PRCTICA 4

COLORIMETRA. LEY DE LAMBERT-BEER

OBJETIVOS
Adquirir los conocimientos bsicos sobre espectrofotometra de absorcin visible,
incluyendo la Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones en Qumica. Para ello se
realizar un experimento en el laboratorio que muestre cmo utilizar un
espectrofotmetro para llevar a cabo la determinacin cuantitativa de un
compuesto.

FUNDAMENTO TERICO
Espectrofotometra ultravioleta visible. Ley de Lambert-Beer.
Los mtodos espectroscpicos de anlisis estn basados en la medida de la radiacin
electromagntica que es absorbida o emitida por una sustancia. En funcin de ello se
clasifican fundamentalmente en:
Mtodos de absorcin: Se basan en la disminucin de la potencia de un haz de
radiacin electromagntica al interaccionar con una sustancia.
Mtodos de emisin: Se basan en la radiacin que emite una sustancia cuando es
excitada previamente por medio de otro tipo de energa (trmica, elctrica).
Mtodos de fluorescencia: Se basan en la radiacin que emite la sustancia cuando
es excitada previamente por un haz de radiacin electromagntica.
Otras clasificaciones de los mtodos espectroscpicos se establecen en funcin de la
regin del espectro electromagntico que interviene en la tcnica. As, pueden utilizarse
regiones como rayos X, ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas, etc. En la Figura 1
pueden verse las regiones del espectro electromagntico, en funcin de los valores de la
longitud de onda () de cada radiacin:

Longitud de onda (nm) 10-3 10-1 10 103 105 107 109 1011 1013

Frecuencia (Hz) 1020 1018 1016 1014 1012 1010 108 106 104

Rayos Ultravioleta Infrarrojo Ondas de radio

Tipo de radiacin
Rayos X Microondas

Visible

400 nm 700 nm

Figura 1
 En esta figura puede tambin observarse como la luz visible para el ojo humano
constituye nicamente una pequea parte del espectro electromagntico.
Dado que los primeros mtodos espectroscpicos desarrollados corresponden a la regin
del visible recibieron la denominacin de mtodos pticos, la cual se utiliza todava con
frecuencia. A continuacin, se ofrece una breve informacin sobre la ley de Lambert-Beer y
la espectrofotometra de absorcin en la regin visible del espectro.
Si se considera que se dispone de una fuente de radiacin que hace llegar a la muestra
un haz de radiacin, de longitud de onda previamente seleccionada, cuya potencia es P 0 , la
muestra de espesor b absorbe una parte de esa radiacin incidente, de forma que la
potencia del haz disminuye despus de atravesar la muestra siendo su nueva potencia P. El
cociente entre la potencia de la radiacin que sale de la muestra y la de la que incidi sobre
ella, se define como transmitancia:
T=P/P 0 .

La transmitancia tambin puede expresarse en tanto por ciento, multiplicando el cociente

anterior por 100. Es ms frecuente utilizar el concepto de absorbancia, o densidad ptica,
que se define como el logaritmo de la transmitancia cambiado de signo:

A = log (P 0 /P) = - log T

De acuerdo con estas expresiones, si la muestra no absorbe radiacin, P y P 0 coinciden,

por lo tanto A=0, y se transmite toda la radiacin T=1 (100% de transmitancia). Si, en otro
caso, se transmite solo un 1% de radiacin (T=0.01), P=P 0 /100, la absorcin de radiacin
que ha tenido lugar corresponde a A=2.
Al incidir radiacin electromagntica visible sobre la materia puede ser totalmente
absorbida o totalmente reflejada. En el primer caso el objeto aparecer de color negro y en
el segundo de color blanco. Puesto que nosotros percibimos los objetos por medio de la luz
reflejada, si hacemos incidir un haz de luz blanca (que contiene todas las longitudes de
onda) sobre un objeto, ste absorber ciertas longitudes de onda y reflejar otras, siendo
stas ltimas las responsables del color. Se dice que este color (observado) es
complementario del que se percibira si la luz absorbida se pudiera detectar. Dado que en la
parte experimental de esta prctica las medidas van a realizarse con espectrofotometra
visible, es conveniente conocer para qu longitud de onda tiene cada color su mxima
absorcin, lo que se muestra en la tabla siguiente:

Colores de la luz visible

Longitud de onda de
Color absorbido Color observado
mxima absorcin(nm)

380-420 Violeta Amarillo-verde

420-440 Azul-violeta Amarillo

440-470 Azul Anaranjado

470-500 Verde-azul Rojo

500-520 Verde Prpura

520-575 Amarillo-verde Violeta

 Para medir los valores de absorbancia y transmitancia de una disolucin se utilizan
espectrofotmetros UV-Vis, que, como puede verse en la Figura 2, se componen de cinco
elementos principales:
Una fuente de radiacin que suele ser una lmpara de filamento de wolframio
Un monocromador que permite seleccionar una longitud de onda determinada
originando un haz monocromtico.
Un recipiente para contener la muestra denominado cubeta fabricado con un material
que permite el paso de la radiacin en la regin del espectro de inters. Suelen ser de
vidrio, plstico o cuarzo. El espesor de la cubeta ms habitual es 1 cm.
Un detector que convierte la energa radiante en una seal elctrica.
Una pantalla de visualizacin

Monocromador Detector

Muestra Pantalla
Fuente de
radiacin

Figura 2

La absorbancia est relacionada con la concentracin de la sustancia, c, por la ley de

Lambert-Beer, que se resume con la ecuacin: A = b c , donde c se expresa en mol/L, b
es la longitud del camino ptico (anchura de la clula que contiene la disolucin de la
sustancia) y se expresa en cm, y es la absortividad molar, propiedad caracterstica de cada
sustancia correspondiente a la cantidad de radiacin que absorbe a una longitud de onda
determinada por unidad de concentracin, siendo sus unidades L mol-1cm-1 (tngase en
cuenta que la absorbancia no tiene unidades).
Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente una
longitud de onda puesto que tanto A como varan con ella. Para ello se obtiene
previamente el espectro de absorcin de la sustancia, que consiste en una representacin
de los valores de absorbancia frente a la longitud de onda expresada en nanometros (nm).
Del espectro de absorcin puede seleccionarse el valor de longitud de onda para el cual la
absorbancia es mxima. La Figura 3 muestra dos ejemplos de espectro de absorcin.
 x

Absorbancia
y

2 1

Longitud de onda

Figura 3

Si bien la ley de Lambert-Beer indica que a una representacin grfica de la absorbancia

frente a la concentracin le correspondera una lnea recta, esto slo tiene lugar para
disoluciones diluidas, por ello, no es conveniente utilizar la expresin matemtica
directamente, sino construir en cada caso la recta de calibrado que confirme que la ecuacin
de Lambert-Beer se cumple en el intervalo de concentraciones en el que se trabaja. Esta
recta se construye midiendo la absorbancia de una serie de disoluciones de concentracin
perfectamente conocida.
En la prctica que realizaremos a continuacin se determinar la concentracin de cobre
presente en una determinada muestra por espectrofotometra. Para ello se formar
previamente el complejo con amoniaco, es decir, Cu(NH 3 ) 4 2+. Por otro lado, se medir la
absorbancia de una serie de disoluciones cuya concentracin de Cu(NH 3 ) 4 2+ es
perfectamente conocida, representndose el valor de absorbancia obtenida frente a la
concentracin (recta de calibrado). Por ltimo, a partir del valor de absorbancia medido para
la disolucin problema y utilizando la recta de calibrado se determinar la cantidad de cobre
presente en la muestra problema.
El compuesto formado Cu(NH 3 ) 4 2+ presenta color azul. Como ya se ha mencionado
anteriormente para que una sustancia sea coloreada debe absorber luz visible,
provocndose como consecuencia trnsitos electrnicos. En el caso del complejo amoniacal
de cobre, la presencia de los ligandos (NH 3 ) alrededor del ion Cu2+ provoca que los orbitales
3d del Cu2+ se diferencien energticamente, posibilitando la absorcin de un fotn de
energa adecuada que provoca un trnsito electrnico, como puede verse en la figura 4.

4s 3d
Cu2+ (Z=29) [Ar] [Ar] 3d9
 Figura 4

MATERIAL Y REACTIVOS

Material 10 frascos de polipropileno

Un frasco lavador
Un vaso de precipitados de 50 mL
Un espectrofotmetro
4 matraces aforados de 50 mL
Cubetas espectrofotomtricas.
Una pipeta graduada de 5 mL
Una pipeta graduada de 10 mL

Reactivos
Sulfato de cobre 0.1000 M Amoniaco (Dispensador 10 mL)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

En el manejo del espectrofotmetro han de observarse una serie de precauciones:

No dejar huellas en las paredes de la cubeta espectrofotomtrica.
Enjuagar cuidadosamente la cubeta espectrofotomtrica con la disolucin que va a ser
medida, antes de llenarla definitivamente.
Realizar las medidas empezando por la disolucin ms diluida y acabando por la ms
concentrada.

Construccin de la recta de calibrado

1. Coger 50 mL de una disolucin patrn 0.1000 M de sulfato de cobre.
2. A partir de la disolucin anterior y de una disolucin de amoniaco preparar varias
disoluciones del complejo Cu(NH 3 ) 4 2+ de concentracin conocida. En concreto, estas
disoluciones se prepararn mezclando 5.0 mL de amoniaco con 1.0, 2.5, 3.5, 5.0, 6.0, 7.5,
8.5 y 10.0 mL respectivamente de la disolucin patrn de sulfato de cobre y enrasando en
un matraz aforado de 50 mL con agua destilada. Las disoluciones se guardarn en frascos
de polipropileno y se etiquetarn hasta el momento de medir la absorbancia.
3. Preparar la disolucin que ser utilizada como blanco. Para ello se pondrn 5.0 mL de
amoniaco en un matraz aforado de 50 mL y se enrasar con agua destilada.
4. Elegir la longitud de onda a la cual se realizar posteriormente la medida de la
absorbancia. Esa longitud de onda es la correspondiente al mximo de absorcin, pues es
ah donde la sensibilidad es mxima. Adems, las medidas de absorbancia en esa zona
implican un menor error frente a pequeas variaciones en la longitud de onda que las
realizadas en cualquier otra zona de la banda de absorcin. Para elegir la longitud de onda
de medida se ha obtenido el espectro de absorbancia de una de las disoluciones preparadas
anteriormente (la obtenida mezclando 5.0 mL de amoniaco y 8.5 mL de disolucin patrn de
cobre) entre 550 y 650 nm. Dicho espectro se muestra a continuacin:

1.0

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0.0
400 500 600 700 800

/ nm

5. Medir la absorbancia de cada una de las disoluciones preparadas (a la longitud de onda

determinada en el apartado anterior).
6. Representar la recta de calibrado.

Determinacin de la cantidad de cobre en una muestra problema.

1. Medir la absorbancia (a la longitud de onda de mxima absorcin) de una muestra
problema que contiene cobre. Dicha muestra es suministrada por el profesor y ha sido
preparada mezclando una cantidad desconocida de disolucin patrn de cobre con 5.0 mL
de amoniaco. Esta determinacin se realizar por duplicado.

RESULTADOS Y CUESTIONES
1. Comentar el espectro de absorcin del complejo amoniacal y explicar cul ha sido la
longitud de onda elegida para medir la absorbancia.
2. Calcular la concentracin exacta de la disolucin patrn de CuSO 4 preparada a partir de
la masa pesada. Con qu instrumento se realiz la pesada? Se enras en probeta o en
matraz aforado? Por qu?
3. Completar la siguiente tabla:

Disolucin V V CuSO 4 Cu(NH 3 ) 4 2+ Absorbancia

amoniaco (mL) (M) medida
(mL)
PATRN 1
PATRN 2
PATRN 3
PATRN 4
PATRN 5
PATRN 6
PATRN 7
PATRN 8
PATRN 9
PROBLEMA

4. Representar grficamente la absorbancia frente a la concentracin.

5. Hallar la concentracin (mol/L) de la disolucin problema a partir de la recta de calibrado.
6. Hallar la concentracin de la disolucin problema a partir de la expresin algebraica de la
ley de Lambert-Beer. Para ello, es necesario obtener previamente el valor del coeficiente de
absorcin molar a partir de la pendiente de la recta de calibrado.

BIBLIOGRAFA

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Higson, S. P. J. Qumica Analtica. 1 ed. Captulo 5. Ed. Mc Graw Hill. 2007.

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