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TRABAJO DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA

PRECIPITACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS
INTRODUCCIÓN
El presente trabajo de investigación está básicamente relacionado con el campo de la
purificación de proteínas terapéuticas como son las inmunoglobulinas son un tipo de
proteínas que están clasificadas de la siguiente manera: IgM, IgG, IgA, IgD, IgE y son
sintetizadas por nuestro organismo con el fin de conferir inmunidad, los productos
derivados de plasma sanguíneo tales como albúmina humana, la inmunoglobulinas
humanas y antivenenosa heterólogos, son medicamentos importantes en el tratamiento
de diversas enfermedades que pueden ser naturales como aquellas ligadas al
cromosoma, accidentes y lesiones entre otras. y puesto que son anticuerpos en
determinadas situaciones patológicas puede ser necesaria la administración de
inmunoglobulinas intravenosas (IgIV).De acuerdo al trabajo a realizar, en este
documento se describirá el/los método(s) más factible(s) para las extracción de
gammaglobulinas en el suero humano ya que es un muy importante tema de actualidad
debido aumento de la demanda actual de estos productos, es importante mejorar la
eficiencia de los métodos de producción de los mismos, para poder abastecer
adecuadamente dicha demanda, y de esta manera prevenir que a corto plazo se
presente una escasez global de estos medicamentos.

OBJETIVOS
 Aprender y comprender los métodos y técnicas más adecuados para la
extracción de gammaglobulinas.
 Buscar la información más relevante sobre la precipitación de
gammaglobulinas.

DESARROLLO
GAMMAGLOBULINAS
Las inmunoglobulinas son complejos proteicos que actúan como anticuerpos. La
estructura básica de las inmunoglobulinas es una unidad formada por dos cadenas
ligeras y dos cadenas pesadas. Estas unidades contienen dominios variables y dominios
constantes. Las regiones constantes de las cadenas pesadas son responsables de la
activación del complemento y de la capacidad de algunas de estas unidades de formar
polímeros. La clasificación de las inmunoglobulinas se de acuerdo a las cadenas pesadas
expresadas en su estructura y estás han sido designadas como: Gamma, Alfa, Delta,
Épsilon y Mu siendo estos tipos de inmunoglobulinas conocidas generalmente como IgG,
IgA, IgD, IgE e IgM respectivamente. Las inmunoglobulinas que contienen cadenas
gamma se denominan IgG. Las moléculas de IgG están formadas por una unidad (LH)2
. Las Inmunoglobulinas G son las inmunoglobulinas mas abundantes en el suero (600-
1800 mg/dL). Estas inmunoglobulinas promueven la fagocitosis en el plasma y activan al
sistema del complemento. Las IgG son el único tipo de anticuerpos que puede cruzar la
placenta. (1)
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PRECIPITACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS
Los datos antecedentes sobre gammaglobulina datan a 1935, McKhann y colaboradores
publicaron un estudio en el que preparaban extractos de placenta con el fin de purificar
y concentrar el anticuerpo contra el sarampión y demostraron que el extracto era eficaz
en la prevención o modificación de la enfermedad. Este fue el primer antecedente del
uso clínico de la gammaglobulina. Los trabajos de Cohn y su grupo en 1940, reconocieron
la extensa experiencia del uso de plasma en diversas afecciones médicas, como
quemaduras, choque, profilaxis o en el tratamiento de ciertas enfermedades
infecciosas. Fue entonces que se demostró que estas preparaciones concentradas de
anticuerpos eran útiles contra enfermedades con diferentes. Casi una década después,
en 1952, Bruton publicó su experiencia con la administración de gammaglobulina, a un
paciente al que se aislaron ocho diferentes tipos de pneumococo. Estos hallazgos dieron
lugar a la primera administración de gammaglobulina en un paciente con deficiencia de
ésta. Se administraron 3.2 g de gammaglobulina (GG) vía subcutánea (SC). El estudio de
electroforesis mostró la presencia de gammaglobulina, que desapareció en un promedio
de seis semanas. Actualmente, esta inmunodeficiencia se conoce como
agammaglobulinemia de Bruton o agammaglobulinemia ligada a X, a fines de esté año
aún existían muchos problemas con la administración de este tipo de Igs ya que no
encontraban la dosis adecuada, no fue hasta 1966 donde se logró administrar via
intravenosa pero todavía no se resolvía la consistencia de IgG ya que está no era pura y
podía conllevar ciertos riesgos. El reto fue encontrar la manera de tratar químicamente
la gammaglobulina concentrada para que no formara agregados, no se activara el
complemento y, al mismo tiempo, dejara las porciones FC y Fab biológicamente intactas.
Este proceso llevó a que la gammaglobulina fuera tratada por diferentes métodos,
probando diferentes sustancias como el polipropilenglicol, sistemas enzimáticos,
manipulación de pH, Temperatura y combinaciones de estos con el fin de encontrar una
solución de manera estándar. Con ello probaron diferentes soluciones de Igs al 5% poco
estable, y aún activaba el sistema de complemento, una solución al 10% para vía IV y un
de 16,5% para vía subcutánea las cuales fueron más estables y eficientes. Por ultimo una
solución al 20% para administración vía sub cutánea existiendo 2 producto que difieren
por el estabilizaor de los cuales pueden mantenerse estable hast una temperatura de
25° y tiene la ventaja de poder administrarse cada tres o cuatro semanas. (2)
El material de partida para la obtención de la gammaglobulina (inmunoglobulina G
humana o IgG) de la invención procede de un pool de donaciones (superior a 1000) de
plasma humano formando una mezcla polivalente de actividades anticuerpo, cuyas
unidades individuales han sido testadas frente a los marcadores típicos de infecciosidad
(virus VIH, hepatitis B, C). La administración de la gammaglobulina puede efectuarse por
vía intramuscular, o más efectivamente por vía intravenosa. Esta segunda vía presenta
grandes ventajas terapéuticas con respecto a la primera, como es su mayor eficacia,
pero puede acarrear reacciones adversas graves. Sólo los productos obtenidos en unas
condiciones que no promuevan la desnaturalización y con un grado de pureza adecuado,
son aceptables por vía intravenosa. (3)
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Método para la producción de gammaglobulina G humana inactivada de virus,


caracterizado por comprender las siguientes etapas:
a) Extraer gammaglobulina de una fracción aislada por fraccionamiento con
etanol en presencia de un carbohidrato.
Se parte de un precipitado rico en IgG obtenido por fraccionamiento etánolico
del plasma humano, preferentemente de la fracción II+III del método de Cohn.
Cada kilogramo de dicho precipitado se suspende en una solución acuosa,
preferentemente a razón de 5 kg a 25 kg de una solución que contiene un
carbohidrato, preferentemente un azúcar-alcohol, y más preferentemente
sorbitol a una concentración (p/v) comprendida entre el 2% hasta el 10%. Como
amortiguador de pH se utilizan preferentemente iones fosfato y acetato, a una
concentración tal que el pH de la suspensión acuosa de la fracción II+III se halla
entre 4,8 y 5,8, y la conductividad no excede de 2 mS/cm. Después de un tiempo
mínimo de agitación, preferentemente superior a 1 hora, se procede a precipitar
la mayoría de las globulinas extraídas acompañantes a la IgG con PEG de peso
molecular nominal de 4000 preferentemente, en un rango de concentración
(p/p) del 2,5% hasta el 5,5%, y a la temperatura preferente de 2ºC-8ºC.
Seguidamente, y antes de proceder a la separación del precipitado, se añade
preferentemente un adsorbente de lípidos y lipoproteínas, como por ejemplo la
bentonita, así como preferentemente un coadyuvante de filtración, o
equivalentes, de forma tal que favorezca la filtrabilidad de la suspensión. (3)
b) Reducir el contenido de contaminantes con PEG
El precipitado formado es retenido preferentemente por filtración-prensa
utilizando hojas o placas filtrantes de profundidad de celulosa de forma que el
filtrado obtenido tiene una turbidez inferior a 5 NTU (unidades nefelométricas
de turbidez). Opcionalmente, el precipitado puede separarse de forma
combinada por centrifugación y filtración. Si el precipitado ha sido retenido por
filtración-prensa, este puede ser lavado con una solución apropiada ajustada a
una concentración de PEG, iones fosfato-acetato y pH, equivalente a las
condiciones de ajuste de la precipitación, favoreciendo ello una mayor
recuperación de IgG. El filtrado obtenido se lleva a un pH de entre 5,7 a 6,3,
preferentemente por adición de solución diluida de hidróxido sódico, y se
somete a clarificación en línea con la inyección a una columna de intercambio
iónico. (3)
c) Aplicación a una resina de intercambio aniónico en columna
La columna de intercambio iónico contiene resinas con ligando aniónico,
preferentemente las del tipo dietil amino-etil (DEAE), unida a una matriz
insoluble del tipo agarosa, o preferentemente DEAE-agarosa, y comercialmente
conocidas por Sepharose, preferentemente las que poseen alta capacidad
dinámica (FF o fast-flow). La columna utilizada, preferentemente es del tipo de
distribución en flujo radial, siendo preferentemente con un recorrido (o altura
de lecho) de entre 8 cm-15 cm. El filtrado se ajusta a un caudal preferentemente
inferior a cuatro volúmenes de columna por hora, inyectándose en la columna
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que contiene empaquetadas las resinas, hasta agotar la solución, de forma tal
que la cantidad introducida, equivalente a material de partida inicial (fracción
II+III, preferentemente), se halla preferentemente entre 1 g-2,5 g por ml de
resinas. Una vez finalizada la carga de la solución, se lava la columna
preferentemente con 2,5 volúmenes hasta 4,5 volúmenes de columna de una
solución de fuerza iónica y pH similar a la solución del producto previamente
inyectada. (3)
d) Reducción del contenido de PEG en el efluente por ultrafiltración
El líquido efluente durante la carga y lavado, o excluido de columna (fracción no
adsorbida), se ultrafiltra con el fin de reducir el contenido de PEG y obtener la
adecuada concentración de proteína para llevar a cabo las posteriores etapas de
inactivación vírica. La membrana de ultrafiltración preferente tiene un corte
molecular nominal de 100 kDa, y preferentemente construida con polisulfona (o
sus derivados). Inicialmente la solución se ajusta a pH entre 5,0 y 5,5 por adición
de un ácido débil (por ejemplo acético diluido) y se mantiene a la temperatura
de 2ºC-8ºC, iniciándose la filtración a una presión transmembrana de entre 1,5
bar-2 bar, preferentemente. Después de reducir el volumen, preferentemente
hasta la mitad del inicial, se diafiltra preferentemente a volumen constante
empleando, preferentemente, entre 1-3 volúmenes de agua para inyección.
Luego, se lleva el pH de la solución a 4,0-4,8, y preferentemente entre 4,2-4,6,
por adición de un ácido mineral. La presión transmembrana se ajusta a un valor
inferior a 1,2 bar, y preferentemente entre 0,5 bar y 1,0 bar, y opcionalmente se
concentra de nuevo mediante reducción del volumen actual hasta la mitad. Se
diafiltra, preferentemente por adición de no menos de 3 volúmenes de una
solución que contiene un azúcar-alcohol, preferentemente sorbitol a la
concentración (p/v) de entre 2%-10% ajustado al pH de 4-5 con ácido acético.
Finalmente se concentra de proteína hasta el valor requerido, preferentemente
hasta una densidad óptica (a 280 nm) superior a 45 UA (unidades de absorción),
siendo posteriormente esterilizada por filtración, usando membrana absoluta de
0,22 micras, preferentemente. Opcionalmente, la solución esterilizada y
estabilizada puede conservarse durante largo período de tiempo a la
temperatura de 2ºC-8ºC.
Finalizado el eventual tratamiento a pH ácido, se lleva a 2ºC-8ºC y se alcaliniza la
solución por adición preferente de una base fuerte diluida alcanzando el pH un
valor comprendido entre 4,7 y 5,2. Se añade seguidamente un carbohidrato
como estabilizante, preferentemente un azúcar-alcohol y más preferentemente
sorbitol, a una concentración (p/p) final preferente de entre 25%-35%. (3)
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e) inactivación secuencial vírica del efluente ultrafiltrado por lo menos por un


método seleccionado entre el grupo que consiste en:
(i) pasteurización
Se pasteuriza a 60ºC-62ºC durante 10 horas-12 horas, preferentemente en
ambos casos. A continuación, se diluye la solución con agua para inyección hasta
que la concentración del carbohidrato o preferentemente del azúcar-alcohol, sea
inferior al 25% (p/p) y la proteína se halle comprendida entre 1% y 3% (p/v). (3)
(ii) tratamiento con disolvente/detergente;
Una vez enfriada la solución a temperatura ambiente, se añade una solución
concentrada de una mezcla de solvente-detergente, formada preferentemente
por los reactivos alquil-fosfato y detergente no iónico, y más preferentemente
por el tri-n-butil fosfato y el polisorbato-80, de forma tal que la concentración
final (p/v) se halla preferentemente al 0,3% y 1% de los dos reactivos
respectivamente. La incubación se efectúa a 24ºC-28ºC durante un período de
entre 4 horas-8 horas preferentemente en ambos casos. (La solución inactivada
de virus se halla a partir de entonces en una área de seguridad viral exclusiva
para productos inactivados, dentro de la cual se efectúan las operaciones
restantes). Posteriormente se diluye la solución con agua fría para inyección,
preferentemente adicionando entre 1 kilogramo a 2 kilogramos del agua por
cada kg de solución, precipitándose prácticamente toda la proteína presente por
adición de suficiente cantidad de PEG (de peso molecular 4000
preferentemente), llevando la solución a una concentración final (p/p) entre 12%
y 17% de PEG, y ajustando previamente el pH entre 7,0 y 9,0, preferentemente
entre pH 7,8 y 8,4, a la temperatura preferente de 2ºC-8ºC. Después de un
tiempo prudencial de homogeneización, preferentemente superior a 1 hora (en
agitación) y de un eventual reposo, se inicia la retención del precipitado en un
equipo de filtración sobre membrana de flujo tangencial (TFF). El líquido filtrado
que está separándose, contiene entre otros, los reactivos de inactivación
utilizados en la anterior etapa solvente-detergente. La membrana de filtración
tangencial preferente es la construida con fluoruro de polivinilideno (PVDF) de
la marca Millipore (configuración Prostak o modelos equivalentes). Otros
materiales compatibles con los reactivos que contiene la solución, como la
polisulfona, puede opcionalmente utilizarse en lugar del PVDF. El tamaño de
poro de la membrana de filtración se halla entre 0,1 micras y 0,45 micras,
preferentemente. La separación del filtrado se lleva a cabo a una presión
transmembrana inferior a 1,5 bar. (3)
f) Precipitación y lavado con PEG de la gammaglobulina G humana inactivada de
virus a efectos de eliminar cualquier reactivo químico de inactivación vírica
Una vez el volumen de la suspensión inicial se ha reducido hasta 4 veces-8 veces
preferentemente, se inicia el lavado del precipitado retenido por adición a
volumen constante de una solución que contiene PEG, preferentemente a la
misma concentración que la usada en la precipitación precedente, y
preferentemente el mismo carbohidrato utilizado en la pasteurización,
preferentemente un azúcar-alcohol, a una concentración (p/p) entre 5% y 20%.
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Después de consumir preferentemente entre 4 volúmenes y 6 volúmenes de la


anterior solución de lavado se procede a solubilizar el retenido con una solución
ácida a un pH inferior a 5,5 que contiene preferentemente el mismo
carbohidrato utilizado en las etapas anteriores. Preferentemente la solución esta
formada por ácido acético entre 1 mM y 10 mM a la cual se añade un azúcar-
alcohol a una concentración (p/p) preferente entre 5% y 20%, y se ajusta con un
álcali hasta pH 4,0-4,5. La temperatura de la solución no excede de 37ºC, y
preferentemente se halla entre 2ºC-8ºC. Se añade una cantidad de solución
ácida para la solubilización entre 2,5 veces y 4,5 veces la cantidad de suspensión.
De esta forma la concentración (p/p) final de PEG se sitúa entre 2% y 4%, y
preferentemente entre 2,8% y 3,4%, hallándose el azúcar-alcohol
preferentemente entre 5% y 20%. Se deja la solución de solubilización en
contacto con el precipitado retenido mediante recirculación hasta lograr su total
disolución. (3)
g) solubilización y cambio del pH de la gammaglobulina G humana inactivada de
virus precipitada y lavada a efectos de eliminar contaminantes de proteína; y
El producto solubilizado se lleva a un pH comprendido entre 7,5 y 8,5, y
preferentemente entre 7,8 y 8,3, por adición de un hidróxido alcalino diluido o
una base débil aceptable, siendo la temperatura preferente de 2ºC-8ºC. Después
de homogeneizar, el precipitado formado puede separarse preferentemente a
través del mismo equipo de TFF anteriormente utilizado, recuperándose el
filtrado como producto de interés. Otra forma de proceder es la sustitución del
equipo de TFF por filtros de membrana, placa o cartuchos multicapa
(profundidad) desechables.
El filtrado obtenido, libre de agregados de alto peso molecular, así como de la
mayor parte de los reactivos del solvente-detergente, se lleva a pH entre 5-6
preferentemente, por adición de ácido diluido. (3)
h) ultrafiltración de dicha gammaglobulina G a efectos de reducir el contenido de
PEG y subsiguiente concentración al valor de proteína requerido.
La solución se ultrafiltra con el fin de reducir el contenido de PEG y de otros
compuestos de bajo peso molecular, y obtener la adecuada concentración de
proteína para ajustar el producto a la formulación final. La membrana de
ultrafiltración preferente tiene un corte molecular nominal de 100 kDa, y
preferentemente construida por polisulfona (o sus derivados) de las marcas
comerciales Millipore y Pall-Filtron. Se inicia la ultrafiltración a una presión
transmembrana de entre 1,5 bar-2 bar, preferentemente. Después de reducir el
volumen, preferentemente hasta 1/2 a 1/3 del inicial, se diafiltra
preferentemente a volumen constante, empleando preferentemente 1 volumen
de agua para inyección. Luego, se lleva el pH de la solución a 4,0-4,8 y
preferentemente entre 4,2-4,6 por adición de un ácido mineral diluido. La
presión transmembrana se ajusta a un valor inferior a 1,2 bar, y preferentemente
entre 0,5 bar y 1,0 bar, y se concentra de nuevo mediante reducción del volumen
actual hasta 1/2 a 1/3 del inicial. Se diafiltra preferentemente por adición de no
menos de 5 volúmenes de una solución que contiene un azúcar-alcohol,
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preferentemente sorbitol a una concentración (p/v) de entre 2%-10% ajustado


al pH de 4-5 con ácido acético. La anterior solución diafiltrada y preferentemente
concentrada al 1%-3% (p/v) de proteína, se ajusta de pH entre 4,4 y 5,0 si fuese
necesario y se calienta preferentemente a 25\pm5ºC. Después se procede a una
eventual filtración de virus por membranas de retención de poro nanométrico
igual o inferior a 50 nm nominal, y preferentemente de 20 nm nominal
aproximadamente (DV20 de la marca Pall) con una recuperación de proteína
superior al 90% y una productividad superior a 1 kg de proteína/m^{2} de área
de filtración en menos de 24 horas de proceso, o también preferentemente las
comprendidas entre 15-20 nm nominales (BMM-Planova 15N o P21, ambas de
la marca Asahi; VNF "Parvo" de Millipore) con recuperación de proteína superior
al 80%. (3)
Finalmente se concentra de proteína por ultrafiltración con membranas de 100 kDa, o
menor tamaño de corte molecular nominal, hasta el valor requerido, preferentemente
hasta una densidad óptica (a 280 nm) final aproximadamente de 75 UA, para obtener
una concentración de IgG del 5%, o a unas 150 UA para la concentración del 10%. (3)
Existen métodos básicos apartir de los cuales se extraen las gammaglobulinas mediante
la modificicaion de los mismos con el fin de obtener una mejor eficacia de las mismas
son los siguientes:
1. Fraccionamiento de plasma
El fraccionamiento de plasma por la técnica de Cohn (fraccionamiento alcohólico en frío)
es el método más extendido y utilizado por la industria de los productos biológicos
derivados del plasma. Para mejorar los aspectos relacionados con el costo de producción
y el rendimiento de la técnica original, varios investigadores han propuesto
modificaciones que emplean menos reactivos o suprimen etapas en el proceso. Por otra
parte, otras modificaciones sugieren la incorporación de técnicas de purificación
basadas en el uso de agentes precipitantes, uno o más pasos cromatográficos o una
combinación de los mismos. Dentro de los agentes precipitantes comúnmente
empleados se encuentran el sulfato de amonio, el polietilenglicol y el ácido caprílico. (4)
2. Fraccionamiento de plasma mediante sistemas de dos fases acuosas (SDFA).
Se ha reportado el uso de los sistemas de dos fases acuosas (SDFA) para la recuperación
primaria y fraccionamiento de compuestos de interés con alto valor comercial. Los SDFA
se componen por mezclas de polímero-polímero, polímero-sal o alcohol-sal, y se han
empleado en la recuperación primaria y purificación parcial de productos biológicos
tales como proteínas, material genético, células u organelos de las mismas, compuestos
orgánicos como aromas y colorantes, metales pesados y algunos fármacos. A partir de
la patente inicial de SDFA se han hecho diferentes modificicaiones a la misma y
patentado cada modificación, cada modificación diferente dada se dio de acuerdo al
resultado que se deseo obtener. Por otra parte, se han publicado trabajos sobre la
partición de albúmina en este tipo de sistemas, con respecto a variables como pH,
temperatura, y tipo y concentración del polímero y las sales. (4)
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3. Purificación de inmunoglobulinas mediante precipitación con ácido caprílico


La técnica de purificación de inmunoglobulinas por precipitación con ácido caprílico fue
introducida por primera vez por Steinbuch, M., Audran, R., 1969. Posteriormente,
surgieron varias metodologías basadas en este principio. A partir de qui se elaboran un
gran numero de patentes modificándola de acuerdo al resultdo que se desee obtener
por ejemplo se emplea la precipitación de proteínas con 1-8% v/v de PEG y 0.1-5% v/v
de ácido caprílico. En otra patente (Kotitschke ef al., 1991) se precipitan proteínas
contaminantes con ácido caprílico al 2.5%, entre muchas otras más, la mayoría de las
metodologías propuestas en dichas patentes poseen rendimientos alrededor del 60%, y
parten de una etapa inicial de fraccionamiento alcohólico en frío. (4)
4. Purificación de Albúmina
En el caso de la albúmina, la desnaturalización térmica diferencial o termocoagulación
selectiva es un método empleado para su purificación a partir del plasma o una mezcla
de proteínas que la contenga. Una de las muchas modificaciones patentadas propone el
calentamiento del plasma a 68 °C en presencia de etanol y caprilato de sodio, seguido
por la adición de PEG para recuperar la albúmina precipitada. De manera similar, etra
modificación patentada calienta el plasma a 60 °C, y posteriormente se precipita la
albúmina con etanol. En otra invención el plasma se calienta a 60 °C, se adiciona PEG
para eliminar el precipitado de proteínas desnaturalizadas, y la albúmina se recupera
mediante precipitación isoeléctrica. Por otra parte, en la patente US 4,177,188 las
inmunoglobulinas se recuperan previo al tratamiento térmico. (4)

DISCUSIÓN
De acuerdo con l revisión bibliográfica revisada se encontró una gran variedad de
procedimientos para la obtención de gammaglobulinas de las cuales todas varían en sus
procesos pero tienen como base un método estándar que modifican de acuerdo a sus
criterios que sean mas factibles para obtener un producto de acuerdo a sus
conveniencia, es por ello que es importante conocer estos 4 métodos básicos los cuales
son utilizados como bases para la obtención de nuevos métodos de obtención de
gammaglobulinas los cuales se obtienen mediante la modificación de uno de ellos o de
la combinación de los mismos con la finalidad de obtener un producto de
gammaglobulinas de acuerdo a la necesidad del investigador, es así como se han dado
un gran número de invenciones en la extracción de las mismas.
Para la extracción adecuada gammaglobulinas es necesario adecuarse al método más
apropiado que el investigador elija ya que este es proceso demasiado complejo de
realizar ya que intervienen muchos factores los cuales pueden afectar el resultado del
producto como por ejemplo la temperatura adecuada, el Ph, los reactivos a utilizar, los
equipos a utilizar, los intervalos de tiempo, estado de la muestra, etc. Es por ello que se
debe conocer muy bien las propiedades y funciones de cada uno de ellos y utilizarlos
como corresponde con el objetivo de tener los resultados que se desee obtener.
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CONCLUSIONES
En este trabajo realizado en busca de información relaciona al tema se logró Aprender
y comprender los métodos y técnicas utilizados en la extracción de gammaglobulinas
las cuales tienen una gran importancia en el ámbito de la salud la cual es muy
requerida en algunos países del mundo.
La información encontrada ha sido de buena fuente ya que ha sido extraída de trabajos
de investigación, patentes, y estás son fuentes confiables porque están muy bien
referenciadas.

BIBLIOGRAFÍA
1 biochemistryquestions. Temas de Bioquimica. [Online]; 2009. Acceso 08 de 11de 2018.
. Disponible en: https://temasdebioquimica.wordpress.com/2009/05/26/inmunoglobulinas-
estructura-y-funcion/.

2 Rodríguez-Lozano DAL. medigraphic. [Online].; 2013. Acceso 08 de 11 de 2018. Disponible


. en: http://www.medigraphic.com/pdfs/actpedmex/apm-2013/apm136b.pdf.

3 Debart TLHRGR. Google Patents. [Online]; 2001. Acceso 08 de 11de 2018. Disponible en:
. https://patents.google.com/patent/ES2295308T3/es?q=precipitaci%C3%B3n&q=gammaglo
bulinas&oq=precipitaci%C3%B3n+gammaglobulinas.

4 UGALDE ASRVALMVAHVA. Google patents. [Online]; 2011. Acceso 08 de 11de 2018.


. Disponible en: https://patents.google.com/patent/WO2012136172A1.