Diagnstico Bioqumico

Citogentica: breve descripcin de las principales tcnicas

utilizadas para realizar un estudio cromosmico
Dra. Pilar Corral
Dpto. de Biologa Molecular
IACA Laboratorios
citogenetica@iaca.com.ar
Introduccin
diversas tcnicas de bandeo cromosmico y en diferentes
tejidos, siendo el bandeo G en linfocitos de sangre perifrica la
tcnica y muestra de eleccin (Figura 1).
Esta metodologa de bajo costo, permite mediante el
anlisis detallado de todos los cromosomas, detectar la
presencia de anomalas numricas y estructurales.

El laboratorio de citogentica juega un papel Las anomalas numricas (aneuploidas) implican la

fundamental para la gentica clnica. Con los avances
cientficos y tecnolgicos desarrollados a partir de los aos
70, no slo hemos podido identificar los cromosomas, sino
que hemos podido establecer que las anomalas
cromosmicas contribuyen significativamente en la
enfermedad gentica, resultando en retardo mental, retraso
en el crecimiento, malformaciones, abortos espontneos e
infertilidad. Por tal motivo, es importante que el mdico
conozca cuales son los medios o herramientas que se
disponene en la actualidad, su utilidad, indicaciones para
estudio y significado de las mismas.
prdida y/o ganancia de uno o varios cromosomas completos
y puede incluir tanto a autosomas como a cromosomas
sexuales.
Las anomalas estructurales implican cambios en la
estructura de uno o varios cromosomas, las ms comunes
son: deleciones, inversiones, translocaciones.
Figura 1. Cariotipo femenino con bandeo G de resolucin
estndar
Human female
G-bands

Hoy en da, el anlisis cromosmico puede realizarse

con tcnicas de:

1. Citogentica convencional: Cariotipo de resolucin

estndar y cariotipo de alta resolucin (AR).

2. Citogentica molecular: Hibridacin in situ fluorescente

(FISH), hibridacin in situ fluorescente multicolor (M-FISH o
SKY) y la hibridacin genmica comparada (CGH).

Estas ltimas metodologas representan una

autntica revolucin en el rea del la gentica, dado que han
permitido mejorar la sensibilidad y la especificidad de los
hallazgos citogenticos.
Cundo es necesario realizar un cariotipo?
Tcnicas de citogentica convenciona
Las indicaciones para realizar un cariotipo quedan reflejadas
El cariotipo de un individuo puede realizarse por en la tabla siguiente:

Contina en pag. 16

14 Bioanlisis
 Tabla I. Indicaciones para realizar un cariotipo
1. Perodo prenatal:
- Edad mayor de 35 aos
- Ansiedad materna
- Triple screening alterado
- Oligoamnios - polihidraminos
- Retraso de crecimiento intrauterino (CIR)
- Arteria umbilical nica
- Sospecha ecogrfica de cromosomopata
- Antecedentes de comosomopata balanceada en un proge-
nitor
2. Perodo neonatal:
- Malformaciones mayores aisladas
- Presencia de 3 o ms defectos congnitos menores
- Recin nacido con rasgos dismrficos
- Recin nacido con genitales ambiguos
- Parto con producto muerto de causa inexplicable
- Muerte neonatal de causa inexplicada
- Infertilidad inexplicable
- Diagnstico prenatal (lquido amnitico y biopsia de corion)
7. En todas las edades:
- Procesos malignos (cariotipo constitucional y tumoral)
- Control de transplantes de mdula sea
Puesto que en las mejores condiciones tcnicas, la
resolucin del cariotipo de resolucin estndar no supera las
550 bandas, se deber realizar un cariotipo de alta resolucin
o tcnicas de citogentica molecular en aquellos casos donde
la alteracin estructural sospechada sea menor a 10
megabases.
En qu consiste un cariotipo de alta resolucin y cmo
se obtiene?
El cariotipo de alta resolucin (AR) consiste en el
anlisis de los cromosomas en profase y prometafase,
incrementando as el nmero de bandas visibles al
microscopio.

3. Perodo de lactancia: En nuestro laboratorio, las clulas en profase y

- Nios con dificultades para el aprendizaje
- Nios con rasgos dismrficos
- Nios con retraso psicomotor
4. Perodos preescolar-escolar:
prometafase se obtienen a partir de un cultivo de linfocitos
sincronizado mediante el agregado de los reactivos 5'-fluoro-
2'-desoxiuridina (FrdU) y 5'-bromo- 2'-desoxiuridina (BrdU).
Los cromosomas en profase y prometafase pueden
alcanzar una resolucin superior a las 800 bandas (Figura 2).

- Trastornos del crecimiento Figura 2. Cariotipo masculino con bandeo G de alta

- Retraso psicomotor resolucin
- Rasgos dismrficos

5. Perodo de adolescencia:

- Ginecomastia
- Falta de desarrollo puberal
- Amenorrea primaria o secundaria
- Retraso mental
- Rasgos dismrficos

6. Perodo del adulto:

- Padres de nios con anomalas cromosmicas estructurales

- Abortos de repeticin

16 Bioanlisis
 De esta manera, al producirse una elongacin de los
cromosomas es posible la deteccin de alteraciones
estructurales ms pequeas como microdeleciones,
duplicaciones y sutiles translocaciones.

Encontramos un ejemplo de su aplicacin en los

sndromes de delecin y en algunos sndromes de
microdelecin (ver Tabla II). Tambin se utiliza para la
confirmacin de resultados obtenidos en un cariotipo de
resolucin estndar, y para definir en forma precisa los puntos
de ruptura de los cromosomas involucrados en alteraciones
estructurales.

Tabla II. Sndromes de delecin / microdelecin

Sndrome Regin cromosmica

delecionada

Wolf-Hirschhorn 4p16.3
Cri du Chat 5p15.2
Langer-Giedion 8q24.11-q24.13
Wiliams* 7q11.23
WARG* 11p13
Prader Willi/Angelman* 15q11.2
Miller- Dieker* 17p13.3
Smith Magenis* 17p11.2
DiGeorge* 22q11.2
Rubinstein-Taybi* 16p13.3
Kallman* Xp22.3

Es importante aclarar que:

- Ciertas deleciones muy pequeas pueden escapar a esta

tcnica y dar resultado falsos negativos.

- Cualquier delecin que se sospeche citogenticamente

debe ser confirmada por FISH u otra tcnica de citogentica
molecular.

- Slo algunas microdeleciones son citogenticamente

visibles. Actualmente, la manera de identificar estos
sndromes es por medio de FISH, utilizando sondas
especficas para las regiones delecionadas.

Por otro lado, el American College of Medical Genetics

(ACMG) recomienda que el AR debe reservarse para casos
donde un sndrome de microdelecin/microduplicacin
especfico es considerado, en el cual su diagnstico
generalmente requiere de cromosomas con una resolucin
superior a 650 bandas. Adems, debido a la gran dificultad y
cantidad de trabajo que requiere el anlisis de cromosomas
de alta resolucin, en la rutina el AR de 850 bandas slo debe
ser indicado para mapear regiones cromosmicas
especficas.
Es importante recordar que la realizacin de cualquier
prueba gentica debe ir acompaada de un acto de
asesoramiento gentico.
Cmo solicitar estos estudios?
Cdigo Estudio solicitado Tipo de muestra y
requerimiento
1961 BANDEO G (CARIOTIPO 5.0 ml de sangre
RESOLUCIN ESTNDAR) perifrica con heparina
sdica.
Trabajar en condiciones
de mxima esterilidad.
1401 CARIOTIPO DE ALTA Remitir muestra a tempe-
RESOLUCIN ratura ambiente, dentro de
las 24 horas de realizada la
extraccin.
Enviar planilla de
datos del paciente.
Bibliografa
1. Shaffer L, et al. American College of Medical Genetics guideline on
the cytogenetic evaluation of the individual with developmental delay
or mental retardation. November/December 2005;7(9):650-654.
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5. Mueller RF, Ian DY (2001) Gentica Medica .10 edicin. Marban
LINKS DE INTERS
http://www.med.com/ Medicine Online
http://www.geneclinics.org/index,html Geneclinic