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ADN Antiguo PDF
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INTRODUCCIN. Figura 2.
Dble hlice
E
l avance y sofisticacin de las de ADN.
tcnicas en biologa molecular ha
permitido uno de los grandes
hitos de la ciencia moderna: la posi-
Fernndez Prez-Prez A.
bilidad de recuperar material genti-
Domnguez E.
co de restos biolgicos antiguos. Las
posibilidades que esta nueva disci-
plina -a la que denominamos "pale-
ogentica"- ofrece son mltiples:
caracterizacin gentica de nuestros
autenticidad de algunos de los resul-
antepasados prximos, anlisis del
tados obtenidos. Algunos investi-
material gentico de especies extin- Turbn D. Arroyo-Pardo E.1 gadores creyeron que las secuen-
tas para tratar de esclarecer su
Unidad de Antropologa cias de ADN presuntamente
relacin con otras actuales -por Departamento de Biologa Animal antiguas no eran sino ADN moderno
ejemplo, los Neandertales- o el Facultad de Ciencias Biolgicas introducido en la muestra por fallos
seguimiento de migraciones histri- Avda. Diagonal 645
27
de procedimiento; es decir, lo que los
cas o prehistricas. 08028-Barcelona.
especialistas denominan "contami-
Toda la tecnologa empleada en el 1
Laboratorio de Biologa Forense
naciones".5-7 Con la llegada de la
estudio de biomolculas antiguas Departamento de Toxicologa y Reaccin en Cadena de la
tiene una base terica y fisicoqumi- Legislacin Sanitaria Polimerasa (PCR)8,9 -y en parte con
ca de gran importancia. Los orgenes Facultad de Medicina la secuenciacin automtica- la tec-
Universidad Complutense de Madrid nologa del ADN antiguo (ADNa) ha
de esta nueva disciplina cabe bus-
28040-Madrid sufrido una autntica revolucin (ver
carlos a mediados de los aos 80 E-mail: earroyop@med.ucm.es
con el trabajo pionero de Higuchi y figura 3). La PCR ha hecho posible
colaboradores.1 Gracias a este
equipo se obtuvo por vez primera ADN de una especie
extinta: el cuagga (Equus quagga), un quido de frica
del Sur que se extingui hace aproximadamente 140
aos. Desde entonces se ha conseguido aislar ADN de
restos de una gran variedad de especies vegetales y
animales, incluido el hombre (ver figuras 1 y 2).2-4
Desgraciadamente, este entusiasmo inicial se troc al
poco tiempo en escepticismo al ser puesta en duda la
Figura 1.
Esquema de la
situacin del
ADN dentro Figura 3. Esquema de la Reaccin en Cadena de la
del ncleo Polimerasa (PCR). El proceso iterativo (ciclos) aumenta
celular. el nmero de copias de ADN.
la obtencin de informacin gentica a partir de canti- ms satisfactorios (ver figura 4).13 Particularmente los
dades nfimas y muy fragmentadas de ADN y el uso de dientes constituyen un depsito natural de cidos nu-
secuenciadores automticos ha permitido analizar de cleicos notablemente protegido de factores medioam-
forma rpida la variabilidad de las secuencias, para bientales.6
comparar muestras antiguas con modernas, e inferir as
conclusiones filogenticas.
Como consecuencia de estos procesos el material Figura 8. Posibles sitios moleculares susceptibles de dao
gentico preservado en restos antiguos presenta un molecular.
conjunto de caractersticas que lo diferencian del ADN
de organismos actuales (ADN fresco) y que impone un
conjunto de limitaciones a su recuperacin (ver figura
7).
Figura 7. Corte
esquemtico de
un diente. El
interior de la
cmara pulpar
retiene gran
cantidad de
ADN post-
mortem.
Espectrometra de Masas (GC/MS) se comprob que Tabla 1. Comparacin de tres protocolos para la extraccin
un gran porcentaje de las bases nitrogenadas estaba de ADNa.
modificado.21 La 5-OH-5-Metil Hidantona es uno de los
productos mayoritarios resultantes de la degradacin de
la timina en ADN expuesto a radiaciones , mientras
que la 8-OH-Guanina se genera tras el ataque de radi-
cales hidroxilo. La cantidad de los dos primeros tipos de
modificaciones en los extractos de ADN guarda una
relacin inversa con la eficiencia de su amplificacin,
probablemente causada por el bloqueo que provocan
estos productos en la PCR.
forma, la protoporfirina IX, est presente en la natu- Algunos autores han estudiado el efecto del dao post-
raleza. mortem en los resultados de secuencias de ADNa y han
podido detectar directamente transiciones denomi-
La protoporfirina IX forma complejos quelatos tetraden- nadas de "tipo 1" (A->G T->C) y de "tipo 2" (C->T G-
tados con iones diversos (hierro, zinc, nquel, cobalto, >A) que pueden enmascarar como mutaciones lo que
etc) y tambin con iones magnesio, en los que el metal no es ms que un dao molecular.37 Por este motivo,
se une por enlaces coordinados a los 4 nitrgenos de dado que una reduccin de 20C en la temperatura
los anillos pirrlicos. La capacidad de la protoporfirina implica una disminucin de entre 10 y 25 veces en la
IX para quelar iones magnesio, necesarios para el fun- tasa de reacciones qumicas, la congelacin de mues-
cionamiento de la Taq polimerasa, hace que este tipo tras puede ser un factor determinante a la hora de
de compuestos presente un poder inhibidor de la re- preservar un ADN durante largo tiempo. As, para mues-
accin de PCR potencial.1 Adems, los derivados por- tras de gran antigedad, en el perodo comprendido
firnicos tienden a formar agregados que quedan as entre 40000 y 50000 aos, la baja temperatura parece
retenidos junto al ADN en la membrana de muchos pro- ser de gran importancia para la ralentizacin de los pro-
cedimientos de filtrado, como el Centriplus 30000, cesos responsables de la degradacin de los cidos
empleados durante la extraccin de ADN antiguo. nucleicos durante el perodo postmortem.21
Figura 15.
Retrato de la
familia imperial
Zarista. El mis-
terioso destino
34 Figura 13. Ejemplo de un resultado de RT-PCR producido
de la princesa
Anastasia solo
por un extracto de ADN procedente del yacimiento neoltico
pudo resol-
de Tel-Hallula (Siria), con una antigedad aproximada de
verse por el
unos 10.000 aos. Los colores verde y rojo corresponden a
estudio del
dos rplicas de la misma muestra que aparecen casi super-
ADN de sus
puestas. Como se ve, a partir de los 33 ciclos de PCR -eje
restos.
de abcisas- la fluorescencia crece exponencialmente
(Imagen de los autores).
hubo que esperar hasta 1991 en que unos historiadores 1, 8 y 9 eran los sirvientes y el 2 era el Dr. Botkin.51 Este
amateur descubrieron una fosa comn con 9 cuerpos. mismo estudio permiti aclarar el enigma de la supues-
En 1992, se inici un estudio gentico para tratar de ta princesa Anastasia -Ana Anderson- que desde 1921
aclarar la procedencia de los restos. Se estudiaron deca ser hija del Zar y que finalmente present una
diferentes marcadores genticos: ADN mitocondrial, secuencia mitocondrial inconsistente con los restos
secuencias cromosmicas de microsatlites y ADN de encontrados.52 A pesar de todo, esta investigacin ha
cromosomas sexuales (gen de la amelogenina). Este recibido tambin crticas.53
ltimo tipo, utilizado comnmente para asignar molecu-
larmente el sexo a una muestra, permiti saber que se El enigma de los neandertales.
trataba de 4 restos de varn y 5 de mujer, tal y como
estableca el registro histrico. El estudio de los Los neandertales (Homo sapiens neanderthalensis)
microsatlites de ADN demostr que los esqueletos 4 y poblaron Europa y Oriente Prximo entre hace 200.000
7 eran padres de 3, 5 y 6. Los restos 1, 8 y 9, al no estar y 30.000 aos aproximadamente (ver figura 17). En
relacionados, podran ser los sirvientes. Para saber si torno al 40.000-30.000 B.P. comenz a proliferar y
los individuos estudiados eran o no los Romanov se extenderse una nueva forma humana que los expertos
recurri a comparar su ADN con el de descendientes han pasado a denominar hombre anatmicamente
actuales vivos por lnea materna. El prncipe Felipe de moderno (Homo sapiens sapiens), debido a su mor-
Inglaterra, actual duque de Edimburgo, al estar rela- fologa ms grcil, semejante a la actual. Durante algn
cionado por va materna con la Zarina Alejandra, deba tiempo ambas subespecies coexistieron hasta que los
compartir con ella su mismo ADN mitocondrial. De la neandertales fueron absorbidos o desplazados por los
misma manera, el ADN mitocondrial de los descen- hombres anatmicamente modernos. Este hecho ha lle-
dientes de Louisse de Hessen-Cassel, emparentados vado a los paleontlogos a preguntarse hasta qu punto
deba ser idntico al del Zar Nicols II (ver figura 16). no hubo hibridacin entre ambas formas y si entre
ambos taxa no existi relacin filogentica.
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BIBLIOGRAFIA
1.- R. Higuchi, B. Bowman, M. & Francis. London, 1987. techniques, 1994, 15(2), 232.
Freiberger, O. A. Ryder, A. C. 18.- M. Dizdaroglu, Biotechni- 35.- P. Francalacci, Hum. Evol.,
Wilson, Nature, 1984, 312, 282. ques, 1986, 4, 536. 1995, 10(1), 51.
2.- S. Pbo, Nature, 1985, 314, 19.- Y. Fridovich, Arch. Biochem. 36.- E. Arroyo-Pardo, M. A.
644. Biophys., 1986, 247, 1. Ocaa, J. J. Arroyo, A. Prez Prez,
3.- S. Pbo, Proc. Natl. Acad. 20.- B. Halliwell, J. M. C. D. Turbn, G. Trancho, M. S.
Sci. USA, 1989, 86, 1939.. Gutteridge, Iron as a biological pro- Rodrguez Albarrn, J. D. Casas, F.
4.- S. Pbo, Sci. Am., 1993, 269 oxidant. ISI Atlas Sci. Biochem., Bandrs, Ancient Biomol., 2002,
(5), 86. 1988, 1, 48. 4(1), 33.
5.- M. Stoneking, Am. J. Hum. 21.- M. Hss, P. Jaruga, T. H. 37.- M. Thomas, P. Gilbert, A. J.
Genet., 1995, 57, 1259. Zastawny, M. Dizdaroglu, S. Pbo, Hansen, E. Willerslev, L. Rudbeck,
6.- A. Cooper, Am. J. Hum. Nucl. Acids Res., 1996, 24(7), 1304. I. Barnes, N. Lynnerup, A. Cooper,
Genet., 1997, 60, 1001. 22.- F. Beesk, M. Dizdaroglu, D. Am. J. Hum. Genet., 2003, 72, 48.
7.- T. Lindahl, Cell, 1997, 90, 1. Schulte-Frohlinde, C. von Sonntag, 38.- M. S. Rodrguez Albarrn, J.
8.- K. B. Mullis, F. A. Faalona, Int. J. Radiat. Biol., 1979, 36, 565. D. Casas, M. Garca-Bartual, E.
Meth. Enzymol., 1987, 155, 335. 23.- M. Dizdaroglu, D. Arroyo-Pardo, Paleopath. News-
9.- R. K. Saiki, D. H. Gelfand, S. Henneberg, C. von Sonntag, Org. letter, 1999, 106, 9.
36 Stoffel, S. J. Scharff, R. Higuchi, G.
T. Horn, K. B. Mullis, H. A. Erlich,
Mass Spectr., 1974, 8, 335.
24.- S. Kwok, R. Higuchi, Nature,
39.- H. Pfeiffer, H. Mrnstad, A.
Teivens, Int. J. Legal Med., 1995,
Science, 1988, 239, 487. 1989, 339, 237. 108, 19.
10.- M. Hss, S. Pbo, Nucl. 25.- E. Hagelberg, B. Sykes, 40.- S. Ohtami, K. J. Yamamoto,
Acids Res., 1993, 21, 3913. Nature, 1989, 342, 485. Forensic Sci. Int., 1991, 36, 792.
11.- N. Tuross, Experientia, 1994, 26.- E. Braud-Colomb, R. 41.- S. Ritz, H. W. J. Schtz,
50, 530. Roubin, J. Martin, N. Maroc, A. Forensic Sci. Int., 1993, 38, 633.
12.- G. H. Logan, M. J. Collins, G. Gardeisen, G. Trabuchet, M. 42.- S. D. Shapiro, S. K. Endicott,
Eglinton, En: Taphonomy: Goosens, Am. J. Hum. Genet., M. A. Provance, J. A. Pierce, E. J.
Releasing the Data Locked in the 1995, 57, 1267. Campell, J. Clinical Inv., 1991, 87,
Fossil Record. Eds. P. A. Allison and 27.- R. Ward, C. Stringer, Nature, 1828.
D. E. G. Briggs. Plenum, New York. 1997, 388, 225. 43.- P. M. Masters, J. L. Bada, J.
1991. 28.- P. H. Helfman, J. L. Bada, S. Jr. Zigler, Science, 1977, 268, 71.
13.- D. De Gusta, C. H. Cook, G. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, 44.- A. Turzynski, S. Ritz, Exp.
Sensabaugh, Ancient ADN 72, 2891. Clin. Endocrinology, 1994, 102 (1),
Newsletter, 1994, 2(1), 13. 29.- M. Krings, A. Stone, R. 104.
14.- E. Hagelberg, L.S. Bell, T. Schmitz, H. Kranitzki, M. Stoneking, 45.- H. Mrnstad, H. Pfeiffer, A. J.
Allen, A. Boyde, S. J. Jones, J. B. S. Pbo, Cell, 1997, 90, 19. Teivens, J. Forensic Sci., 1994, 39,
Clegg, Phil. Trans. R. Soc. Lond. B., 30.- K. Brown, T. Brown, Ancient 1425.
1994, 333, 399. ADN Newsletter, 1992, 1(1), 18. 46.- H. Poinar, M. Hss, J. L.
15.- W. W. Hauswirth, C.D. 31.- C. D. Dickel, W.W. Bada, S. Pbo, Science, 1996,
Dickel, D. A. Lawlor, En: Ancient Hauswirth, Ancient ADN Newsletter, 272, 864.
ADN. B. Herrmann y S. Hummel. 1992, 1(1): 9. 47.- E. H. Man, M. E. Sandhouse,
Eds. Springer Verlag New York, p. 32.- R. Higuchi, Ancient ADN J. Burg, G. H. Fisher, Science, 1983,
104-121. 1994. Newsletter, 1992, 1(1), 5. 220, 1407.
16.- S. Pbo, J. A. Gifford, A. C. 33.- R. Montiel, A. Malgosa, E. 48.- P. M. Masters, Forensic Sci.
Wilson, Nucl. Acid. Res., 1987, Subir, Ancient Biomol., 1997, 1, Int., 1986, 32, 179.
16(20), 9775. 221. 49.- H. Pfeiffer, H. Mrnstad, A.
17.- C. von Sonntag, The chemi- 34.- P. D. Goodyear, S. Mac- Teivens, Int. J. Legal Med., 1985,
cal basis of radiation biology. Taylor Laughlin-Black, I. J. Mason, Bio- 108, 24.
BIBLIOGRAFIA
50.- S. Hummel, Ancient ADN 53.- L. A. Zhivotovsky, Ann. Hum. 57.- M. Krings, C. Capelli, F.
Typing: methods, strategies and Biol., 1999, 26(6), 569. Tschentscher, H. Geisert, S. Meyer,
applications. Springer Verlag, 54.- S. A. T. Anderson et al., A. von Haeseler, K. Grossschmidt,
Heidelberg, Berln, Nueva York, pp. Nature, 1981, 290, 457. G. Possnert, M. Paunovic, S.
193-197. 2003. 55.- M. Krings, H. Geisert, R. W. Paabo, Nat. Genet., 2000, 26(2),
51.- P. Gill, P. L. Ivanov, C. Schmitz, H. Krainitzki, S. Paabo, 144.
Kimpton, R. Piercy, N. Benson, G. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 1999, 58.- G. Gutierrez, D. Sanchez, A.
Tully, I. Evett, E. Hagelberg, K. 96(10), 5581. Marin, Mol. Biol. Evol., 2002, 19(8),
Sullivan, Nat. Genet., 1994, 6(2), 56.- I. V. Ovchinnikov, A. 1359.
130. Gotherstrom, G. P. Romanova, V. M. 59.- J. D. Hawks, M. H. Wolpoff,
52.- Sin autores, Nat. Genet., Kharitonov, K. Liden, W. Goodwin, Int. J. Org. Evolution, 2001, 55(7),
1994, 8(3), 205. Nature, 2000, 404(6777), 490. 1474.
37