Protocolo para la preparacin de agar papa dextrosa enriquecido

con extracto de fresa (FPDA)

Objetivo
Preparar un medio de papa dextrosa enriquecido con extracto de fresa que tenga
consistencia, esto para hacer crecer y esporular al hongo gris Botrytis cinerea
Introduccin
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en ingls) es un
medio de propsito general para levaduras y mohos que puede ser suplementado
con cidos o antibiticos para inhibir el crecimiento bacteriano. Es recomendado
para uso con mtodos de conteo en placa para alimentos, productos lcteos y
pruebas realizadas en cosmticos. El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado
para el cultivo de levaduras y mohos clnicamente significativos. La base (infusin
de papa) nutricionalmente rica, estimula la esporulacin de los mohos y la
produccin de pigmentos en algunos dermatofitos. El Agar Papa Dextrosa est
compuesto por Infusin de Papa deshidratada y Dextrosa que fomentan el
crecimiento exuberante de los hongos. El agar es adicionado como agente
solidificante. Muchos procedimientos estndares usan una cantidad especfica de
cido tartrico estril (10%) para reducir el pH de este medio a 3,5 0.1, y as inhibir
el crecimiento bacteriano. El hongo gris Botrytis cinerea es un microorganismo que
generalmente afecta el cultivo de la fresa causando que este fruto se pudra con gran
rapidez.

Materiales
Matraz Erlenmeyer
Probeta
Cajas Petri de 90 x 15 mm
200 g de fresa desinfectada congelada
Reactivos
Cefotaxima a 250 mg/ml
Procedimiento
1. Licuar las fresas sin agregar agua
2. Colar el zumo para evitar que se vallan pedazos grandes de fresa
3. Pesar 12 g de agar papa dextrosa
4. Medir 120 ml del extracto y completar volumen a 300 ml con agua tridestilada
5. Homogeneizar a mechero
6. Esterilizar 15 min a 121 C/1 atm
7. Agregar 102.4 l de Cefotaxima
8. Verter medio en cajas Petri llenando partes de las mismas
 9. Dejar enfriar y someter a prueba de esterilidad por 24 h antes de inocular el
medio
Observaciones

Figura 1. Preparacin del medio FPDA

Para esto despus de licuadas las fresas se colaron luego se midi 120 ml en una
probeta y despus a modo de lavar el instrumento de medida se tomaron 180 ml de
agua tridestilada

Figura 2. Homogeneizacin del medio FPDA

Fue un poco difcil saber cundo ya est bien homogneo el medio ya que como no
es translucido por el agregado de las fresas as que se tuvo cuidado de no llegar
totalmente a ebullicin porque el medio podra derramarse
 Figura 3. Medio FPDA solidificado
Luego de realizado la prueba de esterilidad por 24 h se continu abriendo una caja
de Petri para observar la consistencia del medio y si bien no quedo totalmente
slido, es apto para ser inoculado
Conclusin
Preparar un medio comercial es fcil, pero al querer enriquecerlo con algn sustrato
o en este caso extracto de fresa se torna difcil ya que no existe literatura que diga
que cantidades se tienen que agregar para que el medio este solidificado, por lo
cual es una labor de prueba y error
Bibliografa

Neogen Corporation. (2015). Agar Papa Dextrosa Potato Dextrose Agar. Acumedia,
4(7149), 35.