ANTI-HUMAN GLOBULIN

PRESENTACION AGH
Anti-globulina humana poliespecfica
REF 3410010 Anti-Human Globulin 10 mL Ensayo cualitativo para la deteccin de anticuerpos o
componentes del complemento humano.
PRUEBA EN TUBO
Slo para uso diagnstico in vitro

FUNDAMENTO ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

La prueba de la antiglobulina o prueba de Coombs, permite 1. Todos estos reactivos son estables hasta la fecha de
la deteccin e identificacin de globulinas ligadas caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se
inmunolgicamente a los hemates. mantienen bien cerrados a 2-8C y se evita la
La adicin del reactivo antiglobulina a los mismos contaminacin durante su uso. No usar los reactivos una
ocasionar su aglutinacin. vez caducados.
2. No congelar o exponer el reactivo a altas temperaturas. La
APLICACIONES conservacin del producto a temperatura distinta de la
recomendada acelera la perdida de reactividad de producto.
Prueba de Coombs Indirecto 3. Estos reactivos deben ser claros y transparentes. La presencia
- Deteccin de anticuerpos irregulares de turbidez puede indicar contaminacin microbiana.
- Pruebas de compatibilidad 4. Descartar el contenido del vial, en caso de turbidez, rotura o
- Determinacin de fenotipos prdida de contenido.
- Identificacin y titulacin de anticuerpos
MUESTRAS
Prueba de Coombs Directo
- Enfermedad hemoltica del recin nacido Las muestras de sangre pueden ser extradas con o sin
- Anemia hemoltica autoinmune anticoagulante. Se debe realizar el ensayo lo antes posible tras
- Reaccin hemoltica post-transfusional su extraccin. Conservar las muestras a 2-8C.
Ensayar el suero antes de 24 horas, mantenido a 2-8C desde la
separacin del coagulo.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS No se debe usar muestras hemolizadas o contaminas.

El reactivo de anti-globulina humana es una mezcla de anti- EQUIPO ADICIONAL

IgG humana policlonal y C3d monoclonal.
El reactivo coloreado verde permite comprobar visualmente
la adicin del mismo a todos los tubos. - Pipetas Pasteur.
ANTI-HUMAN Suero de conejo anti-IgG humana
GLOBULIN purificada.
Anticuerpo monoclonal anti-C3d (murino).
Tampn estabilizante. Azida sdica <0,1%.
Colorantes: Patent Blue y Tartrazine.
Precauciones: Se aconseja manipular los reactivos y las
muestras con las precauciones debidas. Usar guantes y
ropa protectora.
Aviso: Los reactivos contienen azida sdica. Evitar el
contacto con la piel y mucosas.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Los reactivos estn listos para su uso. 3.
- Tubos de vidrio (10x75 mm 12x75 mm).
- Bao a 37C.
- Centrifuga Sero-fuge o similar.
REACTIVOS ADICIONALES
- Tampn Fosfato (PBS): 8,5-9,0 g/L NaCl (0,145 mol/L0,154
mol/L) pH 7,0 0,2 a 22 1C.
- Hemates control: Negativo (hemates Rh negativos sensibilizados
con Anti-D) y Positivo (hemates Rh positivos sensibilizados
con Anti-D dbil).
TECNICA
I Test de Coombs Indirecto
1. En un tubo de hemlisis depositar 1 gota de suero
problema.
2. Aadir 1 gota de suspensin de hemates lavados
(como mnimo 1 vez) al 3% en PBS.
Mezclar e incubar a 37C durante 30-60 minutos.
4. Lavar la mezcla 3 veces con abundante PBS.
Lavado (Nota 1): llenar el tubo con PBS (aprox. 4 mL)
y centrifugar los hemates el tiempo adecuado para
que sedimenten bien los hemates, decantar el

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ISO 9001 ISO 13485 Telf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website www.linear.es
 el sobrenadante. Repetir la operacin 2 veces ms.
Decantar completamente tras el ltimo lavado.
5. Aadir 2 gota de Anti-globulina humana.
6. Mezclar y centrifugar a 1000 f.c.r. durante 20
segundos o por una fuerza y tiempo equivalentes
(Nota 2).
II Prueba de Coombs Directo
1. Preparar una suspensin de hemates problema 3%
en PBS.
2. Depositar 1 gota de la suspensin en un tubo de
hemlisis.
3. 1.Proseguir segn lo indicado en los apartados 3 al 5
del Test de Coombs Indirecto.
Lectura (Nota 3)
Golpear suavemente el tubo para desprender el sedimento
y examinar la presencia o ausencia de aglutinacin.
- Reaccin negativa:
La resuspensin de los hemates es homognea.
- Reaccin positiva:
Los hemates positivos permanecen aglutinados una
vez resuspendidos.
Interpretacin
- Reaccin positiva:
La aglutinacin de los hemates problema es indicativa
de la presencia de anticuerpos, teniendo en cuenta las
limitaciones del procedimiento.
- Reaccin negativa: La ausencia de aglutinacin de los
hemates problema es indicativa de un resultado
negativo, teniendo en cuenta las limitaciones del
procedimiento, y confirma la ausencia anticuerpos en
los hemates ensayados.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
- El lavado inadecuado de los hemates, la
contaminacin de los reactivos con trazas de suero,
tiempos de incubacin y centrifugado incorrectos, mal
control de la temperatura e inadecuada conservacin u
omisin de los reactivos dan reacciones negativas
falsas.
- Los hemates problema, tanto de pacientes como de
donantes, con Pruebas Directas positivas darn un
falso resultado positivo si se les practica la Prueba de
la antiglobulina Indirecta.
- El suero usado no debe ser conservado mas de 24 h a
2-8C o 1 mes a 20C ya que el anti-Complemento
puede perder su actividad.
- El reactivo no aglutina los hemates sensibilizados con
fragmentos C4d.
- Ningn test es capaz individualmente de detectar
todos los anticuerpos clnicamente significativos.
- El reactivo debe ser usado tal como se suministra, sin
diluir y sin adiciones.
- El reactivo ha sido formulado y validado usando tubos
de vidrio.
- El uso e interpretacin de los resultados debe llevarse
a cabo por personal formado y cualificado, de acuerdo
con la normativa de cada pas.
REFERENCIAS
- Coombs R.R.A., Mourant, A.E. y Race, R.R. Lancet
ii:15 (1945).
- Coombs R.R.A., Mourant, A.E. y Race, R.R Brit J Exp.
Path. 26:225 (1945).
- Pirofsky B. American Association of Blood Banks:59
(1972).

CONTROL DE CALIDAD

Para confirmar la validez de los resultados negativos aadir

una gota (50 L) de hemates sensibilizados con anti D
(Hemates Control de Coombs), centrifugar y leer en busca
de aglutinacin (ver Apartado 6 y Lectura de la Prueba en
tubo). Si los hemates no aparecen aglutinados, el ensayo
es invalido y debe repetirse.

NOTAS

Nota 1. Efectuar el lavado de los hemates sin

interrupcin.
Nota 2. Centrifugar y leer los resultados inmediatamente
despus de la adicin de la Anti-globulina.
Retrasos en la lectura pueden provocar
disociacin del complejo antigeno-anticuerpo,
dando falsos resultados negativos o reacciones
dbiles.
Nota 3. Leer los tubos inmediatamente despus de su
centrifugacin.

CARACTERISTICAS FUNCIONALES

- Los reactivos han sido ensayados, segn lo

especificado en el apartado de TCNICA.
- Antes de aprobar cada lote Linear Chemicals prueba el
reactivo frente a hemates sensibilizados.
G3410-2/0407
R1.cas

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