Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Calor PDF
Calor PDF
42-
TESIS DOCTORAL
t
* 530983982
UNiVERSiDAD COMPLUTENSEX
FACULTAD DE BIOLOGICAS
MADRID, 1998
EFECTOS DEL TRATAMIENTO TERMICO DE LA
LECHE DE VACA Y FORMULAS INFANTILES SOBRE
LA BIODISPONIBILIDAD MINERAL Y PROTEICA
Directora:
V0 B0 El Ponente
1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS 3
2. REVISION BIBILIOGRAFICA 9
2.1. Biodisponibilidad 9
2.1.1. Concepto de biodisponibilidad 9
2.1.2. Factores que influyen en la biodisponibilidad mineral 10
2.1.2.1. Factores dietticos 10
2.1.2.1.1.Nutrientes 10
2.1.2.1.2. No nutrientes 13
2.1.2.2. Factores fisiolgicos 14
2.1.3. Tcnicas para el estudio de la biodisponibilidad mineral 15
2.1.3.1. Mtodos lii vitro 15
2.1.3.2. Mtodos in vivo .. 16
2.2. Efectos del tratamiento terndco sobre la leche 19
2.2.1. Efectos sobre las protenas 19
2.2.1.1. Protenas solubles 20
2.2.1.2. Casena 22
2.2.2. Efectos sobre la materia grasa 23
2.2.3. Efectos sobre la lactosa 25
2.2.4. Efectos sobre los minerales 27
2.2.5. Efectos sobre las vitaminas 29
2.3. La reaccin de MailIard 35
2.3.1. Qumica de la reaccion 37
2.3.2. Factores que influyen en la reaccin de Maillard 45
2.3.2.1. Temperatura 46
2.3.2.2. pH 47
2.3.2.3. Actividad de agua . . 48
2.3.2.4. Sustancias reaccionantes 48
Indice
2.5.4. Deshidratacin 88
2.5.4.1. Procedimientos de deshidratacin 88
2.5.4.2. Efectos de la deshidratacin de la leche sobre el
valor nutritivo de la leche 89
2.6. Frmulas infantiles para lactantes 93
2.6.1. Tipos de frmulas y directivas vigentes 93
2.6.2. Composicin nutritiva de las frmulas para lactantes 98
2.6.2.1. Energa 98
2.6.2.2. Protenas 99
2.6.2.3. Grasa 105
2.6.2.4. Hidratos de carbono 107
2.6.2.5. Minerales 109
2.6.2.6. Vitaminas 116
2.6.3. Formas de presentacin y efectos nutritivos de las formas
de procesamiento . . . 117
6. BIBLIOGRAFA 321
Objetivos y Plan de trabajo
Introduccin
1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS
A pesar de ello, es patente que los microondas estn cada vez ms extendidos en los
hogares y tienen una gran utilidad en el recalentamiento de platos preparados as como en el
calentamiento de lquidos, incluyendo leche de vaca y frmulas infantiles.
3
Introduccin
Por otro lado, cabe pensar que los efectos de las microondas sean diferentes en funcin
de las caractersticas del alimento que se calienta. As, pensamos que sera interesante estudiar
si su empleo afecta o no a la leche de vaca con mayor o menor contenido graso. Adems, en
el caso de las frmulas infantiles lquidas, listas para su consumo, cabria plantearse si el
microondas podra afectar la calidad del producto, ya que algunos datos manifestaban la
posibilidad de racemizacin de aminocidos en determinadas muestras sometidas a
tratamientos por microondas (Lubec y col., 1989) y exista un cieno tab ante este tema.
4
Introduccin
Otra reaccin que se produce en la leche por efecto del tratamiento trmico es la
isomerizacin de la lactosa, originando lactulosa, que a su vez puede participar en otras
reacciones que finalizan tambin en la formacin de polmeros y compuestos voltiles. Sin
embargo, los efectos nutritivos de este proceso son menos importantes que los causados por
la reaccin de Maillard.
1. Conocer la influencia del tratamiento trmico domstico, al bao Maria o por microondas,
de leche de vaca entera y descremada, as como de una frmula infantil, presentada en
forma de polvo y lquida, sobre la biodisponibilidad mineral.
5
Revisin Bibliogrfica
Revisin Bibliogrfica
2.1. BIODISPONIBILIDAD
2.1.1. Concepto de biodisponibilidad
La idea de que no basta con ingerir un nutriente sino que ste debe ser capaz de ser
utilizado ya se haba considerado por diferentes autores, pero es en los ltimos diez aos
cuando el concepto de bio-disponibilidad ha adquirido gran relieve. Actualmente se entiende
por biodisponibilidad la fraccin de un nutriente ingerido que se utiliza para funciones
metablicas normales o almacenamiento (Jackson, 1997), y se aplica fundamentalmente a
vitaminas, minerales y aminocidos. En el congreso Biodisponibilidad 97 se plante
redefinir el trmino biodisponibilidad, la propuesta de West fue: la fraccin de cualquier
nutnente que se ingiere que potencialmente puede alcanzar sus tejidos diana. Esta defmicin
tiene en cuenta que uno de los determinantes ms importantes de la biodisponibilidad es la
proporcin que se absorbe en el tracto gastrointestinal, es decir, el nutriente ingerido debe
transformarse en una forma absorbible y atravesar eficazmente la barrera intestinal. Pero
adems debe ser transportado a los lugares de accin o a sus reservonas corporales (esquema
1). Este proceso guarda semejanza con la denominada utilizacin nutritiva que engloba los
procesos de absorcin y utilizacin metablica, como se describe en la metodologa del
presente trabajo. Sin embargo, el estudio de la biodisponibilidad es ms amplio y abarca
caractersticas fisico-quimicas del nutriente as como mediciones en tejidos y determinaciones
de la funcin. Adems, el concepto de biodisponibilidad tambin se aplica a medicamentos
para los que se utiliza la siguiente definicin (Jackskon, 1997): la proporcin y magnitud en
la cual las sustancias activas o partes teraputicas de una medicina se absorben y llegan a ser
disponibles en los lugares de accin, y para estos principios activas se contempla la serie
L.A.D.M.E. (Liberacin, Absorcin, Distribucin, Metabolismo y Excrecin).
9
Revisin Bibliogrfica
~NTE
Clima
Contaminantes
E
N
rl
I~NTE
~IBLE
N
1
F. genticos
E. nutritivo
Procesado de T _
alimentos 1 V E. fisiolgico
o Nutrientes
Drogas No nutricates 1 Ejercicio
R A (~7~NTE
Modas D Estrs
N
Etc. U Patologas
o
L4 o
~TE s
L~SO
2.1.2.1.1.Nutrientes
10
Revisin Bibliogrfica
11
Revisin Bibliogrfica
12
Revisin Bibliogrfica
2.1.2.1.2. No nutrientes
Los oxalatos tambin causan efectos negativos sobre la absorcin de calcio, magnesio
yzinc (Kelsay y Prather, 1983). el mecanismo responsable podria ser la formacin de
complejos fibra-mineral-oxalato que son mucho ms dificiles de romper que los de oxalato-
mineral y fibra-mineral.
Los efectos de los compuestas fenlicos (flavonoides, polifenoles, taninos, etc.) sobre
la biodisponibilidad mineral se han estudiado relativamente poco. Se considera en general que
los taninos la disminuyen, pero no todos los compuestos fenlicos afectan con la misma
intensidad a la absorcin de los minerales; Brune y col. (1989) describieron la interaccin
entre algunos compuestos fenlicos concretos -cido glico, cido tnico, cido clorognico-
~yel hierro. El t y el caf son infusiones que se consumen ampliamente en todo el mundo y
13
Revisin Bibliogrfica
que contienen una gran variedad de compuestos fenlicos, algunos de ellos no identificados.
El hierro tradicionalmente es el elemento que se ha considerado ms afectado por la ingesta
de ambas bebidas, en parte porque sobre este elemento se han realizado mayor nimero de
estudios que sobre los dems (Farkas y Le Biche, 1987; Brune y col., 1989; Christian y
Seshadri, 1989). Adems la influencia negativa que el t ejerce sobre este metal es superior
que la del caf (Hallberg y Rossander, 1982; Vaquero y col., 1991). Por el cotrario, la
absorcin real de calcio prcticamente no se modifica por la presencia de caf, aunque en
consumos crnicos tiende a incrementar su excrecin por va urinaria, lo que reduce su
retencin corporal (Whiting y Whitney, 1987; Vaquero y col, 1993). Sin embargo, respecto
al cobre se ha indicado que el t favorece tanto su solubilidad como su absorcin y retencin
heptica (Vaquero y col., 1994)
2. 1.2.2.Factores fisiolgicos
Los factores intrnsecos determinan que parte de un mineral absorbible es retenido por
el organismo y como consecuencia utilizado. Esto est directamente relacionado con su estado
nutricional y sus necesidades individuales, patologias, herencia gentica... segn lo cual la
biodisponibilidad no es una propiedad del alimento sino el resultado de su interaccin con
el individuo. El nacimiento supone un paso brusco de la nutricin parenteral transpacentaria
a la alimentacin enteral fraccionada e intermitente. Este paso implica la adaptacin al
metabolismo y nutricin extrauterinos, para lo cual el aparato digestivo debe madurar para que
capacite al nio para adaptarse progresivamente a la alimentacin variada. El paso a la
alimentacin oral precisa de la coordinacin de todo el tracto gastrointestinal: succin y
deglucin, vaciamiento gastrico y motilidad intestinal, regulacin de la secrecin salivar,
gstrica, pancretica y hepatobiliar y actividad de las enzimas del enterocito (Martnez, 1993).
14
Revisin Bibliogrfica
madre e hijo estn condicionados por el estado nutritivo de la madre (Vaquero y Navarro,
1993; Vaquero y Navarro, 1996)
* meffibranas de dilisis
* intestino aislado
* cultivos celulares
* perfucin de hgado
* tcnicas de balance
* tcnicas radioactivas
15
Revisin Bibliogrfica
16
Revisin Bibliogrfica
Sandstm y col (1983) disearon un modelo in vivo con ratas lactantes para estudiar
la biodisponibilidad de zinc en leche y frmulas infantiles, que se aplic posteriormente par
otros elementos (Lnnerdal y col., 1985, 1988 y 1993). Utilizaron ratas lactantes de 14 o 16
das a las que se les administraba intragsticamente la muestra marcada con un istopo
radioactivo del elemento a estudiar, posteriormente se sacrificaba a los animales y se
determinaba la radioactibidad en distintos tejidos del cuerpo. Estos autores establecieron que
los resultados obtenidos con este modelo en rata lactante se correspondan bastante bien con
los de humanos.
17
Revisin Bibliogrfica
estables que ya han sido establecidos como adecuados para valorar la biodisponiblidad
mineral, y las tcnicas de espectrometria de masas estn siendo desarrolladas en este sentido.
Dichos mtodos estn de plena actualidad y su mayor ventaja es que pueden aplicarse a
humanos de cualquier edad, siempre y cuando las condiciones de pureza del istopo estable
estn garantizadas (Mellon y Sandstrdm, 1996). No obstante, se les ha atribuido algunos
inconvenientes (Sandstrdm y col., 1993; Bioavailability 97, workshops):
- Alto coste
- Equipamiento sofisticado
- En ocasiones la adicin del istopo estable no puede producirse en condiciones traza
- Para algunos elementos no se dispone de istopo estable.
Este mismo ao, Hurrel y col (1998) demostraron que los estudios con frmulas
infantiles pueden realizarse con istopos estables, y que se obtienen resultados comparables
en nios y adultos.
18
Revisin Bibliogrfica
Introduccin
- Reacciones suaves con grupos carbonilo: este primer tipo se produce en condiciones de
calentamiento relativamente suaves de alimentos ricos en azcares reductores, como es el caso
19
Revisin Bibliogrfica
En el caso de la leche es preciso distinguir la accin sobre las protenas solubles, bastante
termoestables, y la accin sobre las casenas, que son mucho menos alterables por el calor.
Segn Scott (1989) las protenas sricas de la leche son muy termolbiles debido a su bajo
contenido en fsforo, prolina (responsable de prevenir la formacin de enlaces de hidrgeno
en la coagulacin) y por el contrario elevado contenido de aminocidos azufrados.
El calentamiento provoca la agitacin de las molculas de protenas del suero que tienen
carcter globular. Esta agitacin aumenta con la temperatura y provoca la ruptura de enlaces
secundarios que unen las cadenas polipeptdicas produciendo cambios en la estructura nativa.
Por tanto, se desenrollan y como consecuencia, los grupos apolares que estaban dirigidos hacia
20
Revisin Bibliogrfica
el interior de la molcula proteica se encuentran en posicin externa, mientras que los grupos
polares pueden asociarse con la transferencia de agua de la molcula al disolvente. Todos
estos fenmenos conducen a una disminucin de la solubilidad de la protena.
800(2 - 1 mm 20%
800(2 - 30 mm 90%
900(2 - 5 mm 100%
Por otra parte, algunos grupos qumicos como los sulfidrilo sufren un desenmascaramiento,
con lo que se encuentran disponibles para ciertas reacciones.
21
Revisin Bibliogrfica
los 730(2 y ms rpida a partir de temperaturas superiores. Los grupos SH son muy sensibles
al oxigeno. Una leche desprovista de aire es ms rica en grupos SH que la misma leche no
desaireada. Este fenmeno explica las propiedades antioxidantes de la eche sometida a
calentamiento conservada en atmsfera inerte, ya que los grupos sulfidrilo son potentes
agentes reductores que rebajan el potencial de xido-reduccin de la leche confirindole cierta
resistencia a la oxidacin (Hutton y Patton, 1952).
Por otro lado, los grupos SH parecen ser responsables, al menos en parte, del aroma
a cocido de las leches calentadas. En disolucin acuosa a temperatura de ebullicin, la
cisteina, principal fuente de grupos SH en la 3-lactoglobulina, libera sulfuro de hidrgeno
(SF12) voltil. Tambin se piensa que la activacin de los grupos SR causa la formacin de
Rose (1962) lleg a la conclusin de que existe una relacin entre la formacin del
complejo (3-lactoglobulina-caseina y el pH inicial de la leche.
22
Revisin Bibliogrfica
23
Revisin Bibliogrfica
24
Revisin Bibliogrfica
Los componentes de la materia grasa de la leche son poco sensibles a los tratamientos
trmicos moderados. Es preciso alcanzar temperaturas muy superiores a 1000(2 o realizar un
calentamiento prolongado durante varias horas a 70~80oC para detectar una degradacin de
los glicridos.
25
Revisin Bibliogrfica
es ms interesante una hidrlisis relativamente lenta mejor puesta que favorece la absorcin
de diversos minerales (Fomon, 1995).
Aunque la mayora de los cambios que experimenta la lactosa estn relacionados con
la reaccin de Maillard, que ha sido ampliamente estudiada en otro apanado, la leche es un
sistema complejo donde prcticamente todos sus componentes interactan. Centrndonos en
las interacciones en las que participa la lactosa, este disacrido forma enlaces de hidrgeno
con el agua, interaccin que modifica la actividad de aguade la leche. Adachi y Patton (1961)
observaron que la presencia de citratos y fosfatos favoreca la formacin de lactulosa a partir
de lactosa. Corroborando esta idea en otros estudios Klostermeyer (1982) obtuvo que la
isomerizacin de la lactosa durante el proceso de esterilizacin era mayor por efecto de
Na2HPO4. Este mismo autor junto a Geiser estudi la cristalizacin de los fosfatos durante el
Segn Pierre y col. (1977) este efecto protector es muy importante en el suero de la
leche. Tambin se ha observado que la lactosa a elevadas temperaturas es responsable de la
desestabilizacin de las casenas. Por efecto del tratamiento trmico la lactosa da lugar a
formas cidas y en presencia de oxgeno la lactosa es la principal causa de acidez que induce
la coagulacin de la leche.
26
Revisin Bibliogrfica
Algunos de los mtodos que se emplean para valorar la intensidad del tratamiento
trmico estn basados en el anlisis de las reacciones en las que participa la lactosa. Para la
leche de vaca The International Diary Federation ha propuesto la lactulosa como indicador
de procesamiento trmico, estableciendo el lmite mximo para la 1.31-IT en 600 mg/L
(Sclinxme y col., 1993), valores superiores indicaran que se trata de leche esterilizada
convencionalmente. Corzo y col., (1994) han descrito contenidos de furosina de 53.5 a 109.9
mgL para una leche de vaca en polvo reconstituida comercializada, y 17.6 a 85.4 mg/L para
una leche de vaca UHT.
Los componentes minerales de la leche estn en equilibrio dinmico entre la fase acuosa
y coloidal, pero con el calentamiento dicho equilibrio se ve alterado. Scott (1989) clasific
a las sales minerales de la leche en dos grupos segn les afectara o no el tratamiento trmico:
al primer grupo perteneca el calcio, fosfatos, magnesio y citrato y al segundo el sodio,
potasio, cloro y sulfato
27
Revisin Bibliogrfica
altas, por ejemplo a 850(2, casi todo el fosfato clcico que se ha depositado se vuelve a
disolver tras 48 horas a 50(2 (Kannann y Jenness, 1961). A temperaturas por encima de 1100(2,
y ms elevadas solo una parte del material depositado se redisuelve al enfriar (Hilgeman y
Jenness, 1951; Kannan y Jenness, 1961). Esto podra ser explicado por la hiptesis de que
una parte del mineral depositado haya cambiado su estado formndose hidroxiapatita
cristalizada dentro de las micelas que no puede redisolverse durante el enfriamiento.
(Evenhuis, 1956; Edmonson y Tarassuk, 1956; Kannan y Jenness, 1961; Visser y col., 1986).
En la leche existen protenas y fragmentos de protena de la leche, tal como las peptone
proteose que ejercen un efecto estabilizante sobre el calcio y fsforo previniendo que estos
minerales precipiten. El citrato tambin juega un papel importante en el mantnimiento de la
estabilidad del calcio srico puesto que forma un complejo con l.
28
Revisin Bibliogrfica
Cuadro 1.
29
Revisin Bibliogrfica
En lo que respecta al valor nutritivo de las vitaminas de la leche, est una es importante
frente de vitamina B,2 y de riboflavina. Aunque el contenido de cido nicotnico de la leche
no cumple con las RDA, s llega a contribuir hasta en un 50% a las RDA, si tambin se
incluye el cido nicotnico procedente del triptfano. El aporte de vitamina A, D y E,
liposolubles, es mucho ms limitado en la leche descremada o semidescremada respecto a la
leche que contiene toda su grasa.
La tiamina, vitamina B6, vitamina B12 y el cido flico son menos estables al calor y
por lo tanto en los tratamientos trmicos ms severos se incrementa la prdida de stas. La
destruccin de vitamina B12 y cido flico implican interacciones complejas entre ellos y con
el oxgeno y agente reductores tales como el cido ascrbico. (Ford, 1967; Ford y col., 1974).
Los tratamientos trmicos que se emplean en la produccin de leche esterilizada y UHT
30
Revisin Bibliogrfica
(Burton y col., 1967) causan prdidas acumulativas de la tiamina y la vitamina B6, que
Por lo tanto se puede concluir, que en general las prdidas de vitaminas son pequeas,
<10% en la pasteurizacin y entre un lO y 20% despus de la esterilizacin JET. El mtodo
indirecto produce probablemente prdidas ligeramente mayores que el directo, aunque las
prdidas de la esterilizacin en envase son considerablemente mayores que ambos mtodos
UHT. Las prdidas de vitaminas son sensiblemente reducidas cuando a la leche se aplica una
pre-esterilizacin UHT antes de introducirla en el autoclave a una temperatura y tiempo bajo
(Ford y Thompson, 1981).
31
Revisin Bibliogrfica
asociadas. Pero si existe ms 02 procedente del aire de dentro del recipiente, o por que las
paredes del envase sean permeables, se desencadenan reacciones de oxidacin.
Entre todas las vitaminas, la vitamina (2 y hasta cierto punto la riboflavina y la vitamina
A son particularmente vulnerables al oxgeno y a l luz. La leche es una fUente importante
de riboflavina. La prdida de cido ascrbico as como de cido flico viene determinada por
la concentracin de 02 disuelto en la leche. La prdida de ascorbato se ve muy incrementada
por la exposicin de la leche a la luz en presencia de riboflavina, esta destruccin est
catalizada por algunos metales pesados, especialmente el (2u.
Estudios de Ford y col, (1969) demuestran que durante el procesamiento JET directo
el oxgeno se elimina de la leche mientras que en el mtodo indirecto queda cierta cantidad.
Sin embargo, si el mtodo indirecto va seguido de un desaireador, puede dar como resultado
leche con un bajo contenido de 02. Se ha observado que el contenido de vitamina (2 de la
leche procesada por el mtodo indirecto y almacenada a 15-1 90C rpidamente disminuye
despus de 90 das. Tambin se encontr que la estabilidad del cido flico estaba claramente
relacionada con el contenido de cido ascrbico (Burton, 1988). En la leche IJHT por el
mtodo indirecto se observ una prdida total de cido flico al cabo de 14 das, sin embargo
en la leche producida por el mtodo indirecto no hubo prdida alguna. Se pueden dar prdidas
significativas de otras vitaminas lbiles durante el almacenamiento; Ford y col, 1969 describi
la prdida progresiva de vitamina B
6 hasta un 50% despus de tres meses. La vitamina B12
mostr un comportamiento similar pero en menor medida. La adicin de cido ascrbico a
la leche antes de ser sometida al procesamiento JET elimina eficazmente el oxgeno residual
y preserva el cido flico de la leche durante 60 das de almacenamiento, pero la prdida de
vitamina B12 rpidamente se incrementa.
El folato de la leche est iicialmente protegido porque la oxidacin del cido ascrbico
es preferente. La riboflavina es fotolbil tal como lo son, aunque en menor medida la vitamina
B6,B12 y el cido flico. La riboflavina tambin cataliza el desarrollo de sabores oxidados as
como la oxidacin de cido ascrbico (Finley y Shipe, 1968). La vitamina A est sometida
32
Revisin Bibliogrfica
a prdidas por su exposicin a la luz, pero se debe tener en cuenta que la vitamina A nativa
es considerablemente ms estable que los suplementos de vitamina A. Levey, (1982) describi
que las leches descremadas enriquecidas experimentan importantes prdidas de vitamina A.
Adems la luz penetra ms en la leche descremada que en la entera.
Los efectos del tratamiento trmico sobre las protenas y los carbohidratos originando
compuestos de la combinacin de ambos nutrientes se describen en el siguiente apartado.
33
Revisin Bibliogrfica
pigmentos pardos que se forman no son dializables, algunos son sin embargo solubles en agua,
otros son insolubles. Parece que su polimerizacin da lugar a sustancias con un peso molecular
superior a 1000 y que son sustancias inertes desde un punto de vista qumico y biolgico. Por
tanto, el tamao molecular de 1000 sera la barrera que diferenciar las premelanoidinas de
las melanoidinas (Mauron, 1985). Como consecuencia, la reaccin de Maillard mejoraba el
sabor del alimento tratado termicamente pero tambin poda ser responsable de la menor
calidad del mismo.
Durante las ltimas dcadas se han publicado numerosos trabajos sobre la reaccin de
Maillard, al principio el inters de los investigadores se centr en los cambios organolpticos,
color y sabor, de los alimentos. Ms tarde el inters se desvi hacia los efectos nutritivos y
fisiolgicos de la reaccin, as como los cambios de las propiedades fisicoqumicas de las
protenas y su actividad antioxidante. Estudios ms recientes de estas reacciones abarcan los
problemas de seguridad de los alimentos (formacin de mutgenos), la qumica de las
protenas iii vivo, etc.
35
Revisin Bibliogrfica
36
Revisin Bibliogrfica
37
Revisin Bibliogrfica
Amodori reorrongemenl
amino
MELAN~OIDlt4S
(brown nitrogenaus paymers and copo ymers)
38
Revisin Bibliogrfica
____
CII,0II CIIol 0110)11
ONO;
b
RNII
F RNIf 1 RNI{
CI-!
RNII
CH,
CH,OlI
1
L CH,OH
j 011,011 CH,OH
C~.ioo of F.nol <ovo, N.S~b,i,ulcd
aldoiyla.ninc Schiff basc 1 .anno-l .dcozy-
2-kcto,c kcto Lxm
Las aldosas reaccionan espontneamente y reversiblemente con las aminas para formar
aldosilarninas. En lo suc respecta a este punto se han llevado a cabo muchos trabajos con
aminas aromticas para facilitar su aislamiento; tambin se han utilizado una amplia variedad
de aminas alifticas primarias y secundarias. Sin embargo, la estabilidad de las glucosilaminas
es limitada. En un medio seco y senil-seco a 250(2, se reagrupan espontneamente para dar 1-
amino-2-cetosas, denominadas productos de reagrupacin de Ainadori (Hodge, 1955). Segn
Namiki (1988), en medios acuosos las glicosilaminas N-sustituidas como producto muy
inestable son susceptibles de hidrolizarse o participar en reacciones irreversibles.
39
Revisin Bibliogrfica
40
Revisin Bibliogrfica
El dao de la lisina puede ser calculado a partir de la usina (x) y la furosina (y) a
travs de la frmula:
%.Zisinadaada ~ * .2 y x 100
x +
Etapa avanzada
Lo que Hodge (1967) denomin la etapa avanzada abarca una seria de reacciones que
comienzan con los productos de reagrupacin de Amadori hasta las melanoidinas. Comparado
41
Revisin Bibliogrfica
con la simplicidad de la primera etapa los numerosos estudis de la segunda etapa son
caticos y todava no se ha sistematizado una va reconocida universalrnente para la formacin
de melanoidinas. Obviamente, esto se debe a la elevada reactividad de casi todos los productos
de esta etapa que siguen rutas complejas que en todos los casos conducen a la formacin de
unos polmeros de color denominados melanoidinas. Se acepta que dichos polmeros no son
absorbibles (Pieniazek y col., 1975; Hurrell y Carpenter, 1976; Whitelaw y Weaver, 1988)
HG-NC NC N- HC O HC - (1
LI J
Ii-OH 2COH C~O CO
II
CHICHI 3 CH CH
2 CH < co
Orn 4 H20 1 H20 H20 FIOC12
CHICHI ~ CHICHI ~. CHICHI ~ CH a
Amine
H2C~Ndi CHICHI CHICHI CHICHI CHIOH
CC 0 12 Enediol 3Deosy
CHiCHI hexoaone j~~~rsoudns
CHICHI O I-12C-,N C 1 CH2 CH3 CH3 A
CHICHI ,r j 1 4 Amine
COI-I 2COH C~O C0
Amador -HNC 1 1
C0H ~ C = O ~ C = O ~- CCI-I fleductone,
compohsnd 1
CHICHI CHICHI CHICHI COH CH3-CO--CHC
1
CHICHI CHICHI CHICHI CHICHI C113CO--CO--CH3
1 1
Los productos de Amadon son bastantes estables y presentan una dbil actividad de
pardeamiento incluso en presencia de compuestos amino. El principal proceso por el cual los
productos de Amadori dan compuestos coloreados y con sabor es a travs de la enolizacin
1,2 seguido de la eliminacin de un grupo hidroxi en el (2-3 y de la desaminacin en (2-1 (a).
Como consecuencia, se obtiene hidroximetilfiirfural y furfural, que ya poseen aroma y pueden
reaccionar con una nueva amina para producir pigmentos pardos. Por otro lado tambin se
puede producir la enolizacin 2,3 del compuesto de Amadori seguido de la eliminacin del
grupo amino del (2-1 da el intermediario 1-deoxidicarbonio que reacciona dando productos
carbonilos de fisin tales como el metilglioxal, diacetilo etc. (b) (Hodge, 1967) que
contribuyen al aroma y a su vez pueden reaccionar con nuevos grupos amino.
42
Revisin Bibliogrfica
Parece que existe una va adicional ms directa, por la que mediante la caramelizacin
de azcares (hexosas, pentosas) se obtienen productos fragmentados como el metilglioxal,
diacetilo, etc. Por tanto, dichos compuestos de fisin pueden obtenerse a partir de los
compuestos de Amadori que sufren la enolizacin 1,2, por fragmentacin de azcares o
tambin por aminacin adicional de compuestos de Amadori (Hayesli y Namik, 1986; Hodge,
1967).
Tambin se conocen casos en los que los productos de Amadori dan productos
coloreados por degradacin oxidativa de N-glucosidos por otras vas.
43
Revisin Bibliogrfica
En lo que respecta a cmo los pigmentos se forman a partir de sus precursores a los
productos de la reaccin de enolizacin 1,2 hace tiempo que se sabe que la reaccin del
furfural con compuestos amino origina derivados de pirolesypiridinas (Aso, 1939, 1940). Los
productos pardos procedentes de la reaccin, a partir de una 1-deoxisona, por enolizacin 2,3
son las pirrolinonas del tipo de las reductonas (Ledel y Fritxh, 1984) intermediarios clave en
la formacin de melanoidinas.
Etapa final
44
Revisin Bibliogrfica
Los lpidos al oxidarse producen compuestos carbonilos que reaccionan con los
compuestos amino para formar productos pardos de alto peso molecular. Esta reaccin ha sido
ampliamente descrita por Pokomy (1981). Fujimoto y col. (1971) estudiaron la reaccin de
pardeamiento en el msculo pardo y observaron que la reaccin entre lpidos oxidados y
aminocidos era ms importante que la que se daba entre la ribosa y aminocidos.
45
Revisin Bibliogrfica
2.3.2.1. Temperatura
El papel del calor es activar el proceso de modo que, a bajas temperaturas, puede
retardarse el pardeamiento y por el contrario a temperaturas elevadas aumenta rpidamente
(Adrian, 1974; (2heflel y (2heftel, 1976; Dutson y Orcutt, 1984; Hegarty, 1982; Lingert, 1990;
Labuza y Saltmarch, 1981).
46
Revisin Bibliogrfica
2.3.2.2. pH
Los efectos del pH son complejos, porque cada una de la reacciones que intervienen
en el pardeamiento tienen su propio pH ptimo: entre 6 y 8 para la condensacin de Maillard,
prximo a 7 para la reestructuracin de Amardori, 5.5 para la degradacin de cetosaminas por
enolizacin; etc... ((2heflel y Chefiel, 1976).
47
Revisin Bibliogrfica
48
Revisin Bibliogrfica
sistema. De acuerdo con sus resultados orden a los azcares (de ms a menos): ribosa, cido
glucurnico, galactosa, manosa, glucosa y lactosa. Tambin observ que la cantidad de
glicina consumida y el poder reductor era proporcional a la intensidad de pardeamiento, pero
no obtuvo una correlacin con la cantidad de compuestos de Amadori acumulados en la
mezcla de la reaccin.
A su vez, dentro de cada grupo existen diferencias. De este modo, los disacridos
isomaltosa y melobiosa producen muchos ms compuestos fluorescentes que la celobiosa,
maltosa y lactosa cuando se almacenan con ovoalbmina durante 20 das a 500(2 y una
humedad relativa de 65% (Kato, y col 1989).
49
Revisin Bibliogrfica
2.3.3.1.1.1. Protena
50
Revisin Bibliogrfica
51
Revisin Bibliogrfica
Estudios llevados a cabo con melanoidinas 5N-no dializables mostraron que un 76%
de las melanoidinas de la dieta eran excretadas en las heces de las ratas (Homma y col. 1981).
52
Revisin Bibliogrfica
53
Revisin Bibliogrfica
2.3.3.1.1.2. Minerales
54
Revisin Bibliogrfica
urinaria de zinc (Freeman y col. 1975) y tambin de otros elementos como el cobre, hierro
(Stegink y col. 1981) y calcio (Rendelman, 1987).
En 1975, Freeman y col. observaron que pacientes a los que se les administraba por
va parenteral una solucin que contena azcares y aminocidos esterilizados conjuntamente,
presentaban una excreccin urinaria de zinc ms alta. Sin embargo, aquellos pacientes que
tomaban dicha solucin via nasogstrica u otra solucin, cuyos componentes haban sido
calentados separadamente, no vean su eliminacin de zinc incrementada. En consecuencia,
estos autores propusieron que se produca una reaccin entre los azcares y aminocidos que
originaban productos con capacidad de quelar el zinc a nivel metablico y aumentar su
exereccin actuando sobre procesos reabortivos del rin.
Aspe (1992) observ que la adicin de casena a una disolucin de calcio inico
originaba una redistribucin del elemento de forma que parte del mismo precipitaba, tanto ms
cuanto ms se haba calentado la protena. Adems, si el tratamiento trmico se lleva a cabo
en presencia de glucosa y fructosa la precipitacin clcica se agrava, lo cual puede atribuirse
a los productos formados en la reaccin de Maillard (Aspe y col., 1993). Esta influencia
negativa en el caso de la sacarosa slo se manifiesta a 2000(2 cuando el disacrido ya se haba
desdoblado.
55
Revisin Bibliogrfica
Cuando Aspe (1992) prepar dietas que contenan casena calentada a 1500(2 en
presencia de azcares reductores y se las administr a ratas, observ una influencia
discretamente negativa sobre la disponibilidad de calcio que se ejerca preferente o
exclusivamente a nivel metablico. Esto se puede relacionar con las premelanoidinas que han
debido formarse. Tambin la eficacia metablica del hierro disminuye lo cual se traduce en
prdidas globales de la biodisponibilidad del elemento. En lo que respecta al zinc, el
tratamiento en presencia de glucosa-fructosa indujo una serie de cambios que incidieron
negativamente en la utilizacin del zinc. La biodisponibilidad del zinc dietrico estaba
negativamente afectado por la formacin de melanoidinas que comprometan incluso al zinc
endgeno.
56
Revisin Bibliogrfica
Adems, Furniss y col. (1989) proponen que la homeostasis del elemento podra ser
mantenida por pequeos cambios adaptativos en las prdidas de zinc por heces, as como
aumentando la absorcin, yio disminuyendo la exereccin de zinc endgeno.
57
Revisin Bibliogrfica
2.3.3.1.1.3. Vitaminas
Aunque este punto ha sido poco estudiado existen evidencias de que las
premelanoidinas pueden reaccionar y destruir ciertas vitaminas. As, se han encontrado
prdidas moderadas de vitamina B6 y tiamina en leches en polvo almacenadas a 600(2. La
tiamina tiene un grupo amino y la vitamina B6 o piridoxal un grupo aldehdo y ambos podrian
tericamente participar en reacciones tipo Maillard. Al aumentar la temperatura a 700(2 se
produce una dramtica destruccin de tiamina, B6 y B12 y cido pantotnico que transcurre
paralelamente con la degradacin de la lactulosil-lisina y la aparicin de productos de la
reaccin avanzada de Maillard, con lo que las vitaminas podran haber reaccionado con las
premelanoidinas formadas (Ford y col., 1983).
58
Revisin Bibliogrfica
59
Revisin Bibliogrfica
Cuatro aos antes de que Maillard descubriera la reaccin que lleva su nombre, Ling
haba visto el efecto favorable que el calentamiento produca en el aroma de los alimentos.
Cuando la reaccin se conoci, despert un gran inters entre los investigadores, al principio
dirigido a la formacin de color y aroma (Namiki, 1988).
Las pentosas, como es sabido, son ms susceptibles a la reaccin de Maillard que las
hexosas y, como han visto Kirigaya y col. (1968) y Lingnert y Eriksson (1980), inducen
antioxidantes ms enrgicos que la glucosa en su reaccin con aminocidos.
60
Revisin Bibliogrfica
caso. La capacidad antioxidante incrementa con la formacin de color en las primeras etapas,
pero alcanza un mximo y decrece si contina el calentamiento (Lingemert y Eriksson, 1981).
Algo que hay que tener en cuenta, al analizar los resultados obtenidos por los
diferentes investigadores sobre la capacidad antioxidantes de los derivados de Maillard, es la
dependencia del pH inicial, tiempo y relacin molar entre las sustancias reaccionantes. Beckel
y Waller (1983) vieron que, en la reaccin de arginina-xilosa, los mejores resultados se
obtenan con la relacin molar 1:1, temperatura de 1000(2, tiempo entre 10-20 horas y un pH
inicial de 5.
En lo que se refiere a la reaccin de Maillard en relacin con los lpidos, estos tras su
autooxidacin producen compuestos carbonilos, que pueden reaccionar con compuestos amino
para formar productos de alto peso molecular.
Un tercer efecto beneficioso fue observada por Einarsson y col. (1983) quienes
encontraron que los productos de la reaccin de Maillard obtenidos entre la arginina y xilosa
as como entre histidina y glucosa tenan un efecto inhibitorio sobre el crecimiento bacterial.
Posteriormente, Einarsson (1987) con mezclas de arginina-glucosa, arginina-xilosa e histidina-
glucosa, estudi el efecto del tiempo, temperatura y pH sobre la formacin de compuestos
antibacterianos. Encontr que eran ms dependientes del aminocido que del azcar. El pH
ptimo era 9, como haban encontrado Lingnert y Eriksson (1981), para la mayor actividad
antioxidante. El incremento de la temperatura produjo una formacin ms rpida de color y
de sustancias inhibitorias. En definitiva, la formacin de compuestos antibacterianos sigue la
cintica general de la reaccin de Maillard.
61
Revisin Bibliogrfica
63
Revisin Bibliogrfica
Harrison (1980), resumi los factores que afectan al tiempo de calentamiento por
microondas de un alimento en los siguientes puntos: a) su temperatura inicial, cuanto ms alta
sea ms rpido ser el calentamiento para calentarlo; b) su densidad y homogeneidad, cuanto
ms denso sea el alimento se necesita ms tiempo y cuanto ms homogneo sea, mayor y ms
igualada ser la absorcin de las microondas por el mismo y como consecuencia el proceso
tardar menos; c) su forma, si es regular se calentar ms deprisa que si es irregular; d) su
cantidad, normalmente existe una relacin lineal entre la cantidad de alimento y el tiempo de
calentamiento. Una de las aplicaciones ms prcticas del horno microondas es la preparacin
de biberones, sobre lo cual trata esta memoria.
Sin embargo una de las principales desventajas del calentamiento por horno
microondas radica en que en no se pueden obtener alimentos ni tostados ni crujientes
(Fernndez, 1994). Ello se debe fundamentalmente a que la temperatura que se alcanza en la
superficie del alimento es inferior a la que se precisa para que se desarrolle la reaccin de
Maillard, lo cual afecta negativamente a la calidad organolptica resultante. Por esto el horno
microondas se usa a menudo como utensilio para calentar y recalentar, ms que como una
herramienta para cocinar a no ser que se le acople un sistema de gril. Otro aspecto sealado
como inconveniente del procesamiento con microondas es que sea menos efectivo en destruir
microorganismos que el convencional debido a que el tiempo necesario para alcanzar la
temperatura deseada es corto y en el interior del alimento sta no es homognea (Dah et al
1978, Ockennan y Crespo, 1977). Estos aspectos negativos del empleo de microondas deben
ser conocidos y compensados por sus ventajas y adems conseguir mantener la calidad
nutricional del alimento.
64
Revisin Bibliogrfica
Jonsson (1989) indic que no pareca que existiera ningn efecto especial per se en
los alimentos debidos a las microondas, sino que las prdidas en el valor nutritivo se deban
a los efectos de la elevacin de temperatura, tiempo de coccin y al empleo de agua durante
el calentamiento, tal como sucede con los tratamientos convencionales. Este ltimo punto ya
haba sido destacado por diversos autores, as Thomas y col. (1949) y Mabesa y Baldwin,
(1979) sealaron que cuando los vegetales se preparan en agua, el tiempo de coccin y la
cantidad de agua empleada son factores determinantes de la retencin de nutrientes.
2.4.1.1. Protenas
65
Revisin Bibliogrfica
Tsen (1980) pudo comprobar una mayor retencin de lisina debida a una reduccin
de las interacciones aminocido-azcares (reaccin de Maillard) durante la elaboracin del
pan en microondas respecto al horno convencional. El PER (protein efficiency ratio) fue ms
alto. En trabajos posteriores, Tsen y col. (1983) describieron que el pan horneado
convencionalmente, cuya corteza estaba tostada, frente al pan horneado al microondas o al
vapor, con corteza ms clara, al ser administrados a ratas presentaban un PER de 0.32 y 0.90,
respectivamente. La reaccin de Maillard que desencadenaba solo en el primero de los casos
era responsable de la disminucin del valor nutritivo de este alimento. Jonsson (1989) obtuvo
resultados semejantes y los atribuy a que en la coccin con microondas no se produce la
reaccin de pardeamiento y como consecuencia la disponibilidad de los aminocidos
permanece alta, especialmente la de la lisina.
Fue a partir de 1991, cuando empezaron a esclarecerse las ideas con respecto a este
tema. Fay et al (1991) llevaron a cabo un ensayo en que sometan a distintas frmulas
infantiles a tratamientos ms o menos intensos y largos, den?tro del margen de las condiciones
domsticas y posteriormente determinaron la proporcin de D-amino acidos en cada caso. No
observaron ninguna diferencia entre las frmulas tratadas y sin tratar. Estos resultados
coinciden con los obtenidos por Marchelli y col. (1992) quienes estudiaron la presencia de
66
Revisin Bibliogrfica
67
Revisin Bibliogrfica
et al (1991) atribuye este hecho a que el tiempo de coccin sea corto y la temperatura que se
alcanza sea baja, y por lo tanto, a que no se induzca la reaccin de Maillard, que origina
muchos compuestos responsables de las caractersticas organolpticas del producto. Yin (1995)
hizo una comparacin cualitativa entre panes horneados por mtodos convencionales frente
a hornos no convencionales, entre ellos el microondas, y observ que debido a el calor
especfico, al coeficiente de conductividad y al tiempo de horneado mucho ms corto con el
horno microondas, resulta un producto sin corteza con una textura ms dura, ms gruesa pero
menos firme. El autor atribuy estas caractersticas del producto final a que la gelatinizacin
del almidn es insuficiente, a los cambios que se generan en el gluten, y a la rpida formacin
de gases y vapores en el interior del pan.
Los compuestos que se forman durante la coccin con microondas son: tiazol, 2,5-
dimetiltiazol, 4,5-dimetiloxazol, 2-metilpiridina y 2,3-dihidro-3,5-diliidroxi-6-metil-4H-piran-4-
ona. La presencia de cantidades ms grandes de pirina en las muestras sometidas a microondas
indica que se produce muy poca fragmentacin de azcares durante la irradiacin,
probablemente debido a que poca energa est implicada. Sin embargo en el calentamiento
convencional se forman: 2-metil-pirazina, 2,6-dimetilpirazina, 2-furanometanol, y 4-hidroxi-2,
5-dimetil-3(2H)-fiiranona, pirazinas y fliranos, que contribuyen a mejorar la palatibilidad de
un alimento. Las cantidades ms bajas de estos compuestos en la coccin con microondas se
pueden deber a que su bajo ndice de formacin o a prdidas por volatilizacin o destilacin
en el agua (Yeo, 1991).
Los estudios llevados a cabo por Ji (1992) tenan como objetivo ver que papel juega
el calentamiento por microondas, frente al convencional, en la formacin de pirazinas. Para
ello emple un modelo constituido por glucosa, glicina y una base. Los resultados obtenidos
mostraban claramente que el sistema de calentamiento, el tiempo y la temperatura de coccin
influan determinantemente en la formacin de pirazinas y su distribucin.
68
Revisin Bibliogrfica
2.4.1.3. Lpidos
Los efectos del tratamiento trmico con microondas sobre la grasa han sido ampliamente
estudiados. Se ha planteado la posible oxidacin de los lpidos, racemizacin de cidos grasos
a formas trans u otras formas de deterioro. En algunos casos estos fenmenos han sido
comparados frente a formas de calentamiento tradicionales.
Lorenz (1976) realiz estudios sobre la composicin lipdica de ternera, poo y huevos
calentados de forma convencional o por microondas, y observ que se producan pequeas
diferencias en al contenido total de grasa y composicin en cidos grasos, pero no detect
cambios conformacionales inducidos por las microondas.Sus trabajos fueron confirmados por
los de Mai y col (1980), que tenan como fin esclarecer si la coccin con microondas causaba
la isomerizacin de cidos grasos insaturados u otro tipo de alteracin en el patrn de los
cidos grasos y dieron resultados negativos, es decir no exista evidencia de alteraciones
qumicas o de isomerizacin. Sin embargo, Maga y col. (1977) describieron que la coccin
en microondas inducia la isomerizacin cis a trans de los cidos grasos insaturados de las
patatas.
69
Revisin Bibliogrfica
calentado en microondas por diferentes perodos de tiempo obtuvieron resultados que sugeran
que los microondas eran capaces de acelerar las reacciones entre aminocidos y lpidos
oxidados. Desafortunadamente, en este trabajo no se compararon estos resultados con los que
podran haberse obtenido si el calentamiento se hubiera hecho tambin en horno convencional.
Existe cierta informacin sobre los efectos del calentamiento en microondas de aceites.
En ellos se observa que, al igual que con tcnicas convencionales de calentamiento, la
alteracin del aceite est ntimamente relacionada con la composicin en cidos grasos
insaturados, la presencia de antioxidantes y las temperaturas alcanzadas en el proceso (Yoshida
et al, 1990>.
Una de las diferencias ms notables entre las frmulas infantiles y la leche materna es
el contenido en acidos grasos poliinsaturados, siendo X veces mayor en la primera. Por esto
hoy en da existe la tendencia de enriquecer las frmulas con este componente lpidico
buscando mejorar su calidad nutricional. Se ha estudiado la estabilidad de los cidos grasos
poliinsaturados de pescados grasos cocinados en horno microondas en distintos pescados
frescos con un contenido en grasa bajo, medio y alto. El efecto de la coccin fue mnimo y
no se detectaron diferencias en los lpidos totales entre las muestras cocinadas y sin cocinar
y en particular los cidos grasos poliinsaturados no se vieron afectados y mantuvieron su
composicin y contenido de cidos grasos poliinsaturados original (Hearn y col, 1987).
70
Revisin Bibliogrfica
2.4.1.4. Minerales
A diferencia de lo que ocurre con las vitaminas, los minerales son estables a las
temperaturas que se aplican en todo tipo de calentamientos domsticos. Por tanto, la prdida
de minerales en el caso que nos ocupa de calentamiento por microondas se puede dar
nicamente por su difusin en el agua desde el interior del alimento hacia el exterior (Finot,
1993).
En este sentido, Baldwin y col. (1974) hallaron que en el interior de carnes que se
cocinan se produca una difusin de agua desde el centro hacia la corteza, con la consiguiente
migracin de los nutrientes hidrosolubles, tal como minerales, vitaminas y aminocidos libres
y en consecuencia las gotas de exhudado presentaban una mayor concentracin de estos
nutrientes Por ello y debido a que ese exhudado no suele consumirse con el alimento se
consider que en general los mtodos tradicionales de cocinado favorecan una mayor
retencin de minerales, mientras que el empleo de microondas podra producir ciertas prdidas
(Baldwin, 1976>. As, la carne de ternera, cerdo y cordero cocinada en microondas parecia
retener menos sodio, cloro, fsforo y hierro frente a las mismas carnes preparadas de forma
convencional (Baldwin y col, 1976). No obstante, Korshgen y Baldwin (1978) observaron una
menor retencin de potasio en carnes cocinadas por mtodos convencionales frente al
microondas y Jonsson (1989) indic que algunos minerales, tal como el potasio, daban
retenidos en el alimento porque la coccin en microondas se lleva a cabo con una mnima
cantidad de agua.
Klein y col. (1981) estudiaron los efectos del asado convencional y en microondas, sin
agua, sobre los componentes nitrogenados y minerales de la patata cocinada entera.
71
Revisin Bibliogrfica
2.4.1.5. Vitaminas
72
Revisin Bibliogrfica
alimentos tratados por microondas respecto a otros mtodos convencionales~ debido a que el
tiempo de cocinado es menor; Mabesa y col.. (1979) lleg a la conclusin de que la retencin
de cido ascrbico es mayor con el microondas ya que la coccin de muchos vegetales se
puede llevar a cabo sin agua; y Jonsson (1989) coincida en que la vitamina B1 y (2
73
Revisin Bibliogrfica
de vaca, especialmente en el caso de leche entera. Esta consideracin es importante puesto que
la leche es una fuente importante de vitamina A y E en la poblacin infantil.
74
Revisin Bibliogrfica
El conseguir estos objetivos primarios del procesamiento muchas veces implica que
se den otros efectos secundarios; stos pueden ser no deseados como la disminucin en el
valor nutritivo del alimento, o por el contrario positivos, como la mejora de su aceptabilidad.
2.5.1. Pasteurizacin
Se deben a Pasteur los principios del mtodo de conservacin que hoy lleva su
nombre. Entre 1866 y 1876, estudiando las alteraciones del vino y de la cerveza, descubri
que un calentamiento moderado, sin sobrepasar la temperatura de 600(2, era capaz de evitar
algunas alteraciones de los alimentos al dificultar el desarrollo de los microorganismos que
las producen. Hasta 1880, este mtodo no se aplic a la leche. Un poco despus se comprob
que la pasteurizacin, realizada de una determinada manera, era capaz de destruir tambin los
grmenes patgenos que frecuentemente contaminan la leche. A partir de ese momento la
pasteurizacin no fue solo un procedimiento de conservacin sino tambin de higienizacin.
75
Revisin Bibliogrfica
fin preservar el producto, en nuestro caso la leche, durante varios das. Ello se debe a la
inactivacin de enzimas y a la destruccin de microorganismos sensibles al calor, causarido
cambios mnimos en las caractersticas sensoriales y en el valor nutritivo de la leche (Fellows,
1988).
76
Revisin Bibliogrfica
La leche pasteurizada debe ser conservada durante el tiempo que durante su transporte
y comercializacin a una temperatura inferior a 60(2, debiendo ser vendida al consumidor
dentro de las setenta y dos horas siguientes al da siguiente al envasado. Adems, en el envase
se indicar la conveniencia de mantenerla en refrigeracin.
.77
Revisin Bibliogrfica
biolgicamente activa todava, pero muy inestable al calor. Es principalmente esa forma la que
se pierde al pasteurizar la leche. Eliminando el oxgeno de la leche antes de pasteurizara, se
evita en gran medida la prdida de cido ascrbico durante el tratamiento por calor.
78
Revisin Bibliogrfica
2.5.2. Esterilizacin
Esta tcnica, utilizada por primera vez en Suiza y desarrollada en 1889, tiene por
objeto la conservacin indefinida de la leche por destruccin completa de los gnnenes
.79
Revisin Bibliogrfica
Segn las normas fijadas por la Unin Europea (1992), la leche esterilizada cumplir
los siguientes requisitos:
- Haber sido calentada y esterilizada en envases o recipientes hermticamente cerrados,
permaneciendo intacto el dispositivo de cierre.
- Tener, en caso de controles aleatorios, una conservabilidad tal que no sea perceptible
ninguna alteracin despus de una permanencia de 15 das en un envase cenado a una
temperatura de +300(2. Siempre que resulte necesario tambin podr preverse una permanencia
de 7 das en un envase cerrado a una temperatura de 550(2
-La produccin de leche esterilizada podr llevarse a cabo a partir de la leche cruda que haya
sido sometida en otro establecimiento a una termizacin o un tratamiento trmico.
- No contendr sustancias fannacolgicamente activas en cantidades superiores a los lmites
establecidos por las autoridades.
80
Revisin Bibliogrfica
Este tipo de tratamiento trmico, relativamente prolongado y drstico, trae consigo que
la leche esterilizada en botella pierde un 30 por ciento de tiamina, un 50 por ciento de
vitamina (2 y casi toda la vitamina B12 que tena antes del tratamiento La vitamina A y la
EJ.
Revisin Bibliogrfica
Este tipo de leche, conocida ms comnmente como leche UHT (ultra high
temperature), es la leche, entera o desnatada, sometida a un proceso de calentamiento a una
temperatura de l35~150o(2 durante dos a ocho segundos, que asegura la destruccin de todos
los microorganismos y la inactividad de sus formas de resistencia (esporas), siendo envasada
postenorrnente en condiciones aspticas.
Desde el punto de vista tecnolgico dos son los sistemas LJHT: el sistema directo y el
jdirecto. En el primero se inyecta directamente vapor en leche precalentada, alcanzndose
82
Revisin Bibliogrfica
Segn la normativa de la Unin Europea (1992), la leche UHT debe cumplir las
siguientes exigencias:
- Haberse obtenido mediante calentamiento en flujo continuo de la leche cruda a una
temperatura elevada durante un corto lapso de tiempo (como mnimo +1350(2 durante, por lo
menos, un segundo), con el fin de destruir todos los microorganismos y sus esporas. Despus
se debe proceder a su envasado asptico en un recipiente opaco, o que el embalaje convierte
en opaco,de modo que se reduzcan a un mnimo las transformaciones qumicas, fisicas y
organolpticas.
- Tener una conservabilidad tal que , en caso de coptroles aleatorios, no sea perceptible
83
Revisin Bibliogrfica
entonces intactas. Por tanto, son obvias las ventajas prcticas que supone suministrar una leche
lquida con igual color, sabor y valor nutritivo que la pasteurizada con una vida media mucho
ms larga(Fellows, 1988)
Weeks and King (1985) demostraron que la absorcin intestinal y el depsito femoral
de Ca no era distinto entre la leche pasteurizada HTST y la esterilizada UHT.
Burton (1988) indica que las prdidas de lisina disponible son hasta de un 2% en la
84
Revisin Bibliogrfica
leche pasteurizada y de hasta un 6,5% en la leche IJHT. Segn Adrian (1972), la cantidad
de lisina que se pierde en la leche Hl-IT es de 1-4% y hay muy poca diferencia entre el
proceso directo e indirecto. Sin embargo ninguno de estos tratamientos causaron una descenso
de la digestibilidad y del valor biolgico en ratas, debido a que la lisina de la protena lctea
est en exceso para los requerimientos de este animal.
85
Revisin Bibliogrfica
ms rpidamente que aquellos alimentados con leche pasteurizada y explic que puede ser
debido a que la transferencia de aminoacidos al suero sanguneo sea favorecido, hecho que
observ en otros ensayos con cerdos pequeos.
Formulas infantiles elaboradas con leche de vaca y sometidas a UHT resultaron ser tan
eficientes en nios prematuros como frmulas hechas a partir de leche o suero de leche en lo
que respecta a su ingesta energtica, aumento de peso, consistencia de heces y parmetros
qumicos de la sangre y suero. (Ziegler et al, 1969). Sin embargo en este ensayo no solamente
era distinto el tratamiento trmico sino tambin las frmulas empleadas.
Otros experimentos llevados a cabo en bebs y nios pequeos mostraron que la leche
UHT presentaba el mismo valor nutritivo que la leche pasteurizada. Una prdida en el valor
proteico solo se produce cuando se aplican condiciones extremas de calentamiento con fines
experimentales (Finot y col., 1977; Klostermeyer y Fritsh, 1981).
86
Revisin Bibliogrfica
En experimentos con cerdos pequeos, la leche entera JET indujo una lipolisis ms
rpida de los triglicridos en el estmago que la leche pasteurizada. Este efecto puede ser
debido en parte a la modificacin de las membranas de los glbulos de grasa por la
homogeneizacin, o al calentamiento sufrido durante el calentamiento (Timmen y Precht,
1984).
El efecto del procesamiento IJHT sobre las vitaminas supone una prdida de un 10 -
20% sobre el contenido vitamnico de la leche y por lo tanto tiene escasa repercusin
nutricional en dietas mixtas. (2omo se ha indicado, el mtodo LYHT indirecto produceprdidas
ligeramente mayores que el directo (Sharma, 1980; Zadow, 1980; Anderson, 1982). Las
prdidas ms altas de vitamina (2, tiamina, cianocobalamina y cido flico por el tratamiento
indirecto pueden se pueden reducir considerablemente a travs de la desgasificin de la leche
(Tter, 1979; 1980; Lund, 1982;). Por esta razn, Cameron (1978) aconsej que el oxgeno
debera ser eliminado durante la elaboracin de alimentos infantiles. Se ha sido detectado una
pequea prdida de tiamina como resultado del procesamiento JET. La vitamina B6 tambin
87
Revisin Bibliogrfica
2.5.4. Deshidratacin
Mprocedimiento de Just-Hatmaker.-
El aparato de deshidratacin lleva dos cilindros muy prximos entre si calentados
inferiormente por vapor que giran lentamente en sentido inverso. La leche cae entre los dos
cilindros y se reparte uniformemente por sus dos superficies. La deshidratacin es muy rpida
y la leche forma una pelcula que desprende una cuchilla por raspado. El vapor de agua es
aspirado por una campana situada encima de los cilindros. En este procedimiento, el
tratamiento trmico tan brutal al que se somete la leche modifica la estructura fisico-quimica
de la misma, por lo que es preferible obtener leche en polvo mediante el procedimiento de
nebulizacin.
Procedimiento de la nebulizacin.-
Consiste en pulverizar muy finamente la leche hasta que forme una niebla en el interior de
una vasta cmara barrida por Una corriente de aire caliente. La deshidratacin es instantnea
y la leche en polvo cae en la parte inferior dc la cmara. Por la cmara circula una corriente
88
Revisin Bibliogrfica
de aire filtrado a una temperatura prxima a los 150-1600C. Esta corriente pasa cerca del
dispositivo de pulverizacin de la leche. Adems existe un movimiento turbulento que facilita
el descenso del polvo a la base de la cmara, por cuyo orificio de salida es aspirada una
mezcla de aire y polvo.
89
Revisin Bibliogrfica
En el caso de l leche en polvo descremada cuyo contenido en grasa es muy bajo, las
cantidades de vitaminas liposolubles son tambin muy pequeos; sin embargo, estas leches
normalmente se suplementan con vitaminas A y D, hasta concentraciones semejantes a las
presentes en la leche entera. Por el contrario, el contenido de vitaminas hidrosolubles en la
leche en polvo descremada reconstituida es muy similar al de la leche original (Scott, 1989).
90
Revisin Bibliogrfica
(Rols y Porter, 1973; Womack y Holsinger, 1979). Del mismo modo, no parece que en estas
condiciones haya prdidas significativas en la calidad proteica y el valor nutritivo. No
obstante, las vitaminas en la leche en polvo almacenada en condiciones desfavorables son
bastante vulnerables y su destruccin tambin parece estar vinculada a el a la formacin de
productos avanzados de la reaccin de Maillard procedentes de la degradacin de la lactulosil-
lisina. Se ha demostrado que las vitaminas y los grupos amino libres pueden reaccionar con
la lactosa directamente, formando compuestos inactivos desde el punto de vista biolgico
(Ford y col, 1983).
Los estudios llevados a cabo por Scott y Bishop, (1986) en la leche en polvo
descremada demostraron que bajo condiciones adecuadas de envasado y almacenamiento, el
efecto sobre el contenido de vitaminas es prcticamente nulo en su fecha de venta. Por el
contrario, el alto contenido de grasa de la leche entera en polvo hace que sea susceptible a
oxidacin, con la subsiguiente descomposicin de los productos de oxidacin y produccin
de compuestos responsables del mal sabor (compuestos carbonilos, lactonas, aldehdos y
metilcetonas). Sin embargo, parece que si el almacenamiento se efecta en condiciones
adecuadas la concentracin de cetonas en la leche reconstituida que era inferior al umbral de
sabor y no es suficiente para provocar un rechazo por mal sabor para su deteccin por
palatabilidad (Fellows, 1988)..
91
Revisin Bibliogrfica
92
Revisin Bibliogrfica
de los lactantes durante los primeros cuatro a seis meses de vida que satisfagan por s mismos
las necesidades nutritivas de esta categoria de personas.
- Preparados de continuacin: los productos alimenticios destinados a la alimentacin especial
de los lactantes de ms de cuatro meses de edad que constituyan el principal elemento liquido
de una dita progresivamente diversificada de esta categora de personas.
93
Revisin Bibliogrfica
Pediatra (AAP) slo contempla un nico producto que denomina frmula infantil. El Codex
Alimentarius (volumen 4, 1994) de la FAO y la OMS, define una nicafrmula para lactantes
y entiende por lactantes a nios no mayores de doce meses de edad.
Adems de los dos tipos de fnnulas indicadas, se han desarrollado otras especiales
para nios prematuros o de bajo peso al nacer, intolerantes a las protenas o a la lactosa de
la leche, con malabsorcin de grasas, con reflujo gastroesofgico, enriquecidas con hierro etc.
Respecto al etiquetado, la primera de las citadas normativas seala que los preparados
para lactantes son adecuados para el nio desde su nacimiento pero que a partir de los cuatro
meses slo deben ser parte de una dieta diversificada, refirindose en particular a las
necesidades de hierro que no quedan cubiertas. Aparece la composicin, expresada como la
cantidad media de los macronutrientes, cada sustancia mineral y vitamina por cada 100
mililitros del producto listo para el consumo, as como las instrucciones relativas a la
preparacin del producto para conseguir una correcta alimentacin en el caso de que la
frmula sea en polvo, y una advertencia sobre los riesgos para la salud que resultan de una
preparacin inadecuada. A pesar de ello, no existe ninguna indicacin concreta sobre como
llevar a cabo el calentamiento domstico.
94
Revisin Bibliogrfica
Cuadro 1.
Minimos-Mxinio Mnimos-Mximo
Energa:
250-315
Protenas, O.43
Lcc1~e nos sin modificar 0.56-0.7
Leche de vaca modificada 0 .45-0.7
Soja nicamente o mezclada leche vaGa 0.56-0.7
Lpidos: 0.8-1.5
0.8-1.5
Acido lurico hasta 15% total materia
Acido miristico hasta 5% total materia
Acido tinoleico 70-255 70
Carbohidratos:
1.7-3.4
Lactosa 0.85-SE.
Sacarosa hasta 20% total
Almidn pretostado o gelatinizado 5.5.- 2
sustancias minerales:
Sodio (mg) 20-60 5-15
Potasio (mg) 60-145 20-50
Cloro (aig) 50-125 14-3 5
Calcio (mg) 50-5.5. 2-SE.
Fsforo (mg) 2 5-90 6-SE.
Magnesio (mg) 5-15 1 .4-SE.
Hierro (mg) 0.5-1.5 0.25-S.S.
Zinc (mg) 0.5-1.5 0.12-S.S.
95
Revisin Bibliogrfica
La calidad de la protena no ser inferior al 85% de la casena; *referido a 5 de cido linolico; SE. sin especificar.
96
Revisin Bibliogrfica
energtica de las frmulas preparadas en casa. Una persona con experiencia pondra en la
cucharilla la cantidad prevista, con un error de un 5%, pero ste sera de un 10% si carece de
experiencia (Mettler, 1982). Por tanto, las diferencias en densidad energtica de un sustitutivo
de leche materna pueden ser debidas a una hipo o hiperdilucin intencionada. Se ha sealado
que una dilucin excesiva es frecuente en pases no industrializados (Jelliffe y Jelliffe, 1978;
McComaas, 1988; Veraldi, 1988) y en familias con bajo nivel adquisitivo en pases
industrializados (McJunkin y col. 1987), mientras que la tendencia a concentrar los biberones
se da ocasionalmente en paises industrializados.
Los fabricantes de frmulas infantiles para lactantes han acumulado datos sobre los
mrgenes de prdidas a prever para diferentes nutrientes durante el procedimiento especfico
de manufactura, y es preciso ajustar su composicin inicial para compensar esasprdidas. Tras
el envasado de una leche artificial, la concentracin de la mayora de los nutrientes se
mantiene inalterada. Sin embargo, para algunos de ellos disminuye lentamente con el tiempo.
Por ejemplo, en la forma lquida concentrada, la prdida de vitaminas A y (2 tras su
procesamiento y envasado es de escasa cuanta, mientras que s se pierde una parte apreciable
97
Revisin Bibliogrfica
de las mismas en las frmulas en polvo, debido a la inevitable cantidad de oxgeno presente
en el envase (Cook, 1989). Se ha descrito que el contenido de hierro de una frmula infantil
lquida no disminuye durante el perodo de vigencia del producto, pero, debido a la lixiviacin
del hierro del envase, su cantidad puede aumentar hasta 2 mg/l (Dalman, 1989).
La leche materna es aceptada como el alimento ideal para nios hasta 5 6 meses,
pues asegura el crecimiento y desarrollo ptimo (ESPGAiN, 1982). Sin embargo, la
composicin de la leche materna vara de madre a madre, de un da a otro e incluso durante
la toma de forma que se hace muy dificil conocer la concentracin de cada nutriente en la
leche humana.
Teniendo en cuenta que la lactancia materna es superior, las alternativas que existen
para alimentar a los nios desempean un papel muy importante cuando la primera no es
posible, deseada o suficiente. Desde el principio de la historia, la leche de vaca sola y
posteriormente sometida a algunas modificaciones ha sido el principal sustituyente. A finales
del siglo XIX se iniciaron los estudios dirigidos a asemejar la composicin de los preparados
para lactantes a la de la leche humana y hoy en da el objetivo ya no es mimetizar la
composicin de la leche humana sino conseguir efectos fisiolgicos semejantes a los que
producen la lactancia materna (Goedhart y Bindels, 1994).
2.6.2.1. Energa
La densidad energtica media de la leche humana madura se toma como referencia
para establecer las necesidades energticas de los lactantes, y por lo tanto es la gua para
establecer el contenido energtico que deben presentar las frmulas infantiles. El clculo de
este valor se haca a partir del anlisis de macronutrientes contenidos en la leche humana
extrada por medios mecnicos o manualmente, y aplicando el factor de conversin de
Atwater. De esa forma se obtuvo un valor energtico de 700 kcal/l (Departamento de Salud
y Seguridad Social, 1977). Sin embargo, segn Lucas y col. (1990), este mtodo implica una
98
Revisin Bibliogrfica
sobreestimacin, puesto que la leche obtenida por los mtodos indicados presenta ms grasa
que si es extrada por succin. Posteriormente, mediante marcaje con isotpos se ha hallado
que la leche materna contiene unas 530 kcal/l y 580 kcaLIl en la sexta semana y el tercer mes,
respectivamente. Esto significa que los preparados para lactantes presentan un contenido
energtico muy alto y explicara porqu los nios alimentados artificialmente experimentan
un incremento de peso ms rpido que los que crecen con leche materna (Prentice y col.,
1988). A continuacin se recogen en el cuadro las recomendaciones energticas vigentes (Ros,
1998).
ESPGAN 64 - 72
CEE 60-75
AAP 60-80
2.6.2.2. Protenas
Al aporte de protenas proporcionado por la leche de mujer es muy bajo, 0.9-1 gioo
ml. Aos atrs se sobreestimaba el contenido proteico de la leche humana, pues se inclua en
esta fraccin el nitrgeno no proteico, que constituye entre el 20 y el 25%
del nitrgeno total. Actualmente se acepta que la leche materna contiene 8-10
g de protena/l (Hambraeus y col., 1978; Harzer y col. 1986). En las ltimas
dcadas se han disminuido los niveles de protena de las frmulas infantiles
para asemej arlos a los de la leche materna, ya que los nios que consuman
frmula presentaban una concentracin en plasma de urea y determinados
aminocidos demasiado elevados, lo que indicaba un alto estrs metablico
innecesario (Jrvenpfl y col. 1982ab.; Janas y col. 1985). Las
recomendaciones actuales para este macronutriente se indican a continuacin
(tabla 3).
99
Revisin Bibliogrfica
Por otra parte, en ningn estudio con frmulas infantiles con bajos niveles de protena
se ha conseguido reproducir la concentracin de aminoacidos plasmticos de nios
alimentados con leche humana (Picone y col. 1989). As, en un ensayo en el que el contenido
de protena era de 1 1-13 gIl y variando la relacin caseina:proteinas sricas, los nios
presentaban un crecimiento y status nutricional proteico parecido al de nios lactantes
alimentados al pecho, sin embargo sus concentraciones de nitrgeno ureico en sangre y en
orina eran significativamente ms bajas (R~ih~ y col. 1986a,b; Picone y col. 1989; Lnnerdal
& Chen, 1990). Estos resultados no fueron iguales a los obtenidos por Donovan y Lnnerdal
(1992), tal vez debido a que no emplearon la misma frmula que difera en su contenido no
proteico, debido a lo cual concluyeron que existen otros factores que condicionan los niveles
de aminocidos.
Segn Heme y col. (1986) los problemas relacionados con las diferencias en los
aminocidos plasmticos entre los lactantes amamantados y aquellos alimentados con frmulas
a base de leche de vaca no se pueden resolver simplemente mediante la eleccin de otras
proporciones entre las protenas sricas de la leche y la casena. Una de las opciones para
compensar el bajo valor biolgico del componente proteico de las frmulas podra ser su
enriquecimiento con a-lactoalbmina o aminocidos libres, que posibilita disminuir la
concentracin proteica de las fnnulas infantiles hasta concentraciones ms prximas a las de
la leche materna y permite mantener al mismo tiempo un elevado valor biolgico debido a
la alta concentracin de aminocidos esenciales conseguir rebajar el contenido de protena de
las frmulas infantiles hasta niveles semejantes a los de la leche humana es importante para
disminuir la carga renal de solutos a la vez que proporciona un balance aminoacdico ms
loo
Revisin Bibliogrflea
ESPGAN 40:60
CEE 50:50
AA?
101
Revisin Bibliogrfica
Por otro lado, es bien conocido que en la casena bovina la 13-casena es mayoritaria
mientras que en la casena humana predomina la a-casena. Esto afecta al tiempo de trnsito
intestinal y al vaciado gstrico, como se ha indicado anteriormente, por lo que es de esperar
que este hecho tenga ciertas repercusiones fisiolgicas, incluyendo las derivadas del papel de
la casena en la absorcin de minerales y la inmunorregulacin (Migliore-Samour y Jolls,
1988; Daniel y col. 1990).
102
Revisin Bibliogrfica
basado en glucosa, como principal fluente energtica, por la grasa. Dado que el recin nacido
tiene reservas limitadas de L-carnitina debe asegurarse un aporte exgeno, as se ha observado
que lactantes alimentados con frmulas hechas a base de soja (que contienen poca o nada de
carntina) no fueron capaces de mantener un nivel normal de esta seudovitaniina, y
manifestaron cambios bioqumicos subclnicos relacionados con la regulacin de la oxidacin
de acidos grasos en el hgado y cetognesis, hipertrigliceridemia, etc. Sin embargo, se
desconocen las consecuencias fisilogicas a largo plazo que pueda contraer la no
suplementacin. Es especialmente delicado el caso de los nios pretrminos que pueden
presentar una deplecin rpida si no son alimentados por va intravenosa con una solucin no
suplementada con este aminocido (Combs, 1992).
103
Revisin Bibliogrfica
Diversos trabajos (Tyson y col. 1989; Wasserhess y col., 1993; Zamboni y col. 1993)
indican que la suplementacin de frmulas infantiles con taurina tiene efectos en la sntesis
de colesterol, la excrecin de cidos biliares, grasas y la absorcin de vitamina D, as como
en la regin auditiva del cerebro en nios prematuros, aunque no todos los investigadores
opinan que dicha suplementacin deba realizarse (Bijeveld, 1987). A pesar de que no existe
una conviccin absoluta de que la taurina sea un aminocido esencial, muchas frmulas
comercializadas hoy en da estn enriquecidas con este aminocido.
Las frmulas infantiles enriquecidas con nuclotidos, stas han sido comercializadas
en Espaa y en Japn durante aos, y despus se han introducido en Estados Unidos. Sin
embargo, sobre esta suplementacin tambin existe controversia y algunos autores indican que
es preciso determinar su eficacia, seguridad, niveles ptimos de suplementacin y la poblacin
a la que debe ser dirigida antes de recomendar la suplementacin rutinaria de las frmulas
104
Revisin Bibliogrfica
2.6.2.3. Grasa
La grasa adems de ser una frente de energa, aporta cidos grasos esenciales que son
un vehculo para las vitaminas liposolubles y hormonas. Los lpidos de los alimentos naturales
estn constituidos en su mayor parte por triglicridos o grasas neutras. Las grasas animales
estn formadas mayoritariamente por cidos grasos saturados, no esenciales, mientras que las
grasas vegetales son ricas en cidos grasos poliinsaturados incluyendo el cido linoleico (18:2,
n6) y el cido linolncio (18:3, nJ) que son precursores de todos los dems y por tanto se
consideran esenciales.
105
Revisin Bibliogrfica
106
Revisin Bibliogrfica
leche materna tienen niveles de colesterol total plasmtico y LDL colesterol plasmtico, as
como una relacin LDL:HDL, ms alta respecto a los nios que toman frmula infantil
(Jooste y col, 1991, Kallio y col. 1992, Hayes y col. 1992). Estas diferencias son debidas
fundamentalmente a que la leche humanacontiene entre 100 y 150 mg/l de colesterol mientras
que este componente no se incluye en los preparados para lactantes. Se desconoce por el
momento el efecto a largo plazo de la carencia de colesterol en las frmulas infantiles, pero
lo lgica indica que si stos tratan de mimetizar la leche humana quiz deberan tambin
aportar colesterol. La regulacin del metabolismo de este lpido durante la infancia es un tema
de gran actualidad (Snchez-Muniz y col., 1997; Wrong y col., 1993).
2.6.2.4.Hidratos de carbono
La lactosa es el azcar de la leche de todos los mamferos, est formada por glucosa
y galactosa unidas por un enlace 3-1-4-glucosdico y constituye el 7-8% de la leche de mujer.
La dextrinomaltosa est formada por polmeros de glucosa, procedentes de la hidrlisis del
almidn, con bajo peso molecular. Estos dos azcares se utilizan para aumentar el contenido
de hidratos de carbono de la leche de vaca (48 g/L) asemejndolo a la leche de mujer (74 g/L)
tambin con el objeto de diluir el contenido proteico y mineral, como ya se ha citado
anteriormente. Por otro lado, la presencia de azcar en la leche es responsable de su
osmolaridad, por lo que los disacridos tienen la ventaja sobre los monosacridos de
proporcionar doble cantidad de energa con la misma carga osmtica.
ESPOAN 5-8
CEE 5- 9.8
AM 7-8.4
J
107
Revisin Bibliogrfica
El mecanismo por el que la lactosa estimula la absorcin del calcio no est bien
definido. Parece ser que la hidrlisis relativamente lenta de la lactosa en el intestino delgado
es un factor importante. La lactosa de la leche humana se digiere menos rpidamente que la
de las leches adaptadas para lactantes (Heme y col. 1977), lo cual podra ser debido a que
cuando este disacrido se encuentra en presencia de concentraciones relativamente elevadas
de iones fosfato (y quiz tambin sean responsables otros componentes de las leches
artificiales) se transformada de su forma 1~ en a; y la a-lactosa es ms rpidamente
hidrolizada y por esto la lactosa de la leche humana puede resultar ms eficaz para mejorar
la absorcin mineral que la de las frmulas infantiles. Adems, un mayor porcentaje de lactosa
de la leche humana que de las frmulas artificiales para lactantes puede alcanzar el colon
para proporcionar sustrato al crecimiento de las bacterias bfidas. Pahwa y Mathur (1982)
observaron que una preponderancia de flora bifida incrementa la absorcin de diversos
minerales, entre ellos el calcio. Aunque se sabe que la 13-lactosa puede convertirse en a-
lactosa durante el procesado de las leches artificiales para lactantes, la posibilidad de que la
lactosa de la leche humana mejore la absorcin mineral ms que la lactosa de los preparados
para lactantes todava no se ha explorado (Fomon, 1995).
108
Revisin Bibliogrfica
silico al lactante. Las especies mamferas tiene capacidad de sintetizar cido silico a partir
de azcares simples y fosfoenolpiruvato, pero esta capacidad de sntesis no se conoce bien en
neonatos (Carson, 1985). Las frmulas infantiles en las que predominan las protenas sricas
y las casenas contienen respectivamente 50-70 y 10-30 mg/l de oligosacaridos derivados de
cido silico.
2.6.2.5.Minerales
109
Revisin Bibliogrfica
Pero no solamente es preciso tener en cuenta las cantidades de los distintos elementos
a la hora de confeccionar una frmula infantil, sino que estas tienen que ser biodisponibles.
Por ejemplo, el fsforo presente en las leches fabricadas a base de protenas de soja aisladas
tiene baja disponibilidad; esto se compensa aadiendo una cantidad generosa de fsforo, lo
cual obliga a mantener una concentracin relativamente elevada de calcio, para mantener el
ndice calcio/fsforo.
Es bien sabido que el calcio y el fsforo de la leche materna se absorbe mejor que si
proviene de las frmulas infantiles (Fomon et al., 1963). Este hecho se compensa aumentando
las concentraciones de ambos minerales, en el caso del calcio hasta 530 mg/l frente a 300mg/l
en la leche materna.
lo
Revisin Bibliogrfica
111
Revisin Bibliogrfica
En general, se puede decir que los elementos traza de las frmulas infantiles son
menos disponibles frente a los de la leche materna. Por esto, como medida preventiva para
asegurar una nutricin adecuada es necesario aumentar la concentracin de estos componentes
muy por encima de su contenido en la leche de mujer. A menudo las frmulas infantiles
presentan un mayor contenido de elementos traza que el que indica la etiqueta (Hurrel, 1989)
y adems no se tiene en cuenta el contenido de minerales del agua que se emplea en su
reconstitucin. Picciano (1985) ha publicado una tabla que recoge la composicin de la leche
mujer y el de las frmulas liquidas americanas.
Cuadro 6.
Las frmulas especiales para prematuros estn an ms enriquecidas puesto que estos
nios nacen con un almacn de minerales en el hgado muy pequeo en comparacin con los
nios a trmino, debido a que el principal cmulo se produce durante los tres ltimos meses
de embarazo.
112
Revisin Bibliogrfica
El amplio margen que presenta el hierro en cuadro 6 se debe a que la ESPGAN (1977)
no considera preciso enriquecer las frmulas con hierro antes de los tres meses, con lo cual
las frmulas infantiles americanas presentan un contenido de 12 mgl y las europeas de 5-8
mg/L. Sin embargo, la biodisponibilidad del hierro de una frmula infantil es menor que la
del de la leche humana babindose estimado la absorcin en 5-10% y 50%, respectivamente
(Saarinen y col., 1977; McMillan y col. 1977). La lactoferrina que est presente en altas
concentraciones en la leche humana parece ser la responsable de esa elevada absorcin del
hierro. No obstante, parece que intervienen otros factores, ya que al calentar la leche humana
esta protena se destruye en gran medida y sin embargo la absorcin de hierro permanece alta
(McMillan y col, 1976).
La leche de vaca es una frente muy escasa de hierro, nios alimentados con esta leche
a partir de los 6 meses hasta los 12 disponen de unas reservas escasas de este minera] e
incluso pueden presentar una deficiencia que no se plantea en los nios alimentados con una
frmula infantil durante el mismo perodo (Ziegler, 1989). Existe acuerdo unnime sobre los
peligros de la alimentacin de bebs menores de un ao con leche de vaca (Wharf y col.
1997; Dalman, 1990; Vaquero, 1998).
Los principales inhibidores del hierro no hemo son el calcio, determinadas protenas,
el fitato, el manganeso algunos polifenoles (Fomon, 1995). El cuadro 7 contempla dos de
estos inhibidores, as como las cantidades en que son aportadas por leches naturales y
adaptadas.
Cuadro 7. Cantidades en que son aportadas inhibidores del hierro no hemo en leches de vaca
y preparados para lactantes (Fomon, 1995)
Calcio Protenas
113
Revisin Bibliogrfica
Unaproporcin relativamente alta del hierro de la leche de vaca est unido a la caseina
(Hegenauer y col., 1979; Lnnerdal, 1990). Probablemente esta unin interfiera en la
absorcin del metal, ya que Hurrel y col. (1989; 1990) observaron que la hidrlisis de la
casena y de las protenas sricas disminua el efecto inhibidor y adems, el elevado contenido
de calcio de la leche de vaca tambin contribuye a reducir la absorcin del metal (Dalman,
1990).
114
Revisin Bibliogrfica
Los nios nacen con unas considerables reservas de cobre en el hgado, sin embargo
nios prematuros alimentados con frmulas infantilos con un bajo contenido de cobre
115
Revisin Bibliogrfica
muestran deficiencia de cobre (AI-Rashid y Spangler, 1971; Ashkenazi y col., 1973). y nios
de seis meses de edad alimentados con leche de vaca y harina de maz mostraron deficiencias
de este elemento (Naveh y col. 1981). La concentracin de cobre en la leche humana oscila
entre 90 y 600 .g/L,sin embargo las frmulas, especialmente las pretrmino, contienen ms:
500-2000 xg/L las frmulas americanas y 75-300 ggL las europeas. Se sabe poco en lo que
respecta a la biodisponibilidad de este mineral. Haschke y col., 1986) observaron que la
absorcin de cobre disminuye en lactantes cuando se les administra altas concentraciones de
hierro y ejerce un efecto negativo altas concentraciones de zinc en determinados mecanismos
(Turnlund, 1994).
2.6.2.6. Vitaminas
116
Revisin Bibliogrfica
Una frmula adaptada cubre todas las necesidades si el lactante recibe como mnimo
750 ml al da.
En el caso de las frmulas lquidas se pueden esterilizar por calor segn el mtodo
UTHT (aproximadamente 1 500C durante 3 segundos) y posteriormente se envasa aspticamente
o se esteriliza porel mtodo convencional en el propio envase (10-15 minutos a unos 1 150C).
No obstante, los tratamientos trmicos aplicados, tanto para los preparados en polvo, como
117
Revisin Bibliogrfica
para los lquidos, varan considerablemente, por lo que se patentiza la necesidad de investigar
los efectos del procesamiento sobre la biodisponibilidad de sus aminocidos y la calidad de
las protenas, as como las repercusiones de sus posibles alteraciones sobre otros nutrientes
como los minerales.
Las frmulas infantiles contienen mayores cantidades de protena que la leche humana
para asegurar que el nio recibir aportes adecuados de aminocidos de una fuente cuya
digestibilidad se supone menor (Lnnerdal y Chen, 1990). Sin embargo, la digestibilidad de
las protenas sometidas a tratamiento trmico podra ser relativamente elevada, por lo que es
posible que la concentracin de protenas de las frmulas sea innecesariamente alta. Pero en
este aspecto sena necesario diferenciar entre los distintos tratamientos trmicos aplicados a
las frmulas infantiles, segn el informe de una Consulta de Expertos FAO/OMS (1989), los
datos relativos a la calidad y utilidad de las protenas de los productos lcteos infantiles han
llevado a pensar que los preparados lquidos son quiz de menor calidad que los productos
en polvo de esos mismos fabricantes, posiblemente a causa del mayor calor requerido en el
proceso de elaboracin. Sin embargo, la literatura cientfica sobre este tema es muy escasa.
118
Revisin Bibliogrfica
La lactulosa, que ya ha sido tratada, se relaciona con el deterioro del color, gusto y
olor de la leche (Andrews, 1986). A diferencia de otros azcares de la leche no es hidrolizado
y absorbido en el intestino delgado (Dahlqvist y Gryboski, 1965), sino que llega al ciego y
ah es fermentado por la microflora dando lugar a cidos y gases, especialmente hidrgeno.
En 1957, Petuely observ que la lactulosa tenia una efecto estimulante sobre el
crecimiento de bifidobacteria de la flora intestinal de los lactantes (Mc Gillivay y col., 1959)
y tambin le atribuy propiedades laxantes. Bush (1970) tambin seal que sedaba el efecto
laxante siempre que se administrara en cantidad suficiente. Hendrickse y col. (1977) tuvieron
que elevadas dosis de lactulosa producan episodios de diarrea en nios alimentados con
frmulas infantiles. Aos ms tarde, Nagendra y col. (1992), corrobor el crecimiento dc
bifidobacterias, y en trabajosposteriores (Nagendra, 1994) indic que la adicin de 0.5 a 1.0%
de lactulosa a frmulas infantiles administradas a ratas no modific la absorcin ni retencin
de nitrogeno, calcio, fsforo ni hierro.
Se han llevado a cabo pocos estudios sobre la lactulosa en frmulas infantiles. Las
frmulas esterilizadas son las que presentan un mayor contenido (HuneIl, 1989). Al comparar
119
Revisin Bibliogrfica
En estudios recientes, Henle y col. (1995) observaron que en las frmulas infantiles
se alcanzaban valores de 930-1890 mg de furosina por 100 g de protena en las formas en
polvo y de 730 a 1250 mg/lOO g de protena en las lquidas.
120
Revisin Bibliogrfica
Los estudios realizados en humanos son muy limitados. Fomon y Owen (1962)
indicaron que el crecimiento y el balance de nitrgeno no estaban deprimidos en lactantes a
trmino alimentados con una frmula infantil a base de leche sobrecalentada. Estudios
posteriores llevados a cabo en nios prematuros valoraron la prdida de lisina a travs de la
formacin de productos de la reaccin de Maillard y LAL en frmulas infantiles lquidas
esterilizadas mediante IJHT y convencionalmente, obteniendo una prdida de lisina de un
6.2% y 15.6%, respectivamente; la excrecin urinaria de productos de la reaccin de Maillard
era del 1.3% y 3.9% de la cantidad ingerida, respectivamente; y la formacin de LA era de
6.2 a 9.3% en la fnnula JI-IT y esterilizada, respectivamente. No obstante, estos valores no
afectaron la excrecin urinaria de microproteinas ni provocaron daos en el rin
(Langhedries y col., 1992).
121
Material y Mtodos
Material y Mtodos
3. MATERIAL Y METODOS
Estudio de los efectos del calentamiento domstico por microondas frente al tradicional
al bao Mara de varios tipos de leche de vaca y frmulas infantiles, y del calentamiento
implicado en el procesamiento industrial de frmulas infantiles sobre la biodisponibilidad
mmeral.
Experimento 1
Experimento U
Estudio del efecto del calentamiento al bao Mara o por microondas de una formula
infantil en polvo y liquida sobre la biodisponibilidad mineral.
Experimento m
125
Material y Mtodos
3.2. EXPERIMENTO 1
Se utilizaron das baos de agua termostatizados de agua (Selecta Unitronic 320). Las
condiciones de calentamiento seestablecieron realizando distintas pruebas para estandarizaras.
Se dispuso de alcuotas 100 ml de leche en botellas de vidrio que se metieron en el primer
bao para controlar una temperatura inicial de 250C, la cual se control mediante un
termmetro de vidrio. Posteriormente la mitad de las botellas se transfirieron a un segundo
bao hasta alcanzar una temperatura final de 650C. Se consider el control no calentado el
que se mantuvo a 25C.
126
Material y Mtodos
127
Material y Mtodos
a) Digestin gstrica
El pH se ajust a 2.0 con HCI 6My a continuacin se aadi una solucin de pepsina,
1.6 g de pepsina (Sigma Chemical Co.; nr 7000, St. Louis, MO) en 10 ml de HCI 0. 1M, en
la proporcin 0.5 g de pepsina por 100 g de muestra. Una vez aadido el enzima gstrico se
incub en un bao de agua con una agitacin de 100 oscilaciones por minuto a 370C durante
dos horas, con objeto de imitar el proceso de digestin gstrica.
Transcurridas las dos horas de digestin gstrica se pusieron los botes en nevera
durante media hora. La acidez del digerido gstrico se determin tomando aproximadamente
20 g del mismo previa adicin de 0.25 g de la solucin de pancreatina y sales biliares por
gramo de digerido gstrico. Para la valoracin se utiliz una solucin de NaOH 0.SM y se
calcul el nmero de equivalentes de NaHCO
3 necesarios para que el pH de la mezcla fuese
7.5.
e) Digestin intestinal
128
Material y Mtodos
NaHCO3 0. lM y se incubaron en el bao de agua durante tres horas, Transcurrida cada hora
de incubacin intestinal se sacaba un bote del bao, se extraa la membrana de dilisis que
se lavaba exteriormente con agua desionizada, y su contenido se recoga, controlndose el
peso y el pH del dializado y separando alcuotas para la determinacin de minerales.
129
Material y Mtodos
La recogida de orina se realiz sobre HCI al 0,5% (y/y). Se filtr a travs de papel
Whatman n04 1 libre de cenizas, y se diluy convenientemente con la misma solucin cida,
congelndose posteriormente hasta su anlisis. Las heces se desecaron, se pesaron y se
homogenizaron y una parte se inciner para el anlisis mineral.
El ltimo da, la mitad de los animales de cada grupo se sacrificaron previa anestesia
con Nembutal (pentobarbital sdico) (Laboratorios Abbott, Madrid) al 30% va intraperitoneal,
en dosis de 0,15m1/lOOg de peso. En estos animales se procedi a la extraccin de sangre,
mediante canulacin de la cartida, que se recogi sobre tubos lavados con una solucin cida
(liNO
3 10 N) que se centrifugaron a 1000 g para la obtencin de hemates que se congelaron
130
Material y Mtodos
para su posterior anlisis. Tambin se recogi una pequea muestra con capilar heparinizado
para realizar la determinacin del hematocrito
La sangre se centrifug a 1000 para la obtencin del suero. Una vez separado ste,
se lav el cogulo con solucin salina y se centrifug de nuevo a la misma velocidad,
operacin que se realiz tres veces, para la obtencin de los hemates que, al igual que el
suero, tambin se congelaron para su posterior anlisis
Todo el material utilizado en los ensayos in vivo se lav con detergente enzimtico
Tergazime (Alconox) y HCl diluido. En la medida de lo posible se emple material de
plstico de polipropileno. El material quirrgico fue de acero inoxidable.
131
Material y Mtodos
- Indice hepatosomtico:
Para el estudio de los balances de minerales se han empleado los siguientes indices:
A) Absorcin aparente: cantidad ingerida del mineral menos cantidad eliminada por
heces.
AZSa.bido. Xng~zido -
(fl~eridO ~
ngexido
- auD
132
)
Material y Mtodos
<Ingerido noii)
- orino~10~ -
<Ingerido noii)-
E) Utilizacin nutritiva global: porcentaje del mineral retenido respecto del ingerido.
<IngeridoIngerido
flom)
- - OrinO Ir ac~
133
Material y Mtodos
134
Material y Mtodos
MUESTRAS Ca Mg P Fe Cu Zn
3.3. EXPERIMENTO II
Tabla 2.- Composicin mineral de las formulas en polvo y liquida segn anlisis
135
Material y Mtodos
136
Material y Mtodos
3.4. EXPERIMENTO m
Con objeto de evaluar el dao trmico de los distintos tipos de frmulas infantiles se
determin su contenido de lactulosa y furosina.
3.4.2.1. Lactulosa
137
Material y Mtodos
4.1.2.2. Furosina
El anlisis cuantitativo de la furosina se llev a cabo por el mtodo del patrn externo
y la recta correspondiente se realiz con disoluciones de patrn preparadas en el laboratorio
138
Material y Mtodos
Como dieta control se utiliz la dieta AIN modificada al objeto de igualar las
composiciones nutritivas de las dietas experimentales. Ello se realiz modificando las
cantidades de proteina, grasa, calcio y fsforo (tabla 6 y 7). En la tabla 8 se recoge la
composicin analtica de minerales y nitrgeno de las dietas.
139
Material y Mtodos
0r~. y oc
Z!~9 9 y y
o en
QN +1 ~f-1
0
~
o
r-
eJ
Z
F E y en VN en
z
~ N <N <1 CN
VN O VN
e
rt O
Q 2 +1
o
o
O
00 00
= ~$y r
E
a..
0
rs en
~2
~ O
~i
~
o
~i
VN
o ~. <N
en
en VN
e E
e4
n
O
en
y N
u, -... O
-. en
O VN
en
~ 1~- y
cl ~ en 1 VN VN
ca
E en
ca O
c
0
O Z
eJ
~
o
+1 -4-1
~ O
en
O
E ..~
eN en 00
eN
QN
eN
o CM o,
O, u
E
o
a o
e E
en
9
1-
~ QN O
e
ca -4- 8 8
-: +1 +1
O
~ rQN 00
en cO
t ~
u, y en e
y
e
u
e
3.-
en e
es y 00 QN
E ...2 QN
.0 O 4
en 0
+1
y
VN r
+1
VN u
00
E Z ~ r
en 0
en O
y ~.
o
+1
o,
O
e
E- u
o u,
z -s &,~ . o
2 o
O- -~ O
e
140 ~- < O
Material y Mtodos
Componente g/kg
Castina 200
DL-Metionina 3
Sacarosa 500
Fibra 50
Aceite de maz 50
Corrector mineral 35
Corrector vitamnico lo
Bitartrato de colina 2
141
Material y Mtodos
Esta composicin est basada en los requerimientos NAS-NRC para la rata. Se debe de incluir en un
3.5% en la dieta.
142
Material y Mtodos
Componente g/kg
Caseina 180.4
Sacarosa 500
Celulosa 30
Corrector mineral 35
DL-metionina 3
Bitartrato de colina 2
143
Material y Mtodos
Cloruro sdico 24
Sulfato potsico 52
Oxido de magnesio 24
Citrato fnico 6
144
Material y Mtodos
CM CM CM O en VN
<> O en en QN
en en en en en en
vn CM O
8
o
en VN VN QN QN
QN 00 O O 00 O
t. VN VN VN VN VN
CM CM CM CM CM CM
ca
en o oc CM VN
CM O CM
~ 8 8 8
-Li .iJ .1- +1
CM .~ VN
ca ~. 8 . r VN CM
8
0 00 QN
o
ca O CM 00 CM O en
O VN
-~
en
8 en
8
8 8
+4 +1 44 44 44
VN CM en QN O en
oc r- oc VN O
8 ~ en en
QN ~ VN VN
u,
ca
cl
1- QN CM t O 00
en en oc
ti 8
+1 ~4-I +1 +4 +1
O
e
e
e
en
O
o
r-.
o
O en
ca e e O VN
VN QN e e VN VN
o,
a u
O O QN VN 00 en
CM en
e o, e en e O r-. O
44 +1 4-4 +1 44 ~4-4 e
en oc en VN O
cl &. O O t- CM
O VN e CM O VN
en VN CM CM en en
VN e e e e e
a
u,
O CM 00 QN t ~. O e
04 ~ ti A o CM CM
oE
44
CM
+4
O
Z+1 +1
CM
+1
en
en
o -
Q r
VN
r.-
e
oc
e o
VN
en
VN
O O
cd o,
cl ~1)
.0 O CM 00 O
cl A t Ir- o
E- +1
e
+1
O
+1
CM
+1
en +1
.$ o
O 00 e
oc r- VN QN en en o,
e e e e e e o.
u
E
vi
It
O
Ir- ~
4- o
0
o
. o
O o-
o
~ ~ ~- -~
o u < < >1
145
Material y Mtodos
146
Material y Mtodos
- Eliminacin fecal y urinaria de los minerales calcio, magnesio, fsforo, hierro, cobre
y zinc as como de nitrgeno durante el perodo de balance: das 5 al 11
- Composicin corporal:
- Hgado: peso, hierro, zinc y cobre.
- Bazo: peso, hierro, zinc y cobre.
- Piel: hierro, zinc y cobre.
- Suero: calcio, magnesio, hierro, zinc y cobre.
- Hemates: hierro, zinc y cobre.
- Rata entera: peso, calcio, magnesio, fsforo, hierro, zinc , cobre y nitrgeno.
- Eficacia alimentaria:
- Eficacia proteica:
- Indice hepatosomtico:
POBO d~1
LH do lahi~tado (q
rata (g)
147
)>
Material y Mtodos
En las dietas se efectuaron los anlisis descritos en el apartado 3.2.4.3., el resto de las
tcnicas se encuentran en el apartado 3.3.4.3. ms los indicados a continuacion:
-Humedad, por prdida de peso en estufa a 1050C hasta peso constante (A.O.A.C.,
1980).
Todos los datos de los tres experimentos fueron sometidos inicialmente a un test
descriptivo para estudiar su distribucin. Se observ que cada una de las variables en el
conjunto de la muestra segua una distribucin cuasi normal, por lo que se aplicaron pruebas
paramtncas.
Ensayos br vitro
148
Material y Mtodos
x= media
Tr tipo
Tir tratamiento
Ht= hora
Ti *TU= interaccin tipo*tratamiento
Ti*Ht interaccin tipo*hora
TrHt interaccin tratamiento*hora
sijt= error debido al azar
Para todos los minerales, excepto para el calcio, se obtuvo que la hora no ejerca una
influencia significativa, por ello se aplic un modelo general de ANOVA de 2 vas (tipo,
tratamiento trmico) considerando en el caso del calcio la hora como covariable.
Ensayos ti vivo
149
Material y Mtodos
el dia 22 comprobndose que la media de los datos obtenida por generacin no diferan
estadsticamente de lo original. Se ha realizado en el programa SAS con una rutina de
generacin aleatoria llamada RANNOR.
150
Discusin de Resultados
Resultados
GRUPOS DIA 1 DA 4 DA 7
GRUPOS
GRUPOS
Resultados
.4
+4- .4.4 * *
Ir- Ir- Ir- Ir.
Os O OC VN
.0 vn
vn +1 +4 +1 44
CM 0 ~
CM e
s
O
ti
O
Lo
O
VN
o *
e 4- .4. e *
a
e Lo CM O vn
oo .0 CM O O O
4-
CM ?
Lo
Ti
QN
+4
0%
+1
.0
00 0 00 Ir
*
~4 .4. e *
O en CM VN
O vn vn Ir.
O CM
+4 +4 44 +4
VN 0% Os CM
VN O 0~ Lo
VN 0% 0~
O O e e
4-4. +4 * .4~- o
~ vn oc e
o .0
o
0CM
e a)
vn +4 44
oc O O
o e O Ir- O
CM O e
oo
O O e Lo O
0.
o
e 0 e
.4-4. .4.4 * .4--
Ir.. CM O CM
Ir~ e O vn
.0
O
e CM aEa
e O O
o CM fl ti
z O e Lo
e
e
e
o,
e
o 4-
+4 +4. * .4...
4>.~tfl
t~0
00 e
O oc 0 0
O vn o ~o
~< +1 +1 4.4 .4.4 .0
Ir e CM o, e
O Ir- Lo O e u,
4-4 .~ o.
o o
O
.0
O
e
rl
VN
4-- a
4- 4- * *
.0 00 0% Lo vn 4> e
U vn Lo
+1 44 -0 o e
CM O ~ ~
vn CM VN
O O e Lo 4-
5 ~
+4- 4-
e 4.4. 4. * *
4> .0 e O 0% 0
vi
e CM ~ vn vn e o .9-
O +1 +1 o
e CM Os O vn
vn o
u, 4>
+
4.- .4...
1~
*oc .4
* o o oc o e o
.0 e o O O o
o O O O 4> e
Ir-. 3- 4> 0
o O O o
Os
CM oc o O >4
ca e
O O vn O II ci, 4>
5 0. 0. o.
O
e
o
~ .~ ~Efl
.~
>
ci,
~
o,
.2
u>
e u o o o
1-
4> 0 0. e
e O o e
vi u E-, 4-4 -~ -~
e u e e
4> a E
~
o o
2
e
o
o. e
e
e
3-
O
O
0.
E >e >e -o
Lx.. -o
Lx. Ez 1-
4.- ~
Resultados
4- +4
* +4~ 4-
VN * rl O
.0 VN
vn +1 ~+1
e CM e
~ en e
Ir- el CM
Li, +4
e 4- e +4
a CM * O rl
e .0
0 CM
CM
:
+1 Ti
VN
.4-4
en
0%
o
~-; ~Ir- <.4 OC
en
2 CM
.4.- 44
e .4
.0 en * e 00
+1 CM
~
+1 en
+1
CM +1 0
VN 00
00 en CM
o
4 4~+
.0 e * Ir-
en 9
+1
Ir +1 O 0%
9 =
E
<4 OC en en
e .~ y e
44 e
o .0
4
*
.0
O
+4
e O
~ O
o. c.>
O
e CM o
e e +1 00 CM
ti , 0~ oo,r~
~ e .0
CM OC en en
o
4-- +4 .4-
CM * en en
2:
.0
8
+1
e
oc
44
~
05
z
o
<4 9 en 0~
CM 05 e CM
~ E
.~ .~n ~
4- 44 +4 e ci, o
Ir *CM <4 <4
.0 ~ e e
en +1 e e ca
+1
g -~ CM en CM -~ ~
CM Ir- e en e
3-
e e o
+4
4- 0 +4
ca CM * O VN
e
o
.0 ti CM rl -~ .E
rl 4.4 0 +1 44
e e +1 .0 00 o,
4> e
o
.0
~ e
CC
CM O e en
e O
o,
e
o .9-
4-
rl *
+4
Ir-
4-
o o o o
o O CM O .~eo
.0 en . CM O O en O
.4-1 0 +3 +1 o o o o
VN +1 CM rl 8
8 fl ~ 8
<4 00 e en e- e ot
e
~
~
zo
~
o o e
>4
ca ci
e
4>
ca 0 0. e
~
o,
u e e u E-
4> 0 e e >4 o e
e o
O e
o o
e o
e -~ o o. e
3- o o. o, o, o,
Lx.. 1.z.. FZ E- o o e
~ -~ .J
Resultados
.0 u.,
Ca - O
.0 rs r-.
o 6
o y
?~~
0 4. 5
0 rs o
.q~. ~
Ca Ca Ca
4.04
O Ca ~
O a>
o
0 .4. ~ 8
00 <.~ 0
4 o..
r-odr
O~Os Os
a
.04 .0 0
a
o
o
9
ONvn
0005 Ca
no
rs (1 Ca
o
Os 0 t- o)
z U.~ nrs Z 1-
Lfl
o-e
~
0
CNO
0
vn O
ti
< !j ~ ~
o oc os
O r-.0 z
U
O.. a>.~
o vn Os 00
O C-~ Ca rs
00N Z a
O O
oC
e-o
0
u
0.
CC o ~ c~ a 43
o a.~ ~ ..i- vi a
Co,
~ E ~Z
O ~ct~~<H >-~
Resultados
o
a
.0
o 4
en fi
Ca rs cl)
Lo 0
o 0
0 o ~ 0
+1 +1 +~ ~o.
Ca
rs 0 .0 os .0 II
ooc o.
Ososos os o
0 ~ Oc)
.0
rs II .0
r
.0
Lo e--. u.
00
Ca rs002 00
000
oca
os en XI 0
O
<4
000
6
o. o. o.
~vi
o)cd
no
oso o os a>
4-..
a .4-
~ 0 Ca
.0
Lo
.0
00 a
Lo uca a
0 <q 00 00 e
00 0
O
o Ca ~
00
e-e
Lo
rs4r-r~
0 <4 O
os os
r o cAoS os
OSO
O
~tt~
OSO 00 os
o OC Lo <1 .0 <4 4 o
o 2
.0 <4 o cc
Lx.~ Lo Lo
rs oc o zz
E
.~.
.0<
II o,
es rs o.
rs <4
4-..
CO
rs e
O o 0 r- Os
e 4)
e
o; o
ta>
O~N
000
0 <4 4 o lE
o. U., rs <4 rs
O <40 rs rs r- Os
4 Lo o.
rs en rs
O
o ~
0 0 Ca r es
o 00 Lo <4 0 <4 4 o 8?
~ r Lo 0 en o,
4) c~o.
o e--. O oc ZZ 4-
.0 0 .0 II
Lo
..t .t .n rs en rs o. o.
o
o
a>
o a o
o~o)o)
o. e o a
CC a> 4- 6
O o o) E-
o o ,... ~uc o
4- ~
~ o o o
2: o.
ed
1-. o. 4-. 4->
0 Lx... E- E- E-
Resultados
o +4
*
4.- .4-
*
.0
O e O~
o e CM CM CM
O
o o o
o o o
.4 * *
u o. o. o.
en Lo Ir-
. <4 vn vn
4.-
4- e 4-- .0
e en CM CM
2:
~ el en rl
* 4.4. 4-
.0 .0 .0
VN e .4
o
O .0 VN tfl
O .0 0 O
* 4.4. *
e 0 .4~- e o
el en Ir. 0 O CM O
.20
8 O
o
o
o
o .08
os Os en oc
z u .2
OC
Lo .0
O
O
o. 0. 0. ~oE
o u .9- ~
O e
E- Ovi~
u e ,0 o e
O el O e
2: 2:
fl~
vn
O
e ez0
o
4-4. * +4 4- t~ .~
o Ie
?
.0
e
~
*
e
~
e
CM
O
e
o4-
.0
.
e
to
e
u
E- +1 44 +1 e o, E
0 O ~ e cm
VN CM e ~ .~ .~
en vn en el
e ~
o +4 * 4.4.
fl.tc
05 a u
.0 e 4- .0 O o 4> 4-
vn CM en 9 O . O
8 8 o CC O
5~
o.
2:0
o.
0 0 CM VN >
Q en CM rl en vi
4> e a
4-
* .0
* .0
CM *
en e
en u
U) e a
e O o O ca e O
2:
<4
+1
e;
<4
+1
o.~
fl+1
e
~l e Cl en e
e a
e
O a ~Eo
E > E O x - e
4> ti, u
u
~
1>
E
0, Z
o ItSa
o .2 E- u o
~ 4> e e
4> 0 E
a-o ~
e
2
~
O
o. e
e
O
.9- ~ .2
ti, ti, u~
E- > > ~z.. Lx.. E E- E- o o e
-~ h-~ 4.)
Resultados
Lo
e .0 4
o
QN t Ca o
OS r4r-. o y
<4
o o.
o o
S0.e--. o
QN 0e--.
e--. ocr--.
e .0 fi o
Ca t4 rs
Ca<4 e--. <4 u
u
QN
o u
<4 Ca e--.. o
Ca O a
Ir- Ca e--.
a>
e
~ .0 .0
<4 <400
00
o 8 o
o
o rs e--. ~ o u
Ir-. 00 rs
OC dr-e--
OSOSOs
o Co
oc QN rs
rs
o Ca
u
o Lo
+1
+1
QN
+1 o
oc oc rs CA? 4-
.t. o a>
E- z 4.
6
a A
o rs ctS a c
o Ca ~
Ca rs
e
o Lo +1 QN
+1 vio
a>.E
o +1
o
0 ~
4--a
o o. 0 0
t
1~
U
.~. .~
+1
o o
00 u., rs
00 rs
o rs QN
Ea>
+1 +1 +1 ctS
<1 rs t
SON <4
o Lo 05
~ 0
Lo
a-o
u 0 a>.
uu o
o, e
a> a> uy
a
uoE
a>
u ~ o ua>
2: 4-,
cl) E-
Resultados
o
A c a A S 4
Ca 00 os Os
en ~ rs 00 o
cl~)
00 ~ <4
OS <4 .0 O00~ ZZ cd
00 c~O~Os II
Ca Ca CO
Ca e-~ e--. o.
A a a
e N OSO e--. O
r<~e--. OS
.0 u
ctS
SO QN rs Z II
e--. en n~ o. t
Ca 00 00 Ca a>
A a A
~ rs QN 00 SO ~
rs
w rs 9
O Lo <-.4
000
000
o Ca CGO 000 .0
a>cd
Orn
00r-. e u
o 00
o
QN 0
OSO uQN~
o o o
o. o. o.
(Ii .4~~#
o o SO
0000
tl 00
~(4 e--.
rs
0 <4
cdn
u>
e
<4 uSctS
LL~ 9
Ote-
en 0-~
QN rs 00
rl ri r-~ Ca e-
<1~ Co,
2: o
u u
<.4
9 o
e
o
o)
o.
0
090
9flU1
<-1 00
teno O
e
9 cci
CC
a
4a> O
4-a
a>
rl CC * Os
.0
<4
<Y.
<4 <4 a c ...
<4 <4 <4
O
E- o SO <100 4-..
o ~
~-a ~
.0000 <4 <Y- t Os
* rs 0 Os
bE
a>
Lo
rRu 6
~ rs 0 +4o, ~
u o.
O QN
000
00
0 O~4-..
cd
<-1 <4 <4 ~..
<4 <4 <4 8
cdO
o o oo)j~
ea
o u uu,
a>
~ gE~ .0
cd
e u
<.4
O
1
-
.-
a
o).
~ ca
o)
a
n~~O a> Ei~
~u o o~.. E- coa
o CC O o o. n o
O Lx.. 1- no) t~
4->
[A E-E- E-
Resultados
*
0
:4.4. cd +4 4-
o. Cl Cl
2
.0 CM Lo e
o
* O e CM
+4 cd +4 4-
CM CM en
o 8
II II II
u: o. o. 0.
8 ti 8 e
0.
.4 4-
4.+ .0 4.4. e
vn Cl CM CM
2:
0 vn 0 VN
*
* +4 e .4-
.0
00 e e
~ O O
e
O
44 +3 +1
OS en 0% e
8 VN CM
O .0 O
VN
.20
.080
4- O O CM .E y ~
w di
* ~4-+
e
*
Ir-.
.0
e
00
O
o O
o O
o ~ .2
~
el O O O ~oE
2: 8 8 8 O II 13 II o .9- fl
o +1
CM
0
+1
el
O
44
O
OS
+1
CM
CM
o. o. o. o
VN O VN O o o
* 4- a,0o,
Os VN O *
2: U O O
ci
~4~4 44 +3 +1
rs z el
8
Lo
el
OS
O
Os
rl VN ~vi
.0 .0 Lo
e
4.- e e
o
U
t~ o
e e
O e e e e ci, e
d o
2 e-- <4 el
+1
e
CM CM ase
en en rl rl -E ~ e
4-a~
o a 4>
o .4.-
*
o)
e
e
4.-
cl>
ti-,
.0 0
* .0 O
4- cd 4- cd
O O
O o a e
Cl e Ir. oc .E C <cl
8
+1
o
~f-4
o
+3
8
+1
O
II
O
13
O
II vi - . o
O O Os rl o. 0. 0,
rl rl
Cl Cl Cl Cl o
e
o
o .9-
.4- 4- a
4> e o
* * * .4-
O .0 VN
U .0
2: +1 r4 O~
el e Lo e
Cl Cl rl
Cl ~Eo
>4 - e
u fl u
o o a
E ca o
o O e
4> 0 o. 3-
o,
u It It > ~ .2
4> a ~ o, vi u,
e
O
.9- ~
e ~
cd
2 .9-
cd
E
o
0.
O O ci
E- > > Lx.. Lx. E-E-E-
Resultados
QN
Ca QN en O
.0 OSO
O
CC y
o.
<4 .~.
o
t rs ~ e
a>
rl QN <.1
e
cl)
r-.-. OSO ctS cd
2 u
<4 OSO
Sr?.
Lo Lo rs
.0
Ca QN <.4 o
o
e
o O
O
12
000
cd
2: Ca 00 00
u
a
o Lo
QN
.0
QN
QN
QN
.0
rl
Ir
rs
ctS
vi
t
e
a>
o,
o)
a
4
rl
o
9
o
o
a
o
a>
o.
Lo
Lo
~ <.4
ctS
z
e
A
e-
e
~< e-,
o
U o
rs
Lo
Lo rl +1
o,
ctS Ce
o OS <~ z Ea>
<1 rl <1
SO~
Ca>
ae
cd u
u
cd o e e
a>.
CC a>
e
o e o)
vi e
a>
u u
e ~
o 2 o cd
a>
a> a
o E-
Resultados
* 4
A 4 4 A
~
rs rl o
SO 0
0000 O
CA? 00
O
O
0 .0
.Dr-.
en rl
Lo
rl
rl
II
o.
II
o. a
cd
a>
o.
o
A 4 A .0
.0 0 O
CG
e-.- SO
00
.0 a>>
~OS9 00
~ e--. Lo CC00
os~
- en
QN Orlo Zoo a>.
e-- II II
en en SO o. o. o,
rs rl
.0 ca 4
Ocd
ca 4 A 0 rl rl
rl rs j~
rl -~t Ca -o e
Orlrl 000 .0 a
000 o)a>
UD 000 e-
en
r-.-
OSCO
e--.
2: rs t SO
OS CG 05 OSOS Ca z
o .0
~l SO 0
A
rs
0
cl
CGO
4
QN
ti. O
00 CA?
060 00 u
+1 +1 +1 0
e--. 66 Z
eu4)..,
~00 SO Lo <Y.
II II
2: VS
00 o. o. o
a o,
a)
o,
o ~ o
a .0
en
.~
.~
A
SO en Cao e--.
o 00 9 0 0
rl a
a> O
O ctS o
o.. O
o OS
05
QN
QN OS
00 Ca
en~.Os
CM O
ji o
cd
A en rs rs ~rs<~ o. o. a>
a o A~
E- O o.n
o en SO .0
en
000
O
~
99 O
O
+3 oe 0y
O cA ctS u,
w en Ca ~. SOSO rs O
rl rl en en rs II
o..
e ~
cd
O o~ t o-.
o e
-3 cd u,
cl) e
CC cd vi
Z~~e cd
<.1 o cd
e a vi O u o)
o a cd
u o
a
u o ~ eo) E-
y;
o)
CC
o o. ci
o
o-
[A
0 [A E-
Resultados
o
.0
Cl o
~el o
VN rl
o
cm
0 0 0
0 0 0
z
CM
0
.0<4
0
.0CM
0 0%
0
cm
e,.. 0
o
E-
- - - o,
oQo
cm o ~ 8
O 44
o
+4
00
~ CC
N CM <4
0 8 0
O
Lo O e
Cl Cl CM
2: cm 8
44 -~
A. .0 00
CMfl~ VS Z
Lo
- - - e,
o
0:CU -~ ~ o
o.
8
y
+3 ~ z
A Lo
Cl
VN rl
VN en
~-.
2:
O en
VN z
e, Lo CM
cm
E e--. o z ..
8 1<4 e
2: 4>E
e
2: e, en O O~ u
rs ~cmb o
0 VNO~ e
8 8 0
o U)e
e,en O 00O 0%CM ao,4>
44o 8 448 CC
E- A. 000CM
2: -~ o
O CM <Ir-.4 CM o,u E
oacm o,
.0
<.1 VN VNIr- 0O 4> eo,
o e, 6 8 . ci
CC ~ VN+3 O~ e4~ ZCC u cau
04 rl It t-
05 Os
U vn e vn .0ciE <.ec
cd a ci
cio ,. d Oo cio
OCC >u ee -~~ a ~Ee
ca e E ~
O ~~ Vi ~ .2
~ 9-,
E-: .Sa~
u
.c It
1
E
z
e,
It
-.
It
-r
oc
0%
It 0%
2
Co
72
CO
72
E-
o
E-
E ~i~Q -
ti;
o e, 0~0
72 Z
o
O
u
-t CC
-t Co
2: E
o It
o
E- .0 .n .~
2:
o (3 0<
1.
-? -t - E 0
0 +
OC 0% It
Co
~
CC Co
E
2: E
E
E-
2:
o * a
o
rl [A -
O-
E
a
CC
o
a. .
-) O
o O
Resultados
*
Ir e-
rs
-~ e--
2
~ +
1-
CM OC
o
e *
e .0 O e--. O
OC Lo CM O CM O
o O O
888
u e--. <. II II II
O 0. 0. 0.
-va
* .0
e,
.0 Lo
u
y:
O A
-t
CM O~
* e,
O O~ Ir-
O 8
+ + +
O O
.8
0 0
44.
.0
rL
*
CM
e,
VN
4--
Lo
o
.~ y
e y: O
+ +
o z VN
Or-
CM e
CM
0
0
O
o0.
e,
e:
e:
e 0
E- e
u
+4. e, a ~
* .c -4- a .0
2: e- OC e--.
u
y: --
ej
a
e,
r
.e,
oc a
& CM
e 0 0 r
* e,
.0
VN CM e
E- 8 8
-41 +
Oc VN e
CM
e. CM
Lo
<4
aE
- -J e.>
*
0.5 e.>
e e O O
.44 Lo
st e,
e O O O
K
-41 + o
- O
O CM 0 e e,
e e CM CM
-H
1. -~ -a
.4.4 * J
-4-
.3 VN VN
+ -44 e.)
Lo O
VN
<4
0
o ~ e.)
e.)
Y
O
1. o . t
z e, ~1. t Co
-e
.
Resultados
o
.0 4 A E
4
OS
.0
rl
.0
rs SOLo Lo o,
rs QN e--.. Ir-. 00 000
000
4)
0
O
en
Lo
00
<4
0
Ca
OS
<Y-
rs
00
e-
e--.
tu
000
oo-
6
vg
o .0 o.
A .0 4 O 00 .0
rl O
rl rs rl 00 O cdu
O rl 00 o
00 O u
O
Lot
Ir-SO t II
SO
QNrlt o- o- o-
Ire-~0
OSOS Os OSOSO c
a>,)
~ .5
SA A
A uu
000
000 ~ a>
C4~
000
rn
o O ~rl Ir-.
rsIr-.o~
QN rl rs, o.. o- o- a>
00 ~ 00
Os CG CG -o.-
0
-o
e- e-
o rl
rs O rs e-
rl
rl
r--.u~O<
QN Ir-. rs en o
O u
+1 +3 +1 O COCO
+1 +1 +1 e- Ir- SO~
rs t 0 Ir-. Cafl zz
rs OSen enoCa
Qe--e- Ir-. e-
2
00
t
rs
t
rs
O
en
rl rl rl
ji
0 o e, <.4 rs e- Ir-.~ a>
4-4
o fl~QN e- en rs O 4>0
a
o; o +1 +1 +1
4-
~
o rl
Lo
CG
e- ZZ
o- Ca 09 Ca II
-~ vn.
Lo
0Ir-
Cao o
o-
U o
rs
rl
en
en
O
rl Lo
rs
en
rl
Ir-.
rs
rl~
Ir-.
a
it
~o0
0c
c
VS
4--
o Ir-.
Loo
e---. rs en 00
Lo
+3
O
+1
SO
+3
O SO rl e-
CO +1 E 3 y
O rs QN t Ca Z Vi
4> ~ L. ~-a~
drLo rlLo05 o-
<Y-
rs
O
ten
QN n rs Lo
rs en en .E -a
~.
o
-a
o a-o
o
o- ~ ~ ~
cd
u uu,
<.4
o
1
a>
~5
o,
.~fl
~tE
o a> E-
~ u o ~ o x Co,
E .~ ~
5
o o- cd o
o-
5
o
~- <,j
-a
2: a
O oCC~~
[A [A < E- E-
Resultados
* * *
.0 .0 ci *
CM .0 VN .0
el
o o.
VS 0 8 9
OS
o
o 4- 4-
.0
-oc ci
00
*
~0
4-
.0
VS
*
0
<4
o
o
CM
o
o o o
0.. 8 8 o o o
4.- 444444?
U) <Y e--. oc
u: Cl O CM
0-
4-
* .4
cd * .0 *
VS <~ vn ci
8 e. e:
44 0 -H O
Ca 00 44 *1
8 ~ ti
r 00
4- .4 4-
t5~ x~
e,
6 ti 8 -
u VS
VN
O
1--.
<Y
0
<Y
<Y
O .09 d
2: -2 ? ~ -
N +4
ci 0.
.0 * .4 o e
o CC
4-
e
ci
Cl
e
O
e
.0 o o o
o
otz
0.
8 8 8 8 o o o
E- +3 +3 +3 44
z e
VN
.0
O\
CM
<Y
Lo
A? 0,
~o, o.
o
ej
ci
e
vi
0
e
ej
O <Y O O ~0 a e
2: 4> 0
4- * .4 e o, .0
* e .0 e.> e e u
en U
o oc O e e ~0
8 8 -~ 9
44 44 44 +3
.0 Cl .0 <Y
U
VS e .0 rl
O <Y .0 <Y
~ .~ jo
* .4. 4-- cd
It
.0 e e .0 3-
VS e CM e e o,
6 o o o
a e ci
+4 +4 44 44 ~ci 4>
4.- ej
Cl <Y 0% 00 o - ca
0% CM 0% CM u a 3-
4>
CM e
o e
e
ej
e
ci-
o 4.4.
o 4.-
*
ci
+4
e
.4.
e 0
o o
VN
o
O
o,
> .E o
<Y e <Y O 0 0 0 o
N o 8 8 8 9 02 9 u
+3 +3 +3 +3 o o o
0% 00 o cts II II 33
o e .4~ CM 0. 0, 0. It-E0,
o CM CM CM o te
* * o e
Lo ~e ~ flci
U
+3
o
+3 ci --
0 oc VN O e
o, o
o- 4>
a
Cl <Y O <Y 4>
o- e
O
CM CM
u - ca
o -o
o
4-. vi
4>
o-O
e 4> 0 5
~ ~ O O- e
4> ej 0,
o, ca 4-. .2
e o> e e o
4>
e
0
ci
e e
0
.~
5 >4
0
o e05 o
ci
-J
a ~ ~ .~ o. cd o.. o-4 -~
it i~ it
Resultados
.0 .0
- en en e,
OLo Lo
9
0, 0
0
0 rl Ir- U 3
o~
SO ~
.0
SO o-
a>
.0 - fi
O
~~rlj
rl
Ti
O
O
a>
e
u
~
e- ~ o-i
Ca
rs
5 ~
.0 rs
A -e
nen.t.
O
9 e
2: sndod
<I
Ir ~
Ir
0 o-
otz
O
O -O
+1 +1 CC
LoVS Ir
Z <tu
~
O-..
O o rs ~
OS
~ d
O o- ~
U w.6
a>
O en~Os
e--. E
O vi,
a>
O ~ Z: e
o
Lo~Lo
e
a>
a
~0-~
u
CC
O
4-
a>~~
e
~
5~< .2o
a
o,
u o
.~ ~ ~ -~ 6
o ~ <E a>
Resultados
o
-a
e
a>
en O Ir
Ir-. rl <1
o 00 000
000 cd
000
CO en t
dd<..., o
Ir- SOSO
~SO en
E
A
en
4 e,-
VS o)
~SOQN
00
00 CC
3.-
NZ
os
00 O
-~
00
~
00
Ca
u
0~9 2
-a>
A S A
rl Lo QN * *
A A 4 e
05Lo0 rs t O
00 Ca rs O
000
SO
g.~p
.~vi
000
000
t en O Lo Os 6 .~
o;dQN O 00 ti~
E-- .0 E--.- o- o- o. e
SOe--.
u Lo
2: cl>
e-- o fi A 4 O cd
o s rs
> 0
Ca Ir rl Ir-. ~
VS
Ir.
o en ? -e
+1 +1 O e
4->.-
VS OS 0 rs oo~? cd
t Lo OS ~ u.
en t~ cd
u E- QN Ir os
2: rl <.4 rl .. cd
< vio
.~ .~
A 4
~ O .0 rs rs o 00
o e,
o e-
00e-rl
e
a>
a
e.> 9 o VS Ir
O
rl
< a>
o- ~ e
0 o
CC CO E--. rs
~ O <4
< VS SO u.,
E- <4 rl rl e--.
O
rl
rl
A 4
e--. O A
rs a>.~..
o
0
oae--.
<.4 a o
VSe-o; Lot ti~ Ca
00
+3 +1 +1 O
00 CC
000 <.4 O <.4 +4 rS
t u
t1O00 en
-~ do
o rl
Ir-.
4od4
t O II
o.
33
o-
A en ~ rs .0
rl
e--.
rl
.e4
rl
~ o
Lo
a
o o SO ~ a> O
a> a>
e
3 cd u, a> ee o-&
CC e u g~
-~ cd -a
o 4-i
cd
O e o .
o-a
8 e
E-a Ei~ ~
o
o
liii
[A
-3
~
[A
u
.e #~
o a
o
2:
o-
E-E-
a>
cd
5
>4
o
o-
E-
e u
a>vio,cd
noca>
o,
Resultados
e,
QN
o
6
y
o.
-a
o
-a
e
~1
a>
a>
u
a
a>
4 A A a
ti. ti. O
e.>
QN
O rl
Lot 0 1
lii o)
0
rl
rs tLo Lo
n o-
vi
o,
o 9
4 fi A
en
cd
~.S~ rl
+3 ~ +4 0;
e en rl
A
CC O QN.r--.OCj
6 6
.OooCa
2: &
4< Sb CaSO
rl) Ir-.OO0
A?
z
~
e.> 0QN05
f.> e- e--.
4< ~
U a> 4< y
E> ~
a>CC
~ o ~
0 ~ <E- ~g
- 4-
e e
o).-..
o,
4>
-a
>4
Resultados
e,
QN
O
O
y
o-.-
.4.J~
.M ~
cdu
ca 4 .0 .0 L
rs <.4 SO en os .~ e cd
.00 .0 09ene-~ 000 Vio)
000 ns-E
+1 +1 +1 000
Ir-. ~, el -a.- e
OSO Qoc9 cd.
~o;Lo u
SO en QN en
e
00
A
O rs
.0
O e-
e
o u5rl
SO
en
O
u..
o e,
6 o)
4- Vi
Ca>
o O.o~
en SO
ti. o. 4-
e O co
o VS aLo
e o
Q
CC e
a>
OC
2:
o- A .0
4< o Sn o
OS
en
Ir-.
O
SO
OS-Ir-.,.
rs en Ir-.
o e-
000
4<
o ~ 900 ~ O y; o-
QN Ca .0 a>o- .4->
en SO O ~en,.0 ~
CG 00 t
es en SOr
+1 ~
-o
4<
o o
4< 4- cd a>
E- uu,
o a
cd E E
<.4 cd
S a
CC
o 4< a> E- CC~cd
o cd
uo
cd t O o-
E o y;
4~ o
o- cd
4- o-
[A [A E-E- E-
~
Co -e u
a> Loa>
cd
O e oc
e, O
-<--4
-a CC
+ + +
vn
o
O
e z
<4 CM CM
o
OC Lo Cl
O 0 .0
e <Y r,
ti; -$1 +
~-4] z
~
oE- t
... Lo
eec O
E- &
y
o.
0 0 e,
O O oc <Y cd
<NO
~i; OOO~ g
o -.~ .2
e II
O.
Lo Lo0. o
u CM CM CM z
~ ~ r O
e, o.
<Y e <-.2
[A CM en
tfl + + -31 a>
oc e
O, en Z it E
o2: 0. cd
OCM~ a
a>
--
.o e,
e o,
cd
E- rs en - O
z e,
ti;
~St + + -41
Lo O O a>
u e e JI
o. O
o,
Lo <1 Cl
2:
O
O tZ
a> e, e
[A -e u
O ..~
Cl ~
~
CM Lo a> e,
e,
~ 9 U + ~
2: oc 0 o.
uO 0 Lo
Cl
Lo
a
e
Lo cd
o ~
Lo
~
0%
.0 .2
O
CC
e,,
+ ti
a. en.
o O
o e
o e
o,
E- O
eneen ~
Ea>~
qs O
a>
4- ci,
ue,
e, o- e, o,
CC 0 -E e,
o
a. e,
ej
O
e, o-
u o.
o
ej
>
t ~ - -
Co Co Co
rl 22
-t
(3
-~ e.-
4< Co Co
oE- -t It 4 <c OC~
E-
4<
o
+ Co Co
uO 7
-,
7222
u
N
a - e-
Co Co
2:
o
o
4<
E- Co Co
2: 0 727
0%
u
2:
a>
u Li.-
e-
e, -
o 00 -~ + - ~ rl -
2: -1 ~- % E
E- E
o2:
u
O CC ci; 0% 0%. ci-
e.> __
4< a. g -t e rl
72
4<
E-
-- CC
0
CC -, e,
u- z
e,. _
O -
a. e,
-
-E
.2 o - e E
E ~ o e, E
= ej 5 .9
0 z~~- z
Resultados
QN <Y. o
CC O rs
e,
d o;
00
UD Sn
7-. osZ
rl t di
rs en .0
1 Ir Ir-.
en
Ir-.
FE W
e, O
00
>< Sn
Ir-. CC
6 ~rl
QN
e,
00
OCr-. r~i
Sn ~j~j ThctS e,
tao Lo
6 do e-2 O
z ~ O
y
o.
Osen Ir cd
o OS QN ti 5
2: e,
00
t,rl~ eniZ 4<
o rl Ir-. en o
E e,
00
en
09,
5
O
o.
o: Ir-. VS
o
a>
d d
o2: o- 4>
1 e,
00
Sn
rs
tr~
Ir-. .0
~Iu5
a>
cd
u
O.Qs
2:
en
rl en
u
2:
uo o OS VS
SO 00
VS -a
e, +3
>< 00 +1 t1~ CC
o
OC
o QN .0 * ~..
4 d
4 t ti.
2:
e, 00 .0
E- 00 o ~ E
2: 6 c cd
uo
o
ca
a>
O
rl
SO
rs
en z .~ .~
o. a>
SO
es
ti) cd cd
4< u a
cd cd o
-a -e .~ o
c
1
a
4< o
a>
O
a>
cd
a> a> y4-
E- a> u o
4-
o ,~ y vi~
u Z
a> 5
o E- no
Resultados
12 CC
E w . rS
en
E- o ~ t O CO
ZZ
r-.r 0 6
z oo~ ~
O <.4 Vi
~ r en r
00 0% .
Sn Z2 ~
O i- ~ ~ ~ ~ 2:2:2:
o.., ~ .4
en ~
cl O t Vi~ .
~ 2 ~
092:2:2:
rl <.4
2:
O O o,~ t ene.4 -.
zCO
~-
t5 5 0
- - - r4 rg
? ? ~ ~ cinCOCo
u o- d ~ d O
Vi ~ VI it e-. 4-
e
2: 00 c.c en. CMI cl~
.
u u.>
C
e, n
O
~s .4
rl
~
VI ~ 5vi.vi
d 2: Z o
2:
o t ~ VI~ VI o
a
s
O ~
~
~ E
4~
z 0 O e. en O
~ VI 1 Vi -3-E
2:
E- <.4 ca
O 29VI
tC oQ
~ VI ~
22
u ~,?
O 0
~
0%
o) . . . ca
o- 000
4< it
4<
E- 24
4- su ~
CC E 4
O e e:
2= 24 O~ e, 4 ~ S ~
A eo .~ ~ eo .>
~
j~.
~ ~ 2 !- ~ o.
~0 ~0
C: tz. 3-. k 3.-
Resultados
UD
1<
en
rl
e, 9
VIr* (A
2 rl 2:
><
zza
4 re e-.
c.4 0 0%
6 ea
2 enO (A
j.
E rl
.~ o
. 0%
y
2:
6
O rl VI
VI 0 rl
re, ea
en 0
(A
CC 00 VI 2:
2: 8VIr
C.c .
u
2: o
4 rl 0 y
rl e oc
te
j. 4~ -H + (A
2:
C.c O it
2: <4 rl rl
u te rl o
E
900
2:
(A
e,
0. z
d d oVI
2:
u o
o2: te
it
E
u j. z aO
u
Ir. VI 0%
t 5 y cl
o o
4
2 e- o
1
it ~0 A
Ir- y Oc>
bOl
o j. (A
VI 4 0
rl oc y 2:
uo
~
.4.
.~
Vi O 0 0
o
e.> o E ~6
<A
ca 4=
4< 0. <.4 en en z it~
ca~=
-e e:
4< 5
E- u4 cl 4 LI
~ 6
4 -e
It ca 4
II
a 4
O
0- e, scle, 25 e,
0e
e,oS e.>
D .e: e.> 40
e.> o n >2:
2: E
3-
Resultados
CC .0 0 el
-4 e, <Y O oOi VN e VN
E 00 <4 0 cOl 8 o
Sn el
44 +3
ti -4] 44 +3
UD
1<
CC
CM
0%
Cl <Y
0%
Cl
0
CM
0%
zz*
rl fl
VS O VSI
(A
4<
1 vn
e, O
O
<Y e-
e-- 05 ~
o en
44
CM
44
I
44 Ti~ ui ch
1<
>< -4
04
Sn Lo
O
O
CCI
I rl 00
rl 2 ZZ o
VS e- 8 rl
.0 Lo VS <Y ~ O
e,
Lo
o
e
09
CM
VS
e CM e 8
y
6 e,
O
00 Ir VS
e
e
O el
.1:
O
Cl
00
O o-
N Sn ;I Cl
+3
rl
+1 ch O O
a>
4< 0% CM 2: 88
9 e e Cl VS II 33 o
O ti VS 0%
0% ~ e
o. 0..
a>
05 e O
6 <4 CM CM CM
CM
oc
CM
0%
el 4>
0
o
* o.
oc O O
o o o o 00
CM o e <4
e, CM , CM CM
o O
o
00 44 +3 +4i CC
2: O
9 VN
.0
Cli
<-1 oc +3 +3
2: 88
II II
VN 4 ti
O
oc
o
e VS 0. 0, o
u
2:
CM CM CMj
e
CM Cl ca
coZ
0<
o- e,
e Lo
e, o 0 01 o CM O 4> 0
00 02 02 0~i O O O
o 8 8 ch ch ch CV
o 0 0%
44 +3
oc
44 +3
oc 2 ZZ
2: Co 051
o 0%
o o
o a>
o- 02
o
~
o 0~ o 8 8 o
~cd
1
2:
e,
00
Sn
O
e,
e
+3
rl
Cl
Cl
VN
44
Ol
VSI
O
44
CM
00
VS
<Y
<Y
<Y
0%
CM
VS
rl
ch
2
ch
zz
ch
e
e-.
Oc
O e OC O CM
u O O e
CM
Lo CM
2: e- O <Y O O <Y
uo
e
oa)
o O
00
O
<Y
os 0% 05 0
<Y e
>< e, VS el e CM e +3 o
00 O ch ch
o 5
+3
e
~
44
;CM
-4-4
<Y
rl
44
o
CM
44
O 0%
e-- o z 2:
-4 <Y <Y oc 8 CM .0 0,
O O O
2: o ~
b
4> o, 9-
E- <Y VS Lo Cl e CM
2: O e,
o o O O O +3 t 4>
o 8 u~ e
~tn
u o 0%
o~ 05 0% 05
2: zZ
O O O
o
e
4< O
.0 .~tt
4>
e
O
4< O ci
e a e
-g o It o,
1
o a
0. e Ce
e
2e e O
E- CC e
4>
E- ci
o cd
o>
e
O
o
e
o>
ci
~ O
ca >4
e u O o-le o.> o, 0 o-
4>
le
o e O O O
e- e 0.
2: 2:
hz.. E- E- E-..
Resultados
UD
cd
E-
4< 4<
o
CC
Ca e- en e,
O rl
bn ti)
QN
O
04 Sn 6
rl
en
rl
VS
Ca
Ca
z y
o. SO OS OS o-
5--
o
c
Ir-. <.4 a>
e, 02 -t <4
o cA
a>
re~ 5--
cd
u
OSO O
2: e, ~VSrl
00 en
+4 +3 cA
E
o
u
St
5--
SO O
OIr-SO
oo
<4
r-.~
4->
u->
o ~
o Ca
<4
<.400
<.4 4-
e, +3 -
2: o +3 +1 +3 CA,
o r- e--.
Lo IZ
1
5-- Ca en ~ .~
E dd~
rl <4 rl -~ .~
o)
00 .0 SO~
2: e, O a>
d u 6
u o +3
OS
+3
.0
+3 CC
2: CO
uo
a> rl vn rs
o-
a>.
o cd ~o.
u
cd
4- o
2: CC a> a>
o-e
E-
2:
1
-a
o cd
5-
u E-
4<
4<
E-
Resultados
e
1<
o
UD . e,
o
O
o
4< CC en Ca en ti y
W
,--.-. Lo rl e- QN 0 5
4>
E- o 4
~~~cAcAcA
>4
o; 0< rn~ en Ir-
04
~ 0 O Ir rl CO
QN en eni rl en oc
EO
o ~ rl O
3 ~
rI os o Z z
ddSO
e.
a) O
2: Ir-. 00 tI . coy
O t Ir,
.~ rs OS CGrs rs . ES
4->
rl ~
9 . ~ +1 +1 ~fl 9 0 ti) e
O
(3 Ca
<.4 Ir-.
Ir-. 05 O
. o-o-
1 <4 en
c
OS Iri O t SO
2: 0 QN flI QN OC QN oca,
o Z~flcAcAcA
0<31 CGt * Z
rl rl I rl rl
2: ,.-. e--.. Lo Lotm rs -ti~ rl
u
2:
~99~ 999
O Co e--. O CaLo +V5E
a> rlZZZ
o. .9 ososos
o>4 .~ ~
cd e
a>
o cd ~ e
~E- a ~EE
u ~ y;
el ~ ~ o
U
-~
o ~
[A E-E-E-
a .
~
Resultados
e,
Lo
o
6
y
o.
cd
4)
a
4<
ti-
o
o.
o
o 4->
e
a>
re~
O Z O Ca SO
E ~m~ a>
+3 -4-1 +1 .
O<.4QN
QN O Ir Z u
>4 QNSOQN
o
es
a>
(3
o oIrn
Os CG e- u->
4< uE
rs en a> u
09 ~ oc
rl OS en
rlrl<.4
~vi
SO a>
a
O u t
cdcd cd o,
cd ~ :~
O> ~ a a
u- a>
4< 0
U
Resultados
o
e
a)
cd
e
4>
u
E
O>
4< O
o
o-
2: cA cd
o
<4
re~ e, rl 4.4.CO
(4 O
4>
E rl rl rl e
o -
00 Lo
Ohos ~ <~ rs zzt o
Z
>4
a
oE- 3-
.04. rl en Vi Co
en oc en
u teSO
Ti?
. 5
o
E- Q.,en~
CCCfl E-/I
tjn
4>tz
rl rl Lo
4< dt.en 4. -~.~
4.4.4. 4.4.4. cdC,)
.~ .~
a)
o o
-a
SO~
u
o
CC
3o-
e
a>
cd ~
cd
~
~,
e
~
cd
U <t o
.c->
e
e
a>
cd
-e.
-o-o
CO
E
g
~
o u 03
.~
cd
~
o .~ E
al ~ u o ce
do
4.
0 Lx, >2:
4. [A E-E-E-
4<
U
Resultados
LA RELACIN LACTULOSA/FUROSINA
Ca
en
6
-H
4.
7-.
4.
O
C/D
2:
e
Co
a>
en a
4.
Lo
o
QN 5
5
O>
2:
o 00
O
<.4
-H
(4 Co
O
& -H Ci) a>
-H
o 4.
<4
SO
00 Z
e
cd
O
6 en <4
4.
cd
OS
4< a>
-o
CO
4<
u E
E
Co
a>
a
Ci) 4< o
.0
o Ir
~
~..
a
4-
o
2:
o
o-
o <u 4<
Resultados
e,
8
e, CM ~ CM oc 0 o.
e Lo vn r
0080
~.
0 e
.
7
+ 0 -41 + + ~ 40
4< <Y
-41
CM
CM
VS
CM
OC
O
33 e,
e
u e
.0:
rl
,A .~; o. e,
N
o-
E- o)
o,
O e-- <Y O CM OC O>
04 0~ 88868ch
<4 &
+ + + -41 + 4<
o OC O coz +4.
. (3 en e e en e
vn vn en en el a
u
st
4< Cl CM CM cM
. O 0 0 0~O .4-
88888ch
-41 +3 + +3 -41
4< .0 O .0 VS 0 Z o-
E- U 5 Lo VS o
2: o o o o
*
0
o
o
4<. 4>
o)
o. CM o.
4< 0 e C~ Ch
co m
eN
o. 0088 . e,
VS
O
1< c&11
(3 4> vn O OC cO e
O
Ee, ~ e ~ .~.
y
o.
o-
0
e ca
e.,
e,
-e,
e,
It ej
e, ~ * * * * 5
E- o Cl CM Cl Lo 0 o
z erlClCl ci;
+ 85800 ~> ca
o
~ <Y oc oc 3
+ ca
t0
..
~ o. ~e,
e.>
o
E
e,
e,
~
-~
<E
CM
e.>
e
e.,
ej
o -~
e o
0
N .~ o
e.>
2:
.-
E -
ci) u It
O oc> It OD o
o-
00 o-a . .. . O
D 0 Z
a. .9
.-2 Z
a. 2 e,
o
4< 0
E-
Resultados
e,
(3
u4< e,
e
E- en vn
o cd CA)
-H +1
04 0
z z
>4 (3
o e e
E-
r~5 4< O e-
en
en
(30 08
-UD
-lA-fi
4<0 QN O
tI U
o-
rn~
<-.4 en
5
cd
O
<4<1
00 QN vi
O a)
4< 08 <.1
o 5
Ii~ -fA-fi o o
4< e-- SO b
~Fz~ u e
8 rs II a>
o- -H
(3(3
e
o
vi e, <.4
~.- cd do CA)
cd
o <4 z os
00 ~8 <Y a)
e os O
vi
o
r~r~ E
o,
4>
(3~ .1
o
CA) e
o 4<
o o
o-
2:
o 4< E
0%
e
4<
4<
E-
Resultados
o
4< 4-.
<4 Lo <4 4- .0
e t elrl~ o-
0
00008
o
<4 <4 <4 <4
re .
Ir
.
o
.
.
00
-e
0
e <1 Lo Lo o- cd
E- 1
o 7 <Y 0 <4 00
4>
04
>4 02 <1O
88888 cA o-
-IH-H-4-I+I-H
Lo Ca OS O O 2:
-~ U cnt ten e
4< en en vn e
4-
E
2 Y rl o-
4<
-4< 88888 0 4-
4< .OOS.0o.0 2:
U QN Lo A) o Lo 5
occo
o
e..>
*
e
o
e, .0 O>
ej
-4< o en vn rl <1 rl o-
88008 4>
-H -fA fA .f-j
4< 0 o en x-. 1-
(3 fl909 CGe
.o e,
QN
.0Loee4
e, e CO
Lo rs <4 rs ~ O 0>
o, e <1 rs 9 4>0
(3 <YO<Y
8 .0
Lo en O
Ca Ca Ca Ca o- +1 o,
o
(3
4>0
<E e
.~ ~
E-
1
E-
CA)
1 U!E
- - .~ ~ E-
4<
1
o,
Resultados
CM <Y
CM o
o
o<Y o
<Y 8II
O <Y 0,
Cl O
-< -~ CM
o
-~
<Y oc 8
o,
rl rl O
o
<Y .8
VN 8
05 0
o ~e <Y
oc
Lo
2: 44 rl
~ :~ o
O E- . CM 8II
~ 0,
E-
o
~ Q O
e
ch
o:
CC
<Y O
o
<Y
Z
~O <Y
(3 4< CMCM
u
o!~~
CM
o
8
II
Ii) <Y VN
4< o-
ci
Cl
e 0% a
e
0 CC e O e
4< 08 CM ~
U) 44 44 o
E- <Y 8
<Y:
0% 0, b
4>
+3
o
<Y u
o ~O e
8VN
44
zti e
O CM
~oc
CM u
a
o
o
ccl
CC 1<
o ~ o-
o
Co ~
o Z .9 >
o < ~ ..< E
Resultados
ej
.4-) 0~ 0% en
+4 +4
en 00
0
it
r-..
ej
e-.. 1
en Vi
+1
0%
00 e-.
en 0%
e-- 6
e-. t
4.- o
ej * * * a
en en y 4-
o a.
~ ~ej
y y 5?
0.
ca
0% 0% 0%
e
o
o e-
oc
a
it ej
* a a
VI
o
e,
.10: Ir- O o
O
Ir- 00 O
+4 4] ca
it Ir- oc
o el
el
en
<4
O
y
it
oc
00
VI
O
1 o.
ej it e- Ir- it
ej
o
4-
o a a a
2 0%
.~
0%
10:
it Ir-
e LO
y o
o
o
0.
00 00
44 .4]
o it o Ir- 4-
o e y e-. ej
o,
ca e
e--
ej
en
ej
ej
ej
Cl
ej
ej
VI
ej
1
e,
0
e.>
4
~ e- 0 4.- 0 VS
Cd 0:9 it Ir- en o s
oc en
2: o
e. E cm y y +4 o en O
u, o en
VI O Ir
-
y y
1 Vi
4; en 9
0 4 oy
0 0.
en y y e:
o, e- oc o e
o
uL2 Ir- oc
o
O ~
3-4 4-
&
<
ej
. ej y
ej
LO
e.
9?
0. u
4]
ca
e- a a a a ~ e>
oo
O
v~
oc oc
o Ir- o e: e
o 4 ca
it o
E
.4]
it
+4
Ir-
00
+4
00
~
o ti O
ej
o CC OC it ej Ir o o
2: it VI Ir- VI r-. 0. 0%
00 en ej en rl
ej ej ej ej ej u .2
~0 o
oo e
0 0
ca
E
4
4- o
e, 3-
o o 1<
e ~
0.
o
0.
0 o4-
ca E
0 < < 3-
Resultados
~ii t ~ A
+4
CG QN
~
en O
os
rs vR
rs 4
-~
L
o
9.
(3 ~
II
QN O <.3 ~ o.
u o CC ~ QN SO .0
o
E-
o * * 4-- 4--
CG rl . rs
e.>
RA) N
rl
+3 O
+1
fA O
CacOseno
33
~ 5 ~ o-
rl rl
4<
E-
a> > E-
o
o- o-
EZ <
cd -<
cd ~cd Cd
4<
E E 3 E>
[A
f f
[A [A
~
[A
~
4<
Resultados
oc 0% Cl
Lo
o
0
O 05 0
vi 33
O r~-. o.
VN rl~
st 80 0
0
. en o
0,
00 05 CM
<Y
CM
o
8
rOl
<Y <Y 0.
el O
o 9~ oc
el
o
LI; 00
E- 8
4< LI; rO 0.
ele
o
Cl O
<YVS
CM
+4 44 CC
u Ca
0<1
Lo
2:
4< Cl e
4<
000O <0
<Y
~b88 CM
+4
0 44
Cl 02
0
4< o U
o.
U
3..
0
oc e e
ch
U), O
~fl O
02 2:
ca
o-
CM O O
4>
+3
O O
9<Y
<Y
CM
44 +3 CA
e VS
LI; 00%
o e.<Y. - ci
00 CM CM
ca
a
o
O
e.
CC
71
1< o
ca
O
o, ~E > o-
o
Co e
O <U
Resultados
a a
0% 00 C~ Ir.
5?0.
VI y VI y Ir
Ir- oc oc co oc
en ej en ej it
it
0% it
0% ej
0%
0 it
0% Ir-
y
0%
0
r-. .
ej a
00 a
0
00
00~~ej0\
Ir r-.
CC 0%
00 4-
CC 0%
00
2 ~y ~
y
a
0~ r
9
c
ejenen
d
y en
rs en ~
en
nC
en en
y II
0.
6
2 0
0.
ca
-<
2 it en it it
0%en
CC O
2CtS
O en
00
en
en Vi
it en
VI
O
y y
en VI
en y
en Vi
en
0>
o-
oc
0 CC <4 0% o
ej ++
0 - o
ui E 9t ~. o
cf, O VI
O
en
0%
o a
4.-
4;
a a.. e:
ag
U
3-> d
~y-n&o
0: q <10: t U
y y VI en ca
o
o
a a a a
2 4
.~
y
~
4
LZ>
VI en ~ en en
4 oc
C0
u
e:
4
e:
0>
e-) u
4 o
0
o 0%
4 0J Y4
N 4 o o
<A 3-
Z o
LI
D o
e: t 6~> .0
e: o. 2= o. O o ~
O <<ca ca z s.
< ~ .~ oc
o
Resultados
o
Lo rl t
&S44 +3
OS e- 5 1; z
U <ti <a en:
o .4
o * 4- ~ * Lo
o
o
UD Ir en ~
O SOr- Ir , o-
o
o Z
E-
z 9 ~4 .3.
-
tf,
4< -~ (1 II
4< Lo o-
rl <.4
4<
E-
It
a> o
3 & .~ E-
o-Z
4<
E- cd cd cd cd 4<
E E E E>
~ ~
[A [A [A
Resultados
~ rl Cl
o
771 o
o
VS 0% 8
~ 0 33
oc
Cl Cl
-< o
44 44
0% O
O e o
o
o
o
o ~ 8
VS VS 33
oc 05 o,
o 05 Cl
o o e e
<4 Ir-
el
o Loz44 33
UD o-
o rl e
OCM
9
CC
o CMCl 2:
CC e
vi e
~
CM vn
O
~3 o
7 T~~CM +3
A) 8
II
4< <Y o,
U o
<Y
CM
1~
o
0, e
u
c.c
O CMVS
oc .0
bo
ca
CM +3
+3 +3
[2~ Cl<Y 2:
q
Cl O ci
Lo VN
e
CM
o>
a
o
CC ~a 1<
> vi
Co ~
o ~<Z 9-
E-~ o
~
Resultados
a
0 ~ en O
<.4
44 .4.4
0% y
Ir- it e..,
y
r-. 00
0- Ir Ir 2:
VI
ej ej ej
74 4]
oc 00 CO
r.- y
00 00 2:
a a a
y VI 0% y 0%
o
CC
CC
O
0%
1
a a
u
2 en
y
y
0%
y
ej
en
o ej
ej rl ti
o 44
OS
Cl
44
it
Ir
ti
0
O o 0%
y ej ej en ej M
U) e.>
O &
2 ej
a
en
a
en
a
it
*
qn
8
o o ej o y -c
o it it en
8
a.
o
1
y 0%
CC ej en y VI
y en en en en
a
4 a * 4-
o ej y
it en y VI
ib
en
ej VI
o
1>
e, Ir.- VI y y VI
ej en 4
4; s
ej
0% CC
ej y en 0- en o
en OC O
.44 441]
z C.c en en y en 1
O 9
e,
* a LI 4
2 LO
it
a
o en
y
0
y
0%
y o
E ~
oza Ir ej ~ ca e
1
VI 0% VI
o it r- 500 .4.4
VI qn en en en u ~
~ .~
ej
e: ci
4
ej
4 cd
0%
4
0 u .S
cS o 0>
a
o
e, E-
<A o CD
o E
o o
a o. z o
0. O
u0< < ca ca
Resultados
o .4 4-~~ * SO
*
4. SO e rl
- O O
+3 00
+1 +1 ~
~
1
Ca
en
~t
rl
. rs
U
o-
04
o
*
SO
*
<4 r- -4--
4.
UD .- - O
ml +4
o;i ~ ~ o-
.D Lo SO 7.
o
Z
o
E-
2:
0 -e~~--
-c ~ 0
N 00000
u, +3
e-1
0 +3
4. +1
O O
II
4< 4< o~
en
<rs
r
<4
e
<.4
o-
4<
E-
a-a
Ci,
o) o
. -
o o- o
o-
E- Cd Cd Cd cd 4<
E
~ fE E~ ~ >
O
[A [A [A [A
Resultados
<Y
ch
e O
vir- 2:
e VN
<100
ch
2
rio;
<Y O
o
a
o
0% ~ 0
-~ 8 II0.
O <Y
o
0% Cl
UD
9
z 2:
LI.~ ?I~ ch
re~
4< &-
<10%
O
rlCM
0%
o
9
VS CM
U <YO 2:
Cle
~ .1<
e
a e
o e
.0
o
00 Cl
.0 0
o
0%Cl
4< o . . 33
U
It
ci
a
0% .0 0 e
00
~ I~
CM o. u
+3
o,
o 00% 4>
9 CNN e
00 CC
+3
e
44
e z . e
3O <Y
vivi
VS CM
e
o
1 0
e.;
u
CC E
2 o
.<
e
O -<U ~E-~ >
Resultados
CC ej qn it
1] +4 +1 +3
it en it. en . 0: (A
Ir
VI VI
y <.4
1 VI
VI O
VI 2:
y 0%
0% ~ 0 y
.4: <.4 +3r~qq qq
O
k
it y y
rl 1<1 0%
en
4] +4 44 44 44 0
0: <1 -t .100
0 0 00 <4 O I
Ir. Ir CC oc oc 0.
Q a
E.> en 0% Vi VI a y
2
U)
t -t -: 4,
4
CC <4 t~ ej ej 0>. o
4
..1< O
ej
oLI
oC a y en it y
Ir ~ e 0
o ~25???
CO C~C%VIen 4:
ca e.~ ej it 0: O
~ R e~ en en 0.
0
.E oc en
1
4:
~o y 0 0%
0 . t
en en en ej en o
0%
O O
e.>
4; * a 4
o
0000%
O it a y
9
o
LI> ej 00 Ir OC
~ d E
O
O
3 1- V
<1 n ~
Lo> 8, ~,>
VI y oc en 5?
2: E.-
Vi y y y y 0.
+3
4
o 0%
a e.> e>
~ 0
Ol oc
E
O ~ Cej 4:
2ej o.b O &O O o
o u
Resultados
VS O
e e o
O
cm o O
+3 o
e 8
A rl rl
Lo 0,
CM
2: <Y
Cl 0%
0% VS o
U, o
cm o
A O
0%
rl
VS
0%
0% e
o
o o
o o o
cm o
o
<1 8
Cl CM
o 8 0,
o
U
cm
o el 00
z O rl CM
O
bOl o
A <Y rl o
~
CM
8
CM
o.
e
U 0% 00
O
cm 8 ch
2: E
e.
44
VS z
0
8 o
o.. rl CM
o o
2: ~
rl
00 +3 ch
U A O
Os z
o2: e
<Y
O
O
U e o
o VN
Cl
0>0 8 ch
2: cm +3
oc 0% 2:
A Os
O
CM
O
o2: e
U U <Y Cl
<.4 OC <Y .1
a .0 <Y ci
a
1< cm +3 +3 ch e
4; A VN
00
<Y
0
O
e
o,
u
e oc
o o
ca
CM +3
CM
O Cl <Y A
o rl
+3
rl
+3
rl
O
u
Cd
CC
LI; cm CM e O
0- rl e
O CM 0, (0>
<Y Os O
o>
a
e. o,
e.; O
a
ca
o O
E
0.- <Y o- o
0 e O ca
o O- o
o -< U e
Resultados
cd 0
y
a
<4
<4
a
it
en
-t
*
O
0
o
.~ en
fl en
y o
VI
. o
y
o
y
~
O
O
II
<4 ej ej <4
~Z
a a a a
O O CC ej o
0% Ir Os VI 0%
VI Ir CC Ir <4 o
E- o o
O E <1
o -t
en 9
e O
e-s en
y
E- VI ej
CC ej
Ir- <.4 en
y
o
<4 o
ej S
<4 8
<4
e,
0> ch
o SL
A ~ z
u O d o o
z a a a * <Y
e, en VI en ej O O
o
~ r ~ 4 ~ 09
A ~ o
en en e- e- <4 33
y y y o.
<l ej ej
di
e,
u 00 - ..~ -
ej it 09 en ch
A ~ 2:
VI VI it VI VI
o
ej en 0% Ir-
o it it e--.
e, y d ~
0> - - y Ir 4-. 2: o
z VI
e,
SL : -, -t ej ch e
O 0> VI Ir Ir 0% O
>4 E ~
5- 6 1 <1 <4]
o ci it it it it o
(3 4>
en 4 0% 0 0% 1- o.
vi
Ir y en ~ 0: ci 4>
e, Ir ej Ir O it o
e o-
ca
00 - - -
E- E
-.- ~
9 <4] ej It 4>
0 0% en o ~n o> E
o 00 Vi VI y o-e
VI VI O >
(3 ca e
+3
es ej 0 05 0% 0% vi 3.0
St e, en Vi ej Ir ch e
cd cm
++
y o
y y
en Ir 0% ej y 0>
0 0%
Cl VI
00 <4
CC 50%
00 <4
CC 0>
ci e
ca
.0 o-
E- ca~
a a
o vi
o ~
O E a
4> o>
~
e., o z E ~
~ o o o e
e 0> 9 0 o. ~ o. u e..>
e .<
< ca ca <
H ~
e
e
Resultados
e VS
0 ch
0tCl
U) 0 2:
80
U
C Cl CM
88 ch
~ 2:
80
u
U 0% CM
O~oo
U) ~t09 ch
U
E 80
Ci)
U)
9 <Y vn
o Caz
~O 88 CM
U
wEg~
2:SL4444 CC
~titi
z
U o-
o
U Q~?
a
e.,
1~ ch
Cl CM
-
<E Cl~fl . o
o-
1<
2 4>
4; +3
o,
0 O
o>
E
ca
o-
o <U) i~- ~
Resultados
Lo CaO SO OS
90 99
O CC
+3 +3
04 SO SO 4. rs
o
u 000
888
(3
0 e, rl r-.
00000
88888 CC
+3 +3 +3 +3 +3
Ca SO SO SO 4.
8888o
u
(3
o e, rl rs en
99999 cA
UD
4< z
en rl <4 rl rl
(3 88888
0
UD
9 rs Ca en rl rl
z CCC
U4e rl CM
cA
ZSb
(3 e-~ SO 4. Lo Lo
rs 4. en QN 4.
1
z
rl
(3 O
V2~
~. ~ CM
o CC
Co
(3 09OSrs~ OS
a>
A) 2 oS 2 oa
0 a>
4< +3
ci,
U -eCd
Cd
N
cd
o
O
E
o)
Co
o O a>
1- o
o
~ o
o
o-
o)
4->
CO
a
o) o
o <3 22 o-
o 0[A [A E-
Resultados
o VS en
cA
(3
- 0
tI
CO e--.
enZ
+3
os:
. o
o ~ 00 e- Lo
~ C1 O rl
O- .0 .0 SO
CC
o
E-
SO SO QN OC
.6
St
4< ~~1 -
U
a-
o Co
o) o
> E-
o co 3
o- o-
o- .< ~
Cd Cd Cd Cd $
E E E ES
[A [A LI~ U,
Resultados
CM
CC
<Y
0%Cl
e VS
z
<Y el O
4< 88 0
0
ocj
o
VN
0% 0% o,
0%
CMCM zCO
VS VS
e Cl
O VNC
o
-4-3-4-4 U)
o 2:
E
<YVN
<Yrl
e
CM rl
el
O VSO
oc o
oo;
CM
44 +3 CC
<Y vn
CC 2:
(3 0% <Y
0% e
4< 4< CM en
ocO
4< o Lo o
-
~~+3+4 O
O-
.0 CM
4<
CMO
U VN
rl
Cl
o
oc
O
Cae,
2:
oc o~
e VN
CM CM O
o>
O e
<Y <Y
00 +3
9 oc
. tI - o
u
Ee
e.,
Lo .0 CM
0>
o
o
cd
ca
CC E
O
o-
o
o
ci <u 3 ~- >
Resultados
a
a
VI en O 0
O
O
ej
0 0 00 y O
en
Vi
00
it
00
o
0
VI
0
9?
o-
y
en VI en y en
-4: o
O
O
VI Vi VI it
0% 0% 0% 0% 0% 0~
o
en a
en
o
ej a
*
O 0.
O
O ca
O *
it ej VI 1 4
VI 1 Ir it o o
4
4
e:
VI y VI
o oo o <.4
<4
en CC ca
0
44 44
y
En oc
rs y y 0%
oc
Ir CO
.4:
en 00 00 O
en ej ej en en 2:
O
O
O 0.
Vi 4 0%
en CO
44 44 4-
Ir-. oc
o O CC VI 0% O
cacts.0: e.
rs
r0
<4
od
0%
<4
0%
ej
en
0%
ej
en z(A *
e
o
u
4
o
o O
Vi
Cl
it
00 CC
it
e
it ca
.9 y
1<
o
44 2 e-
o u
4; it y O
VI VI OS Ir- O VI
en ej en 6 <4 O
0- 3- 0
4 y
0 3
e:
VI VS
Vi CC O
O
0609
+1
d O
O
~
it e-. u
(~2
En 0%
LO
y
4
VI
0%
ej
lo
it
y
it
O
O e0
Cl 0-
1 VI 4> LI
g .~
a a u
y; 09 * ej ~ e:
2 4
ej VI qn it
0% CC O ej -s
4 o
ej 0% +1 44
1
oLI> Ir-
it y y
h
oc
VI
y O 0% 5
2: O ql
VI it
0- u
o 3-
o
it y y
o
e
u o
o
~ E
e
o3- LI
E- C0 O
o
CD 4:
o
0.
o~
2= o o
o < < ca ca 2:
.4:
O.
E-
Resultados
o
&909 O
04
Ca II
<>60 0 0 o-
rl <.4
o
.4.-. .f..~ *
N -~ ~ <.~ Ca
o
(3 ~~+IOOO9
z
O -% II
r-. C~ Lo
QN
00
4. o-
o o
E-
o
Os fl
.DClOS~
4<
Ca oC
O q
4. en o
o-
E- rl rl rl
o,
4> CI
4< 4<
h Cd Cd Cd Cd 4<
E ~
o
z
U, [A [A [A 4<
Resultados
O
. O
O
9
O
O
O
* S~
e ej 9?0.
VI 0%
0%
en
Vien
os
en
1
2 O
O
U 9
y VI
g ~
o
8,VI
~ r4
Ir
oCIr 1
-4: -0%
e VI 0%
4;
.1<
y-
o-
it Ir e
~i 1 o
VI O O e
(~1
En VS
9
8,
Y u
y
CC ej
0% o
enej
u
+3
<4 0% vi
ej en 4>
ci
2 (A
LI> yit z
ci ej ci
en
0 O
0% e
CM
VI y
ca
a
CI
o
4< vi
ch u
1 o
4< 3Z ci
Resultados
oc la CC
O
y <4
.44 *4
0% it O
a? itd
qn ej o;
ej
<.4
ej
0%
ej 1
lo y y 0% 0% VI
O
y VI O
+4 +1
en OC 9
e-)
0%
Ir
VI
VI Ir.-
it
VI
Ir- 1
o
0% y ej 1- y
o
0.
Ir.-
606
CC o, ca
a? 0%
en en qn
en Ir-
en 2: e
4
e
VI a CO
o o r- it O
en
0% Ir.- E
e--
U 2v
za
E- it a o y CC 8, o.
VI
oc
fl
it
Ir.-
06
O
CC
o
ej
y
1 .4:
a.
oc O o
2 VI
ej
ej
O
e-
CC
y; Ir 0
ca o
U 44 44 <.4 .4:
oo, it
o
y
0%
it
Vi
ej
en
it
y
rl
9 4-
ca e- VI en O O o
0% y
.4: VI CC 0. O
0%
O
Ca
a
4 en Ir VI VI
<Y 0% y it oc 1
~enel o
4: ib ti
1<
4; CC it Ir-
O VI CC 05 VI
ej o Ir- O>
en en y en
9
Ir.- CC O y os
VI y e-. 0%
O O ej VI it
en
o o.
e:
44 VI
it
ej
t
O
CC
VI
O
ej
0%
qn
8, ca
en o
0%
ej
it
ej
ej
ej qn
0%
ej 1 b
u
4
e>
0
4-)
* a la e...
VI en VI 0% it
Ir ej y
VI
2 e-. y CC
44
CC
+1
~
0%
o
~
0%
E
En ej en en
4 0>
en 9 ej
it ej
O
0%
y
Ir
en
0%
o
en OC
y
y
e-
y
9?
0.
fi e
o
o e
o
e: 3-
la
o o .4: o
o
~ .3 & o 0~
Co
0.
<O. 2=
o ca Z 0.
o u ca
Resultados
CM O
rl Lo
~+; CM o
o
o
CM
8
II
O O-
CM o
CM o o
44 44 0
O O
e oc
VN II
O
o,
0 4<
o
(3
ooo
II; e,
e ~
CM e
CM CM
O
U) ~ +4 44 o
~ O
o.
4< e
a
O e
2 e O
o
e
It
u
1 <n 8 CM 5
44 44 0 0
CM 0% 02 ~
4< LI; O oc O o>
8 8 33
o
E-
e
e
CM
u
o
o
o
o,
o>
o-
O 4< 0
E
~ Co e
o ~
Resultados
o
o.
ca
e
o
0
e:
ej loen
606
VI qn y en y 1
4:
o
2 en- .~
~1
1
o t
CO 09 00 en en .3
0 ca 9?
O < O. o
U
4
4 0
a a e>
U
z
4< U
~
O 00 VI os y
o
la
VI
En O VI y 9
O y y VI VI
0
e,
rl ~
7-. o a a a a - ~0
2 it y oc <.4~
4; E ~ 44 C
zO 69 en
oc . en
e-
e-.
Q
3-
u~ Eoc
.~
4
oc
fi
~
e:
e: u
ej u
l.~
~0>
fie:
u
o o
o
~0
4 fi oc E
o
4: >
0 0< < ~ <3-
Resultados
VS .0
0 O
cm o O
O
O
1 <Y
02 0,
Cl
ue
Cl
O rl O
+3 O
cm +3 O
05 e
o 00
<4
O-
O O
CM
rl -.
44 44 vi
o <Y O
z
U e 00
O CM
e Cl rl
U ci
N
e
00 00
O el
4> Cl
~au cm 44 -4-4 ch
el
e
e
CM
el
O
z
CM rl
U
0%
e)
o rl
eecd
cm ti
z SL +3 -4-4
<4
O:
o
O z ca
4>
U O e- 1~
z el rl O
o 4> 4>
U ~.. +3
o
00 4)
o e e cd
E
2:
e,
cm +3
7-
-4-4
<Y
ti
2:
ci
<Y e cd
rl VS
E- CM CM O
2: o
o VS
U eou
CM
O rl CM
<Y <Y O
o rl
+3
rl
-4-3
CM
O e
4< CC 0>0> o>
4; CM e 8
Cl E
0% CM 0, o
<Y 0% e.>
O
cd
e
u,
o O
<Y 4<
o
o o
4< 0
o u
Resultados
*
0%
*
CC
a
oc O
o
O
O O 0 9 0
O
~- en ej ej CM 0.
u
4<
E- 000 * * *
O O <4
u
E- en cd ~p Ir- ej
+ o
e, 0% Vi 8 8
0>0 rS rS 6
Co ej 0% 33
o 5 ej r.4 ej ej o.
o
(3 O ej y qn
ej VI qn ej
u -~
SL oc 055000 ch
>0 ~ ej
en -
en
0
ej
en
en ej
en Z
c e
N
oc en VI y y
O it en en oc
00 6 k y en
en rl Ir en y
ej qn ~ o
Ca
O ~ O Ir ej
ej CC
<.4 e-
ej 2: __
_
o
ci
o
ej
Z en
3 0% o. e
O
+3 +3 0
(3
Z oc
Ir.-
VI
.
4>
o>
O
u
a
e
o-
o>
.
.
0: a
it
1
.
Ir-
.
09 o
~u Eca
o oot y it it
cae.,
y 1
Z -~
0
~
VI
0%
en
y;
qn en
0
II
.2~ 0
Ecm
E- 5-- <1 Cfl rs en o. e.,
Z E ~
O e e
(3 .0
4> 44>
fi
CC ej 0% 0% 0% 0% o o
7 ~I; en 1 <.4 t~ y;
4< o ca
e, ~ ch
cm
5-~ 0%
ej CC
VI CC
<.4 50
Co ej
CC E ~
4< o,
E- E
O ~
a
e
e
e
oe
CC N 4<
2 .3
E
z O o
t
e:
U
0.
<
0>
4:
a.
ca
D
Z .9
O ca<
Resultados
CC O
LI; it CO
y
CO
en CO
1<
.3
-
VI z
las
LI; y it
2 VI it
1<
O OC
y en
4; CO
2 ji;
z
it it
CO CO
4;
Ir
ej
6 CO vi
ib en
oc y z
Ir-
e-
6
o (A
N CO
1< .3 y
y
it
e-, 2:
oc
o
CO
Co
2 rl o 2:
y en
66
2:
y Ir
U CO
O Ir-.
It
ib
2:
~ y
04 Ir-
2: it e
U
2: oc Ir
o
U
o it VI
CO vi
1<
2:
>04
o 9
2 <46ej
4
o
e:
o
rl qn .5
u
2: O
E
ej ca
E- CO
Ir
<.4 en 44
o2: O
ej
z e
U &
e:
4
O it
3.-.
O
4< VI
4; u
o
O
4 o
u
CC E
o
~e: o O
0.
O
4
4: 3-
Resultados
CC
ch
+3 2
000 O
U) .~ <Y
VNSOV ~
4< <Y~zrt ~
t~%Cl . .0
ch
~ =o9t
VS ~ e <Y
O 2:
~ o o
4;
rl 00 CM VS
<4 e e 00
~CMeZe ri ~]
O;
6 ch
<Y
02 2
<Y 00 0% <Y <Y
<Y CM CM O 0
CM CM CM O
e
o Oe>~r~ 00 ch 4<
E Ne, ~+3~+3~
Cl0%
00
~t z
ti ti it; 2:
VS
O<YOOo 00 4<
VS
rl Lo
-5 e o
cm0 0 0 0 0
8 ch
E
z ~ u~ 880 8 z e
4>
ci
U 0>0 o
<.,<~
rl ~ CM ch
z ~SL~Z~+3
e,
V~ 2:
z
oU
+3
U ~ <Y 0%~
O O
<-SClZ0%VS 0% -~ <. r
~
E
0~el
5-VN ~ t~ 44 CM
~
CM CM ~ 00 L ~
Cl <1 <1 e
0 VS~
OU cao>
-a~;Cl4 ;
<Y 0 44 6::+
+3 +3 ~
+ 2
Ca ocae
~6~
o
4> CM 000 <Y VN
O e
o>...-
0, e Cl ~ e . Lo
u
H
o~o ~ 4<
O >
~ ~ o.- .
e 0, o.
ce. O ~
o uo <4< ~ ~ ~
Resultados
05
VI <4 Co
CO
4: 2:
za- en r-
U)
1 0%
oc
0%
0%
It 0>0 e- O
en
en
1
rl
CC
En ib
0- za. O 4 ci
VI
e04 ej
><
4;
05 os
VI y
0>0 en
6 Cl
Vi
05 5?0.
it
y r4
VI It
-t 05
o
EM CO CC
4: <.4 VI 5?o.
E ca Ir
U
z CO <A
O y qn 2:
ci ci
8 ~
U CC
e-,
Vi 00 2:
za. 0%
ej en
z
Ir-.
U Ir
y
o 2 CO
44
Ir
ri
CO
44
Ir
00
<4,
a
e
o,
o>
U CD O 3-
O
ej qn
b
o Ir
ca
+3
<.4 o,
<.4 en 4>
CO e
O ej
o
U
K y y e
O
o
00
Ir VN
o>
It a
4; 4 A
o
1< ci,
4:
o It
<u
~
4:
a u
o-
O
CD e
Resultados
Ca oc O O VN 0%
e, <4 Cl e~
h
4< cm
SL +3
] 8
+3
ch
~ ~ CM CM e <Y~ 2
CM ~
00 ~ o
U)
*
4< e, O
CM
<Y <Y
-l <Y
CMI <Y
71
~ ~ 8
>0 CM el NI
4;
OC VN
e o ~
6 e, Cl . .
~
~
711
~: ch
Z
O<Y0%0
CM i e <Y
o O <Y <Y Lo
e 4<
oe-oc 0
ch
4< 0>0
n. ~ 0 e 4<
O 0% Cl <1 oc 2: VN
o
VNti ql rl
o
U <flVNe~., O yo,
0 O 4>
oIr O el
0, ~ Cl Cl el~ e 2: ci
e,
o880 o e.>
U e..>
VS
O
SL ti ~~
CM O O ~
O ch
U e r, o
OC uo>
en rl Cl Cl CM be
o
ca
U
o vn <Y oc +3;
a +4
CM Z
vi o
2: 8
rl
Cl
e
VN OI
e
3 0u
e 1
o
U <4 rl o
e rs
VN
4>
ca
os
0>0<1
~ 088801
+3
e
+4
Cl
+4
e
+3
CM
+3
ch ~g
oa
o VS Ir <Y VS
4< u
0. CMoc0O
~ ri ~ ~
vii Z ca
o 3-
e
E 0.
0,
~5:
Ca - 0o.ZIO
Resultados
U)
It
Ir
IrO y
CO
4: + (A
2 rl 2:
CO en
En e- it
z
e4 e--
en
CO (A
En
2::
e.- <.4 <.4
O
00
oc 9 VI
it (A
z
o
U O CO
O it
o 2 CO
<4] 9
(A 4
4: o
U CD z
-ne,
6 u
qn
1 ej 44
U CC
(A ca
oZ 0%
y
VI
<.4
y
a
e,
U 4
it
o VI
u
~0
O
2: 4
o o
U 4: 4
o
Co
o 0.
4< CD <u .4: 3-
Resultados
UD
4<
c.d
>4 CC
1<
u.~
e, 4.4.4.
. <4 00
cA O
E- b0
O ~-.OrlCG en
2:
SO VQNIr
4< O
0 8
y
o Ir-.
rs.
en e--.
0
o
en
rl .
o CC.
o-
5--.
4< e
...- rl OS O 2: a>
d rl
Z a>
QN e--. rl
e, . . en 4. 0 0
CC
O
O ~~~.b00
rl
CG
rl
2:
(3 CaOS. OS SO
Co .fl
a>a>
SO e-- r- 4.
0LA) <4
e, en OS .
o
~ +1+1+1
iQN QN OS SO CC +tCd
rl e- Ir en . 4 o
en en rl
u~o~fre 4. en
<a, -~
Z ~rl;SO4 en
0090 ~ cA 0u
Z Cd5
O
(3 ~<.~
4.
O
en
OSO
4
Lo
>4
o Cd E->
N
O~C~c~
Oc
Z CdC
o. a> o-~ IZ A
OU<<~ 14< E >2:
-a
oc
4<
O
4<
E-
Resultados
4<
2:
O OSO
O .04.
E
cA
o QN 2: e
>4
o
O a)
E- O 3-
o
oc
(3 4. o a>
o
E- uE
+1
4<
A
<a CG
rs
z
CA) e>,
o)
en en
SO
a)
e
C.) u Co
o
>0 e
o a>
E
o 4< vi
o)
o o
o-
5
o
CI
00 o <(3
4<
4<
E-
Resultados
0
O
Z 0 <-4 QN SOr
rs
E4..8888
Lo QN Ir-.
CA)
en QN r
>4 ~~rlr~rl
o vi
a>
E-
oa
E CGIr-.OO
(3 0
O
E- <.j rl O <4 cA +3
CO
4< Ca Ir.- OS rl Lo a>
LC,CaOOLoSO
cn rs en rs en
e
Cd
.0
u
a>
O
CI CO
Cd ~ o
o O > :5o)
CA) E-.-4 E
4< 0 oEo~~ vi
a>
a
o. a) o.~ ~r o- o
es o . Cd
oc 0 ~ E-
4<
U
Discusin de Resultados
4.2. Experimentos 1 y II
En los animales que consumieron leche de vaca la ingesta alimentaria se situ en unos
120 ml totales, independientemente del calentamiento efectuado (tabla 9). El peso corporal
evolucion de acuerdo con el estadio fisiolgico correspondiente (tercera semana de lactacin)
y pas de aproximadamente 30 g a 40-41 que es el peso considerado normal para la rata
en el momento de su destete (Saiz y col., 1983; Harkness y Wagner, 1995). sin producirse
diferencias significativas debidas al calentamiento (tabla 11).
Las ratas alimentadas con fnnula infantil voluntariamente bebieron menor cantidad
de alimento que las que tomaron leche de vaca (tabla 10). Por ello, aunque partieron de pesos
similares a stas, no alcanzaron al final del experimento pesos equivalentes (tabla 12).
Adems, en estos animales se observ una influencia del tipo de frmula consumida; la forma
lquida condicion una menor ingesta y ganancia ponderal respecto a la fnnula deshidratada
(tabla 12). Sin embargo, el calentamiento domstico de la leche, al bao Mara o al
microondas no afect estos parmetros.
Por su parte las dos frmulas, aunque tenan prcticamente el mismo contenido de
nutrientes, segn indicaciones del fabricantes y nuestros propios anlisis (tabla 2), parecieron
tener distinta calidad nutritiva. En este sentido, los anlisis efectuados en la tercera
experiencia, que se detallaran ms adelante, revelaron que la frmula lquida posiblemente fue
sometida a un mayor tratamiento trmico que la frmula en polvo con una mayor alteracin
de las protenas, lo que podra haber condicionado una influencia ms negativa sobre el
225
Discusin de Resultados
crecimiento, coincidiendo con labibliografa(Muozy col ,1981; Lewis y col., 1982; Marcos
y col., 1984; Tirapegui y De Angelis, 1985; Sakuma y col., 1987). Por un lado, se ha descrito
que el sabor y el olor pueden verse alterados en leche procesada, lo que se asocia a su alto
contenido en lactulosa, producto de isomerizacin de la lactosa, (Andrews 1986; Burton 1988)
y fue precisamente la frmula lquida la que contena una concentracin de este compuesto
ms elevada: 4556 mg/L frente a los 143 mg/L de la frmula en polvo. Pero adems, se sabe
que los productos de la reaccin de Maillard pueden disminuir la ingesta afectando el peso
corporal (Furniss y col, 1989; Burton, 1994) y la frmula lquida presentaba cierto
pardeamiento, y como se explicar en el apartado 4.3.1. probablemente contena mayor
proporcin de productos avanzados de la Reaccin de Maillard que la frmula en polvo.
Como se puede observar en las tablas 13 y 14, los valores del ndice hepatosomtico
obtenidos en este trabajo como corresponde a animales muy jvenes, son inferiores a los
correspondientes a ratas ms adultas (Aspe, 1992; Arce, 1993; Prez, 1997) y muy prximos
a los descritos para ratas de algo ms de un mes de edad (Aguirre, 1995). Existi una pequea
226
Discusin de Resultados
diferencia, entre los indices de las ratas alimentadas con frmula infantil respecto a las
alimentadas con leche de vaca, siendo stos significativamente inferiores, lo que se relaciona
fundamentalmente con el peso final del animal (tabla 11 y 12), y con el peso de los hgados
(tabla 37 y 38).
concordancia con los resultados de Shen y col. (1995) y Roig (1996), y casi el doble, un 30%,
en el caso de la leche descremada, de acuerdo con Aguirre (1995). Los valores obtenidos para
las fracciones del no dializado soluble y el precipitado estuvieron en tomo al 62% y 20%,
respectivamente, para la leche entera, y 62% y 8%, respectivamente, para la descremada (tablas
15, 16 y 17). Para este ltimo tipo, el rango seria similar al observado en otros estudios (Aguirre,
221
Discusin de Resultados
inhibe la dilisis del calcio y dicha interferencia es ms acusada cuando la grasa es de tipo
saturado (Vaquero y col., 1992; Aguirre, 1995; Prez-Granados, 1997). Esta interaccin en el
caso de la leche ha sido descrita por Reykdal y Lee (1991). Ello habra que relacionarlo con la
capacidad del calcio de formar jabones insolubles con los cidos rasos saturados, especialmente
los de cadena larga (Widdowson, 1965). Los cidos grasos saturados ms abundantes de la leche
de vaca son el miristico, palmtico y esterico, y entre los insaturados el olico (Bellomonte y
col., 1990) y parece ser que precisamente los cidos grasos saturados de entre 12 y 18 carbonos
son los que ms perjudican la absorcin de este mineral (Cheng y col., 1949; Nicolaysen y col.,
1953) ftente a los saturados de cadena ms corta y los insaturados (Gacs y Baltrop, 1977; Van
pancretica, aunque esta tendencia no se aprecia claramente con la leche de vaca entera
aisladamente (tabla 16, Figura 13). En casi todos los estudios de digestibilidad in vitro se ha
observado influencia del tiempo de digestin, aunque sta ha sido desigual: se han descrito
elevaciones progresivas de formas no dializadas e insolubles de calcio (Aspe, 1992; Aspe y col.
1993; Aguirre, 1995; Prez Granados, 1997), disminuciones del no dializado soluble (Aspe y col.
1993; Prez-Granados, 1997), disminuciones del dializado (Vaquero y col. 1992; Aguirre, 1995;
Prez Granados, 1997) e incluso elevaciones del dializado (Aspe, 1992). Las diferencias podran
atribuirse a las condiciones experimentales y al tipo de muestra ensayada. No se observaron
diferencias significativas en la fraccin de calcio no dializado pero soluble entre la leche de vaca
entera y la descremada, y como se ha indicado anteriormente, fue el calcio dializado el que ms
vari debido al contenido de grasa de la leche. Schwartz y col. (1982) tambin indicaron que la
disponibilidad in vitro de calcio era superior en la leche de vaca desnatada que en la entera,
aunque en su estudio no identificaron el calcio capaz de dializar y solamente el calcio soluble
228
Discusin de Resultados
total; Reykdal y Lee (1991) encontraron que la diferenciase produca en el no dializado soluble
en lugar del dializado. Tambin Shen y col. (1995) observaron que el calcio de la leche
descremada de distintas especies tendia a dializar ms que sus homlogas enteras. No obstante,
de todo ello no puede deducirse que la ingesta de leche entera frente a la descremada deprima
la absorcin intestinal de calcio, ya que numerosos trabajos demuestran que el calcio lcteo es
altamente disponible (Walstra y Jeness, 1984; Reykdal y Lee, 1991) estando en una forma de
fcil asimilacin; prcticamente todo el calcio (99%) est en la fraccin desnatada (Frannson y
Lnnerdal, 1983); dos tercios del total est en forma coloidal asociada con las micelas de
caseina, en forma de fosfato clcico o de iones calcio unidos a los residuos de fosfoserina y el
tercio restante est en forma soluble (Holt, 1985).
Al igual que ocurre en la fraccin del no dializado soluble, la hora tambin afecta
significativamente al precipitado, pero en este caso de manera negativa (tabla 17, Figura 14). Se
aprecia claramente que la leche de vacadescremada, que es la que result tener mayor porcentaje
de calcio dializado, origin un menor precipitado, con diferencias significativas respecto a la
leche de vaGa entera y a las frmulas (tabla 15 y 17).
dos frmulas qued por debajo del nivel de la leche de vaca, particularmente el de la frmula
229
Discusin de Resultados
los descritos por Roig (1997) para distintos tipos de frmulas infantiles y leche
de vaca entera.
calculado a partir del valor porcentual medio de las tres horas de digestin y la concentracin
del metal en la muestra de partida correspondiente. Como se observa claramente, el calcio
dializado y el no dializado soluble de la leche de vaca entera, seguida de la descremada, por
unidad de volumen, son superiores en relacin a los que aportan las frmulas infantiles, debido
a que contienen aproximadamente una concentracin doble del mineral (tablas 1 y 2), y en el
caso de la leche descremada tambin a que el porcentaje de dilisis era el ms alto. Para este tipo
de leche se aprecia que la magnitud del precipitado es muy pequea, al producirse tan solo en
un 8%. A grandes rasgos, las diferencias entre frmulas descritas en los valores porcentuales se
mantienen al utilizar esta expresin, ya que la concentracin de calcio de los dos preparados fue
muy similar.
una tendencia a mayor disponibilidad de calcio con el preparado para lactantes liquido respecto
al polvo. Ciertamente, existe una diferencia importante en la forma fsico-qumica de este
elemento entre la leche de vaca y las frmulas infantiles, stas se elaboran a partir de leche de
vaca total o parcialmente desmineralizada y desnatada adicionndose aceites vegetales, su
contenido proteico se modifica cualitativa y cuantitativamente variando la relacin
230
Discusin de Resultados
En lo que respecta a los efectos de los calentamientos al bao Maria y por microondas,
fue significativo tanto en el calcio no dializado soluble como en el precipitado cuando se calent
por microondas, y slo en el precipitado en el caso del bao Maria (tabla 17).
tambin se deduce que el tratamiento al bao Mara y por microondas asemeja la frmula en
polvo a la lquida. Tambin puede entenderse que este efecto haya sido ms marcado al utilizar
microondas que con el calentamiento convencional, ya que en el primero el agua y las partculas
de leche intentan alinearse con el campo electromagntico y se origina una rotacin dipolar con
la consecuente friccin intermolecular que llega a romper los puentes de hidrgeno dbiles
favoreciendo la disolucin. Por otra parte, la polarizacin inica tambin se producira en el
calcio, as como otros elementos ionizados, que en su migracin electrofortica colisionara con
otras molculas e iones (Yeo et al, 1991) todo ello contribuida a reducir los tamaos de las
partculas y favorecer la disolucin.
231
Discusin de Resultados
80
70
60
50
40
30
20
10
o
D NDS P
232
Discusin de Resultados
4.2.2.2.Ensayos ja vivo
mostr diferencias significativas entre los grupos que tomaron la leche de vaca entera, sin
calentar o bien calentada al bailo Mara o al microondas. Tampoco se vieron afectadas la
absorcin ni retencin aparentes de calcio, aunque para llegar a esos valores las ratas alimentadas
con la leche tratada al bao Maria utilizaron el calcio con una eficacia digestiva, metablica y
nutritiva global superiores respecto al resto de los animales (tabla 18). Por lo tanto, tampoco
se modificaron el contenido absoluto ni la concentracin del mineral en el cuerpo de los animales
al final del experimento (tabla 26).
Ya se ha comentado, los tres grupos de ratas que tomaron la frmula infantil lquida
bebieron menor cantidad de alimento (tabla 10), y como consecuencia, ingirieron
significativamente menos calcio que los que tomaron frmula en polvo (tabla 19). Ese efecto
principal provoc tambin una reduccin significativa de la absorcin de calcio con respecto a
los que tomaron frmula en polvo reconstituida, a pesar de que los animales intentaron absorber
el calcio del preparado liquido con mayor eficacia, como se demuestra por las diferencias
significativas en el porcentaje Ah debidas al tipo de frmula. El balance de calcio tambin fue
ms bajo en los grupos que tomaron el preparado para lactantes liquido debido, ~OT un lado a
la inferior absorcin, y por otro a que la eficacia de utilizacin metablica (%RIA) fue tambin
ms baja respecto a los animales que tomaron la frmula en polvo. Es decir, parte del calcio
absorbido se elimin por orina, con una eliminacin media de 0.7 y 3 mg periodo en los grupos
que tomaron la formula la frmula en polvo y lquida, respectivamente. En consecuencia, la
utilizacin nutritiva global fue menor en estos animales (Fig 15).
233
Discusin de Resultados
alta de calcio cuando ingeran menor cantidad del mismo, lo que parece reflejar la existencia del
transporte activo. As, el orden observado en la digestibilidad fue descendiente en los grupos:
frmula lquida> frmula en polvo > leche de vaca. Pero a este efecto tambin han podido
contribuir en alguna medida determinados componentes que abundan ms en las frmulas y que
estimulan el transporte intestinal del elemento, entre ellos destacara la lactosa. Estudios hechos
con ratas y otras especies de mamferos (Ziegler y Fomon, 1983) sugieren que la lactosa favorece
al absorcin de calcio, as como la de magnesio y hierro entre otros elementos. El que las
frmulas se suplementen con sales de calcio como citratos, carbonatos, cloruros, y fosfatos mono,
di y tribsicos (Miles, 1982; Packard, 1982) tambin ha podido ejercer un efecto activador, as
como una relacin Ca/P ms favorable y una mayor presencia de protenas sricas (Lnnerdal,
1989).
Diversos estudios han demostrado que los productos de la reaccin de Maillard pueden
incrementar las prdidas urinarias de distintos elementos, entre los que se encuentra el calcio
(Hurrel 1990; Aspe, 1992) que se excretara en forma de complejos de alto peso molecular
(Rendelman, 1987). Esto apoyara que el consumo de la frmula infantil lquida implica una
ingesta ms elevada de productos de la reaccin de Maillard, que seran absorbibles en gran
medida e interaccionaran con el metabolismo del calcio en etapas postabsortivas. De hecho, la
capacidad de incrementar la absorcin del mineral estaba inalterada en los animales que
consumieron este preparado, los cuales presentaron un incremento en la digestibilidad aunque
con ello no consiguieron igualar los valores de retencin de los lactantes alimentados con el
preparado en polvo.
Al igual que ocurra en el ensayo realizado con leche de vaca, el calentamiento domstico
realizado no lleg a modificar la absorcin aparente ni el balance de calcio en las ratas lactantes
que tomaron frmula infantil como nico alimento (tabla 19). No obstante, el calentamiento al
bao Mara de la frmula en polvo origin una pequea elevacin del coeficiente RIA, similar
a la observada al calentar la leche de vaca por el mismo procedimiento (tabla 18), aunque no se
modificaron ni la digestibilidad ni la utilizacin nutritiva~. Sin embargo, cuando se calentaba al
234
Discusin de Resultados
Coincidiendo con los datos de retencin clcica, los animales que tomaron frmula
infantil calentada por uno u otro procedimiento tenan un contenido corporal y concentracin de
calcio similar al de los que tomaron la frmula sin calentar (tabla 27). No obstante, a diferencia
de lo hallado mediante la tcnica de balance, no se observaron diferencias significativas en e!
contenido corporal debido al tipo de frmula. Solamente aparecieron diferencias en la
concentracin corporal de calcio, que fue superior en los grupos que tomaron la frmula lquida
frente a la frmula en polvo debido fundamentalmente a su menor peso (tabla 27). Ello ha
podido suceder por la necesidad de mantener el esqueleto aunque los animales fueran de peso
relativamente bajo, de hecho, la concentracin corporal de fsforo, elemento relacionado con el
calcio en la constitucin del esqueleto, tambin estaba elevada en esos animales (Garner y col.
1995).
235
Discusin de Resultados
mg/periodo
50
40
30
20
10
o
1I
Ingerido Retenido
0/
o
100
75
50
25
o
Ah Ru
Figura 15. Utilizacin digestiva y nutritiva de calcio
236
Discusin de Resultados
Los resultados de la disponibilidad in vitro de fsforo, y del resto de los elementos que
se comentarn posteriormente, se presentan de forma combinada uniendo los datos de 1 h, 2h y
3h, ya que la influencia del tiempo de digestin no fue significativa (tabla 20). Esto tambin ha
sido observado para este micronutriente por otros autores (Aguirre, 1995).
En principio puede decirse que las diferencias en la distribucin del fsforo durante la
digestin in vitro son debidas a la cantidad de grasa: la leche descremada en comparacin con
la entera, permite una mayor formacin de fsforo soluble no dializado y menor precipitado,
aunque en las muestras no calentadas las diferencias no llegaron al nivel de significacin
estadistica. Esto concuerda con lo descritopreviamente por Aguirre, 1995, quien al ensayar dietas
con un contenido de grasa de un 8% y un 2% obtuvo que la dieta con ms grasa dio lugar a
mayor proporcin de fsforo precipitado y una cierta disminucin del no dializado soluble.
En las frmulas infantiles la distribucin del fsforo en las distintas fracciones se vio
afectada por el tipo de frmula y por el calentamiento. La comparacin de las dos frmulas sin
calentar revela que la dilisis se estimul con la frmula lquida y al mismo tiempo se redujo
ligeramente el precipitado, sin existir modificaciones significativas en el no dializado soluble.
Adems, esta frmula lquida sin tratar favoreci la disponibilidad in vitro del fsforo respecto
a los dos tipos de leche de vaca, lo que se observa en las fracciones del dializado y precipitado
(tabla 20).
237
Discusin de Resultados
El calentamiento de la leche entera, tanto al bailo Mara como por Microondas, produjo
una elevacin del fsforo dializado y una disminucin el no dializado soluble, permaneciendo
prcticamente invariable el precipitado (tabla 20). En la leche descremada ambos calentamientos
originan una elevacin del no dializado soluble, mientras que las otras dos fracciones tienden a
disminuir de forma ms significativa el precipitado. El calentamiento al bao Maria de la
frmula infantil lquida, pero no el de la frmula en polvo, increment el fsforo dializado y
precipitado y disminuy la fraccin soluble no dializada.
El porcentaje de fsforo precipitado es muy bajo tanto en la leche de vaca como en los
preparados para lactantes y tan solo se observ una disminucin de esta fraccin por efecto del
calentamiento en el caso de la leche de vaca descremada y un ligero incremento en el caso del
calentamiento al bao Mara de la frmula lquida.
En la leche de vaca un 20% del fsforo est en forma de fosfato orgnico esterificado
unido a la casena, estando el resto como fosfato inorgnico (Jenness, 1974) del cual un 56% es
soluble, principalmente est en forma de iones fosfato libre (Holt, 1985). Por su parte, en la
leche materna, el 23% del fsforo est unido a protenas (Harzer y col., 1986b), un 15% est en
forma inorgnica y el resto unido a lpidos (Renner, 1983). Se ha indicado que al realizar un
calentamiento moderado de la leche (55-600C) se puede producir una integracin del fosfato
clcico en suspensin en las micelas de fosfocaseinato; aunque este proceso es parcialmente
238
Discusin de Resultados
60 -
50 -
40 - A
30 -
20
10 -
d
0
D NDS P
Leche Entera 1~I Frmula infantil polvo
Leche Descremada II Frmula infantil lquida
239
Discusin de Resultados
Leche de vaca
Entera Descremada
100%
75%
50%
25%
0% -4-
NC BM MO NC BM MO
Frmula infantil
Polvo Lquida
10004
75%-
50%-
25%-
0%- A- -H
NC BM MO NC BM MO
240
Discusin de Resultados
reversible, podra explicar la elevacin del fsforo no dializado soluble en el caso de la leche de
vaca descremada. ( Kannann y Jenness, 1961). Adems, probablemente se trata de una forma
biodisponible; ya que se ha sealado que la absorcin de calcio en forma de fosfocaseinato es
elevada y posiblemente tambin la del fsforo (Hazefl, 1985), es decir, ese fsforo no dializado
soluble tendra la capacidad de absorberse m vivo.
La ingesta de fsforo no mostr diferencias entre los tres grupos que tomaron leche de
vaca sin tratar o tratada al bao Mara o por microondas (tabla 21). No obstante, ambos
calentamientos produjeron una elevacin de la utilizacin digestiva y metablica del fsforo, lo
que tambin se detect en la utilizacin nutritiva, particularmente cuando se calent la leche al
bao Mafia. Ese aumento de la eficacia de absorcin podra relacionarse con el incremento de
fsforo dializado, cjue se observ al estudiar la digestibilidad lii vitro de la leche de vaca entera
calentada al bao Mara o por microondas. Sin embargo, no se lleg a alterar ni la absorcin ni
la retencin del elemento, como tampoco se modificaron los contenidos corporales de fsforo
al final del experimento (tabla 26).
Con respecto a los efectos debidos al tratamiento trmico de estos preparados para
lactantes, ni el bao Maria ni el microondas indujeron modificaciones en la ingesta, absorcin
ni retencin del mineral. Sin embargo, la utilizacin digestiva tendi a disminuir en los animales
que tomaron las frmulas sometidas a tratamiento trmico, a excepcin de los que tomaron la
frmula lquida tratada al bao Maria. Tanto en la frmula lquida como en la frmula en polvo
241
Discusin de Resultados
la utilizacin metablica y nutritiva fueron ms bajas en los grupos que consumieron las formas
calentadas al bao Maria o por microondas.
El contenido de fsforo de los animales al final del experimento, no vari
significativamente en funcin del tipo de frmula ni del calentamiento (tabla 27). En principio
ello contrasta con el menor balance del mineral de las ratas que tomaron la frmula lquida
respecto a la frmula en polvo, aunque parece que la tendencia se mantiene cuando se
contemplan los grupos que bebieron frmulas calentadas, aunque sin llegar al nivel de
significacin estadistica a travs del test de ANOVA de dos vas aplicado. Por su parte la
concentracin de fsforo si se vio afectada por el tipo de frmula consumida; fue mayor en las
ratas que ingirieron la frmula lquida, lo que ya se ha descrito para el calcio y se relacionara
con la participacin de ambos minerales en la constitucin del esqueleto. En distintas situaciones
de nutricin deficitaria se ha encontrado que determinados tejidos se salvaguardar en la medida
de lo posible, entre ellos el cerebro, el hgado, el esqueleto, y que una deficiencia en el
crecimiento suele ir asociada con cambios en la concentracin de elementos en los distintos
tejidos(Vaquero y Navarro, 1993).
La cantidad de fsforo presente en los cuerpos de los animales que tomaron las frmulas
infantiles no vari por el calentamiento, aunque se observaron ciertos cambios en el contenido
relativo de fsforo, que estuvieron al borde de la significacin estadistica en el caso de la
frmula lquida (pO.05) y tuvieron mayor significacin por el calentamiento al bao Maria de
la frmula en polvo que supuso un incremento en las concentraciones corporales de fsforo (tabla
27).
En resumen, podramos indicar que el tipo de alimento fue el condicionante ms
importante de la utilizacin nutritiva del fsforo. Esta fue mucho ms adecuada en las ratas que
bebieron leche de vaca frente las frmulas infantiles, y de ellas superior con la forma en polvo.
Sin embargo, el calentamiento favoreci la utilizacin nutritiv del mineral en el caso de la leche
de vaca y la disminuy cuando se trat de las frmulas infantiles, pero en ningn grupo se alter
ni la absorcin ni la retencin corporal de fsforo.
242
Discusin de Resultados
Al digerir la leche descremada, se produce menor magnesio precipitado que al utilizar las
otras muestras, lo que se asocia con la mayor proporcin de magnesio no dializado pero soluble,
ya que el dializado en todo caso tendi a ser menor con este tipo de leche. La influencianegativa
de la grasa en la biodisponibilidad in vtro de este elemento ya se ha indicado en otros estudios
realizados con dietas completas que nicamente diferan en. la cantidad de grasa; las dietas
hipograsas favorecan la formacin de magnesio no dializado soluble e impedan la precipitacin
del mineral (Aguirre, 1995).
243
Discusin de Resultados
Leche de vaca
Entera Descremada
100%-
75%
50%
25%
NC BM MO NC BM MO
Frmula infantil
Polvo Lquida
1
1-- -H
NC BM MO NC BM MO
244
Discusin de Resultados
7-
6- y
5-
4- u
3-
2-
1- II
a
mi
D NDS p
con el preparado en fonna lquida, lo que parece relacionarse con las caractersticas fisico-
qumicas del alimento que se digiere por este sistema in vito.
245
Discusin de Resultados
Cabe destacar que la cantidad de magnesio que queda insoluble despus de la actuacin
de los enzimas digestivos es muy pequea, entre el 2 y el 7%, porque ya en la leche de partida,
antes de someterla al proceso de digestin in vito, aproximadamente el 65% del magnesio es
soluble y est en la fraccin desnatada (40% como citrato magnsico, 7% como fosfato
magnsico y un 16% est libre en forma de ion), estando el resto unido a la casena en una
suspensin coloidal (Fransson y Lnnerdal, 1983; Hazel, 1985; Lnnerdal y col., 1993;); y
lgicamente la digestin ha supuesto un incremento de la solubilidad y una disminucin del
precipitado. Los resultados de nuestro trabajo concuerdan por tanto con los de Lnnerdal y col.
(1993), que obtuvieron en distintos tipos de leche, incluyendo frmulas infantiles, una
insolubilidad del magnesio entre el 35% y el 4%, que despus de la digestin con pepsina y
pancreatina se redujo a un intervalo de 8 a 2%.
La leche de vaca contiene aproximadamente el doble de magnesio que las frmulas: 10.4
frente a 5.1 mg/m, respectivamente, segn datos analitics de esta tesis (tabla 1 y 2). En la
figura 3 se puede observar que esta diferencia se mantiene en las distintas fracciones resultantes
de la digestin in vtro, se obtuvo una cantidad de fsforo dializado doble con la leche de vaca
respecto a las frmulas; tambin el no dializado soluble guarda esta proporcin aunque en el caso
de la leche descremada es algo mayor. El precipitado es pequeo en todos los casos pero cabe
destacar que en la leche de vaca entera duplica al resto de las muestras.
246
Discusin de Resultados
Aunque se carece de datos referidos a efectos del calentamiento moderado de leche sobre
la biodisponibilidad in vito de magnesio, Aspe (1992) dirigi, por el mismo mtodo empleado
en nuestro trabajo, dietas que contenan como nica variable casena sin tratar o calentada a
1 500C y tambin obtuvo que el tratamiento trmico incrementaba el magnesio no dializado
soluble a la vez que disminua las fracciones de dializado y precipitado.
Como corresponde a los cambios descritos del consumo alimentario, las ratas alimentadas
con la leche de vaca sin calentar o sometida a calentamiento ingirieron una cantidad de
magnesio similar. La absorcin y retencin del elemento tampoco de afect. El nico parmetro
que mostr variaciones fue la digestibilidad, que se elev en los grupos que tomaron la leche de
vaca tratada al bao Mara o con microondas (Tabla 24). No es de extraar que las variaciones
hayan sido mnimas, y ni siquiera se detectaran en la composicin corporal (tabla 26), ya que
tampoco en los ensayos in vito se apreciaron influencias debidas al calentamiento de este tipo
de leche (tabla 23).
Al igual que se ha indicado para la ingesta de alimento (tabla 10) y los balances calcio
y fsforo (tablas 19 y 22), el magnesio ingerido por las ratas alimentadas con la frmula lquida
fue inferior respecto a las que tomaron la frmula en polvo (tabla 25). Por ello, tambin fueron
menores las cantidades de Magnesio absorbidas y retenidas, Adems, la digestibilidad fue menor
en el grupo de animales que consumi la frmula lquida sin tratar respecto al de la frmula en
polvo no tratada. No obstante, por el calentamiento dicha digestibilidad se alter de forma
diferente en una u otra frmula infantil. En la utilizacin metablica y nutritiva no se
manifestaron diferencias debidas al tipo de frmula.
247
Discusin de Resultados
Diversos enfoques en estudios realizados con istopos, han encontrado valores absorcin
de magnesio de leche humana y frmulas infantiles del mismo orden de los nuestros (Schuette
y Ziegler, 1990) o algo superiores, entre el SOy el 82% (Liu y col., 1989). En este ltimo rango
se situarian la absorcin de magnesio de nuestros valores para la leche de vaca o serian incluso
mayores. Lnnerdal y col., 1993, estudiaron la posible influencia del tipo de leche o frmula,
con marcaje radioactivo y encontraron que la capacidad de retencin de magnesio era similar con
leche de vaca, leche humana y una variedad de nueve frmulas infantiles, aunque el valor
referido como porcentaje de la dosis era algo superior al %RII encontrado en nuestros ensayos.
En nios a trmino y pretrmino se ha hallado mediante tcnicas de balance una absorcin de
magnesio del 55 al 75% (Slatery col., 1961; Stromey col., 1969; Schanlery col., 1985), valores
que estn dentro del mismo rango que los obtenidos con ratas (Lnnerdal y col 1993).
La diferencia entre los efectos del consumo de leche de vaca y de frmulas se aprecia no
solamente en la cantidad de magnesio ingerida, sino tambin en la digestibilidad y utilizacin
metablica (tablas 24 y 25). Por un lado se ha indicado que las ratas de esta edad tienen una
capacidad limitada para absorber magnesio y otros elementos mediante transpone activo debido
a la inmadurez de su aparato digestivo (Ghishan y col., 1980; Lnnerdal, 1989; Lnnerda] y col.,
1993), pero estos ensayos se han realizado al final de la lactacin y es posible, como sugerimos
al discutir los resultados de la biodisponibilidad de calcio, que este mecanismo pudiera haber
tenido cierta relevancia. En este sentido, en un estudio en personas adultas se obtuvo que el
porcentaje de absorcin real de magnesio era inversamente proporcional a su ingesta, as fue del
75% cuando sta era de 23 mg/dia, del 44% cuando era de 240 mg/da y del 24% cuando era
de 1.764 mg/da (Grahan y col, 1960), lo que se explica por los sistemas de transpone de
magnesio: activo, que se satura a bajas concentraciones luminales del mineral, y de difusin que
248
Discusin de Resultados
mg/periodo
5
~ 4S<~P~
4
3
~I~V
2
o
Ingerido Retenido
loo
ir,
75
50 Ili14~
III
25
o
Al
249
Discusin de Resultados
Por todo ello, es factible en nuestros ensayos con ratas lactantes alimentadas con leche
de vaca y frmulas infantiles, que la mayor ingesta de magnesio en las primeras se asociara con
una utilizacin digestiva algo inferior respecto a las segundas. Sin embargo, si comparamos el
comportamiento de los animales que tomaron el preparado lquido frente al polvo, stos no
fueron capaces de absorber el magnesio ms eficazmente, aunque s consiguieron absorber algo
mejor el calcio como se ha comentado anteriormente. No disponemos de una razn clara que
explique tal resultado. Sin embargo, es cieno que las cantidades de magnesio ingeridas por las
ratas que tomaron leche de vaca fueron aproximadamente tres veces superiores respecto a las que
tomaron frmulas infantiles, pero el consumo del preparado infantil en una u otra forma
comercial no influy tanto en este parmetro. Adems, la absorcin del magnesio no est sujeta
a un control homeosttico tan estricto como la del calcio, porque tambin se regula a nivel
metablico, modificando sus prdidas urinarias (Linder, 1988b). Por ltimo cabe pensar que el
distinto tratamiento trmico utilizado en la elaboracin de la frmula en polvo y la lquida haya
afectado de manera desigual a las digestibilidades del calcio y del magnesio.
250
Discusin de Resultados
polvo tratada al microondas y sin tratar, de forma que el balance del mineral tendi a reducirse
por el tratamiento trmico, aunque las diferencias debidas al calentamiento al bailo Maria de la
frmula en polvo no fueron significativas respecto a la no calentada. Por ltimo, la utilizacin
nutritiva, que engloba la influencia tanto a nivel digestivo como metablico, muestra que en las
dos formas de preparado el calentamiento domstico ejerci un efecto negativo, que no vari en
funcin de que ste fuera convencional o por microondas.
El contenido corporal de magnesio al final del experimento fue menor en las ratas
alimentadas con la frmula infantil lquida respecto a la equivalente en polvo (tabla 27),
coincidiendo con los resultados del balance. Sin embargo, la concentracin del minera] en el
cuerpo no se alter, en contraste con los incrementos relativos de calcio y fsforo ya comentados,
lo que se interpretara porque estos dos minerales son constituyentes fundamentales del hueso
mientras que el magnesio, aunque tambin participa en la estructura sea, est presente en una
mayor cantidad en btros tejidos, como es el msculo (Schaafsma, 1997).
251
Discusin de Resultados
Los valores del porcentaje de hierro en cada una de las fracciones obtenidas tras la
digestin in vitro son del mismo orden que los descritos en trabajos anteriores de nuestro grupo
(Aguirre, 1995), aunque quiz el no dializado soluble ha resultado mayor en nuestro estudio
(tabla 28).
El estudio de la disponibilidad ita vitro del hierro de la leche de vaca entera no queda
reflejado la tabla 28, ya que existi gran variabilidad y las recuperaciones fueron altas, en
algunos casos superiores al 150%. Sin embargo, la leche de vaca descremada, que se digiri
simultneamente con la leche entera, y que tena un contenido de hierro tambin relativamente
bajo (tabla 1), como es bien conocido (Hazel, 1985; Wharf y col., 1997) y similar al de ella,
tuvo un comportamiento durante la digestin in vitro parecido al de otros tipos de leches, y los
resultados correspondientes s se reflejan en la tabla.
En este sentido, se sabe que aproximadamente el 14% del hierro de la leche est en la
fraccin de grasa (Fransson y Lnnerdal, 1983; Lnnerdal, 1985), asociado a la membrana de
los glbulos grasos; aproximadamente un 24% esta unido a la casena (Fransson y Lnnerdal,
1983), probablemente a travs de residuos de fosfoserina de la casena, mientras que un 29% est
unido a protenas sricas y un 32% est asociado con una fraccin de bajo peso molecular.
Adems la grasa saturada, tpica de la leche, acta interfiriendo la di~ponibilidad del hierro, tanto
ita vitro (Aguirre, 1995) como in vivo ( Lukaski y col., 1982; Prez-Granados, 1997) por lo que
esta influencia negativa unida al hecho de que la leche constituye una fuente escasa del metal,
rica en inhibidores de la absorcin de hierro como son el calcio y la casena (HurreIl, 1997), ha
podido dar lugar a ese comportamiento irregular del elemento y a la imposibilidad de detectar
con suficiente sensibilidad los cambios debidos al calentamiento.
252
Discusin de Resultados
100%-
50%
25%
0% - -H
NC BM MO
Frmula infantil
Polvo Lquida
100%
75%.
500/o
25%- -
0%- A-
NC BM MO NC BM MO
253
Discusin de Resultados
300 ZA -
250 -
ZA
A
200 -
150 -
-A
100 ZA
50 ZA
pv
o
D NDS P
Leche Entera m Frmula infantil polvo Frmula infantil lquida
Por lo que se refiere a la disponibilidad in vitro del hierro de la leche de vaca descremada
y de las fnnulas infantiles, se observa claramente que con la leche descremada se produca
mayor proporcin de hierro dializado y precipitado y menor no dializado soluble respecto a las
frmulas(tabla 28), y esas diferencias en todos los casos fueron significativas. Al comparar las
frmulas entre s se observ que la dilisis del hiero se favoreca con la frmula lquida, y a la
254
Discusin de Resultados
vez disminua el no dializado soluble, aunque sin diferencias significativas entre las dos frmulas
calentadas al microondas (tabla 28).
En la leche humana un 33% del hierro total est asociado a la fraccin lipidica (Fransson
y L~nnerda1, 1980); otra parte importante, aproximadamente un 32%, pertenece a una fraccin
de bajo peso molecular que an no ha sido bien caracterizada (Lnnerdal, 1984) y tan slo un
9% est unido a la casena (Fransson y Lnnerdal, 1983), lgicamente esta distribucin del hierro
y el mantenimiento de su funcin se presenta como el ideal en el diseo de las frmulas
infantiles.
Respecto a este tema, diversos estudios tratan la asociacin de] hierro a distintos
nutrientes en las frmulas infantiles. Algunos datos procedentes de estudios in vitro indican que
cuando se suplementada la leche adaptada con hierro, este se liga a un componente u otro en
funcin de la sal utilizada, en concreto el sulfato ferroso dona menos hierro a la casena que
otros tipos de suplementos (Hegenauer y col., 1979). La unin de] hierro a la lactoferrina srica,
tan relevante en la leche materna (Davidson y Lnnerdal, 1988), cuando se intenta reproducir
suplementando las frmulas con esta protena no da siempre un claro efecto positivo sobre la
absorcin de hierro (Fairweater-Tait y col. 1987; Schulz-LelI y col. 1991; Davidson y col.,
1994). Hurrell y col., (1989) indican que la casena y las protenas sricas de la leche de vaca
deprimen la absorcin de hierro, lo que tambin fue corroborado por otros autores a travs del
mtodo ita vitro de biodisponibilidad;encontrando que la dilisis ms se favoreca cuando las
frmulas contenan protenas hidrolizadas (Alegra y col., 1997)
E] incremento en la dilisis del hierro con la leche de vaca descremada, respecto a las
frmulas infantiles (tabla 28), ya se ha descrito para el calcio (tabla 15), y se atribuy a su bajo
contenido de grasa. Pero, por otra parte, la precipitacin del hierro fue mucho mayor con la leche
descremada que con las frmulas. Sobre ello, podemos indicar que la casena, protena
mayoritaria en la leche de vaca y que est presente el las frmulas infantiles junto con protenas
sericas en una proporcin 60:40, es un potente inhibidor de la absorcin de hierro, como lo
demuestran distintos estudios in vitro, (Aspe, 1992), en ratas y en humanos (Hegenauer y col.,
255
Discusin de Resultados
1979; Lnnerdal, 1990). Dicho efecto de la protena lctea revierte en gran medida cuando se
hidroliza previamente (Hurrel, 1989; 1990; Alegra y col., 1997). En realidad la leche de vaca
como ya se ha mencionado, incide negativamente en la biodisponibilidad del hierro, por su alto
contenido de casena (Hurrel y col., 1989) y tambin por su alto aporte de calcio (Hurreil,
1997), y como presenta un contenido muy bajo de hierro, no se recomienda para nios con una
edad inferior a 12 meses (Ziegler, 1989; Dalman, 1990; Fomon, 1995; Wharf y col., 1997).
256
Discusin de Resultados
257
Discusin de Resultados
la rata lactante a la baja ingesta de hierro debe relacionarse con el contenido de este nutriente
en la leche de rata que para el perodo de nuestro ensayo, la tercera semana de lactacin, se sita
en unos 4 ig/ml (Keen y col. 1981). La leche de vaca, con un aporte de hierro de 0.65 i.ig/ml
(tabla 1), por tanto constitua un alimento deficitario, mientras que los preparados para lactantes
con un contenido de 4.5 .g/ml y 5.35 gg/ml, para la frmula en polvo y la lquida,
respectivamente, aportaron una cantidad de hiero ms cercana a la necesitada por la rata
lactante(tabla 2).
En las ratas que tomaron los preparados para lactantes la ingesta, absorcin y retencin
de hierro, se vieron afectadas significativamente por la forma de presentacin, ya que con el
preparado liquido los tres parmetros fueron inferiores. Pero adems, excepto en el grupo que
tom la frmula tratada al bao Mara, la digestibilidad de la frmula lquida fue inferior a la
de la frmula en polvo(tabla 29). Cabe destacar, que en estos animales lactantes alimentados
exclusivamente con frmula infantil la capacidad de absorcin fue extremadamente alta, a
diferencia del estado adulto y coincidiendo con otros datos de la literatura ( Ezekiel, 1967; Leslie
y Kaldor, 1971) que indican que la rata en sus primeros 14 das de vida puede absorber casi el
100% del hierro ingerido, valor que desciende paulatinamente hasta llegar aproximadamente al
25% a los 30 dias de edad. Adems, la concentracin de hierro de los preparados para lactantes
empleados en este ensayo, fue similar a la concentracin de la leche de rata, por lo que este
rgimen de alimentacin no supondra un dficit de frrico.
La utilizacin metablica del hierro fue significativamente inferior con la frmula lquida
respecto a la frmula en polvo, es decir, una proporcin superior del hierro absorbido se elimin
por orina cuando se presentaba en forma lquida. En consecuencia, no slo la peor utilizacin
digestiva de este alimento sino tambin la menos eficiente utilizacin metablica, condicionaron
una inferior utilizacin nutritiva en los tres grupos de animales que tomaron la frmula infantil
lquida (tabla 29). Se ha descrito que el calentamiento implicado en la esterilizacin puede
provocar la aparicin de determinados productos de la reaccin de Maillard (Renner, 1979; Finot,
1983; HurreIl, 1994), algunos de ellos inhibiendo la absorcin frrica y otros incrementando sus
258
Discusin de Resultados
tg/perodo
500
400
300
200
100
o
Ingerido Retenido
100
75
50
25
o
ALT Ru
Figura 21. Utilizacin digestiva y nutritiva de hierro
259
Discusin de Resultados
nutriente no son suficientes (Dalman, 1990; Wharf y col., 1997), colectivos vulnerables que si
se alimentan durante un tiempo prolongado exclusivamente con frmulas liquidas esterilizadas
podran ver agravados algunos de sus sntomas.
260
Discusin de Resultados
29), pero, aunque vari el contenido total de hierro, la concentracin corporal no se afect ni por
el tipo de frmula ni por el calentamiento ensayado (tabla 36).
Se observaron algunas variaciones del contenido total de hierro en las ratas lactantes al
cabo de los 6 das que dur e experimento, pero los contenidos relativos no se modificaron, de
modo que fundamentalmente habra que relacionarlas con las fluctuaciones del peso entre los
distintos grupos;, slo en el grupo que tom frmula lquida sin calentar fueron peso y contenido
frrico significativamente inferiores que en su homlogo en polvo (tabla 36). Si estos animales
se comparan con los alimentados con leche de vaca (tabla 35) se puede observar que la
concentracin corporal de este elemento fue bastante ms alta, lo cual se puede atribuir a bajo
contenido de hierro de la leche de vaca que ya ha sido indicado.
261
Discusin de Resultados
4.2.6.1.Ensayos u vitro
Segn Evans y Johnson (1978) la forma qumica del zinc biolgicamente ms importante
es como ion divalente, pero dichos iones en solucin acuosa a pH elevado, normalmente forman
hidrxidos que precipitan, a no ser que estn presentes especies acomplejantes (tales como
aminocidos, pptidos, protenas o quelantes orgnicos). Otros autores coinciden en indicar que
la forma ms disponible del zinc es formando quelatos con aminocidos, y la menos formando
parte de sales inorgnicas y complejos orgnicos altamente estables (Kirchgessener y Hartel,
1977).
262
Discusin de Resultados
Leche de vaca
Entera Descremada
100%
75%.
50% -
25%
0% - -fr -H-
NC BMMO NC BM MO
Frmula infantil
Polvo Lquida
1000/
NC BM MO NC BM MO
263
Discusin de Resultados
250
200
150
100
50
En la leche de vaca casi todo el zinc est ligado a la fraccin descremada y slo un 1%
pertenece a la fraccin lipidica (Fransson y Lnnerdal, 1983). Respecto al zinc correspondiente
a la parte descremada, un 95% est asociado a las micelas de casena (Blakeborough y col.,
1983) y slo una pequea proporcin (5%) est asociado a un compuesto debajo peso molecular
(Singh y col., 1989) que ha sido identificado como citrato (Blakeborough y col., 1983; Martn
264
Discusin de Resultados
y col., 1984). Del zinc ligado a las micelas de casena, un tercio est dbilmente unido a travs
de los residuos de fosfoserina de la casena, y los otros dos tercios se unen ms estrechamente
al fosfato clcico coloidal (Singh y col., 1989).
En las frmulas infantiles, parte del zinc puede que se encuentre en formas similares a las de la
leche de vaca, pero debido a los distintos procesos implicados en su fabricacin, sta ha podido
modificarse y adems hay que tener en cuenta que debe adicionarse como sal inorgnica al
objeto de cubrir las necesidades del beb.
La leche de vaca entera y descremada y las frmulas infantiles estudiadas contenan una
cantidad de zinc bastante similar (tabla 1 y 2). Por ello, la expresin del zinc dializado, no
dializado soluble y precipitado por 100 m, de leche o frmula no tratada (Figura 5) detecta las
mismas diferencias que ya se habian encontrado en los valores porcentuales, a excepcin de la
elevacin significativa del valor absoluto del zinc no dializado soluble y precipitado con la
frmula infantil en polvo respecto a la leche de vaca entera que se produce porque esta ltima
presenta una concentracin de zinc algo superior.
265
Discusin de Resultados
4.2.6.2.Ensayos it vivo
266
Discusin de Resultados
p.gperodo
400-
300
200
100
o
Ingerido Retenido
A/t RJ
Figura 23. Utilizacin digestiva y metablica de zinc
267
Discusin de Resultados
nutriente, no parece que hayan podido jugar un papel destacado, aju.zgar por las variaciones tan
pequeas que se han producido.
En cualquier caso, la ingesta de leche de vaca tratada al bao Mara o por microondas
hubo de alterar poco el estado nutritivo de zinc, ya que los contenidos tisulares de este elemento
no se afectaron (tabla 39) y el contenido corporal total (tabla 35) no se redujo, incluso en el del
grupo que tom la leche calentada al bao Maria se increment significativamente tanto en valor
absoluto como relativo. En diferentes rganos y tejidos no se apreciaron cambios importantes
(tabla 37).
Las ratas que tomaron frmula infantil absorbieron y retuvieron el zinc con eficacias
similares a las de las que tomaron leche de vaca, Ah, RJA, PA (tabla 31 y 32). En este sentido,
estudios de retencin corporal total de 65Zn llevados a cabo en adultos humanos demostraron que
la absorcin de zinc de la leche de mujer es significativamente ms alta que la de la leche de
vaca o la de frmulas infantiles elaborados a partir de leche de vaca, sin diferencias significativas
entre stas (Casy y col. 1981; Blakeborough y col., 1983; Lnnerdal y col., 1984). Tambin
Lnnerdal y col. (1988) obtuvieron en monos rhesus lactantes que la absorcin del zinc de la
leche humana (65%) era ms similar a la de las frmulas infantiles con predominio de protenas
sricas (60%) que con predominio de casena (46%), pero la cantidad absoluta de zinc absorbido
era considerablemente ms alta con las frmulas que con la leche humana, debido a que las
primeras presentaban una concentracin del elemento en cuestin notablemente ms alta. Sin
embargo, existen en la bibliografia resultados dispares sobre este tema: Sandstrm y col. (1993)
no observaron diferencias en la distribucin tisular del 65Zn administrado con frmula infantil
o leche humana, y Johnson y Evans (1978) obtuvieron en ratas que la biodisponiblidad del zinc
de la leche de mujer y la leche de vaca eran respectivamente 59 y 42%, pero esta diferencia no
era significativa. Otros estudios llevados a cabo en ratas lactantes mostraron un porcentaje de
absorcin de zinc elevada (85-95%) con leche de mujer y en preparados para lactantes a base
de leche de vaca (Brennan y col., 1989, 1990 a,b; Flynn y Brennan, 1991). Parece ser que la baja
concentracin de zinc de la leche de mujer contribuye a que su eficacia de absorcin sea ms
268
Discusin de Resultados
elevada ya que el zinc est sometido a un control homeosttico, pero tambin se sabe que ste
tiene alta biodisponibilidad, gracias a la calidad proteica y a la presencia de pequeos ligandos
en la leche humana (Sandstrm, 1977).
La cantidad de zinc ingerida, absorbida y retenida tendi a aumentar en los animales que
tomaron las frmulas despus de calentarlas tradicionalmente al bao Mara, si bien las
diferencias en los valores de absorcin y retencin no llegaron a ser significativas respecto a sus
controles; ya que en el caso de la frmula lquida tendi a elevarse la digestibilidad y en la
frmula en polvo se redujo, llegando a afectarse la utilizacin nutritiva (figura 23).Por su parte,
el microondas disminuy los tres coeficientes Ah, R/A, y Ru, especialmente con el preparado
liquido,pero no se afect de forma clara ni la absorcin aparente ni el balance.. Por tanto, estos
calentamientos de tipo domstico incidieron poco en la utilizacin nutritiva del zinc; se
presentaron ciertas diferencias en los coeficientes que cuantifican los procesos digestivo y
metablico o incluso el nutritivo, lo que tambin se observ cuando se calent la leche de vaca
(tabla 31) pero en ningn caso se afect el balance del elemento (tabla 32).
El zinc corporal total fue significativamente inferior en las ratas que consumieron la
frmula infantil lquida (tabla 36) lo que fundamentalmente se relaciona con su mayor peso; los
animales de estos grupos comieron menos, pesaron menos y retuvieron una cantidad de zinc
inferior, como se determin a travs del estudio de balance (tabla 32). Sin embargo, la influencia
269
Discusin de Resultados
Tambin el menor peso de los animales alimentados con el preparado liquido conlev
un peso heptico ligeramente ms bajo y un contenido de zinc en el rgano significativamente
menor que el de las ratas que se alimentaron con la frmula en polvo, pero no se produjeron
diferencias significativas en sus concentraciones (tabla 40). Tampoco se apreciaron diferencias
significativas en las concentraciones de zinc en piel y hemates. Podra apuntarse que quizs en
la piel, tendieron a elevarse; y precisamente acmulos excesivos de este metal en pelo se han
asociado con estados de malnutricin (Varela y col., 1992).
Todo ello apoyara una vez ms que las repercusiones nutntivas del calentamiento
moderado de las frmulas infantiles fueron minmas.
4.2.7.tEnsayos u vitro
270
Discusin de Resultados
sg por 100 kcal, y esta misma cantidad es la especificada por la Joint FAO/OMS Alimentarius
Commission (1986).
Se indicado que el 44% del cobre de la leche de vaca se encuentra unido a la casena,
un 8% a las protenas de suero y un 47% a la fraccin de bajo peso molecular unido a la grasa
(Le5mnnerdai y col., 1981). La relacin de ZnICu es mucho mayor en la leche de vaca que en la
leche de mujer, que en el primer mes de lactancia es de 6.3, en el segundo 4.7, en el tercero 3.9
y en el cuarto de 3.7 (Butte y col., 1987). En nuestro caso dicha relacin fue aproximadamente
12 para leche de vacay 6 para las frmulas infantiles, y por tanto estas tendran una composicin
ms cercana a la de la leche materna.
4.2.7.2.Ensayos u vivo
La ingesta de cobre no mostr diferencias significativas entre los grupos que consumieron
leche de vaca (tabla 33). Sin embargo, el calentamiento favoreci la digestibilidad de este
elemento, tanto los animales que tomaron la leche calentada al bailo Maria como los que la
tomaron tratada al microondas presentaron una mayor relacin A/I respecto al control. Sin
271
Discusin de Resultados
Con respecto a los contenidos globales de cobre y a las concentraciones corporales al final
del experimento de los animales que tomaron leche de vaca (tabla 35), no se han encontrado
diferencias significativas debidas al calentamiento, si bien se aprecia un contenido ligeramente
inferior en el grupo que consumi la leche sin calentar.
Los nios al nacer contienen una considerable reserva de cobre en el hgado, del 50 al
70% del cobre total se localiza en este rgano, y acta como reserva durante los 3 a 6 primeros
meses de vida, cuando la ingesta de cobre es baja. El contenido de cobre de la leche humana
es de 0.2 g/ml y es altamente disponible (Lnnerdal, 1981). Tan slo se han observado
deficiencias de cobre en nios prematuros, que presentan un contenido heptico de cobre ms
bajo, alimentados con leche devaca(AI-Rashidy Spangler, 1971; Navehy col, 1981). La leche
de rata presenta una concentracin de cobre notablemente ms alta que la de muchas otras
especies de mamferos incluido el hombre (Underwood, 1977) adems es muy disponible, de
manera que durante la lactancia, la rata el incrementa su reservar heptico de cobre (Terao y
Owen, 1977; Keen y Hurley, 1980). Las concentraciones hepticas de cobre obtenidas para los
animales que tomaron leche de vaca fueron superiores a las obtenidas para ratas de un mes: 10
sg/g (Aguirre, 1995). No se vieron afectados los contenidos en valor absoluto ni relativo de este
micronutriente en higado, piel y hemates de los animales de los tres grupos anteriormente
indicados.
La mayor parte del cobre eritrocitario est presente en la Cu, Zn-superxido dismutasa,
y la concentracin del zinc en esta enzima permanece inalterada durante toda la vida del
eritrocito maduro (Fomon, 1995). Los valores obtenidos para este parmetro en los grupos que
tornaron leche de vaca (tabla 37) no mostraron diferencias entre si y son coherentes con la
concentracin media de cobre en hemates descrita por Aguirre (1995) para ratas de 85 g de
peso: 9.9 sg/g.
272
Discusin de Resultados
En general se observa que las cantidades de cobre absorbidas y digeridas por los animales
que tomaron frmula infantil fueron bastante similares a los que tomaron leche de vaca, lo que
fundamentalmente se debe a la mayor concentracin de cobre en las frmulas, incluso a que la
digestiblidad de este elemento result favorecida. La ingesta de los grupos que tomaron la
frmula lquida fue inferior a la de los grupos que tomaron la formula en polvo, siendo la
diferencia entre tipos significativa en las frmulas tratadas al bao Mara, as como en las
calentadas al microondas. Debido a que la eliminacin urinaria de cobre fue relativamente
proporcional a su ingesta se alcanzaron dentro de los dos tipos de preparados para lactantes
valores de absorcin aparentes parecidas. Tan slo es de destacar el caso de la frmula en polvo
calentada al bao Mara que mostr una absorcin significativamente ms baja respecto a su
control y a su homlogo calentada al microondas, y a la vez fue significativamente menor a la
frmula lquida tratada al bao Maria. Tambin es de sealar que en este grupo la relacin A/I
fue significativamente distinto desde el punto de vista de su tipo y de su tratamiento. Parece que
el calentamiento de la frmula en polvo hubiera perjudicado su utilizacin digestiva siendo ms
acentuado en el caso anteriormente sealado. Con respecto a este parametro coincide que la
frmula lquida calentada al microondas tambin fue significativamente menor que su control
y la frmula lquida bao Maria.
273
Discusin dc Resultados
274
Discusin de Resultados
descrito contenidos de furosina de 53.5 a 109.9 mg/L para una leche de vaca en polvo
reconstituida comercializada, y 17.6 a 85.4 mg/L para una leche de vaca IJHT (Corzo y col.,
1994). Henle y col. (1995) sealaron que los preparados para lactantes del mercado contienen
ms furosina respecto a otros productos lcteos, oscilando de 9.3 a 18.9 g de furosina por kg
de protena en las frmulas en polvo y 7.3 a 12.5 g/kg de protena en las lquidas. Nuestros
datos estn dentro de estos rangos (de 7 a 14 g/kg de protena). En una frmula infantil para
prematuros esterilizada convencionalmente sehall un contenido de lactulosil-lisina dos veces
superior que en la equivalente esterilizada mediante UHT y tambin tres veces ms productos
avanzados de la reaccin de Maillard que su homloga UHT (Langhendries y col., 1992), lo
que est en concordancia con nuestros resultados.
27 5
Discusin de Resultados
esterilizada como indicaremos a continuacin, lo que tambin est en concordancia con los
valores ms altos de lactulosa y furosina.
El anlisis por HPLC de las fracciones solubles a pH 4.6 por el mtodo de Resmini
(1989) no penniti determinar cuantitativamente las protenas del suero nativas, ya que las
muestras dieron lugar a cromatogramas distorsionados en los que los picos correspondientes
a la a-lactoalbmina y (3-lactoglobulina tenan una forma irregular (resultados que no se
muestran en la tesis), que contrasta claramente con la de la leche de referencia. Es posible
que el conjunto de reacciones que se producen durante el calentamiento hayan afectado
preferentemente a las protenas solubles porque estas hayan interaccionado ms fcilmente con
azcares, lpidos o incluso agregados proteicos.
Los resultados anteriores se ven respaldados por los obtenidos por SDS-PAGE para
cada tipo de preparado, as como sus respectivas fracciones de casena y protenas sricas
(figura 6). En general todas las proteinas presentaban modificaciones intensas. La a-
lactogloblina y (3-lactoalbmina apenas se pudieron apreciar en las fracciones solubles de las
frmula lquida esterilizada convencionalmente y la UHT, respectivamente calle 7 y 15, lo
cual apunta a que las proteinas sricas presentaran un alto grado de desnaturalizacin y
estuvieran asociadas a la casena. Sin embargo, en ambas frmulas en polvo se apreci una
banda ms clara para las protenas sricas (calles 3 y 11) especialmente en el caso de la
frmula 2. En todas los casos al aplicar un tampn SUS y p-mercaptoetanol se produce la
ruptura de enlaces disulfuro y entre la casena y la ct-lactoalbmina y 3-lactoglobulina
desnaturalizadas, pudindose apreciar una segunda banda ms clara, correspondiente a dichas
protenas sricas, en las fracciones de casena (calles 2, 6, 10, y 14). Es de destacar que la
leche entera y la fraccin caseinica correspondientes a la frmula lquida A (calles 5 y 6)
fueron muy difusas y apenas se pueden diferenciar las bandas correspondientes a las distintas
protenas. Tan slo apareci en el punto de aplicacin de las muestras una banda, propia de
un agregado de protenas de alto peso molecular, que no migraron a travs del gel de
resolucin ni se solubilizaron al aplicar condiciones reductoras.
276
Discusin de Resultados
1 2 3 4 5 6 7 9 10 11 12 13 14 15 16
a -
I e. st
e
u.
1: 1P
2: Fraccin casena 1P
3: Fraccin soluble 1P
4: Fraccin casena Referencia (leche de vaca pasteurizada)
5: lE
6: Fraccin casena lE
7: Fraccin soluble lE
8: Fraccin soluble Referencia (leche de vaca pasteurizada)
9: 2P
10: Fraccin casena 2P
11: Fraccin soluble 2P
12: Referencia (leche de vaca pasteurizada)
13: 2UHT
14: Fraccin casena 2 UI-Il
15: Fraccin soluble 2 UHT
16: Kit de bajo peso molecular
277
Discusin de Resultados
8
04
AL
A.
o Le.
u-
LS
Q$ A
278
Discusin de Resultados
279
Discusin de Resultados
280
Discusin de Resultados
281
Discusin de Resultados
282
Discusin de Resultados
La dieta control de los ensayos realizados para estudiar la influencia del tratamiento
trmico industrial sobre la utilizacin nutritiva de la protena y los minerales, respecto a la
dieta estndar AI?N-76, era una dieta hipercalrica, con un contenido de aproximadamente
4350 Kcal/kg frente a 3850 Kcal/kg, respectivamente, diferencia que se debi al diferente
aporte graso, 16% y 5%, respectivamente (Tablas 4 y 7). Ello se debi a que se intent
preparar una mezcla de dieta estndar y frmula infantil casi a partes iguales pero sin que la
dieta resultante se alejara excesivamente de los requerimientos de la rata, particularmente
evitando que el aporte graso fuera superior al 15% a fin de prevenir la aparicin diarreas. Se
decidi por tanto utilizar una mezcla de la dieta estndar y frmula infantil en la proporcin
60:40.
283
Discusin de Resultados
indicar posteriormente. El ndice hepatosomatico fue ligeramente superior en las ratas del
grupo control frente a las alimentadas con la dieta estndar, aunque las diferencias no llegaron
al nivel de significacin estadstica.
Despus del periodo de adaptacin de 4 dias, los pesos de los distintos grupos de
animales que consumieron frmula infantil no presentaron diferencias entre si (tabla 48), pero
los animales cuya dieta contena la frmula esterilizada pesaban significativamente menos que
los que tomaron la dieta control. Al fmal del ensayo dichas ratas, y las que consumieron las
dietas que contenan frmulas en polvo tuvieron significativamente pesos inferiores que las
del grupo control, mientras que el peso de las ratas que tomaron la frmula UHT no lleg a
diferir significativamente del control. Estos cambios han de atribuirse a las diferencias de
ingesta (tabla 50), durante el perodo de balance las ratas alimentadas con las frmulas
infantiles ingirieron significativamente menos alimento que las de la dieta control. Es de
destacar que, a diferencia del experimento II, no se apreciaron diferencias entre los grupos
que tomaron dietas que contenan la frmula en polvo A y la lquida esterilizada A, lo que
seguramente se debi a que en este experimento los animales no se encontraban en periodo
de lactacin, y por eso eran menos vulnerables, y adems porque su dieta no era
exclusivamente la frmula infantil sino que estaba formulada para cubrir mejor sus
recomendaciones dietticas.
284
Discusin de Resultados
reaccin de Maillard, pero en concordancia con Said y col. (1974) esto tampoco produce
modificaciones sustanciales en el peso del rgano en cuestin.
285
Discusin de Resultados
4.3.3.Biodisponibilidad de nitrgeno
Ya que las diferencias en la ingesta alimentaria de las ratas que tomaron las dietas
control y AJN-76 no fueron significativas, tampoco se apreciaron diferencias en la cantidad
de nitrgeno ingerido (tabla 51). La absorcin aparente no lleg a modificarse
significativamente por el consumo de una u otra dieta, pero se apreci una disminucin del
nitrgeno fecal en las ratas del grupo control acompaada de un incremento de su
digestibilidad. Esta influencia podra relacionarse con un medio luminal relativamente ms
cido en la dieta hipergrasa debido al aumento de cidos grasos libres que se originan durante
la digestin (Van Soest, 1982). Sin embargo, el efecto a nivel metablico fue mucho ms
acusado, y con la dieta control de nuestros experimentos se produjo una marcada disminucin
de la excrecin urinaria de nitrgeno, aumentando el coeficiente de utilizacin metablica en
comparacin con la dieta Afl4 76. Ello tambin se tradujo en diferencias significativas en la
utilizacin nutritiva. Es posible que con un 5% de grasa en la dieta en lugar del 14%, parte
de la protena diettica se utilizara con fines energticos, en cuyo caso se sabe que se elevan
las prdidas urinarias de nitrgeno Por consiguiente, la utilizacin de un contenido de grasa
.
Los animales que consumieron la dieta que contena frmula infantil lquida
esterilizada convencionalmente eliminaron una cantidad de nitrgeno superior por va fecal
en comparacin con los dems grupos, de modo que el coeficiente de digestibilidad aparente
se redujo significativamente. Este resultado, junto con los indicadores de dao trmico que
ya se han discutido en esta memoria, apoya que la esterilizacin convencional utilizada en la
elaboracin de la frmula A lquida ha originado productos avanzados de la reaccin de
Maillard, cuya absorcin como se ha descrito (Finot, 1990). es muy escasa. Sarwar y col.
286
Discusi6n de Resultados
mg/da
300-
250-
200-
15W
100-
50-
0~
Ingerido Fecal Urinario
100
75
50
25
287
Discusin dc Resultados
En los ensayos in vitro de la experiencia III no se estudi por separado cada hora de
la digestin pancretica, a diferencia de la experiencia II, sino que se procedi a tomar tres
muestras en la segunda hora. Esto se realiz a fin de estandarizar este mtodo de
disponibilidad mineral como se propuso en la accin concertada n0 10 del proyecto europeo
FLAIR.
288
Discusin de Resultados
289
Discusin de Resultados
embargo, en el balance las diferencias fueron ms marcadas y ste se elev debido a que las
prdidas urinarias del metal se redujeron significativamente con la dieta ms calrica. En el
contenido total de calcio de las ratas que tomaron esa dieta tambin se apreci al final del
estudio un valor medio superior al de las ratas del grupo AIN76 pero las diferencias no
llegaron a ser significativas (tabla 62). En consecuencia, la utilizacin metablica y utilizacin
nutritiva global fueron mayores con la dieta control respecto a la de referencia para la rata..
Parece ser que la grasa juega un papel modulador de la absorcin de calcio, pero en.
l literatura existen variedad de resultados debidos a las distintas circunstancias
experimentales: se ha indicado que cantidades muy pequefias de grasa en la dieta dificultan
la absorcin intestinal de calcio y mayores cantidades, dentro de ciertos limites, la favorecen
(Kies, 1985). Pero Kaup (1990) observ que la edad tambin condicionaba dicha influencia;
en ratas jvenes era mininia pero en las ms maduras una elevacin de la grasa diettica del
5% al 20% redujo la absorcin y retencin clcicas. Otros datos en humanos indican que un
incremento de la cantidad de grasa de la dieta desde el 22% al 42% no altera la utilizacin
nutritiva de este mineral (Van Dokkum, 1983).
Las ratas que tomaron dietas que contenan frmula infantil, mostraron una menor
ingesta clcica respecto a las que tomaron la dieta central, pero sta no vari en funcin del
procesamiento industrial de cada una de eIlas.(tabla 55). Tampoco se observaron diferencias
en la excrecin fecal de calcio debidas al tipo de frmula, que fue significativamente ms baja
en todos los grupos respecto al control. Esto se produjo de tal modo que la digestibilidad se
increment debido al consumo de frmula infantil y, aunque la cantidad de calcio absorbida
fue algo menor que con la dieta control, slo se apreciaron diferencias significativas en el
caso de las ratas que tomaron en su dieta la frmula B en polvo.
290
Discusin de Resultados
La retencin de calcio se redujo, en comparacin con el control, en los dos grupos que
tomaron frmula en polvo (tabla 55).
Este ltimo resultado est de acuerdo con estudios llevados a cabo en ratas a las que
se les administraba dietas que contenan lactulosa durante aproximadamente mes y medio; la
presencia de este compuesto increment la retencin de calcio, magnesio, hierro cobre y zinc
(Suzuki y col. 1985, 1986). En nuestro caso, las frmulas liquidas contenan al menos 10
veces ms lactulosa que las frmulas en polvo (tabla 48), quedando las dietas preparados a
partir de la frmula A lquida esterilizada y B lquida tU-IT con un contenido de lactulosa
final de 1.5% y 0.5%, respectivamente. La bibliografia indica que la incorporacin de
lactulosa al 0.5% en frmulas infantiles es suficiente para incrementar significativamente la
poblacin de bifidobacteria en ratas al cabo de cinco semanas (Nagendra y col. 1992; Mizota
y col., 1987), y que la absorcin de minerales es ms elevada al preponderar la flora bfida
(Pahwa y Mathur, 1982). Posiblemente debido a que nuestro periodo experimental fue ms
corto y a que las concentraciones de lactulosa no fueron muy altas, el aumento de absorcin
y retencin asociado al consumo de los dos preparados liquidos no se apreci con nitidez, y
en ningn caso se observaron diferencias significativas entre preparados en polvo y lquidos
sino slo en comparacin con el grupo control.
Por otro lado, en el estudio que se realiz utilizando las frmulas en polvo A y lquida
esterilizada A, como nico alimento de ratas lactantes (tabla 19) se observ un incremento de
la digestibilidad clcica asociado a la frmula esterilizada, que sin embargo no fue capaz de
mejorar la absorcin ni retencin del elemento, por lo que podra apuntarse que el posible
efecto favorecedor de la absorcin atribuido a la lactulosa fue muy leve en las condiciones
de ese ensayo. Estos resultados estaran en concordancia con trabajos posteriores de Nagendra
y col. (1994), que administraron a ratas dietas sin o con un 0.5% 1% de lactulosa y
observaron que la presencia de este compuesto no repercuti sobre el balance de calcio ni
sobre los ndices %A/I y %RII.
291
Discusin de Resultados
mg/da
60
50
40
30
20
Ingerido Retenido
100
75,
50
25
0~
Al Rl
Figura 25. Utilizacin digestiva y nutritiva de calcio
292
Discusin de Resultados
Esa pequea diferencia en los valores de absorcin y retencin entre las ratas que
consumieron frmulas en polvo y liquidas, tambin podria interpretarse porque el contenido
relativamente mayor de productos iniciales de la reaccin de Maillard en las frmulas
deshidratadas (tabla 44) dificulte en alguna medida la absorcin de este mineral. Sin embargo,
parece ser que estos compuestos son absorbibles y su interferencia se producira a nivel
metablico, como se observ en el ensayo realizado con ratas lactantes. Cabra esperar una
repercusin ms acusada del consumo de la frmula A lquida esterilizada sobre la
biodisponibilidad tic calcio, teniendo en cuenta que fue la que presentaba mayor dao trmico
(tabla 44 y 45), y se ha sealado que la calidad de las proteinas ingeridas afecta a la
utilizacin nutritiva del calcio (Aspe, 1992). Eso seguramente no se ha detectado al haber
utilizado la frmula en combinacin con la dieta AIN 76.
Los ensayos de disponibilidad in vitro de fsforo revelaron una influencia del tipo de
frmula en las fracciones de dializado y no dializado soluble (tabla 56). Los valores fueron
del mismo orden que sus homlogos estudiados en la experiencia II en el caso del preparado
A en polvo y algo menores para el lquido esterilizado (tabla 20). Estas pequeas diferencias
293
Discusin de Resultados
Estos resultados indicaran que la nica influencia detectable se debi a la marca del
preparado, tal como ocurri en el calciopero que aqu fue ms leve, pero no a la cantidad de
fsforo que prcticamente fue identica en los preparados de una u otra marca comercial. Por
su parte, el tratamiento trmico empleado en su fabricacin tuvo un efecto mnimo.
294
Discusi6n de Resultados
jabones insolubles, ms fcilmente que el fsforo, y ste ltimo quedara libre para poder
absorberse mejorndose as su eficacia digestiva (Fakambi y col., 1969; Kaup y col., 1990).
Sin embargo, esta interaccin calcio-fsforo no parece haberse producido en estos ensayos,
ya que la absorcin de calcio no se vio dificultada por la ingestin de la dieta hipergrasa, sino
que como la del fsforo tambin tendi a elevarse. Probablemente en nuestras condiciones
experimentales el nivel de grasa del 14% no fue lo suficientemente elevado para insolubilizar
al calcio e impedir su absorcin, y estara en la linea de las observaciones que sealan un
afecto favorecedor de una elevacin moderada de la cantidad de la grasa en la dieta.
295
Discusin de Resultados
mg/da
60-
50-
40-
30-
20-
10-
0- 4
Ingerido Absorbido Retenido
1001 7
1
fA.
75
50-
25j 1
o A
Al Rl
Figura 26. Utilizacin digestiva y metablica de fsforo
296
Discusin de Resultados
respecto al control. Sin embargo, la inclusin de una u otra frmula infantil en l dieta no
repercuti en la absorcin de fsforo(figura 26).
La eliminacin urinaria de este elemento en ratas alimentadas con las dietas que
contenan las frmulas infantiles fue inferior que la de las ratas controles aunque sin
diferencias significativas cuando se trat del preparado B-UHT; an as la retencin en los
cuatro grupos que tomaron frmulas infantiles fue significativamente ms baja que la del
grupo control y las utilizaciones metablicas fueron del mismo orden. El anlisis estadistico
de los coeficientes R/A y RA indic que las diferencias entre los grupos estaban al borde de
las significacin estadstica, pareci que la utilizacin metablica de fsforo estaba disminuida
por el consumo de la frmula deshidratada A respecto a su homloga lquida esterilizada
(figura 26), lo que se acus en la utilizacin nutritiva. La utilizacin nutritiva de la protena
vari en el mismo sentido, lo que nos permitira pensar exixti una causa comn teniendo en
cuenta adems que el metabolismo de estos dos nutrientes est relacionado(Harrison, 1 984);el
elevado contenido de productos iniciales de la reaccin de Maillard originados durante la
deshidratacin, que habran podido absorberse sera el causante de la pequea disminucin de
la utilizacin metablica de la protena y del fsforo.En el contenido corporal total de fsforo
no se apreci ninguna diferencia (Tabla 63).
297
Discusin de Resultados
4.3.5.1.Ensayos in vitro
bastante prximo, lo cual se pone de manifiesto tambin a travs del estudio de su precipitado,
que fue slo significativamente inferior en el caso de la frmula B-UHT. Esta influencia de
la marca comercial en la disponibilidad mineral recuerda la que se produjo tambin para el
calcio y con menor intensidad para el fsforo, y podra explicarse porque en la elaboracin
de estos alimentos infantiles se han empleado diferentes sales minerales como permite la
normativa actual, aunque el aporte de cada elemento sea equivalente. Sobre este tema, se ha
descrito que este mtodo de disponibilidad iii vitro puede detectar cambios de solubilidad en
funcin de la forma qumicadel elemento (Lindberg y col., 1990; Fine y col., 1991), aunque
298
Discusin de Resultados
La ingesta de magnesio de los animales del grupo control y AuN 76 fue parecida pero
los segundos presentaron una eliminacin fecal del mineral que fue prcticamente el doble y
por lo tanto significativamente mayor reducindose marcadamente el coeficiente de
digestibilidad; no obstante, debido a las cantidades excretadas eran pequeas, 1.24 y 2.16
mg/dia, no lleg a variar la absorcin (tabla 60). Nuestros resultados coinciden con los de
Watkins y col. (1992) que administraron una mezcla de grasas compuesta de manteca, aceite
de maz y aceite hidrogenado de coco al 1.5, 5 10% a ratas y no obtuvieron efectos de la
cantidad de grasa sobre la absorcin de magnesio. La eliminacin urinaria de magnesio
tambin fue significativamente distinta pero con respecto a este parainetro, la del grupo
control fue mayor, lo cual tampoco alter su retencin diaria. Por ltimo, la utilizacin
nutritiva tendi a incrementarse en el control (p=O.OS8>. Estos resultados podrian ser
sorprendentes ya que existe una mayor posibilidad de formacin de jabones de magnesio en
el intestino de los animales del grupo control, dado que su dieta contiene una mayor cantidad
de grasa. Sin embargo, este efecto depende tambin de la concentracin de calcio, y parece
ser que los cidos grasos libres forman preferentemente jabones con este mineral que con el
magnesio. As, Kaup y col. (1990) observaron que administrando a ratas jvenes dietas con
cantidades elevadas de grasa y de calcio, el magnesio se absorba mejor. En nuestro estudio,
sin embargo, todos los elementos mayoritarios se absorbieron bien con la dieta del 14% de
grasa quiz porque ese nivel lipdico no era tan excesivo.
Las ratas alimentadas con las dietas que contenan frmulas ingirieron una cantidad
de magnesio inferior que las que consumieron la dieta control, aunque en el caso de la dieta
B-polvo no se alcanz el nivel de significacin establecido ; p<0.O5 (tabla 61). Debido a que
la eliminacin fecal de magnesio en los cuatro grupos experimentales tambin fue
significativamente ms baja en relacin al control, la absorcin resultante fue similar, excepto
la del grupo que tom la frmula A polvo que fue menor. En definitiva, las eficacias de
absorcin en todos los grupos fueron del mismo orden y solo se diferenciaron
significativamente las correspondientes a la frmula A lquida esterilizada y A polvo, siendo
la pnmera mayor.
299
Discusin de Resultados
mg/da
6~
5-
4,
3.2
2-
1- r
0- A
Ingerido Retenido
101<
75.
50-
25-
o. 4
Al Rl
300
Discusin de Rcsultados
301
Discusin de Resultados
Tras la digestin lii vitro de las cuatro frmulas ensayadas no se produjeron diferencias
en ninguna de las fracciones. Es decir, las presentaciones en polvo y lquidas de los
preparados infantiles estudiados no influyeron en la disponibilidad in vitro de este metal. A
diferencia del calcio y el magnesio, la distribucin del hierro en las distintas fracciones
durante la digestin simulada no pareci modificarse por el tipo de marca del preparado, lo
que podra ser la consecuencia de que el tipo de sal de hierro empleada y la presencia de otros
componentes que afectan su disponibilidad, debi de ser muy semejante en ambos preparados
infantiles
302
Discusin de Resultados
4.3.6.2.Ensayos fu vivo
La ingesta de hierro de las ratas que consumieron la dieta control fue ligeramente
mayor que la correspondiente de las alimentadas con la AIN 76, debido a las diferencias en
la ingesta alimentaria ya comentadas, al igual que su eliminacin por heces y su absorcin
aparente; pero en ninguno de estos parmetros las diferencias fueron significativas (tabla 67).
Sin embargo, s fue significativamente inferior la excrecin urinaria de hierro del grupo
control, pero ya que las prdidas urinarias de este metal son cuantitativamente muy pequeas
y no constituyen una va normal de regulacin homeosttica (Linder 1988; Hurreil, 1997), no
lleg a incrementarse el balance significativamente y slo se produjo una elevacin
significativa del coeficiente de utilizacin metablica.
Nuestros resultados se veran refrendados por los de Van Dokkum y col. (1983) que
no observaron modificaciones sobre la absorcin de hierro en humanos debidas a los niveles
de grasa diettica. Por el contrario, otros autores sealan que la absorcin aparente de este
metal mejora con un mayor porcentaje de grasa en la dieta (Kauffman y col., 1987; Sorensen,
1965; Boweingycol., 1977;Mahoneyycol., 1980; Mahoneyycol., 1980; Kies, 1988),yque
una alimentacin abundante en grasas saturadas produce un balance de hierro mucho ms
positivo que otra idntica pero rica en grasas poliinsaturadas (Van Dokkum y col., 1983). En
este ensayo, ambas dietas contenan aceite de maz como fuente de grasa y por tanto
principalmente la cantidad, 5 o 14%, y no el tipo de grasa sera el determinante de las
diferencias encontradas.
303
Discusin de Resultados
pg/dia
7O0-~
600-
50W
400-
300-
200-
100
Ingerido Retenido
75/
50-
25
0
Al Rl
Figura 28. Utilizacin digestiva y metablica de hierro
304
Discusin de Resultados
Las ratas que tomaron en su dieta frmula infantil ingirieron menor cantidad de hierro
que las del grupo control porque tomaron menos cantidad de alimento (tabla 68). Tambin
eliminaron menos hierro por heces, existiendo cierto paralelismo entre la ingesta y la
eliminacin fecal en los grupos experimentales, como tambin se muestra en la estabilidad de
los coeficientes de utilizacin digestiva que no vari por el tipo de frmula consumida (fig.
28). Mi, las ratas cuya dieta contuvo la frmula A en polvo fueron las que excretaron mayor
cantidad del metal pero las absorciones aparentes fueron similares en todos los grupos. Por
otro lado, el hecho de que la absorcin de hierro de los animales del grupo control se situara
en valores similares a los de los grupos experimentales, y que los porcentajes de absorcin
se incrementaran debido a la presencia de los preparados para lactantes, sugiere un efecto
positivo de algunos componentes de dichos preparados sobre la biodisponibilidad de este
micronutriente.
a) El tipo de grasa Segn Lukaski y col. (1982) y Van Dokkum y col. (1983) una
alimentacin abundante en grasas saturadas produce un balance de hierro mucho ms positivo
que otra idntica pero con una proporcin elevada de grasas poliinsaturadas. Tambin los
resultados de Chao y Gordon (1983) apoyan esta hiptesis, ya que en sus estudios en ratas
observaron un descenso de la absorcin del elemento en las dietas a base de grasa de pescado.
Las ratas alimentadas con las dietas que contenan frmulas infantiles ingiriern una grasa con
una relacin de cidos grasos insaturados/saturados ms baja, que la correspondiente a la dieta
control, porque dicho cociente en las frmulas infantiles utilizadas fue de 1,3-1,5 y
aproximadamente 2 en la dieta cuya grasa era aceite de maz.
305
Discusin de Resultados
absorcin del metal, y se habla del denominado efecto carne que seria el resultado de una
interaccin entre las fracciones magras y grasas de este alimento. La interaccin puede ocurrir
en el himen; los productos de la digestin de la protena y de la grasa podrian participar en
una secuencia de hechos que daran como consecuencia la reduccin del hierro y se sabe que
este hecho aumenta la absorcin del elemento (Muir y col., 1984; Wollenberg y Rummel,
1987; Wien y Van Campen, 1991). Esta reduccin del hierro vendra seguida del
acomplejamiento del hierro ferroso por los cidos grasos libres, formndose complejos
lipofilicos que atravesaran rpidamente las membranas de las clulas de la mucosa, pero este
hecho parece estar relacionado con la carne, y tambin con el pescado, cordero, cerdo y el
pollo (Hurrel, 1997). La cisteina es el nico aminocido libre que parece que tiene un efecto
semejante (Taylor y col., 1986), ya que presenta la capacidad de quelar el hierro y reducirlo
a hierro ferroso que es mas soluble (Hurrel, 1997).
Segn todo ello, la conjuncin la grasa y la protena en las dietas que contenan
frmulas infantiles ha podido ejercer ese efecto positivo en la absorcin del hierro no hemico.
306
Discusin de Resultados
produjo una diferencia significativa entre las dos formas de presentacin del preparado B, a
favor de la IJHT.
Por ltimo, cabe indicar que la utilizacin nutritiva del hierro de las dietas que
contenan frmula infantil fue en general superior a la de la dieta control (fig. 28),
especialmente debido a su elevada digestibilidad, pero que en este ndice se acus esa mayor
eliminacin fecal y urinaria del elemento con la dieta que contena la frmula B en polvo,
porque para este grupo la utilizacin nutritiva del elemento no difiri de la del grupo control,
pero en ningn caso se produjeron variaciones de la absorcin o retencin aparentes del metal.
Aspe (1992) estudi la influencia del consumo de dietas que contenan casena y aceite
calentados con o sin adicin de glucosa y fructosa sobre la utilizacin nutritiva del hierro en
ratas en perodo de crecimiento, y obtuvo que slo el calentamiento de la casena ya originaba
un aumento de las prdidas urinarias del metal y disminua el indice de utilizacin metablica,
ms an cuando se trataba de la mezcla de casena, glucosa, fructosa y aceite, que fue la que
condicion la menor utilizacin nutritiva. En el ensayo que se realiz con ratas lactantes que
se alimentaron con la frmula A en polvo o lquida s se observ un empeoramiento de la
utilizacin metablica del hierro y de la utilizacin nutritiva cuando se trataba de la frmula
esterilizada, que segn los anlisis efectuados posteriormente, debi contener ms productos
de la reaccin de Maillard. No obstante, en el presente ensayo dichos cambios no se han
llegado a producir seguramente por haber quedado atenuados al emplear las frmulas en
combinacin con la dieta de referencia y probablemente tambin porque los animales eran ms
mayores y el perodo experimental no muy largo.
La cantidad total de hierro presente en los hgados de las ratas al final del ensayo vari
en funcin del peso del rgano, resultando significativamente superior en las que tomaron la
frmula lquida UI-IT respecto a las alimentadas con la frmula en polvo A, aunque las
concentraciones de este metal en el rgano no variaron entre los distintos grupos (tabla 77).
No se produjeron diferencias en los contenidos de hierro en bazo, piel y hemates (tabla 77),
ni siquiera en las concentraciones sricas (tabla 65) y eritrocitarias de hierro (tabla 77). Sin
307
Discusin de Resultados
embargo, el anlisis de hemoglobina (tabla 83) y del contenido corporal total de hierro (tabla
75) indican que el consumo de las dietas que contenan frmula infantil era ms favorable que
el de la dieta control sin existir diferencias debidas al tratamiento trmico aplicado en la
elaboracin de estos preparados para lactantes.
4.3.7.Biodisponibilidad de zinc
4.3.7.1.Ensayos fu vitro
Sandstrm y col. (1983) indicaron que la solubilizacin del zinc de las frmulas
infantiles puede presentar grandes diferencias debido a que se encuentre unido en mayor o
308
Discusin de Resultados
menor proporcin a la fraccin grasa, algo que en nuestro estudio podra estar relacionado con
las variaciones asociadas a la marca comercial. Por otro lado, los mismos autores indican que
la presencia de emulsificantes en la frmulas liquidas puede condicionar un secuestro de
cationes, lo que explicara en el caso del preparado B el mayor porcentaje de zinc precipitado
y menor porcentaje soluble con la forma lquida respecto al polvo.
4.3.7.2.Eusayos fu vivo
La utilizacin nutritiva del zinc fue muy diferente en los animales alimentados con la
dieta control en relacin con la dieta estandar para la rata. Las diferencias en las cantidades
ingeridas no llegaron a ser significativas, pero la absorcin y retencin aparentes de zinc
fueron muy superiores con la dieta control y tambin fueron bastante ms altas las eficacias
de utilizacin digestiva, metablica y nutritiva global (tabla 70).
No obstante, dichas diferencias no quedaron patentes en los anlisis efectuados en el cuerpo
entero (tabla 74), o tejidos concretos (tabla 76).
Los animales que se alimentaron con la dieta que contenia la frmula infantil A, tanto
en polvo como lquida, ingirieron una cantidad de zinc significativamente menor que los del
control (tabla 71), y a su vez los que tomaron las dietas con la frmula A ingirieron
significativamente menos que los que comieron la frmula B en cualquiera de sus dos
presentaciones. La eliminacin fecal de zinc fue algo ms alta en el grupo B polvo,
significativamente frente a A liquido esterilizado. Ello afect en alguna medida los valores
de absorcin, y se observo en este grupo una diferencia significativa en comparacin con su
homlogo la del Uf-IT. Entre los grupos de frmulas infantiles, la absorcin correspondiente
al preparado A polvo fue significativamente inferior que la del control.
La eliminacin urinaria de los grupos cuyas dietas contenian frmula infantil fue
significativamente superior frente al grupo control, prcticamente el doble ms baja: esto se
tradujo en que dichos grupos presentaron una retencin de zinc ms baja, aunque slo lleg
a ser significativamente inferior para el grupo A polvo. El incremento de la zincuria se puede
309
Discusin de Resultados
ig/da
50V
400
300
200
100
0-
Ingerido Absorbido Retenido
60 7
40
20
o
Al Ru
Figura 29. Utilizacin digestiva y nutritiva de zinc
Ratas alimentadas con la dieta control EJ o dietas que contenan frmulas:
A polvo U A lq. esterilizadaU R polvo EJ B lq. UHT m
310
Discusin de Resultados
El coeficiente %A/I fue ligeramente inferior en los dos grupos que tomaron una dieta
que contena frmula en polvo; y los ndices %R/A y %R/I fueron significativamente
inferiores en estos dos grupos con respecto al control. Estos resultados,aunque discretos, llevan
a pensar que el procesamiento industrial de deshidratacin ha desencadenado la reaccin de
Maillard, puesto que como se ha indicado, se produce con ms intensidad en medios con un
bajo contenido de humedad, como qued reflejado en los valores de furosina obtenidos para
la frmula infantil en polvo A, pero no la B , frente a las formas lquidas (tabla 71). De
acuerdo con Hurrel (1990) las premelanoidinas absorbidas, son responsables de las elevadas
excreciones urinarias de zinc, lo que se observara en nuestro estudio por eso cierta
disminucin del coeficiente R]A, mientras que las melanoidinas, no absorbibles,
interaccionaran con el elemento en el tracto gastrointestinal.
311
Discusin de Resultados
4.3.8.Biodisponibilidad el cobre
Las ratas alimentadas con la dieta control ingirieron significativamente ms cobre que
las que comieron la dieta de referencia, y sin embargo este segundo grupo elimin una
cantidad de cobre por heces significativamente mayor; esto determin que su absorcin y
utilizacin digestiva fueran aproximadamente la mitad respecto al grupo control y por lo tanto
significativamente inferiores. Segn estos resultados, se podra concluir que un contenido de
un 14% de grasa, frente al 5%, en la dieta para ratas mejora notablemente la utilizacin del
cobre (tabla 72).
La ingesta de cobre del grupo control fue significativamente superior que la de los
cuatro grupos experimentales y paralelamente su eliminacin fecal fue ms alta que la del
resto, aunque slo lleg a ser significativamente mayor que la del grupo A polvo y A lquido
312
Discusin de Resultados
esterilizada (tabla 73). Todos los animales que consumieron una dieta que contena alguno de
los preparados para lactantes absorbieron significativamente menos cobre en comparacin con
el control, pero a nivel de la eficacia de utilizacin digestiva nicamente la correspondiente
a los dos grupos de ratas que tomaron frmula en polvo fue significativamente menor frente
al grupo control, lo cual se relaciona con el balance de zinc, donde estos dos mismos grupos
presentaron los valores de %A/I ms bajos, aunque en este ltimo mineral la regulacin se da
a nivel metablico fundamentalmente.
Entre los primeros estudios llevados a cabo sobre la reaccin de Maillard estn los
ensayos in vitro en los que Herdlicka (1976) seala que cuando se calientan mezclas de
glucosa-glicina o fructosa-glicina en presencia de sales de Cu o Fe se forman pigmentos
insolubles que actan como agentes quelantes de estos cationes, y estos pueden incluir en su
utilizacin digestiva. Este mecanismo inhibitorio podra relacionarse con que los iones Cu son
fuertemente adheridos por los productos avanzados de la Reaccin de Maillard originados en
dichas mezclas (Rendeman e Inglett, 1984) y al introducirlos en las dietas para animales estos
podran afectar la biodisponiblidad de los cationes (Rendelman, 1987). En nuestros ensayos
solo determinamos la presencia de premelanoidinas a travs de flhrosina, pero segn los
resultados in vivo cabria pensar que coexistiesen tambin productos avanzados de la reaccin
de Maillard, responsables de la presencia ms alta de cobre en las heces alterando as su
utilizacin digestiva o bien que las premelanoidinas hayan participado en este proceso.
313
Discusin de Resultados
314
Conclusiones
Resmen y Conclusiones
5. RESUMEN Y CONCLUSIONES
Una vez conocidos los resultados del estudio anterior, se estudi la influencia del
tratamiento trmico industrial implicado en la elaboracin de preparados para lactantes y se
utilizaron un preparado para lactantes A en forma de polvo y lquida esterilizada
convencionalmente, que fue la misma marca comercial empleada en el estudio de los efectos
del calentamiento domstico, y otro preparado B en forma de polvo y liquido UIHT. Dichas
frmulas infantiles fueron estudiadas mediante la disponibilidad in vitro. Adems, se
elaboraron dietas para ratas en crecimiento y se realiz un ensayo de balance frente a un
grupo control. Las determinaciones efectuadas fueron similares a las indicadas para el estudio
antenor.
315
Resmen y Conclusiones
316
Resmen y Conclusiones
317
Bibliografa
Bibliografa
6. BIBLIOGRAFA
AARLE, C., BONTENBAL, E., POTJEWIJD, R.E. (1997). The dialysability of calcium,
magnesium and iron as a method to compare in vtro boavailability of minerals in foods. En:
Book of Abstracts, Bioavailability 97. Wageningen, The Netherlands.
ADACHI, S, Y ITOH, T. (1981). Kagaku to Seibutsu 19, 643 Chem. Abst. 96: 85851 (1982).
ALAIS, CH., KJGER, N. JOLLES, P. (1967). Action of heat on cow y-casein. Heat caseino-
glycopeptide. J. Diary Sci., 59, 1738-1743
ALAIS, C., LORIENT, D., HUMBERT, 0. (1978). Pan. Nutr. Aliment. 32, 511-521.
ALEGRIA, A., BARBERA, R., FARRE, R., GUILLEM, A., LARGADA, M.J. (1997). In
vitro availability of infant formulas supplemented with zinc salt?. In: Books of Abstracts of
Bioavailability 97. Wageningen, te Netherlands.
321
Bibliografa
ANGELO, A.J. Y BAILEY, M.E. (1987). Over flavour of meat. Academic Press,
Orlando, USA.
APRJYANTONO, A. Y AMES, J.M. (1993). Xylose -Lysine model system. The efect
322
Bibliografa
ASHKENAZI, A., LEVIN, S., DJALDETTI, M., FISHEL, E., BENVENISTI, D., (1973).
The syndrome of neonatal coper deficiency. Pediatries 52: 525-533.
ASPE, 1., VAQUERO, M.P., NAVARRO, M.P. (1992). Changes in the speciation and
utilization of calcium in rats by the presence of untreated or heated casein,
seperately or in combination with glucose and fructose En: Bioavailability
93. Nutritional, Chemical and Food Processing Implications of Nutrient
Availability. Ed: Schlemmer, U. PP 68-73.
323
Bibliografa
BELIKOV, VM., ANTONOVA, T.V., BEZRUKOV, M.G. (1981). Nahrung 25, 91-97.
BELLOMENTE, G., BONIGLIA, C., CARRATU, B., FILESI, 5., GIAMMAARJOLI, 5.,
MOSCA, M., SANZINI (1990). Protein and Lipid composition of human milk and
infant formulas: comparison and nutritional consequences. Ann. Ist. Super.
324
Bibliografa
BERM{ART, F.W., GAGLIAPDI, E.U., TOMAR.ELLI, R.M. & STRIBLEY, R.C. (1965). 3.
Dairy Sci. 48, 399.
BLILEVELD, C.M.A., VONK, R.K., OKKEN, A., FERNANDES (1987). Fat absorption
in preterm infants fed a taurine-emiched formula. Eur. J. Pediatr. 146,
128-31.
BMDP 1992 BMDP Statistical Software. Univ. California Press, Berkeley, CA,
USA.
325
Bibliografa
BOWERS, J., FRYER, B. (1972). Thiamin and Riboflavin in cooked and frozen
reheated turkey. J. Amer. Dietet. Assoc., 60, 399.
BRUNE, L.; ROSSANDER, L.; HAtLBERG, L. (1989) Iron absorption and phenolic
compounds: Importance of different phenolic structures. Eur. J. Clin. Nutr.
43, 547-558.
BRUNSER, O., ESPLINOZA, J., PIRAYA, M., CRUCHET, S. & GIL, A. (1994). Effect
of dietary nucleotide dupplementation on dianhocal disease in infats. Acta
Paediatrica 83, 188-191.
326
Bibliografia
York publishers.p.254-291.
BURTON, H., FORD, J.E., PERKDJ, A.G., PORTER, J.W.G., SCOTT, K.J., THOMPSON,
S.Y.T., TOOTHILL, J., EDWARDS-WEBB, J.D. (1970). J. Diaiy Res., 51, 637.
BUSH RT.(1970). Lactulose: an ideal laxative from children. New Zeal. Mcd. J. 71: 364-
.365.
BUSTAMANTE, 5. A., SANCHES, N., CROSIER, J., MIRANDA, U., COLOMBO, 6. &
MILLER, M. J. 5. (1994). Dietar> nucleotides: effects on te gastrointestinal system in
swine. Journal of Nutrition 124, 1495-1565.
BUTEE, N.F., GARZA, C., OBRIMJ SMITH E., WILLIS, C., NICHOLS, B. (1987).
Macro- and trace mineral intakes of exclusively breast-fed infants. Am. J. Clin. Nutr., 45,
42-8.
BUTIE, N.F., WONG, W.W., FER.LIC, L., OBRIAN SMITH, E., KLEIN, P.D. & GARZA,
C. (1990). Energy expenditure and deposition of breast-fed infants during early infancy.
Pediatric Research 28, 63 1-640.
CALVO, M.S. (1993). Dietary phosphorus, calcium metabolism and bone. 3. Nutr. 123,
327
Bibliografa
1627.
CANDIANO, G., ZETIA, L., BENFENATI, E., ICARDI, G., QUEIROLO, C., GUSMANO,
R., GHIGGER.I, G.M. (1990). Characteriziation of te major browning derivatives of lysine
with 2-amino-2-deoxy-D-glucose. En: Ihe Maillard Reaction in Food Processing, Human
Nutrition and Physiology. Pp. 109-114. Ed. Finot, P.A., Aeschbacher, H.U., Hurrel, R.F.,
Liardon, R. Birkhuser Verlag. Basel.
CARPENTER, K.J. (1982). The Estimation of available lysine in foodstuffs after Maillard
reactions. Nestl Research News, 78-86.
CERRUTTI, P., RESNIK, S.L., SELDES, A., FERRO FONTN, C. (1985). Kinetics of
deteriotative reactions in models food systems of high water activity: glucose loss, 5-
Hydroxymethylfurfural accumulation and fluorescence development due to nonenzymatic
browning. J. Food Sci., 50, 627-630.
COOK, D.A. (1989). Nutrient levels in infant formulass: technical considerations. J. Nutr.
119, 1773-1778. En: Nutricin del Lactante. FOMON, S.J. (1995). Ed.: Mosby/Doyma
Libros. Cap.: 27 Leches aritificiales para lactantes. pp.4l5-43l.
COOK, D.A. (1973). Availability of magnesium, balance studies in rats with various
inorganic magnesium salts. J. Nutr. 103, 1365-1370.
328
Bibliografa
CORZO, N., DELGADO, T., TROYANO, E., OLNO, A. (1994). Ratio of lactulose to
furosine as indicator of quality of commercial millcs. J. Food Prot .57, 737-739.
COULTER, S.T., THOMAS, E.L. (1968). Enrichment and fortification ofdairy products and
margarmne. Journal of Agriculture and Food Chemistry 16, 355-381.
CHAO, L.S. Y GORDON, D.T. (1983). Influence of fish on te bioavailability of plant iron
in the anemie rat. J. Nutr. 113, 1643-1652
CHEN, ST., WU S.H. , WANG K.T. (1989). Rapid isomerization of optically active amino
acids by microwave oven-based heating treatment. International Journal Pept. Protein Res.,
33, 73-75.
CHENG , A.L.S., MOREHOUSE, M.G., DEUEL, H.J.. Jr. (1949). The effect of the level
of dietar> calcium and magnesium on the digestibility of fatty acids, simple triglycerides and
some natural and hydrogenated fats. J. Nutr., 37, 237. Citado por: Speckmann, E: W.,
DAHL, CA., MAITEWS, M.E., MARTHE, E.H. (1978). Cook/chill food service systems,
Microbiological quality of beef loaf at five process stages. J.Food Prot. 41, 788-93.
329
Bibliografa
DALGLEISH, DG. (1989). Thc behaviour of minerals in heated milk En: Bulletin of the
International Diary Federation n0 238/1989, FIL-IDE.
DALLMAN, M.E. (1989). Upper limits ofiron in infant formulas. J. Nutr. 119, 1852-1855.
En: Nutricin del Lactante. FOMON, S.J. (1995). Ed.: Mosby/Doyma Libros. Cap.: 27
Leches aritificiales para lactantes. pp.415-43l.
DALLMAN, P.R. (1990). Progress in the Prevention of Iron Deficience in Infants. Acta
Paediatr. Scand. Suppl. 365: 28-37.
DAVIES, N.T., (1979). Anti-nutrient factors affecting mineral utilization. Proc. Nutr. Soc.
38: 121-128.
DE JONG, F.A., SCHREIBER, 0. (1987). Messenger RNA levels of plasma proteins in rat
liver protein depletion and refeeding. J.Nutr. 117, 1795-1800.
DECAREAU, R.V. (1985). Microwaves in the Food Processing Industry. Academie Press,
330
Bibliografa
New York.
DELGADO, T., CORZO, N., SANTA-MARIA, G., JIMENO, M.L., OLANO, A. (1992).
Determination of furosine in milk samples by ion-pair reversed phase liquid
chromatography. Chromatographia 33:374-376.
DELUCCHI, C., PIlA, M. L FAUS, M. J., MOLINA, J. A., UAUY, R. & GIL, A. (1987).
.,
DILE, C.W., ROBERTS, W.M., AURAND, L.W. (1962). Production of sulfur compounds
rn skimmilk heated by steam injection J. Diar> Sci. 45, 1332-1335.
DONOVAN, S.M. & LNNERDAL, B. (1989). Non prtein nitrogen and true protein in
infant formulas. Acta Paedriatica Scandinavica 78, 497-504
DRAPER, A., LEWIS, J., MALLHOTRA, N., WHEELER, T.,H.,L. (1993). The energy aud
nutrient intakes of different types of vegetarian: a case for supplements?. Brit. J. Nutr., 69,
3-19.
DUNDLEY, W.L., FRANKLIN, .D., PANGBORN, R.M. (1962). Food Technology 16, 112.
DWORSCHAK, E., HEGEDUS, M. (1974). Acta Alim. 3, pag. 337. Citado por Hurrel, R.F.
331
Bibliografa
EVANS, 0W., JOHNSON, P.E. (1978). Copper-and zinc-binding ligands in the testinal
mucosa; in Kirchgessner, Trace elements metabolism in man and animals.vol3 (Institut fr
Ernhrungsphysiologie, Freising-Weihenstephan.
332
Bibliografia
EZEQUIEL, E. (1967). Intestinal iron absorption by neonates and some factors affecting it.
J. Lab. Clin. Mcd. 70, 138-149.
FAIRWEATHER-TAIT, S.J., SYMSS, L.L. (1989). The effect ofMaillard reaction products
on zinc bioavailability. Nutrient availability, chemical and biological aspects. Ed. Southgate,
D., Johnson, 1., Fenwick, G.R Royal Society of Chemistry, Thomas Graham House,
Cainbridge. England. pp. 229-231.
FAIRWEATHER-TAIT, S.J., BALMER, S.E., SCOTT, P.H. & MINSKI, M.J. (1987).
Lactoferrin aud iron absorption in newborn infants. Pediatrie Research 22, 65 1-654.
FAKAMBI, L., FLANZY, J., FRANCOIS, A.C. (1969). Comptition in vivo entre acides
gras et phosphore pour la formation de compss insolubles de calciuni R. Acac. Sc. Paris,
269 (D)., 2233-2235.
FARKAS, C.S. y LE BICHE, W.H. (1987) Effect of Tea and Coffe Consumption on Non-
Haem Iron Absorption. Sorne Questions about Milk. Human Nutrition: Clinica! Nutrition,
41C: 161-163.
333
Bibliografa
FARRER, K.T.H. (1982). Light damage in milks, Farrer Consultants, Victoria, Australia.
FERNNDEZ MARTIN, F., MORAIS, F., OLNO, A. (1980). En: Food Processing
Engineering Vol. 1, Eds. Linko, P., Malkki, J., Olkku, J., Lainkari, J. Applied Sci.
Publishers, London, pp.523.
FILER, L.J., MATTSON, F.H., FOMMON, S.J. (1969). Triglyceride configuration and fat
absorption by the human infant. Journal of Nutrition, 99, 293-298.
FINE, K.D., SANTA ANA, C.A., PORTER, J.L., FORDTRAM, J.S.(1991). Intestinal
absorption of magnesium from food aud supplements. J. Clin. Invest. 88:.396-402
FINOT, P.A., MERABET, M. (1993). Nutritional and safety aspects of microwaves. History
and critical evaluation of reported studies. nter. 3. Food Sci. Nutr. 44, (Suppl. 1). 565 - S75.
334
Bibliografa
FINOT, P.A., BRJCOUT, 1., VINI, R., MAURON, J. (1968). Identification of a new lysinc
derivate obtained upon acid hydrolysis of heated milk. Experientia 24: 1097-1099.
FINOT, P.A.,DEUTSCH, R., BUJARD, E.(1981). The Extent of the Maillard Reaction
During the Processing of Milk.. Prog. Fd. Nutr Sci. 5, 345-355.
FINOT, P.A. (1983). Lysinoalanine in food proteins. Nutr. Abst. Rey, clin. Nuir. A 53, 67-
80.
PINOl, P.A., MAGNENAT, E., GUIGNRD, G., HURRELL, R.F. (1982). The behaviour
of tryptophan during early and advanced Maillard reactions. nt. J. Vitam. Nutr. Res. 52, 226
FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda edicin. Ed. Interamiericana, PP 119.
FOMON, S.J. (1995). En: Nutricin del Lactante. Ed.: Mosby/Doyma Libros. Cap.: 27 Leches
aritificiales para lactantes. pp.4l5-431.
FOMON, Si., OWENM G.M., TENSEN, R.L., THOMAS, L.N, (1963). Am. 3. Clin. Nutr.
12, 346.
335
Bibliografa
FORD, J.E., PORTER, J.W.G., THOMiPSON, S.Y. (1974). Int. Diary Congr. New Delhi, Vol.
lE, 567.
FORD, J.E., PORTER, J.W.G., THOMIPSON, S.Y., TOOTHILL, J., EDWARDS-WEBB, J.D.
(1969). Effects of UHT processing aud of subsequent storage on te vitamin content of
milk. J. Diary res. 36, 447-454.
FORD, JE., HURRELL, R.F. & FINOT, P.A.(1983). Brit. J. Nutr., 49, 355
FORD Y SALTER (1966).FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda edicin. Ed.
Interamiericana, PP 119.
137.
FRIEDMAN, M., GUMBMNN, M.R. (1984). The nutritive value and safety of D-
phenylalanine and D-tryosine in mice. J. Nutr. 114, 2089-2096.
FRIEDMAN, M., ZAHNLEY, F.C., MASTERS, P.M. (1981). Relationship between in vitro
digestibility of casein and its content of lysinoalanine and D-amino acids. 3. Food Sci.
336
Bibliografa
46,127-131.
FRITSCH. R.J. YKiLOSTERMEYER, H.Z. (1981). Lebensm. Unters. Forsh. 172,440. Citado
por: SCOTT, K.J. (1989). Micronutrients in milk products En: Micronutrients in milk
products aud milk based food products Editado por: Renner, E. Elsevier Science Publishers
Ltd. Essex, Englaud, PP 71-123.
FUJIMOTO, K., KANDEA, T. (1973). Brown discoloration of fish products IV. Nitrogen
content of te browning substance. Nippon Suisan Gakkaishi, 1973, 39, 185-90.
FUJIMOTO, K., SAlTO, J.y CANEDA,T. (1971). Nippon Suisan Gakk., 37, 44-47. Citado
por: Adrin J.(1974). Nutritional aud physiological consequences of the Maillard reaction.
World Rey. NUtr. Diet., 19, 71-72
FURMSS, D.E., VUICHOUD, J., FINOT, P,A,, HtJRRELL, R.F. (1989). The effect of
Maillard reaction products o zinc metabolism in the rat. British J. Nutr., vol. 62 (3)., 739-
749.
FURNISS, DE., HUIRRELL, R.F., FINOT, P.A. (1986). Modification of urinar> zinc
excrtion in the rat associated with the feeding of Maillard reaction products. Acta
Phannacologica et Toxicologica 59, 57, 188-191.
337
Bibliografa
phosphorus utilisation in diets containing raw, cooked or canned tuna. Influence of 1 and 3
years storage time International Journey of Food Sciences and Nutrition 45, 237-247.
GARNER, S.C., ANDERSON, J.J., AMBROSE, W.W. (1995). Skeletal tissues and
Mineralization.In: Calcium and Phosphorus in Health and Disease.Chapter 7, by CRC Press
Inc.
GIL, A., PITA, M., MARTINIEZ, A., MOLINA, J. A. & SNCHEZ-MEDINA, F. (1986b).
Effect of dietary nucleotides on the plasma fatty acids in at-tenn neonates. Human Nutrition
40C, 185-195.
GLAHN, R.P., WIEN, E.M., VAN CAMPEN, D.R, MILLER, D.D. (1996). Caco-2 cel iron
uptake from meat aid casein digests paralcs in vivo studies: use of a novel in vitro method
for rapid estimation of iron bioavailability, J. Nutr. 126: 332-339.
GLAHN, R.P., VAN CAMPEN, D.R. (1997). Iron uptake is enhanced in Caco-2 cel
monolayers by cysteinc and reduced cysteinyl glycine. 3. Nutr. 127: 642-647.
GLAHN, RP., GANGLOFF, M.B., VAN CAMPEN, DR., MILLER, D.D., WIEN, E.M.,
NORWELL, W.A. (1995).Bathophenanthrolene disulfonic acid anO sodium dithionite
effectively remove surface-bound iron from Caco-2 cellmonolayers. J. Nutr. 125: 1833-1840.
338
Bibliografa
GOEDHART, A.C. Y BINDELS, J.C. (1994). The composition of human milk as a model
for te design of infant formulas: recent findings and possible applications. Nutrition
Research Reviews, 7, 1-23.
GRF, E. (1983). Calcium binding to phytic acid. J. Agrie. Fd. Chem. 31: 85 1-855.
GRAHAM, L.A., CAESAR, J.J., BUIRGEN, A.S.V. (1960). Gastrointestinal absorption and
excretion of Mg 28 in man.Metab Clin Exp 9:646-659.
GRIVAS, 5., OLSSON, K., NYHAiMIMAR, T. (1983). Creatinine aid Maillard Reaction
Products as precursors of mutagenie compounds formed in fried beef. En: The Maillard
reaction in food and nutrition. Eds: Waller, G.R. y Feather, MS. ACS Symposium Series.
American Chemical Society, Washington D.C. PP 507-MS.
HALLBERG (1981). Bioavaiability of dietar> iron in man Ann. Rey. Nutr. 1:123-147.
339
Bibliografa
HAEKNESS, JE. Y WAGNER, J.E. (1995). The biology aid medicine of rabbits aid
roedents. 4th cd. Ed.: Williams & Wilkins. Baltimore, U.S.A.
HARPER, W. (1976). In: W. Harper aid C. Hall (eds.), Dairy Technology aid engineering.
AVI, Westport, Connecticut,pp. 141-169,572.
HARRIS, R.S. Y KARMAS, E. (1975). Nutritional Evaluation of Food Processing. The Avi
Publishing Compan>, Inc. Y cd.
HARRISON, G.G., GRAVER, E.J., VARGAS, M., CHIJRELLA, H.R. & PAIJLE,C.L.
(1987)., Growth aid adipos> of term infants fed whey-predominant or casein predominait
formulas or human milk. Journal of Pediatric Gastroenterology aid Nutrition 6, 739-747.
HARRISON, D.L. (1980). Microwave versus conventional cooking methods, effects on food
quality attributes. Journal of Food Protection. Vol. 43, No. 8, 633 - 637.
HARRISON, H.E. (1984). Phosphorus. En: Present Knowledge in Nutrition. Sth edn, cd. RE
340
Bibliografa
HAIRZER, G., HASCHKiE, F., (1989). Micronutrients in human milk. En: Micronutrients
in milk aid milk-based products, captulo 3.Ed. E. Renner, E. Elsavier Science Publishers
Ltd., London y New York, PP. 125-237.
HRZER, G., HAUG, M. & B1TNDELS, J.G. (1986). Biochemistry ofmaternal milk in carl>
lactation. Human Nutrition:Applied Nutrition 40A, Suppl.1, 11-18.
HARZER, G., DIETERICH, T., GEIER, H.(1986). Ernlihr Umschau 33, 91. Citado en
Harzer y Haschke(1989).
HASCHKE, F., ZEIGLER, EE., EDWARDS, BB., FOMON, SJ., (1986). Effect of iron
fortification of infant formula on trace mineral absorption J Paedriatr Gastroenterol
Nutr.5:768-773
HASHIBA, H.1982). The browning reaction of Aniadori compounds derived from various
sugars Agric. Biol. Chem. 47, 547-8.
HEARN, T. L., SGOUTAS, S.A., SOUTAS, D. S., HERN, J.A. (1987). Stability of
polyunsatuurated fatty acids after microwave cooking of fish. Jour. Food Sci. 52, No. 5,
1430-1431.
HEGARTY, P.V.J. (1982). 1 nfluence of food processing on nutritive value of proteins. En:
Food proteins. Fox P.F. Y CONDON J.J. Applied Science Publishers. London Y New York.
pp.: 145-154.
HEGSTED, D.M. Y LINKSWILER, H.M. (1981). J. Nutr., 111,24. Citado por Linder, MC.
341
Bibliografa
HEINE, W., TIESS, M. & WUTZE, K.D.(1986). N-tracer investigations of the physiological
availability of urea nitrogen in mothers milk.
REINE (1992). Aspectos cualitativos de las protenas de la leche humana y de las frmulas:
patrones de aminocidos. En: Metabolismo de las Protenas en la Infancia. Nestl Nutrition
Services. Resumen del 330 Seminario de Nestl Nutricin.
HEIMNG, M.J., NOMMSEN, L.A., PEERSON, J.M., LNNENDAL, B. & DEWEY, K.G.
(1993). Energy aid protein intakes of breast-fed aid formula-fed infants during the first year
of life aid their association with growth velocity:the DARLING study. American Journal Of
Clinical Nutrition 58, 152-161.
HENLE, 1., ZEHETNER, G., KLOSTERMEYER, H. (1995). Fast aid sensitive detrmination
of furosine. Z. Lebensm. Unters. Forsch. 200, 235-237.
HENRY Y KON (1950). En: FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda edicin.
342
Bibliografa
HERBERT, V., (1987). Recomnended dietar> intakes of folate, vitamin B12 and iron in
humaus. Am. J. Clin. Nutr.,45, 661-668.
HESTED, M., SCHIJETTE, S.A. ZEMEL, M.B. LINKSWILEER, H.M. (1981). Urinary
calcium aid calcium balance in young men as affected by level of protein aid phosphorus
intake. J. Nutr. 3, 553-562.
HODGE, J.E. (1967). Origin of flavors in food. Nonenzymatic browning reactions. En:
Chemistry aid Ph>siology of Flavors. Eds.: H. W, Schulz, EA. Da> y L.M. Libbey. AVI
Pub., Westport, Connecticut. pp. 465-491.
HODGE, LE. (1953). Chemistry of browning reaction in a model system. J. Agric. Food
Chem. 1, 928-948.
HOLT, C. (1985). The milk salts: theirsecretion, concentrations aid physical chemistry. En:
Developments in Diary Chemisrty.-3: Lactose aid Minor Constituents. (P.F.. Fox, cd., PP
143-18. Elsevier, London.
HOMMA, 5., FUJ1MAKI, MM., (1981). Growth response of rats fed a diet containing non--
dialyzable melanoidin. Prog. Food Nutr. Sci. 5, 209-16.
HOWIE, P.W., FORSYTH, J.S., OGSTON, S.A., CLARK, A.& FLOREY, C.DU V. (1990).
Protective effect of breast feeding against infection. British Medical Joumal 300, 11-16.
HU?RRELL, R.F., FURNIS, D.E., BURR, 3., ET AL. (1989). Iron fortification on infant
cereals: a proposal for the use of ferrous fumarate or ferrus succinate. Am. 3. Clin. Nutr. 49:
1274-1282.
343
Bibliografa
HURRELL, R.F., BERROCAL, R., LYNCH, S.R., ET AL. The influence of bovine milk
proteins on iron absortion in man. En Hercberg S, Galan P, Dupin H, editors:Recent
knowledge on iron aud folate deficiencies in te world. Colloque INSERM 197:265, 273.
HURRELL, R.F., LYNCH, S.R., TRINIDAD, T.P., DASSENXO, SA., COOK, J.D. (1989).
Iron absorption in humans as influenced by bobine milk proteins. Ant 3. Clin. Nutr. 49,
546-52.
HU?RRELL, R.F., FINOT, itA., FORD, J.E. (1983). Storage of milk powders under adverse
conditions, 1. Losses of lysinc aid other essential amino aeids. British J. Nutr., 49, 343-354.
HIJRRELL, R.F. & FINOT, P.A. (1983). In: Nutritional adequacy, nutrient availability aid
needs. J. Mauron (cd.), Birkh~user Verlag, Basel,p.135.
HURRELL, R.F., Y FINOT, P.A. (1985). Effects of food processing on protein digestibility
aid aminoacid availability. En: Digestibility aid aminoacid availability in cereals aid
oilseeds. pp.: 233-246. Finle>, J.W., y Hopkins, D.T. (Eds.), American Association of
Cereals Chemists, Inc., St. Paul, Minnesota.
I-IURRELL, RiF., BERROCAL, R., NEESER J.R, SCHWEIZER, T.F., HILPERT, H.,
TRAITLER, H., COLAROW, L., LINDSTR.ND, K. (1989). Micronutrients in Infant
Formula In:Micronutrients in Milk aid Milk-Based Food Products. Ed. Renner E. Elsevier
Science Publishers Ltd. Essex, Englaid, PP 239-294.
344
Bibliografia
HURRELL, R.F., DAVIDSSON, L., REDDY, M., KASTENMAYER, P., COOK, J.D. (1998).
A comparison of iron absorption in adults and infants consuming identical infants formulas.
B. J. of Nutrition,79, 31-36.
HURRELL, R.F., FII4OT, P.A., FORD, J.E. (1983). Storage of milk powders under adverse
conditions. 1. Lossess of lysine and other essential amino acids. Br. J. Nutr. 49, 343-354.
HURRELL, R.F. (1984). En: Developments in Food Proteins, vol. 3 (B.J.F.Hudson, cd).
Elsevier, London, Pp. 2 13-244.
HUIRRiELL, RIF., (1992). Prospects for improving the iron fortification of foods In: Fomom
5. Zlotkin 5 (eds). Nutritional anemias. Rayen press, New York, PP 193-208.
51,Suppl. 1, 54-58
HUTION Y PATTON (1952). The origin of sufhydril groups in milk proteins aud their
contribution to cooked flavour J. Diar> Sci., 35, 699.
IFT (1989). Microwave food Processing, A Scientifc Status Summary by the IFT Expert
Panel on Food Safety aid Nutrition. Food Technology, 43 (1)., 117-126.
345
Bibliografa
JANAS, L.M., PICCINO, M.F. & HATCH, T.F. (1987). Indices of protein metabolism in
term infants fed either human milk or formulas wit reduced protein concentration aid various
whey/casein ratios. Journal of Pediatrics 110, 838-848.
JANAS, L. M. & PICCIPINO, M.F. (1982). The nucleotide profile of human milk. Pediatric
Research 16, 659-662.
JRVENPAA KL., RAJETA, N.C.R, RASSIN, 11K. & GAULL, G.E. (1982A). Milk
,
protein quantity and quality in te term infant.I.Metabolic responses aid effects on growth.
Pediatrics 70, 2 14-220.
JRVENPA A.L., RAJETA, N.C.R, RASSIN, 11K. & GAULL, G.E. (1982B). Milk
,
protein quantity aid quality in te term infant.II. Effects on acidic aid neutral amino acids.
Pediatrics 70, 221-230.
JELLIFFE, D.B. Y JELLIEFE, E.F.P. (1978). World consequences of carl> weaning. En:
Human milk in the modern world. Phychosocial, nutritional aid economic significance.
Oxford, 1978. Oxford University Press, Pp. 241-299.
JI, H., BERNHARD, R.A. (1992). Effect of Microwave Heating on pryzine formation in a
model system. J. Sci. Food Agric. 59, 283-289.
JOHNSON, PE., LYKKEN, G., MAHALKO, J., MILNE, D., INMAN, L., SANDSTEAD,
H.H. (1986). Ihe effect ofbrowned aid unbrowned corn products on absorption ofzinc, iron
and copper in humais. En: The Maillard reaction in foods aid nutrition. Eds. Wafler, GR.
y Feather, MS.. Am. Chem. Soc. U.S.A. pp. 349-360.
346
Bibliografa
JONSSON, L. (1989). Nutritional changes during microwave cooking aud reheating. Var
Fda 41(4)., 188-194.
KAANANE, A., Y LABUZA T.P. (1989). The Maillard reaction in foods. En: The
Maillard reaction in aging, diabetes, aid nutrition. Alan R. Liss, Inc. pp: 301-327.
KANNAN, A. Y JENN?ESS, R. (1961). Relation on milk serum proteins and milk salts to
the effects of heat treatment on rennet clotting J. Diar> Sci., 44, 822.
KAYSOKEFALOU, M. Y MILLER, D.D. (1993). Lean beef aid beef fat interact to enhance
nonheme iron absortion in rats. J. Nutr., 123, 1429-1434.
<ASAI, H., YAMAIZUMiI, Z., SHIOMI, 1., YOKOYAMA, 5., MIYAZAWA, T.,
WLKABAYASHI, K., NAGAO, M., SUGIMURA, T., NISHIMURA, 5. (1981). Chem. Lett.
485-488. Citado por: JGERSTAD, M., LASER REUTERSWARD, A., STE, R.,
DAHLQVIST, A. GRIVAS, 5., OLSSON, K., NYHAMMAR, 1. (1983). Creatinine and
Maillard Reaction Products as precursors of mutagenie compounds formed in fried beef. En:
The Maillard reaction in food and nutrition. Eds: Waller, G.R. y Feather, M.S. ACS
S>mposium Series. American Chemical Society, Washington D.C. PP 507-518.
KATO, Y., MATSUDA, T., KATO, N., NAKAMURA, R. (1988). Browning aid protein
polymerization induced by amino-carbonyl reaction of ovalbumin with glucose aid lactose.
J. Agric. Food Chem., 34, 35 1-355.
<ATO, Y., MATSUDA, T., KATO, N., WATANABE, K., NAXAJvIURA, R. (1986).
347
Bibliografa
Browning aud insubilization of ovalbumnin by the Maillard reaction with some aldohexoses.
J. Agric. Food Chem., 34, 35 1-355.
KAUP, S.M., BEHLING, A.R., CHOQUETTE, L., GREGER, IL. (1990). Calcium and
magnesium utilization in rats: effect of dietar> butterfat aid calcium and of age J. Nutr. 20,
266-273.
<AL]?, SM., BEHLING, A.R., CHOQUETTE, L., GREGER, J.L. (1990). Calcium aid
magnesium utilization in rats: effect of dietar> butterfat and calcium and of age. J. Nutr., 20,
266-273.
KEEN, C.L., & HU?RLEY, L.S. (1980). Developmental changes in concentration of iron,
copper, aid zinc in mouse tissues. Mech. Ageing Deve. 13, 161-177.
KEITH, MO., BELL, J.M. (1988). Digestibility of nitrogen aid amino acids in selected
protein sources to fed mice. J. Nutr. 118: 561-8.
KiELSAY, J.L., Y PRATHER, E.S. (1983). Mineral balances of human subjects consuming
spinach in a Iow-fiber diet aid in a diet containing ftuits aid vegetables. Am. J. Clin. Nutr.,
38: 12-19.
<lES, C.V. (1988). Mineral utilization of vegeterais: impact in fat intalce. Am. J. Clin.
Nutr., 48, 884-887.
<lES, CV. (1988). Mineral utilization of vegetarians: impact of variation in fat intake. Am.
j. Clin. Nutr., 48, 884-887.
<lES, CV., (1985). Effect of dietar> fat aid fiber on calcium bioavailability En:
348
Bibliografa
KIMIAGAR, M., LEE, T.C., CHICHESTER, C.O. (1980). Long term feeding effects of
browned egg albumin to rats J. Agrie. Fd. Chem. 28, 150-155.
KING, A., BOSCH, N. (1990). Effects of NaC aid CIK en rancidity of dark turkey meat
heated by microwave. J. Foed Sci., 55,1549-1551.
KLEII4, L. B., MONDY, N. 1., (1981). Comparison of microwave aud conventional baking
of potatoes in relation to nitrogencus constituentes and mineral comoposition. J. Foad Sci.
46, 1874-1880.
KLOSTERMEYER, H., RABBEL, K., REIMERDES, E.-H. (1975) Milchwiss. 30, 194-198.
349
Bibliografa
LABUZA, T.P., Y SALTMARCH, M. (1981). Kinetics of browning and quality loss in whey
powders diring steady state and non-steady state storage conditions. 3. Food Sci., 47, 92-96.
LABUZA T P, SALTMARCH M 1981 Kinetics of browning and protein quality loss in whey
powders during steady state aud nonstead> state storage conditions. 3 Dair> Sci 47 92-113.
LARSON Y ROLLERI (1955). Heat denaturation of the specific serum proteins in milk 3.
Diar> Sci. 38, 351-360.
LAL], K., (1986). Phosphate disorders. In kokko JI, Taimen RL, editirs: Fluids aid
electrolytes, Philadelphia. W.B. Saunders,pp. 398-470.
LAU, B. L. 1., KiKUDA Y., ARNOTT, D.R. (1989). Effect of milk fat on the stability of
vitamin A in ultra-high temperature milk. 3. Dair> Sci. 69, 2052-2059.
LEE, C.M., SHERiR, B., KOH, Y. N. (1984). Evaluation of kinetic parameters for a glucose-
lysine Maillard reaction. 3. Agric. Food. Chem., 32, 379.
LESLIE, A. J. Y <ALDOR, 1. (1971). Liver aud spleen nonheme iron and ferritin
350
Bibliografa
LEVEY, G.A. (1982). Light, Milk and Vitamines, Paperboard Packaging Council, New York,
U.S.A.
LINDBERG, J.S., ZOBITZ, M.M., POINDEXTER, J.R., PAK, CYC. (1990). Magnesium
bioavailability from magnesiuni citrate and magnesium oxide. 3. Am. Col. Nutr. 9: 48-55
LINDER, M.C. (1988b). Nutricin> metabolismo de los elementos traza. En: Nutricin.
Aspectos bioqumicos, metabolcos y clinicos. Linder, M.C. ed. Editorial Eunsa, Pamplona.
Cap. 7. pp. 189-241.
LINGNERT, H. (1990). Development of the Maillard reaction during food processing. En:
Ihe Maillard reaction in food procesing, human nutrition an physiology. Ed. Finot, P.A.,
Aeschbacher, H.U., Rurrel, R.F. Y Liardon, R. Birkh~user Verlag. Basel.
LII) Y.M, NEAL P., ERNST J. ET AL.(1989). Absorption of calcium and magnesium from
fortified human millc by ver> low birth weight. infants.Pediatr Res 25:496-502.
LONNERDAL, B. (1989). Trace elements nutrition in infants. Annu. Rey. Nutr. 9:109-25.
LONN?ERDAiL, B. (1990). Iron inhuman milk aud cows milk-effects of binding ligands on
bioavailability. En Lnnerdal B, editor: Iron metabolism in infants, Boca Raton, FI, CRC
Press, Pp. 87-107.
LONNERDAL, B. & CREN, C.-L. (1990). Effects of fonnula protein level aid ratio on
infant growth, plasma amino acids aid serum trace elements.1 Cows milk formula. Acta
.
351
Bibliografa
LNNERDAL, B., BELL, J., HENDRJCKX, A.G., BURNS, RA., KEEN, C.L., (1988).
Effect of phytate removal on zinc absorption from soy formula. An.J. Clin: Nutr. 48: 1301-
6.
LNNERDAL, B., BELL, J., KEEN, C.L. (1985). Copper absorption from human milk,
cows millc aud infant formulas using a suckling rat model. Am. J. Clin. Nutr. 42, 836-844.
LORENZ, K. (1976). Microwave heating of food. Critical Reviews in Food Science aid
Nutrition. 339-370.
LIJBEC, G., WOLF, C., BARTOSCH, 8. (1990). Aminoacid isomerization aud microwavc
exposure. The Lancet, Vol. 334 1392-1393.
LUCAS, A., DAVIES, P.S.W., PHIL, M. (1990). Physiologic energy content of human
milk. En: Breastfeeding, Nutrition, Infeetion aud Infant Growth in Developed aid Emerging
Countries Eds: Atkinson, S.A., Hanson, L.A. y Chandra, R.K. Newfoundland: ARIS
Biomedical Publishers aid Distributors. pp. 337-357.
LYKKEN, G., MAHALKO, u., JOHNSON, P.E., MILNE, D., SANDSTEAD, H.H.,
GARCA, W.J., DINTZIS, F.R., INGLETT, GE. (1986). Effects of browned aid unbrowned
com products intrinsical> labeled with 65Zn on absorption of 65Zn in humais. J. Nutrition,
116, 795-801.
352
Bibliografa
LYSTER, R.L.J. (1979). In: Effects of heating in foodstuffs, R.J. Priestle> (cd.). Elsevier
Appl., Sci. Pub., Barking, 11K, p:353.
MABESA, L., BALDWIN, R.E. (1979). Ascorbic acid in peas cooked by microwaves. .1.
Food Sci., 44, 932-933.
MACGILLIVRAY, P.C., FINLAY, H.V.L., BI?N?NS, T.B. (1959). Use of lactulose to create
a preponderance of lactobacil> in the intestine of bottle-fed infants. Scott. Mcd. J 4: 182-
189.
MAGA, J.A., TWOMEY, J.A. COHEN, M. (1977). Effects of baking methods on te fatty
acid composition of potatoes. J. Food Sci. 42, 1669.
MAl, 1, 15K, C. H., ARMIBRUSTER, G. CHU, P., KINSELLA, J.E. (1980). Effects of
,
MARCOS, A., VARELA, P., ARCE, M~ M., CASTRILLON, A.Ma (1991). Maillard
reactions products as inmunomodulating agents: an in vivo study. Proceedings of the
Interdisciplinar> Conference on Effects of Food on Ihe Inmune and Hormonal Systems. Ed.:
Institute of Toxicology, Swiss Federal Institute of Technology and University of Zflrich,
Schwerzenbach, Switzerland. pp.: 86-90.
353
Bibliografa
MAUTRON, J. (1981). The Maillard reaction in food, a critical review ftom the nutritional
standpoint. in Eriksson, Prog. Food Nutr. Sci. Pergamon Press, Oxford. Vol. 5, pp. 5-35.
MELA, D.J. (1990). Ihe basis of dietary fat preferences. Trends Food Sci. Technol., 1, 3,
71-73.
MENDEZ, A., OLNO, A.(1979). Lactulose. A review of sorne chemical properties and
applicatioons in infant nutrition and medicine. Diovy Sci. Absttr 41, 531-535.
354
Bibliografa
METAXAS, A.C., MERLEDITH, R.J. (1983). Industrial microwave heatin. lEE power
engineering series, 4 P. Peregrinus on behalf of Institution of Eleetrical Engineers.
MILES, J.P. (1982). J. Assoc 0ff Anal Chem 65,1482. Citado en Hurrel et al. (1989).
.
MIZOTA, T., TAMUIRA, Y., TOMITA, M., OKONOGI, 5. (1987). Lactulose as a sugar
with physiological signifaicance. Bulletin 21
NKAI ,S. & LI-CHAN, E. (1987). Effect of clotting in stomachs of infants on protein
digestibility of millc. Food Microestructure 6,161-170.
NANGPAL, A., REUTER, H., KIESNIER, C.(1990). Reaction kinetics of lactulose aid
furosine formation. Influence of dilution of milk during direct UHT treatment. Kiel.
Milchwirtsch. Forschungsberi 42 ,53-64.
355
Bibliografa
NANOPAL, A., REUTER, H., KIESNER, C. (1990). Reaction kinetics of lactulose aid
furosine formation. Influence of dilution of milk during direct UHT treatment. Kiel
Milchwirtsch. Forschunsberi, 422, 53-64.
NAVEH, Y., HAZANI, A., BERNT, M., (1981). Copper deflcienc> with cows milk diet.
Pediatrics 68: 397-400
NESHEIM Y CARPENTER (1967). FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda
edicin. Ed. Ineramiericana, PP 119.
NIELSEN, H.K., HTU?RRELL, R.F. (1983). Content and stability of tryptofan in foods, in
Schlossbergr el al., L 22. ISTRY-83. Fourth Intern. Meeting on tryptophan metabolism,
biochem., pathology aid regulation. (de Gruyter, Berlin 1983).
NOVAK, D.A., CARVER, J.D. & BARNESS, L.A. (1994). Dietar> nucleotides affect
hepatic growth and composition iii the weanling mouse. Journal of Parenteral and Enteral
Nutrition 18, 62-66.
OKAMMOTO, E., RASSIN, 11K., ZUCKER, C.L. SALEN, G.S., HEIRD, WC. (1984).
Role of taurine in feeding te low birth weight infant. J. Pediatr. 104, 936-940.
OLANO, A., CALVO, M.M., REGLERO, G.(1989). Analysis of free carbohydrates in milk
using micropacked columns. Chromatographia 21, 538-540.
356
Bibliografa
PACKARD, V.S., (1982). En: Human milk and infant formula.Academic Press, New
York,pp6O. Citado en Hurrel el al. (1989).
PAR WA, A. AND MATRUR, B.MN. (1982). influence of oral ingestion of bifidobacteria
on the intestinal microflora and nutritional absorption among rats. Indian J.
Nutr. Diet., 19 267-272.
PATION, J.S. Y CAREY, M.C. (1979). Atching fat digestion. Science, 204, 145-148.
PELLEGRINO L, DE NONI 1, RESMINI P 1995 Coupling lactulose and furosine indices for
quality evaluation of sterilized milk. mt Dair> J 5 647-659.
PREZ GRANADOS, A.M. (1997). Consumo de grasas crudas y fritas y utilizacin nutritiva
de minerales. Tesis Doctoral Universidad Complutense de Madrid-Consejo Superior de
Investigaciones Cientficas.
35?
Bibliografa
man aid animals, Tema 7.B. Momcilovic cd. Institute for Medical Research and Ocupational
Health University of Zagreb. pp. 25.8-25.9.
PEREZ GRANADOS, A.M., VAQUERO, MP., NAVARRO, MP. (1995). Iron Metabolism
in rats consuming oil ftom fresh or fl-ied sardines. Analyst, Vol 120, 899-903.
PICCiANO, M.F. (1985). En: Trace Elements in Nutrition of Children. Ed.: Chandra, Rayen
Press, New York, PP 157.
PICONE, T.A., BENSON,J.D., MORO, G., MINOLI, 1., FULCONIS,F., RASSIN, D.K. &
RIHA, N.C.R. (1989). Growth, serum biochemistries aid aminoacids of term infaits fed
formulas with amino acid aid protein concentrations similar to human milk. Journal of
Pediatric Gastroenterology aid Nutrition 9, 35 1-360.
PIERRE, A., BRILE, G., FAUQUANT, J., PIOT, M. (1977). Lait 57, 646.
358
Bibliografa
POKORNY, C. (1981). Browning from lipid-protein interactions. Prog. Food Nutr. Sci. 5,
421-8.
POWERS, J. H. (1997). Vitamin requirements for term infants: considerations for infant
formulae. Nutrition Research Reviews, 10, 1-33.
PRONCZUK Y COL. (1973).FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda edicin.
Ed. Interamiericana, PP 119.
RIHA, N., MINOLI, 1 & MORO, U. (1986a). Milk protein intake in the temi infant. 1.
Metabolic responses and effects on growth. Acta paedriatica Scandinavica 75,881-886.
R3JHA, N., MINOLI, 1., MORO, G. & BREMER, H.J. (1986b). Milk protein intake in the
term infant. II. Effects on plasmna amino acid concentrations.Acta paedriatica Scandinavica
75,887-892.
RIH, N.C.R (1985). Nutritinal proteins in milk and the protein requirement of normal
infants. Peditrics 75, S136-S141.
RANHOTRA, G.S., LOEWE, R.J., PUYAT, L.V (1973). Bioavailability ofmagnesium from
wheat flour aid various organie aid inorganie salts. Cereal Chem. 53, 770-776.
RASSIN, D.K., GAUILL, G.E., JRVENPAA, A., RIH, N. (1983). Pediatrics, 71, 179.
359
Bibliografa
microflora on iron aid zinc metabolism aid on activities of metalloenzyines in rats. J. Nutr.,
102, 101-8.
RENNER, E. (1981b) Aust. Soc. Dair> Technol. Techn. Pub. 26, 41-53.
RENNER, E. (1983). The heating of millc. En:Milk aid diar> products inhuman nutrition.
W-GmbH, Volkswirtschaftilcher Verlag, Mttnchen,pp.280-298.
RENNER, E., DORGUTH, H. (1980). Deu. Milchwirtsch.31,505-508. En: Milk and Dair>
products in human nutrition. Edniund Renner. W-GmbH, Volkswirtschafllicher Verlag,
Munch en
REYKDA, O., Y LEE, K. (1991). Soluble, dialysable aid ionic calcium in raw and
processed skim milk, whole milk aid spinach. J. Food Sci., 56 No. 3 Pp 864-866.
RINGE, ML., Y LOVE, M.H. (1988). Kinetics of protein quality change in an extruded
cowpea-coru flour blend under varied steady-state storage conditions. J. Food Sci., 53, 584-
588.
360
Bibliografa
ROLLS, B.J. Y SHIDE, D. (1992). me influence of dietar> fat on food intake and body
weight. Nutrition Reviews, 50, 10, 283-290.
ROSE (1962). Factors affecting the heat stability of milk J. Diar> Sci. 45, 1305-1311.
ROSENBERG, U., BGL, W. (1987). Microwave thawing, drying and baking in the food
industry. Food Technology, 85-91.
ROSSI, M., POMPEI, C. 1991 Changes in liquid milk-based infant formulas during heat
treatments. Ital. J. Food Sci. 1, 39-47.
ROSSI, M., POMPEI, C. (1991). Changes in liquid milk-based infant formulas during heal
treatments. Ital. 3. Food Sci.,, 1, 36-47.
RIJBIN, D.H., LEVENTHAL, J.M., KRASILNIKOFF, P.A., KUO, 11.5., JEKEL, J.F.,
WEILE, B., LEVEE, A., KURZON, M & BERGET, A. (1990). Relationship between infant
feeding and infectious illness: a prospective study of infants during the first year of life.
Pediatrics 85, 464-471.
SAID, A. K., HEGSTED, D.M., HAYES, K.C. (1974). Response ofadult rats to deficiencies
of different essential amino acids Brit. 3. Nutr. 31, 47-57
SALAMA, N.A. (1993). Evaluation of two cooking methods and precooking treatment of
361
Bibliografa
SALTMARCH, R., VAGNJNI-FERRARI, M., LABUZA, T.P. (1981). Iheoretical basis and
application of kinetics to browning in spray-dried whey food systems. Prog. Food Nutr. Sci.
5, 331-44.
SNCHEZ MUNIZ, F.J., BASTIDA, 5., PEREA, 5., CUESTA, C., ARAGONES, A. (1997).
Low dense lipoproteins in neonates with high cord serum cholesterol levels. Acta Peditrica
86, 414-418
SNCHEZ-POZO, A., MORILLAS, 3., MOLTO, L., ROBLES, R. & GIL, A. (1994).
Dietar> nucleotides influence lipoprotein metabolism in newbom infants. Pediatric Research
35, 112-1 16.
SARWAR, G., PEACE, R.W., BOTTING, HG. (1989b). Differences in protein digestibility
aid quality of liquid concentrate and powder forms of milk-based infant formulas fed to rats.
Am. J. Clin. Nutr. 49, 806-813.
SARWAR, G., BOTTING, H.G., PEACE, R.W.(1989). Amino-Acid Rating Method for
Evaluating Protein Adequacy of Infant Formulas. 3. Assoc. 0ff Anal Chem. 72, 622-626.
362
Eibliogr afia
SARWAR, G., PEACE, R.W., BOTTING, H.G. (1989). Differences in protein digestibility
and quantity of liquid concentrate and powder forms of milk-based infant formulas fed to
rats. Am. J. Clin. Nutr. 49, 806-13.
SCOTT, K.J., BISHOP, D.R. (1986). J. Soc. fiar> Technol. 39, 32.
SCOTT, K.J (1989). Micronutrients in milk products En: Micronutrients in milk products
and milk based food products. Editado por: Renner, E. Elsevier Science Publishers Ltd.
Essex, England, PP 71-123.
SCHNLER, R.J, GARZA, C., OBRIN SMITH. E, (1985). Fortified mothers milk for
ver> low birth weight infants: results of macromineral balance studies. Y Pediatr.107: 767-74
SCHULZ-LELL, O., DRNER, K., OLDIGS, H.D., SIEVERS, E. & SCHAUB, J. (1991).
Iron availavility from sri infant forniula supplemented with bovine lactoferrin. Acta
Paediatrica Scandinavica 80, 155-158.
SCHWARTZ, R., BELKO, AZ., WEII, EM. (1982). An in vitro system for measuring
intrinsec dietar> mineral exchangeability: Alternative to intrincie isotopic labeling. 3. Nutr.
363
Bibliografa
112, 497-504.
SGARBIERI, V.C., AMAYA, J., TANAKA, M., CHICHESTER, C.O. (1973). J. Nutr., 103,
17-31.
SHEIKH, M.S., SANTA ANA, C.A., NICAR, M.J., SCHILLER, L.R., FORDTRAN, iS.
(1987). Gastrointestinal absorption of calcium from milk and calcium salts. N. Eng. J. Mcd.
317, 532-536.
SHEN, L., ROBBERECHT, H., VAN DEAL, P., DEELSTRA, H. (1995). Estimation ofthe
bioavailability of zinc and calcium form human, cows, goat and sheep milk by an in vitro
method. Biological Trace Element Research. Vol. 49, 107-118.
SETILES, M.E. (1984). Magnesium. Nutrition reviews. Present knowledge in nutrition. The
Nutrition Foundation, Washington D.C. PP 423-437.
SHINOHARA, K., FUKUMOTO, Y., TESNG, Y.K., INOUE, Y., OMURA, H. (1974). J.
Agr. Chem. Soc. Japan 48, 499. Citado por OMURA H., JAHAN, n., SHINOHARA, K.,
MURAKAMI, H. (1983). Formation of mutagens by the Maillard Reaction En: The
Maillard reaction in food aid nutrition. Eds: Waller, G.R. y Feather, M.S. ACS Symposium
Series. American Chemical Society, Washington D.C. PP 537-563.
SHIPE, W.F., BASSETTE, R., DEAN, D.D., DUNKLEY, W.L., HAMMOND, E.G.,
HARPER, W.J., KiLEYN, D.H., MORGN, M.E., NELSON, J.H., SLATER, J.E, (1961).
Retention of nitrogen and minerals by babies 1 week od. Br. J. Nutr. 15: 83-8
SMITH, L.L. (1996). Review of progress in sterol oxidations. Lipids, 31, 453-487.
364
Bibliografa
SOLOMONS, N.W., JACOB, R.A. (1981). Studics on the bioavailability of zinc in man. IV.
Effect of haem and nonhaem iron on the absorption of zinc. Am. J. Clin. Nutr. 34: 475-481.
SOLOMONS, N.W., PINEDA, O., VITERI, F., SANDSTEAD, H.H. (1983). Studies on the
bioavailability ofzinc in hmnans: mechanism of the intestinal interaction of nonhaem iron aid
zinc. J. Nutr.113, 337-349.
SPENCER, H., LEWIN, 1., FOWLER, J., et al. (1969). Influence of dietar> calcium intake
on Ca41 absorption in man. Am. J. Mcd. 46, 197-205.
STEGINK, L.D., PITKJN, R.M. (1977). Placental transfer of glucose-amino acids coniplexes
present in parenteral nutrition. Prog. Food Nutr. Sci., 5, 265-278.
SIROME, J.H., NESBAKKEN, R., NORMANN, T., SKJORTEN, F., SKYBERG, D.,
JOHANNESEN, B., (1969). Familial hipomagnesemia Acta Paediatr. Scand. 58: 433-7.
SUGIMUPA, 1., KAWACHI, T., NAGAO, M., YAHAGI, 1. SENO, Y. OKAMOTO, T.,
SI{UDO, K., KOSUGE, T., TSUJI, K., W AXABAYASH1, K., IITAKA, A., 11K, A.,
(1977). Proc. Japan Acad. 53, 58. , TESNG, Y.K., INOUE, Y., OMIJRA, H. (1974). J. Agr.
Chem. Soc. Japan 48, 499. Citado por OMURA H., JAMAN, n., SETINOHARA, K.,
MURAKAMI, 11. (1983). Formation of mutagens by the Maillard Reaction En: The
Maillard reaction in food and nutrition. Eds: Waller, G.R. y Feather, M.S. ACS Symposium
Series. American Chemical Society, Washington D.C. PP 537-563.
SUGIMURA, 1., NAGAO, M., (1979). CRC Crit. Rey. Toxicol. 66, 189-209. Citado por:
JAGERSTAD, M., LASER REUTERS WARD, A., STE, R., DAHLQVIST, A. GRIVAS,
365
Bibliografa
5., OLSSON, K., NYHAMMAR, 1. (1983). Creatinine aid Maillard Reation Products as
precursors of mutagenic compounds formed in fried beef. En: The Maillard reaction in food
and nutrition. Eds: Waller, GR. y Feather, M.S ACS S>mposium Sedes. American Chemical
Society, Washington D.C. Pp. 507-518.
SUZUKI, K., ENDO, Y., VEHARA, M., YAMADA, 11., GOTO, 5., IMMANURA, M.,
SCHIOZU, 5. (1985). Effect of lactase, lactulose and sorbitol on mineral utilization ad
intestinal flora Nippon Eiyo Shokuryo Gakkaishi 38, 39-42.
SUZUKI, K., VEHARA, M., ENDO, Y. YAMADA, 11., GOTO, 5. (1985). Effect of
lactulose and sorbitol on iran, zinc, copper utilization iii rats Nippon Eiyo Shokuryo
Gakkaishi, 39, 217-219.
SWAISGODOD, H.E., JNOLINO, V.G., SLIWKOWSKI, M.X. (1979). Proc. Int. Conf
U?HT Processing, Raleigh/USA, 67-76.
SWEETSUR, A.W.M., MUIR, D.D. (1980). Journal Soc. Diar> Technology, 33,101.
TANAKA, M., KIMIAGAR, M., LEE, T.C. CHICHESTER, C.O. (1977). Effect of Maillard
reaction on the nutritional quality of protien. En: Nutritional, Biochemical and Chemical
Consequence of Protein Cross-linking. pp. 321-341. Plenum Press. New York.
TERAO, T. & OVEN, C.A. (1977). Copper metabolism in pregnan and pospartum rat and
pups. Am. 3. Physiol. 232, E172-E179.
TOBIAS (1952). The origen of sulhydril groups in milk proteins aid their contribution lo
cooked flavaur. J. Diar> Sci. 35, 699.
TORRE, M., RODRIGUEZ, R., SAURA-CALIXTO, F. (1991). Effects of dietar> fiver and
phytic acid on mineral availability. Cnt. Rey. Foad Sci. Nutr. 1(1): 1-22.
366
Bibliografa
TOVAR, L.R., SCHWASS, D.F. (1983). D-Amino acids in processed proteins, their
nutritional consequences. En, Xenobiotics in Foods aid Feeds, eds. Finle> J.W. & Schwass,
D.F. ACS Symposium Series 234, American Chemical Society Washington, D.C.
TSANG, R.C., SIEICETEN, J.J., BROWN, D.R. (1977). Clin. Perinat. 4 385.
TSEN, C.C., REDDY, P.R.K., EL-SAMAHY, S.K. GEHRKiE, C..W. (1983). Effect of te
,
Maillard browining reaction on the nutritivo value of breads and pizza crusts En, The
Maillard reaction in foods and nutrition. Eds., Waller, G.R. y Feather, MS. Symposium Series
215. Americcan Chemical Society Washington D.C.
ISEN, C.C. (1980). Microwave energ> for baking bread and its effect on the nutritive value
of bread, a review. J. Food Protect., 43, 638.
TUCKER, B.W., RIDDLE, V., LISTON, J. (1983). Loss of available lysine in protein in
a model Maillard reaction system. En: Ihe Maillard reaction in food and nutrition. Eds:
Waller, G.R. y Feather, M.S. ACS Symposium Series. American Chemical Society,
Washington D.C.
TURNLUND, J.R., KING, J.C., GONG, B., KFYES, W.R, MICHEL, M.C. (1985). A stable
isotope study of copper absorption in young men: effect of phytate and alfa-cellulose. Am.
J. Clin. Nutr. 42: 18-23.
TYSON, J. E., LASKY, R., FLOOD, D., MIZE, C., PICONE, T. & PAULE, C. L. (1989).
Randomized trial of taurine supplementation for infants =1,300-gram birth weith: effect on
367
Bibliografa
UAUY, R., STRINGEL, O., THOMAS, R. & QUAN, R. (1990). Effect of dietar>
nucleosides on growth aid maturation of te developing gut in te rat. Jaurnal of Pediatrie
Gastroenterolagy aid Nutrition 10, 497-503.
VALLE-RIESTRA Y BARNES (1970). FOMON, S.J. (1974). En: Nutricin Infantil. Segunda
edicin. Ed. Interamiericana, PP 119.
VAN DEN BERG, GJ., YU, 5., VANDER HEIJDEN A., LEMMERS, AG., BEYNEN, AC.,
(1993). Dietar> fructase versus glucose lowers copper solubility in te intestinal lumen of
rarts. Biol. Trace Elem. Res. 38:107-115.
VAN SOEST, P.J. (1982). Nutritional ecology of the rumiant. Rumiant metabolism,
nutritional strategies, te cellulolytic fermentation and the chemistry of forages aid plant
fibers. O & B Books.
368
Bibliografa
VAQUERO, M.P., VAN DEN HAMER, C.J.A. y SCHAAFSMA, G. (1991) In Vitro and In
Vivo Methods for the Determination of Iron Availability from Breakfast Meals. In: Trace
Elements in Man aid Animals, Moncilovic, iB. (cd). Intitute for Medical Research and
Occupatinal Health University of Zagreb, Croatia, PP 103-104.
VAQUERO, M.P., VAN DOKKUM, W., BOS, K.D., WOLTERS M.G.E., SCHAAFSMA,
G. LUTEN, J.B. (1992). Disponibilidad in vitro de calcio, magnesio, hierro, cobre y zinc
de pan blanco o integral, asiladamente o en combinacin con otros alimentos. Rey. Esp.
Cienc. Aliment. 32 (1). Pp 47-58.
VAQUERO, M.P., VELDHUIZEN, M., VAN DOKKUM, W., VAN DEN HAMER, C.J.A.
y SCHAAFSMA, G. (1994) Copper Bioavailability from Breakfasts Containing Tea. Influence
of the Addition of Milk. J. Sci. Food Agrie., 64: 475-481.
VARELA, P., MARCOS, A., NAVARRO, M., P. (1992). Zinc status in anorexia nervosa.
Ann. Nutr. Metab., 361, 197-202.
VERALDI, G. (1988). The charges. En: Dobbing J. editor Infant feeding. Anatomy of a
controversy, 1973--1984. Berlin 1988, Spriner-Verlang, Pp. 29-41.
VISSER, J., MINIHAN, A., SMITS, P., TJAN, S.B., HEERTJIE, 1. (1986). Netherlands Milk
Diar> Journal, 40,351.
WALSTRA, P. Y JENNESS, R. (1984). Diary Chemistry adn Physics. New York: J. Wiley
369
Bibliografa
& Sons.
WHITEHEAD, R.G. (1988). Are current dietar> guidelines for young children a prescription
for overfeeding?. Lancet u, 1066-1069.
WHITING, S.J.; WHITNEY, H.L. (1987) Effect of dietar> caffein and theophylline on
urinar> calcium exeretion in te adult rat J. Nutr. 117, 1224-1228.
WIDDOWSON, E.M. (1965). Absorption and excretion of fat, nitrogen aid minerais from
filled milks by babies one week od. Lancet, 3:1099-1105.
WONG, W.W., HACHEY, DL., 1NSULL, W., OPFKUN, A.R, KLEIN, PD. (1993).
Effects of dietar> cholesterol on cholesterol synthesis in breast-fed aid formula-fed infants.
Journal of Lipid Research 34, 1403-1411.
370
Bibliografa
ZADOW, J.G. (1969). Studies of the ultra-heat treatment of milk. Pan 1. Comparison of
direct and indirect heating of whole milk. Austr. J. Diary Technol. 24 (2)., 44-49.
ZAMBONI, G., PIEMONTE, G., BOLNER, A., ANTONIAZZI, F., DALLAGNOLA, A.,
MESSNER, H., GMBARO, G. & TATO, L. (1993). Influence of dietar> taurine on vitamin
D absorption. Acta Paediatrica 82, 811-815.
371
Bibliografa
ZAMORA, R., HIDALGO, F.J. (1992). Browning and fluorescence development during
microwave irradiation of a lysine/ (E).-4,5 -Epoxy-(E).-2-Heptanal model system. J. Agric.
Food Chem., 40,, 2269-2273.
372