didimio (Disolución)
100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
200 300 400 500 600 700 800 900
125


de onda
Filtro de óxido de didimio (Disolución)
95
85
Transmitancia (%)
75
65
55
45
35
25
225 275 325 375 425
126

CENTRO NACIONAL DE METROLOGÍA
VxÜà|y|vtwÉ wx
 Material de Referencia `tàxÜ|tÄ wx exyxÜxÇv|t
Certificados.
No. de Certificado: CNM-MR-520-0XXX/2012 No. de Servicio: 520-XXXXXX Hoja 1/6
Certificate number Service Lumber
Cliente:
Customer Nombre: Nombre del Cliente.
Name
Domicilio: Calle No. , Fracc. . Municipio, Edo., País. C.P.
Address
Filtro óptico de óxido de

Material de Referencia:
Standard Descripción: Filtro de óxido de Holmio en matriz de vidrio.
Reference Description
Material
Marca: CENAM Catálogo: DMR-042
Holmio.
Manufacturer Catalog number
No. de serie: X Lote: XX
Serial number Lot number
Condiciones del Material de Referencia: El material es nuevo.
Standard Reference Material condition
Patrón: Espectrofotómetro UV-Vis-IRc, Marca: Varian, Modelo: Cary 5e, No. Serie: 94031002
Standard
Filtro óptico de óxido de

Resultado de la caracterización: Ver inciso e)
Caracterization result
CNM-MR-520-0XXX/2012 CENAM Hoja 3/6
Incertidumbre: Ver inciso f)
No. de Servicio: 520-XXXXXX Uncertainty
didimio.
Condiciones ambientales de medición: Temperatura: 20.0 ºC, variación máxima ±1.0 ºC
Tabla No 3. Valores de longitud de onda y sus incertidumbres Environmental
para las bandas características
conditions of measurement del Humedad relativa: 45.0 %, variación máxima ±10.0 %
filtro.
ABE = 1.00 nm ABE = 4.00 nm ABE = 10.00 nm
Fecha deABE Certificación:
= 20.00 nm
aaaa-mm-dd
Certification date
Banda U Banda U Banda ULugar de Banda U
la Certificación:
(nm) (nm) (nm) (nm) (nm) (nm Certification (nm)
site (nm Instalaciones del Centro Nacional de Metrología.
279.30 0.08 *** *** *** *** *** ***
287.60 0.09 *** *** *** ***Procedimiento *** / método*** utilizado: 520-AC-P.023 / Medición Directa.
Procedure / method employed
333.89 0.08 334.03 0.19 335.18 0.50 *** ***
347.85 0.15 *** *** *** ***Este certificado
*** consta de*** 6 hojas escritas en un solo lado, incluida la carátula. No es recomendable la reproducción parcial del
mismo, ya que puede dar lugar a interpretaciones equivocadas de sus resultados.
360.87 0.08 360.83 0.17 361.22 0.36 360.92 0.36
381.63 0.08 *** *** *** *** *** *** Fecha de emisión: aaaa-mm-dd
385.83 0.11 385.05 0.26 385.19 0.37 *** *** Date issued
418.72 0.10 418.57 0.16 419.03 0.36Certificó:*** Nombre Apellido.*** Aprobó: Nombre Apellido.
424.93 0.14 *** *** *** ***Certified by ***Metrólogo del ***Laboratorio de Approved by Jefe de la División de
445.62 0.08 446.23 0.16 448.47 0.36 ***
Caracterización *** de Materiales.
Óptica Óptica y Radiometría
453.61 0.08 453.20 0.17 *** *** 452.43 0.36
460.13 0.08 460.34 0.16 *** ***Km 4.5 Carretera
*** a Los Cués,*** El Marqués, Qro., C. P. 76246, México.
473.85 0.10 *** *** ***

Apdo. Postal 1-100 Centro, Querétaro, Qro., C. P. 76000, México.
***Tels.: 01 (442)***211.05.00 al 04,
***Fax: 2110528
XXXXX
484.23 0.08 485.62 0.32 485.01 0.36 *** ***
La autenticidad de la emisión de este documento puede ser verificada en el domicilio electrónico
536.45 0.11 536.70 0.17 537.40 0.36 537.88 0.36
http://www.cenam.mx/servicios/certificados.asp con el Número de Certificado.
637.48 0.13 637.30 0.20 639.00 0.36 641.68 0.36
NOTA: En los recuadros con símbolo (***) no se indica el valor de longitud de onda, debido al
decrecimiento de las bandas de absorción por el incremento del ancho de banda.
La figura muestra las bandas de absorción características del material de referencia cuando se utiliza
en la medición ABEs de 1.00 nm, 2.00 nm o 4.00 nm.
DMR 042
100
90
80
70
Transmitancia (%)
60
50
40
AB1
30 AB2
AB4
20
10
0
250 300 350 400 450 500 550 600 650
El resultado de las mediciones objeto de este certificado está expresado en términos del Sistema
General de Unidades de Medida, consistente con el Sistema Internacional de Unidades. Los
patrones nacionales de medida son las referencias con las cuales se realizan experimentalmente
dichas unidades en México.
f) Incertidumbre:
La incertidumbre de la medición se obtuvo multiplicando la incertidumbre estándar combinada por un

Este Certificado consta de 6 hojas escritas en un solo lado, incluida la carátula. No es recomendable la reproducción parcial del
mismo, ya que puede dar lugar a interpretaciones equivocadas de sus resultados.
127

MRC empleados en la calibración de las escalas de

transmitancia y absorbancia
Filtros de Densidad Óptica Neutra
60
50
Filter .
Transmittance (%)
40 50%
30%
30 20%
10%
20
3%
1%
10
0
400 450 500 550 600 650 700
Wavelength (nm)
128

MRC empleados en la calibración de las escalas de

transmitancia y absorbancia
Filtros de Densidad Óptica Neutra UV-Vis
100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
Filtro
50 90
40 30
30 10
20
10
0
200 300 400 500 600 700 800 900
129

CENTRO NACIONAL DE METROLOGÍA
 Material de Referencia VxÜà|y|vtwÉ wx

Certificados. `tàxÜ|tÄ wx exyxÜxÇv|t
No. de Certificado: CNM-MR-520-0XX/2014 No. de Servicio: 520-XXXXXX Hoja 1/5
Filtro óptico de densidad

Certificate number Service Lumber
Cliente:
Customer Nombre: Nombre del Cliente.
Name
Domicilio: Calle No. , Fracc. . Municipio, Edo., País. C.P.
óptica neutra.
Address
Material de Referencia:
Standard Descripción: Conjunto de 8 filtros de vidrio para evaluar la escala fotométrica en
Reference Description Transmitancia y Absorbancia.
Material
Marca: CENAM Catálogo: LCOM-002
Manufacturer Catalog number
No. de serie: XX Lote: XXXX
Serial number Lot number
CNM-MR-520-0XX/2014 CENAM Hoja 3/5
Patrón y Trazabilidad: Ver inciso b, en hoja 2.
No. de Servicio: 520-XXXXXX Standard and Traceability
Resultado
Tabla No 3. Valores de transmitancia y sus incertidumbre de la medición:
a las longitudes de onda especificadasVer inciso
para d, en hoja 3.
los filtros.
Measurement result
Longitud Transmitancia (%)
de Onda 1% 3% 10 % Incertidumbre
20 % de%medida:50 %
30 Ver75inciso
% e, en90hoja
% 6.
(nm) Medida U Medida U Medida U Medida Medida
Measurement
U uncertainty
U Medida U Medida U Medida U
225
Condiciones ambientales en la medición: Temperatura:
91.030 0.352 20.0 ºC, variación máxima ±1.0 ºC
250 91.626 0.350 relativa:
Humedad 45.0 %, variación máxima ±10.0 %
Environmental conditions of measurement
280 92.092 0.355
340 Fecha de Certificación: aaaa-mm-dd
92.604 0.410
360 Certification date 92.845 0.385
400 92.976 0.384
440 0.745 0.008 2.415 0.015 8.608 Lugar
0.037 18.517 de la28.475
0.072 Certificación:
0.108 46.525 0.166 73.148 0.262 Laboratorio
92.940 0.362de Propiedades Ópticas de los Materiales del
465 1.046 0.008 3.123 0.015 10.416 Certification
0.036 20.700 0.070 site
31.924 0.105 51.107 0.185 74.849 0.286 Centro Nacional
93.024 0.378 de Metrología.
500 93.087 0.371
546.1 0.995 0.009 3.005 0.015 10.056 Procedimiento / método utilizado:
0.037 19.681 0.070 30.819 0.102 50.417 0.186 73.863 0.285 93.170 0.379/ Medición Directa.
520-AC-P.005
590 0.907 0.008 2.805 0.014 9.105 Procedure / method employed
0.037 18.486 0.071 28.844 0.104 47.824 0.184 70.193 0.266 93.206 0.375
635 1.169 0.008 3.397 0.015 10.167 0.038 19.960 0.070 29.907
Este certificado consta0.108 47.639escritas
de 5 hojas 0.160 en
69.520
un solo0.253
lado, 93.242
incluida0.373
la carátula. No es recomendable la reproducción parcial del
650 1.283 0.009 3.647 0.015 10.519 mismo,0.073
0.037 20.295 ya que29.886
puede dar lugar47.247
0.106 a interpretaciones equivocadas
0.166 68.722 de sus resultados.
0.259 93.262 0.377
700 2.810 0.015 6.592 0.023 16.507 0.056 26.551 0.105 35.739 0.120 51.317 0.176 73.850 0.283 93.310 0.385
750 3.926 0.017 8.485 0.037 18.658 0.071 28.677 0.103 35.967 0.122 48.763 0.164 72.614 0.254 93.345 0.378 Fecha de emisión: aaaa-mm-dd
NOTA: Los recuadros en color gris no indican valores por tratarse de longitudes de onda consideradas fuera del uso propuesto Date issued
del material. Certificó: Nombre Apellido. Aprobó: Nombre Apellido.
Certified by Metrólogo del Laboratorio de Approved by Director de de Óptica y
Tabla No 4. Valores de Absorbancia y sus incertidumbre a las longitudesÓpticas
Propiedades de ondadeespecificadas
Materiales. para los filtros. Radiometría
Longitud Absorbancia (1)
Km 4.5 Carretera a Los Cués, El Marqués, Qro., C. P. 76246, México.
de Onda 1% 3% 10 % 20 % 30 % Querétaro,50 % C. P. 76000, 75México.
% 90 %
(nm) Medida Medida Medida
Apdo.
Medida
Postal 1-100 Centro,
Medida
Qro.,
Medida Medida Medida
XXXXX
U U U Tels.: 01 (442)
U 211.05.00 alU04, Fax: 2110528
U U U
225 0.0408 0.0017
La autenticidad de la emisión de este documento puede ser verificada en el domicilio electrónico
250 http://www.cenam.mx/servicios/certificados.asp con el Número de Certificado.0.0380 0.0017
280 0.0358 0.0017
340 0.0334 0.0019
360 0.0322 0.0018
400 0.0316 0.0017
440 2.1280 0.0034 1.6171 0.0021 1.0651 0.0016 0.7324 0.0015 0.5455 0.0015 0.3323 0.0016 0.1358 0.0016 0.0318 0.0016
465 1.9804 0.0035 1.5055 0.0021 0.9823 0.0016 0.6840 0.0015 0.4959 0.0015 0.2915 0.0016 0.1258 0.0016 0.0314 0.0017
500 0.0311 0.0017
546.1 2.0024 0.0035 1.5221 0.0022 0.9976 0.0016 0.7060 0.0015 0.5112 0.0014 0.2974 0.0016 0.1316 0.0016 0.0307 0.0017
590 2.0425 0.0035 1.5520 0.0020 1.0407 0.0016 0.7332 0.0015 0.5399 0.0015 0.3204 0.0016 0.1537 0.0016 0.0306 0.0017
635 1.9324 0.0034 1.4689 0.0021 0.9928 0.0016 0.6998 0.0015 0.5242 0.0015 0.3220 0.0016 0.1579 0.0015 0.0304 0.0017
650 1.8918 0.0035 1.4381 0.0021 0.9780 0.0016 0.6926 0.0015 0.5245 0.0015 0.3256 0.0016 0.1629 0.0016 0.0303 0.0017
700 1.5514 0.0022 1.1810 0.0018 0.7823 0.0016 0.5759 0.0015 0.4469 0.0014 0.2897 0.0015 0.1316 0.0016 0.0301 0.0018
750 1.4061 0.0023 1.0714 0.0016 0.7291 0.0015 0.5425 0.0015 0.4441 0.0015 0.3119 0.0016 0.1390 0.0015 0.0299 0.0017
NOTA: Los recuadros en color gris no indican valores por tratarse de longitudes de onda consideradas fuera del uso propuesto
del material.
La figura que se presenta a continuación, muestra los espectros de transmitancia característicos para los
filtros cuando se utiliza en la medición un ABE de 1.00 nm.

FDON E007
100
90 90%
80
75%
Transmitancia (%)
70
50%
60
30%
50
20%
40
10%
30
20 3%
10 1%
0
400 450 500 550 600 650 700 750
Este Certificado consta de 5 hojas escritas en un solo lado, incluida la carátula. No es recomendable la reproducción parcial del mismo, ya
que puede dar lugar a interpretaciones equivocadas de sus resultados.
130

Otros MR empleados en la calibración de la escala de

longitud de onda
Filtro de Interferencia Filtros Interferenciales
100 100
90 90
80 80
Transmitancia (%)
Transmitancia (%)
70 70
60 60
50 50
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
200 300 400 500 600 700 800 900 230 250 270 290 310 330 350 370 390
Longitud de Onda (nm) Longitud de onda (nm)
Respuesta Espectral de Filtro V

100
90
Transmitancia (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
400 500 600 700
131

Otros MR empleados
Filtros Corte (evaluación de la luz extraviada)
100
0.10
Transmitancia (%)
80
Transmitancia (%)
0.08
60 0.06
40 0.04
20 0.02
0 0.00
200 220 240 260 280
200 250 300 350 400 450
100
0.10
80
Transmitancia (%)
0.08
60 Transmitancia (%) 0.06
40 0.04
20 0.02
0 0.00
300 310 320 330 340 350 360
300 350 400 450
132

Otros MR empleados
Filtros Corte (evaluación de la luz extraviada)
100
0.10
Transmitancia (%)
80
Transmitancia (%)
0.08
60 0.06
40 0.04
20 0.02
0 0.00
380 400 420 440 460
380 430 480 530
133

Cuidados y Manejo de los MRC
• No tocar las superficies del filtro.

• Manejar los filtros por los extremos de la celda y empleando
guantes adecuados.
• Manejar en atmosfera libre de partículas tales como polvo, fibras,
aceite, etc.
• Usarlos dentro de su intervalo de trabajo.
• Almacenar en su contenedor.
• Evitar realizar limpieza de los filtros, a menos que la limpieza no
altere la superficie del filtro.
• Evitar contacto de las superficies del filtro con materiales de igual
o mayor dureza.
• Manejar y Almacenar en condiciones de temperatura y humedad
recomendadas por el productor.
134

Filtro de óxido de didimio

100
90
80
Transmitancia (%)
70
60
50
40
Vidrio
30
Líquido
20
VidrioQ
10
0
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900
135

Incertidumbre de la medición
¿ Qué es incertidumbre de medición ?
“Parámetro asociado al resultado de una

medición, que caracteriza la dispersión de los
valores que podrían ser razonablemente
atribuidos al mensurando”
(Ref.: CNM-MMM-PT-001)
136

Incertidumbre vs. Error de Medición
137

Estimación de la incertidumbre
IDENTIFICACIÓN Lista de fuentes de incertidumbre
ORGANIZACIÓN Relaciones entre las fuentes de incertidumbre
CUANTIFICACIÓN Variabilidad cuantificada de cada fuente
REDUCCIÓN Representación uniforme
COMBINACIÓN Combinar las contribuciones de cada fuente
INFORME Incertidumbre expandida

138

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Identificación
CUANTIFICACIÓN 1) Determinar el mensurando
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME
2) Identificar las fuentes de incertidumbre, incl.
- características de instrumentos,
- condiciones de medición,
- magnitudes de influencia, etc.
Herramientas:
 Lluvia de ideas
 Analizar el procedimiento de medición
Resultado:
 Lista de fuentes de incertidumbre 139

IDENTIFICACIÓN Espectrofotómetro:
ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
Calibración de la escala fotométrica
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME MONOCROMADOR DETECTOR
Filtro de
densidad neutra
Mensurando: ?Error   instr   cert
instr Transmitancia medida por el instrumento

cert Transmitancia presentada en el certificado de calibración
 El mensurando es función de 
140

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
Fuentes de incertidumbre:
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME
 Patrón, Filtro de densidad neutra

 Repetibilidad de las lecturas
 Resolución del instrumento
Además:
 Ruido fotométrico
 Estabilidad fotométrica
 Luz extraviada
 Ancho de banda espectral, error de la escala de 
 Inhomogeneidad del filtro
 Variaciones de las condiciones ambientales
141

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Organización
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
Organizar las fuentes analizando relaciones
COMBINACIÓN
causa efecto en el aspecto de incertidumbre.
INFORME
Identificar posibles interacciones y

correlaciones entre diversas fuentes.
Herramientas:
 Diagrama de árbol
Resultado:
 Lista depurada y organizada de fuentes de incertidumbre
142

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN Error   instr   cert

INFORME
Patrón cert
Inhomogeneidad del
filtro de densidad neutra
Error
Variaciones de la
Repetibilidad
fuente de luz
Variaciones de la inst
temperatura
Resolución
... y otros más r
143

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Cuantificación
CUANTIFICACIÓN
 Asignar valores a la variabilidad
de cada fuente
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME
 ¿ Distribución ?
Orígenes de la información:
 “Tipo A”
?
 Mediciones repetidas
 Informes, certificados de calibración

 Especificaciones del instrumento
 Pruebas  “Tipo B”
 Normas, literatura
Resultado:  Valores de incertidumbre original.

144

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Incertidumbre Tipo A
CUANTIFICACIÓN Repetibilidad:
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
 Desviación estándar experimental de la media
INFORME
uA 
s 
1

 k
(q  q )2
n n n 1
n número de lecturas
qk valor de la lectura k
promedio (media) de las n lecturas
qs q qs q
 Distribución normal 145


IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Incertidumbre Tipo B
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN Ejemplo 1:
INFORME
Certificado de Calibración
 Distribución normal
-U +U
Ejemplo 2:
Resolución de un instrumento
 Distribución rectangular
87 88 89
87,5 88,5
 a-  a+ 146

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME
¿ Cual es la incertidumbre
del filtro de densidad neutra ?
por repetibilidad de las mediciones ?
por resolución del instrumento ?
147

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Reducción
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME
Representar los valores de las
incertidumbres originales como
incertidumbres estándar.
Criterio:
Tipo de distribución asignado a la incertidumbre
original de cada fuente.
Resultado:
 Incertidumbre estándar de cada fuente.
148

IDENTIFICACIÓN Contribución a la incertidumbre combinada

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
Suponiendo la ... con la incertidumbre ... su contribución
COMBINACIÓN
distribución ... expresada como ... ui es:
INFORME
Incertidumbre
expandida U
U
-U +U
Certificado de calibración k
Límites -
a+ - a
- superior e inferior
a a+ 12
Incertidumbre Tipo A
Repetibilidad de n mediciones t 95 ,45 ( n)
Corrección para n < 10  uA
-uA +uA 2
149

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Combinación
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME Incertidumbre estándar combinada:
2
 f  2 N 1 N
f f
u  xi u x j r xi , x j 
N
uc  y      u  xi   2 
2
i 1  xi  i 1 j i 1 xi x j
150

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
Coeficientes de Sensibilidad:
f f
INFORME

xi X i xi , x2 ,..., x N
Coeficientes de Correlación:
1 n
r  s q , e    qk  q ek  e 
nn  1 k 1
151

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN Incertidumbre estándar combinada:

COMBINACIÓN
INFORME
u
2 2 2 2
uc  i  u1  u2  ...  uN
i
ui Contribuciones a la incertidumbre
de las diferentes magnitudes de entrada (o influencia)
152

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN
INFORME ¿ Cual es la incertidumbre combinada

de la escala fotométrica del espectrofotómetro ?
¿ Cuales son las contribuciones dominantes ?
¿ De que manera podemos reducir la

incertidumbre combinada notablemente ?
153

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Incertidumbre expandida
CUANTIFICACIÓN
U  k  uc
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN Incertidumbre Expandida:

INFORME
k 1 2 3
nivel de
confianza 68,3% 95,4% 99,7%
-3uc -2uc -uc +uc +2uc +3uc
 Aumentar el nivel de confianza

 k está elegido por el usuario según conveniencia
154

IDENTIFICACIÓN Informe de medición / calibración

ORGANIZACIÓN
CUANTIFICACIÓN
Y Mensurando
REDUCCIÓN Resultado de la medición: y Mejor estimado del
COMBINACIÓN
Y = y  U con k = ? mensurando
INFORME U Incertidumbre expandida
Posibles formas de la representación:
  = (634,3  2,3) nm (k=2)
  = 634,3 nm  2,3 nm (k=2)
  = 634,3 nm  0,36 % (k=2)  como incertidumbre relativa
  = 634,3 nm U = 2,3 nm ó U = 0,36 % (k=2)

(Ejemplo: Medición de una longitud de onda) 155

IDENTIFICACIÓN
ORGANIZACIÓN
Informe de calibración
CUANTIFICACIÓN
Informa adicionalmente:
REDUCCIÓN
COMBINACIÓN  método y secuencia de cálculo

INFORME
 lista de las fuentes de incertidumbre

y método de su estimación
 lista de ecuaciones, correcciones y constantes usadas
y fuentes de origen
Verifica:
¿He dado información clara y suficiente
para que mi resultado pueda ser actualizado
cuando haya nuevos datos?
156

Espectrofotómetro:
Calibración de la escala de longitud de onda
 Filtro de Oxido de Holmio : cert = (640,53 ± 0,13) nm k=2
 Resolución del instrumento: 1 nm
 Tomamos 3 mediciones  639 nm

639 nm
640 nm
Mensurando: ?
Error   instr   cert
de la calibración ?
157

Espectrofotómetro: Calibración de la escala de longitud de onda

Organización y acumulación de la información en una tabla
Magnitud de Fuente de Incertidumbre Tipo Contribución
entrada información original
Fuente de Distribución
incertidumbre
1 cert Certificado 0,13 nm B 0,07 nm

Patrón normal, k=2
2 instr Mediciones 0,58 nm A 0,33 nm

Repetibilidad repetidas normal, n=3
3 instr Especificación 1 nm B 0,29 nm

Resolución Instrumento rectangular
Incertidumbre Combinada 0,45 nm
Incertidumbre expandida : U = 0,89 nm k=2
Error = -1,2 nm 158


Espectrofotómetro: Calibración de la escala de transmitancia

 Filtro de Densidad Óptica Neutra : cert = (51,20 ± 0,26) % k=2
 Resolución del instrumento: 0,1 %
Tomamos 5 mediciones  51,3 %

51,1 %
51,5 %
51,2 %
51,3 %
Mensurando: ?
Error   instr   cert
de la calibración ?
159

Espectrofotómetro: Calibración de la escala de transmitancia

Organización y acumulación de la información en una tabla
Magnitud de Fuente de Incertidumbre Tipo Contribución
entrada información original
Fuente de Distribución
incertidumbre
1 cert Certificado 0,26 % B 0,13 %

Patrón normal, k=2
2 instr Mediciones 0,15 % A 0,07 %

Repetibilidad repetidas normal, n=5
3 instr Especificación 0,1 % B 0,03 %

Resolución Instrumento rectangular
Incertidumbre Combinada 0,15 %
Incertidumbre expandida : U = 0,30 % k=2
Error = 0,08 % 160

UNIDAD 4 Método-Procedimiento de calibración del espectrofotómetro UV-Vis
Introducción La calibración de los espectrofotómetros UV‐Vis consiste en determinar los
errores e incertidumbres para cada una de sus escalas: fotométrica y de
longitud de onda, usando materiales de referencia certificados recomendados
en normas, publicaciones técnicas y recomendaciones de Institutos Nacionales
de Metrología que validan el uso de este método.
Objetivo El asistente realizará un ejercicio en laboratorio de la calibración de cada una
de las escalas, fotométrica y de longitud de onda de un espectrofotómetro UV‐
Vis, empleando materiales de referencia certificados.
Visión general Mediante el ejemplo práctico de laboratorio se abordará el proceso para
determinar el mensurando y las variables de influencia que influyen en la
medición realizada por el espectrofotómetro UV‐Vis para cada una de sus
escalas y se realizará la estimación de incertidumbre de los resultados de
medición obtenidos durante el ejercicio de acuerdo a la GUM.
Estructura de la Lección 1 Practica de la calibración de la escala de longitud de onda.
Unidad Lección 2 Practica de la calibración de la escala fotométrica.
Lección 3 Cálculo de la estimación de la incertidumbre para las calibraciones
efectuadas en las practicas de laboratorio.
Unidad 4
Método-Procedimiento de Calibración del
Espectrofotómetro UV-Vis.

Lección 1 Practica de la calibración de la escala de longitud de onda.
1.5
1.0
0.5
Error (nm)
0.0
230 330 430 530 630 730 830
-0.5
-1.0
-1.5
163

Lección 2 Practica de la calibración de la escala fotométrica.
0.5
0.4
0.3
0.2
Error (%)
0.1
0.0
-0.1 0 20 40 60 80 100
-0.2
-0.3
-0.4
-0.5
Transmitancia (%)
164

Lección 3 Cálculo de la estimación de la incertidumbre para las calibraciones efectuadas en las
practicas de laboratorio.
165
UNIDAD 5 Informe de los resultados de calibración
Introducción Los informes de resultados de la calibración de espectrofotómetros UV‐Vis no
contienen la información suficiente conforme con la ISO 17025, esto ocasiona
que los usuarios no cuenten con la información que les permita validar el
correcto funcionamiento de su instrumento. Revisaremos los elementos que
nos permitan discernir entre aceptar o rechazar un servicio de calibración de
un proveedor o elaborar un informe de resultados adecuado.
Objetivo El asistente conocerá cual es el contenido de un certificado de calibración de
un espectrofotómetro UV‐Vis.
Visión general Se abordará el contenido de certificados de calibración recomendado por la
ISO 17025 y su aplicación para la calibración de espectrofotómetros UV‐Vis.
Estructura de la Lección 1 Certificado de calibración del espectrofotómetros UV‐Vis.

Unidad
Unidad 5
Informe de los resultados de Calibración.
UNIDAD 5 Informe de los resultados de Calibración

Lección 1 Certificado de calibración del espectrofotómetros UV-Vis.
Informe de Resultados
DEBEN ser Informados exactamente.
 Claramente, sin ambigüedad.
 Objetivamente.
 De acuerdo con cualquier instrucción específica en los
métodos.
 Se incluye toda la información requerida para su
interpretación.
168

Contenido
a) Título.
b) Nombre y dirección del laboratorio y localidad donde se realizó
la calibración.
c) Identificación única del informe.
d) Nombre y dirección del cliente.
e) Identificación del método usado.
f) Descripción, condición e identificación sin ambigüedad del
elemento ensayado o calibrado.
g) Fechas de recepción (si es crítico) y realización del ensayo o
calibración.
169

Contenido
h) Referencia al plan de muestreo y procedimientos usados
(cuando sea relevante).
i) Resultados y unidades de medida.
j) Nombre, función y firma de las personas que autorizan.
k) Declaración de relación de resultados con elementos ensayados
o calibrados.
l) Las condiciones bajo las cuales fueron hechas las calibraciones,
que tengan influencia.
m) La incertidumbre de la medición.
n) Evidencia de que las mediciones son trazables.
170

Otros Aspectos del Contenido

 Cuando un equipo ha sido ajustado o reparado, se requieren los
resultados de calibración anteriores y posteriores al ajuste o
reparación.
 Si se incluyen opiniones e interpretaciones, se debe documentar
las bases sobre las cuales se realizaron.
 No debe haber ninguna recomendación de intervalos de
calibración, excepto cuando esto ha sido acordado con el cliente.
 Los resultados de servicios subcontratados deben ser
identificados.
 El formato debe ser diseñado para adaptar cada tipo de ensayo o
calibración y minimizar la posibilidad de malas interpretaciones.
171

Contenido Adicional conforme a la SE

 Logotipo del laboratorio.
 Magnitud calibrada.
 Fecha de emisión.
 Patrones utilizados.
 Firmas, función y firma del personal que calibró.
 Requerimiento de autorización de copia.
 El informe manifestará trazabilidad hacia patrones nacionales
mexicanos.
 Si el informe surtirá efecto fuera de México, se indicará el
acuerdo de reconocimiento vigente y aplicable.
172

Enmiendas y Sustituciones
 Después de haber sido emitido, un informe puede enmendarse
únicamente emitiendo un documento adicional debidamente
identificado.
 Si es necesaria la emisión de un informe sustituto nuevo, éste
debe ser identificado individualmente, conteniendo referencia al
documento original al que reemplaza.
173

CNM-CC-520-XXX/2008 CENAM Hoja Y/Z
Este certificado consta de dos partes: a) Parte 1, se refiere a la calibración de la escala de longitud
de onda; b) Parte 2, se refiere a la calibración de la escala fotométrica, en absorbancia y
transmitancia.
Parte 1
Calibración de la Escala de Longitud de Onda
a) Procedimiento: 520-AC-P.001 “Calibración de espectrofotómetros UV-Vis-IRc”,

que emplea el método de comparación.
b) Patrones de referencia y otros

instrumentos utilizados:
 Materiales de referencia patrón para longitud de onda.
Certificados: CNM-MR-520-XXX/2008, filtro de óxido de Holmio y
filtro de óxido de didimio. Incertidumbre: Ver Tabla No. 1, trazable
a él Patrón Nacional de Transmitancia, Absorbancia y
Reflectancia espectrales mantenido por el CENAM.
Tabla No 1. Incertidumbre para los Materiales de Referencia.

Ancho de Banda Espectral
Material de Referencia Incertidumbre
(ABE)
Filtro de óxido de Holmio 2,0 nm  0,087 nm
Filtro de óxido de didimio 2,0 nm  0,109 nm
c) Condiciones del equipo:

Sin observaciones.
d) Desarrollo:
Una serie de mediciones independientes se realizaron con los materiales de referencia; los
resultados de estas pruebas son promedios de las longitudes de onda que corresponden a
cada máximo de absorbancia para las bandas características de los materiales encontradas
por el instrumento. Las mediciones fueron ejecutadas con una geometría de haz incidente
normal a la superficie del filtro. Una línea base al cero de absorbancia es obtenida,
empleando como referencia al aire, antes de realizar la medición.
Tabla No 2. Parámetros instrumentales usados en la calibración.

PARÁMETRO CONDICIONES
Escala longitud de onda 235 nm a 900 nm
Escala fotométrica en absorbancia 0 a 2,1
Ancho de banda espectral 2 nm
Velocidad de barrido 120 nm/min
Intervalo de longitud de onda 0,1 nm
Este Certificado consta de Z hojas que incluyen la carátula. La reproducción parcial del mismo puede dar lugar a interpretaciones
equivocadas de sus resultados, por lo que se recomienda evitarla.
174

CNM-CC-520-XXX/2008 CENAM Hoja Y/Z CNM-CC-520-XXX/2008 CENAM Hoja Y/Z
e) Resultados: El valor de la incertidumbre de la medición mostrado, no incluye las contribuciones por

estabilidad a largo plazo, deriva y transporte del instrumento calibrado.
Las siguientes tablas muestran los resultados obtenidos de la calibración del instrumento.
g) Trazabilidad:
Tabla No 3. Valores y errores de longitud de onda cuando se emplean los filtros d
óxido de Holmio y óxido de didimio. La calibración realizada tiene trazabilidad a Longitud de onda en nanómetros, nm, unidad
del SI, a través del Patrón Nacional de Transmitancia, Absorbancia y Reflectancia
Filtro de óxido de Holmio Filtro de óxido de didimio. espectrales mantenido por el CENAM.
Longitud de Error Longitud de Error
Onda Onda h) Observaciones:
(nm) (nm) (nm) (nm)
241,1 -0,11 684,5 -0,17 El usuario, con base en el historial del equipo, es el que debe definir el programa de
250,0 -0,17 740,1 0,07 calibración. El presente certificado sólo ampara las mediciones reportadas en el momento y
260,1 -0,13 748,6 0,00 condiciones ambientales y de uso en que se realizó esta calibración. La validez de los
278,0 -0,20 807,4 -0,08 resultados contenidos en este Certificado depende tanto de las características del elemento
287,4 -0,25 879,7 -0,01 calibrado como de las prácticas de su manejo y uso.
333,3 -0,26
345,3 -0,14 i) Recomendaciones:
361,1 -0,04
385,7 -0,22 Enviar el equipo a mantenimiento preventivo para su limpieza antes de la próxima
416,4 -0,23 calibración.
451,3 0,00
467,6 -0,27 2008-XX-XX
473,3 -0,21
485,1 -0,15 Calibró: Aprobó:
536,6 -0,32 Metrólogo del Laboratorio de Jefe de la División de
640,5 -0,27 Caracterización Óptica de Materiales Óptica y Radiometría
El resultado de las mediciones objeto de este Certificado, están expresadas en términos del
Sistema Internacional de Unidades y por lo tanto conforme al Sistema General de Unidades
de Medida. Los patrones nacionales de medición son las referencias con las cuales se
realizan experimentalmente dichas unidades en México.
f) Incertidumbre:
La incertidumbre de la medición se obtuvo multiplicando la incertidumbre estándar
combinada por un factor de cobertura (k) que asegura un nivel de confianza de al menos
95%.
La incertidumbre de la medición fue estimada de acuerdo a la norma NMX-CH-140-INMC

2002 Guía para la expresión de la incertidumbre en las mediciones, equivalente a la Guide
for the Expression of Uncertainties in Measurement BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP,
OIML (1995)
Tabla No 4. Incertidumbre encontrada.

Material de Referencia Incertidumbre
Filtro de óxido de Holmio  0,12
Filtro de óxido de didimio  0,19
Este Certificado consta de Z hojas que incluyen la carátula. La reproducción parcial del mismo puede dar lugar a interpretaciones Este Certificado consta de Z hojas que incluyen la carátula. La reproducción parcial del mismo puede dar lugar a interpretaciones
equivocadas de sus resultados, por lo que se recomienda evitarla. equivocadas de sus resultados, por lo que se recomienda evitarla.
175

Parte 2 NOTA:
Calibración de la Escala Fotométrica
 En los recuadros con símbolo (---) no se indican valores de referencia
debido a que los materiales se encuentran fuera de la región de uso a las
a) Procedimiento: 520-AC-P.001 “Calibración de espectrofotómetros UV-Vis-IRc”, longitudes de onda indicadas.
que emplea el método de comparación.  Para conocer los valores de referencia en Absorbancia, para éstos
materiales de referencia, utilizar la definición de AbsorbanciaRef. 1,2.
b) Patrones de referencia y otros
c) Condiciones del equipo:
instrumentos utilizados:
 Materiales de referencia patrón de densidad óptica neutra para Sin observaciones.
transmitancia y absorbancia. Certificado CNM-MR-520-
XXX/2008. Incertidumbre: Ver Tabla No. 1, trazable a él Patrón d) Desarrollo:
Nacional de Transmitancia, Absorbancia y Reflectancia Una serie de mediciones independientes se realizaron con los materiales de referencia; los
espectrales mantenido por el CENAM. resultados de estas pruebas son promedios que corresponden a los valores de absorbancia
a las longitudes de onda especificadas en éste informe; los valores en transmitancia fueron
Tabla No 1. Incertidumbre para los Materiales de Referencia.
determinados usando la definición de absorbanciaRef. 1,2. Las mediciones fueron ejecutadas
Material de Referencia Incertidumbre con una geometría de haz incidente normal a la superficie del filtro. Una línea base al cero
Identificación Transmitancia (%) Absorbancia (1) de absorbancia es obtenida, empleando como referencia al aire, antes de realizar la
1930-1  0,015  0,0059 medición.
1930-3  0,028  0,0032
930d-10  0,046  0,0020 Tabla No 3. Parámetros instrumentales usados en la calibración.
930d-20  0,063  0,0017 PARÁMETRO CONDICIONES
930d-30  0,108  0,0015 Escala fotométrica en absorbancia 0 a 2,3
1930-50  0,243  0,0021 Escala longitud de onda 225 nm a 750 nm
2031-90  0,286  0,0014 Ancho de banda espectral 2 nm
Tabla No 2. Valores de referencia para los Materiales de Referencia. e) Resultados:

Longitud Transmitancia (%)
de Onda Las siguientes tablas muestran los resultados obtenidos de la calibración del instrumento.
(nm) 1930-1 1930-3 930d-10 930d-20 930d-30 1930-50 2031-90
225 --- --- --- --- --- --- 90,973 Tabla No 4. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en absorbancia.
250 --- --- --- --- --- --- 91,772 Longitud de Absorbancia (1)
280 --- --- --- --- --- --- 92,178 Onda 1930-1 1930-3 930d-10
340 --- --- --- --- --- --- 92,657 (nm) Error Incertidumbre Error Incertidumbre Error Incertidumbre
360 --- --- --- --- --- --- 92,750 440 0,0045  0,0071 0,0018  0,0032 0,0007  0,0019
400 --- --- --- --- --- --- 92,908 465 0,0006  0,0070 0,0005  0,0031 0,0001  0,0019
440 0,563 2,307 8,166 16,316 29,813 50,147 93,009 546,1 -0,0026  0,0065 -0,0020  0,0033 -0,0011  0,0022
465 0,790 3,034 9,741 18,507 33,116 53,529 93,049 590 -0,0006  0,0062 -0,0024  0,0033 -0,0011  0,0022
500 --- --- --- --- --- --- 93,117
635 -0,0031  0,0059 -0,0031  0,0033 -0,0017  0,0021
546,1 0,714 2,847 9,110 17,647 32,155 52,918 93,173
650 -0,0029  0,0060 -0,0027  0,0032 -0,0016  0,0019
590 0,661 2,635 8,260 16,458 29,798 50,111 93,210
700 -0,0008  0,0031 -0,0005  0,0020 0,0000  0,0017
635 0,883 3,284 9,274 17,874 30,508 49,142 93,254
650 0,972 3,520 9,498 18,182 30,321 48,198 93,250 750 -0,0022  0,0031 -0,0020  0,0020 -0,0009  0,0018
700 2,126 6,604 14,332 24,391 35,973 49,586 93,282
750 3,093 8,968 16,159 26,573 35,641 45,082 93,291
176

Tabla No 8. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en transmitancia.

Tabla No 5. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en absorbancia.
Longitud de Transmitancia (%)
Longitud de Absorbancia (1)
Onda 930d-20 930d-30 1930-50
Onda 930d-20 930d-30 1930-50 (nm) Error Incertidumbre Error Incertidumbre Error Incertidumbre
(nm) Error Incertidumbre Error Incertidumbre Error Incertidumbre
440 -0,02  0,08 0,00  0,13 0,06  0,24
440 0,0004  0,0017 -0,0004  0,0015 -0,0008  0,0020
465 0,00  0,09 0,06  0,14 0,07  0,23
465 0,0000  0,0017 -0,0005  0,0015 -0,0006  0,0017
546,1 0,05  0,10 0,06  0,12 0,09  0,26
546,1 -0,0010  0,0017 -0,0011  0,0015 -0,0008  0,0022
590 0,04  0,08 0,10  0,12 0,10  0,24
590 -0,0011  0,0017 -0,0015  0,0015 -0,0010  0,0020
635 0,04  0,10 0,10  0,13 0,14  0,23
635 -0,0017  0,0017 -0,0017  0,0016 -0,0010  0,0020
650 0,03  0,10 0,09  0,13 0,11  0,26
650 -0,0016  0,0017 -0,0017  0,0016 -0,0011  0,0023
700 0,01  0,11 0,04  0,14 0,06  0,25
700 -0,0002  0,0019 -0,0009  0,0015 -0,0005  0,0021
750 0,04  0,11 0,15  0,14 0,12  0,23
750 -0,0009  0,0022 -0,0017  0,0015 -0,0013  0,0021
Tabla No 9. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en transmitancia.

Tabla No 6. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en absorbancia.
Longitud de Absorbancia (1)
Onda 2031-90
Onda 2031-90
(nm) (nm) Error Incertidumbre
Error Incertidumbre
225 -0,0043  0,0019 225 0,89  0,44
250 -0,0030  0,0014 250 0,59  0,30
280 -0,0020  0,0017 280 0,46  0,39
340 -0,0015  0,0018 340 0,31  0,41
360 -0,0013  0,0016 360 0,25  0,34
400 -0,0007  0,0014 400 0,17  0,31
465 -0,0005  0,0014 465 0,13  0,29
500 -0,0005  0,0014 500 0,09  0,30
546,1 -0,0004  0,0013 546,1 0,11  0,29
590 -0,0005  0,0014 590 0,10  0,29
635 -0,0005  0,0014 635 0,09  0,30
650 -0,0005  0,0013 650 0,13  0,29
700 -0,0005  0,0013 700 0,12  0,28
750 -0,0011  0,0013 750 0,22  0,28
Tabla No 7. Errores determinados e Incertidumbres estimadas, en transmitancia. El resultado de las mediciones objeto de este Certificado, están expresadas en términos del
Sistema Internacional de Unidades y por lo tanto conforme al Sistema General de Unidades
Onda de Medida. Los patrones nacionales de medición son las referencias con las cuales se
1930-1 1930-3 930d-10
(nm) Error Incertidumbre Error Incertidumbre Error Incertidumbre
realizan experimentalmente dichas unidades en México.
440 0,02  0,07 -0,01  0,06 -0,02  0,11
f) Incertidumbre:
465 0,01  0,06 -0,02  0,07 -0,03  0,08
546,1 -0,01  0,06 0,04  0,08 0,00  0,08 La incertidumbre de la medición se obtuvo multiplicando la incertidumbre estándar
590 0,03  0,07 -0,02  0,08 0,03  0,08 combinada por un factor de cobertura (k) que asegura un nivel de confianza de al menos
635 0,01  0,06 0,02  0,07 0,03  0,08 95%.
650 0,02  0,06 -0,01  0,07 0,01  0,08
700 -0,02  0,07 0,00  0,07 -0,02  0,09 La incertidumbre de la medición fue estimada de acuerdo a la norma NMX-CH-140-INMC
750 0,01  0,06 0,04  0,08 0,04  0,09 2002 Guía para la expresión de la incertidumbre en las mediciones, equivalente a la Guide
for the
177

CNM-CC-520-XXX/2008 CENAM Hoja Y/Z
Expression of Uncertainties in Measurement BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP, OIML
(1995)
Ver tablas 4, 5, 6, 7, 8 y 9.
El valor de la incertidumbre de la medición mostrado, no incluye las contribuciones por

estabilidad a largo plazo, deriva y transporte del instrumento calibrado.
g) Trazabilidad:
La calibración realizada tiene trazabilidad a unidades de Transmitancia, expresadas en
porcentaje %, y unidades de Absorbancia, unidades del SI, a través del Patrón Nacional de
Transmitancia, Absorbancia y Reflectancia espectrales mantenido por el CENAM.
h) Observaciones:
El usuario, con base en el historial del equipo, es el que debe definir el programa de calibración.
El presente certificado sólo ampara las mediciones reportadas en el momento y condiciones
ambientales y de uso en que se realizó esta calibración. La validez de los resultados contenidos
en este Certificado depende tanto de las características del elemento calibrado como de las
prácticas de su manejo y uso.
i) Referencias:
1. ASTM E 131-05 Standard Terminology Relating to Molecular Spectroscopy
2. CIE 17.4; Vocabulario Internacional de Iluminación; 1987; (845-04-66).
j) Recomendaciones:
Enviar el equipo a mantenimiento preventivo para su limpieza antes de la próxima calibración.
2008-XX-XX
Calibró: Aprobó:
Metrólogo del Laboratorio de Jefe de la División de
Caracterización Óptica de Materiales Óptica y Radiometría
Este Certificado consta de Z hojas que incluyen la carátula. La reproducción parcial del mismo puede dar lugar a interpretaciones
equivocadas de sus resultados, por lo que se recomienda evitarla.
178

Calibración Espectrofotometros

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Curso de Calibración de Espectrofotómetros UV-Vis

• Guillermo Valencia Luna

Laboratorio de Propiedades Ópticas de los

Este curso permite al CENAM transferir el conocimiento

La falta de normas y guías referentes a la calibración de espectrofotómetros

Al finalizar el presente curso el asistente tendrá los conocimientos sobre

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis.

Lección 1 Vocabulario, símbolos, definiciones y breve repaso de la teoría.

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis.

Lección 1 Partes principales del espectrómetros UV-Vis.

UNIDAD 3 Calibración del espectrofotómetro UV-Vis.

Lección 1 Términos básicos de metrología.

UNIDAD 4 Método-Procedimiento de calibración del espectrofotómetro UV-Vis.

Lección 1 Práctica de la calibración de la escala de longitud de onda.

UNIDAD 5 Informe de los resultados de calibración.

Lección 1 Contenido del certificado de calibración del espectrofotómetro UV-Vis.

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Visión general Se abordaran conceptos relacionados con la técnica instrumental acorde a

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Métodos Ópticos de Análisis.

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Longitud de onda []

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Interacción de la energía con la materia.

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

A = -log10[I/I0] = -log10[] = log10[1/] = 2-log10[(%)]

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Reflectancia especular (e) Reflectancia difusa (d) 17

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Índice de Refracción [n]

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Aplicaciones de la Espectrofotometría UV-Vis-NIR

A  lC 553 553.5 554 554.5 555 555.5

UNIDAD 1 Conceptos básicos de espectrofotometría UV-Vis

Aplicaciones de la Espectrofotometría UV-Vis-NIR

Determinación de pesos moleculares

Determinación de fórmulas empíricas

Determinación de constantes de disociación de ácidos y bases

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Objetivo El asistente conocerá las partes que componen un espectrofotómetro UV‐Vis y

Visión general Mediante esquemas de diversos diseños de espectrofotómetros UV‐Vis se

Estructura de la Lección 1 Partes principales del espectrofotómetro UV‐Vis.

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Es un instrumento provisto de filtros para seleccionar una

Instrumento diseñado para medir la energía radiante o flujo

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Instrumento empleado en el análisis

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Los compartimentos de las cuales esta compuesto un

1) Compartimento de lámparas (fuente de energía radiante)

Fuente de Monocro_ Compartimento de

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Esta provisto de fuentes de radiación que emitan en la región

Características de fuentes de radiación:

• Deben producir un haz de radiación cuya potencia sea suficiente

UNIDAD 2 El espectrofotómetro UV-Vis

Lámpara de Tungsteno ( Fuentes térmicas)