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Manual de Micología PDF
Manual de Micología PDF
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Bibliografa
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Prctica No. 1
Seguridad en el Laboratorio
Introduccin
Los laboratorios de Micologa son ambientes especiales con respecto a la seguridad de
aquellos que trabajan en ellos, las muestras clnicas de pacientes recibidas para su estudio
significan un riesgo para el personal debido a los agentes infecciosos que pueden contener.
Los cultivos de agentes infecciosos producto de muchas de las actividades del
miclogo clnico tambin constituyen una amenaza.
La educacin del personal que manipula a diario los agentes potencialmente
infecciosos y la educacin por medio de avisos sobre riesgos biolgicos, as como
instrucciones escritas y verbales de aquellos que solo tienen una exposicin limitada al
ambiente del laboratorio son las medidas disponibles ms importantes para prevenir las
infecciones adquiridas en el laboratorio, los riesgos de un laboratorio de Micologa pueden
extenderse a laboratorios adyacentes.
Adems del riesgo por infeccin los laboratorios de Micologa tambin estn
expuestos a todos los riesgos asociados a cualquier ambiente de laboratorio como incendio,
riesgos elctricos, qumicos, materiales radiactivos, mal funcionamiento de los equipos,
peligros dependientes de desastres naturales, situaciones ambientales como pisos
deslizantes, sistemas de circulacin de aire deficiente.
Se debe poseer un manual de seguridad que contenga informacin sobre la conducta
a seguir en caso de una contingencia.
Objetivo
Dar a conocer a los alumnos a travs de un seminario las reglas de seguridad a
seguir durante el desarrollo de las prcticas a realizar.
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Tcnicas a emplear
Exposicin oral del tema utilizando material didctico (acetatos, diapositivas)
Material a emplear.
Acetatos y diapositivas
Desarrollo de la prctica
1. Exposicin oral
2. Ronda de preguntas
3. Aclaracin de dudas
Reporte
Resumen de lo expuesto durante el Seminario
Cuestionario
1. Defina que es seguridad
2. En un laboratorio que factores pueden alterar la seguridad
3. Que pasos se deben seguir para establecer la seguridad
4. De los factores que pueden alterar la seguridad cual considera el ms importante
5. Una breve crtica acerca del tema
Prctica No. 2
Aislamiento y siembra de hongos en placa y tubo
Introduccin
La mayora de los alimentos y productos agrcolas, son invadidos por diversos
microorganismos durante su desarrollo y su almacenamiento, siendo los hongos los ms
abundantes y la principal causa de los procesos de putrefaccin de los alimentos y de los
granos, ocasionando severas prdidas econmicas.
Algunos hongos se encuentran como flora normal de diversas cavidades y mucosas
del organismo humano, as como estn presentes en el suelo y las plantas, donde se
considera que tales sitios son su hbitat normal.
Objetivo
El alumno se familiarizar y aprender a manejar las diversas tcnicas de
aislamiento y siembra de hongos para su posterior identificacin.
Tcnicas a emplear
A) Tcnica de dilucin y vertido en placa (sustratos slidos o lquidos muy
contaminados).
1. Preparar de 4 a 5 tubos con 9 mL de agua destilada, o bien, solucin salina
isotnica, esterilizar y numerar del 1 al 5.
2. Se suspende en el tubo 1, un mL, o bien, un gramo de alimento muestra a analizar.
3. Homogenizar perfectamente la prueba.
4. Con ayuda de una pipeta estril, tomar 1 mL del tubo 1 y traspasarlo al tubo 2; con
otra pipeta estril, se toma una alcuota de 1 mL y se lleva al tubo 3; as
sucesivamente hasta llegar al tubo 5.
5. De las dos ltimas, tomar 1 mL de cada una y depositarlos respectivamente en las
placas de Petri estriles y vacas.
6. Adicionar aproximadamente 20 mL del medio PDA o SDA, estril, fundido y
enfriado a 45C.
7. Homogenizar por rotacin de las placas sobre la mesa.
8. Dejar solidificar e incubar a 28C por 4 a 5 das.
9. Hacer observaciones cada 48 h hasta la aparicin de colonias caractersticas de
hongos.
Material a emplear
1. Suelo.
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2. Refrescos embotellados.
3. Granos (arroz, trigo, frjol, etc.)
4. Alimento (chocolate, yogurt, queso, etc.)
5. Placas con medio SDA o PDA.
6. Tubos con tapn de rosca con medio SDA o PDA.
7. Tubos con solucin salina isotnica, o bien, agua estril.
8. Placas de Petri y pipetas de 1 mL estriles.
Desarrollo de la prctica
1. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de dilucin y vertido en placa.
2. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de puntos en placa o tubo.
3. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de exposicin de placas.
Cuestionario
1. Defina el trmino aislamiento
Prctica No. 3
Reconocimiento de las estructuras bsicas de los hongos
Introduccin
La mayora de los que deben relacionarse con la rama micolgica, a menudo se sienten
confundidos y desalentados en sus tentativas para estudiar los hongos debido a la gran
variacin en el aspecto macroscpico de las colonias, a la multiplicidad de las estructuras
microscpicas y a la nomenclatura poco conocida.
Sin embargo, estas dificultades son ms psicolgicas que reales y cuando se llegan a
dominar unos cuantos conceptos bsicos basados en las morfologas macroscpica y
microscpica, la identificacin de los hongos resulta ms fcil y rpida que en otras
bacterias ordinarias.
Los hongos emiten una o ms prolongaciones tubulares llamadas tubos germinales o
tambin llamadas hifas, que se alargan por el crecimiento de su extremo distal. La hifa
puede dividirse por formacin de paredes transversales a intervalos regulares.
Las hifas divididas por tabiques se denominan hifas tabicadas, sin embargo algunos
hongos no desarrollan tabicaciones en las hifas y se denominan no tabicadas o cenocticas.
Finalmente, el conjunto de hifas desarrollan lo que se conoce como micelio, la
diferenciacin de los hongos se basa principalmente en su aspecto colonial y morfologa
microscpica.
e. Luz reflejada.
f. Luz transmitida.
g. Bordes.
B) Morfologa microscpica ( referente al micelio )
a. Tabicado o septado.
b. Cenoctico.
c. Hialino.
d. Pigmentado (fugilaginoso, carotenoide )
e. Macrosifonado
f. Microsifonado.
Objetivo
El alumno ser capaz de diferenciar las colonias de los hongos y los diversos tipos
de estructuras bsicas, como por ejemplo, el micelio por medio de tcnicas de observacin
en fresco o directa y algunas preparaciones facilitadas por el profesor, valorando estos
parmetros como fundamentales en la identificacin de los hongos.
Tcnicas a emplear
A) Tcnica de resiembra en tubo.
1. Con el asa micolgica en ngulo de 90 tomar un pequeo fragmento de loas
colonias con morfologa diferente y depositarlo en un tubo con medio inclinado
PDA o SDA.
2. Incubar a 28C.
3. Observar cada 40 h el desarrollo de las colonias.
Material a emplear
1. Colonias de hongos aisladas en la prctica anterior.
2. Colonias de hongos proporcionadas por el profesor.
3. Tubos con medio PDA o SDA.
4. Colorante azul de algodn.
5. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
6. Porta y cubre objetos.
Desarrollo de la prctica
1. Observar las colonias aisladas de los sustratos (prctica # 1).
2. Escoger diferentes tipos de colonias y resembrarlas en tubos con medio PDA o
SDA.
3. Observar comparativamente las caractersticas macroscpicas de las colonias
desarrolladas.
4. Hacer preparaciones en fresco con azul de algodn lactofenol de las colonias
aisladas resultando de la prctica anterior.
5. Observar comparativamente el micelio de las muestras aisladas
con las
Dibujos:
a)
Hifa.
b)
Micelio.
c)
d)
e)
Micelio septadofugilaginoso.
f)
Micelio microsifonado.
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Prctica No. 4
Estructuras de reproduccin asexual en hongos saprfitos
Introduccin
La espora se refiere a un rgano que tiene como funcin la multiplicacin del hongo, las
esporas tienen una forma definida que puede ser redonda, ovalada, ms o menos larga etc.
Pueden ser unicelulares o pluricelulares; su tamao vara de 2 a varias decenas de
micras, su pared es sencilla o doble. Las esporas asexuadas se forman ya sea en el interior
de un saco por lo que se conoce como endosporas o en el exterior conocindolas como
exosporas, fijadas a la extremidad o sobre el trayecto de una hifa.
Tambin pueden ser producidas por rganos especiales, al ser puestas en libertas las
esporas pueden multiplicarse y dar origen a una colonia. Las esporas asexuadas son el
resultado de la transformacin de la hifa, sin el concurso de fenmenos sexuales y se
dividen en tres grupos:
Artrosporas.
b)
Blasrtosporas.
c)
Dictiosporas.
d)
Clamidosporas.
e)
Aleuriosporas.
B) Conidiosporas.
C) Esporangiosporas.
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Objetivo
Tcnicas a emplear
Preparacin de placas para microcultivo.
1. Seleccionar placas Petri de 20 x 100 mm.
2. Colocar dentro de la placa un crculo de papel filtro.
3. Sobre el crculo de papel colocar una varilla de vidrio de 8 mm de dimetro doblada
en V.
4. Sobre la varilla colocar un porta y un cubre objetos (22 x 22 mm).
5. Esterilizar las placas as preparadas.
6. Colocar glicerol al 10% estril.
7. Formol al 10%.
8. Pinzas, pipetas estriles.
9. Placa con medio de cultivo SDA o PDA (se deber seccionar en cuadros pequeos
en una zona estril).
Material a emplear
1. Colonias de hongos aisladas en la prctica anterior.
2. Colonias de hongos proporcionadas por el profesor.
3. Cultivos de Candida albicans en medio de Agar Harina de Maz o medio para
clamidosporas.
4. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor
Desarrollo de la prctica
1. Realizar la tcnica de microcultivo a partir de las colonias obtenidas en tubo.
2. Observar y comparar al microscopio los diversos tipos de esporas asexuales en
preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
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Artrosporas.
b)
Blastosporas.
c)
Clamidosporas.
d)
Esporangiosporas.
e)
Conidiosporas.
f)
Macroconidias.
g)
Dictiosporas.
h)
Fialosporas
Cuestionario
1. Defina el termino espora
2. Mencione los grupos de esporas por las cuales se reproducen los hongos
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Prctica No. 5
Identificacin macro y microscpica de los hongos saprofitos ms
frecuentes
Introduccin
La presencia de hongos en alimentos y productos alimenticios no es una novedad, se
conoce desde hace mucho tiempo y de hecho estos hongos, levaduras o mohos han sido
utilizados para alterar de manera deseable el sabor y olor de algn alimento (maduracin de
quesos y carnes, produccin de vinos y cerveza). Los hongos tambin se conocen como
deterioradores de los alimentos, actualmente existen ciencias especializadas en el estudio de
los hongos, ya que stos han demostrado gran relevancia en las reas mdica, alimenticia,
agrcola, etc.
En el rea mdica por los diversos cuadros clnicos que producen en el humano,
causando hasta la muerte (esto es cuando no se lleva a cabo un buen diagnstico de
laboratorio y mdico).
Objetivo.
Que el alumno establezca los diversos parmetros macro y microscpicos para la
identificacin propia y definitiva de los hongos saprfitos ms frecuentes.
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Material a emplear.
1. Preparaciones obtenidas a partir del microculivo.
2. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
3. Cepas de hongos saprfitos proporcionados por el profesor.
Desarrollo de la prctica.
1. Desmontar la preparacin del microcultivo. Teir y sellar.
2. Hacer comparaciones microscpicas entre las preparaciones obtenidas por los
equipos y las preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
3. Hacer los dibujos correspondientes a:
a. Rhizopus.
b. Mucor.
c. Aspergillus.
d. Penicillum.
e. Geotrichum.
f. Hormodendrum.
4. Describir la morfologa macroscpica de los hongos filamentosos.
5. Describir la morfologa macroscpica de los hongos levaduriformes.
Cuestionario
1. Qu parmetros se deben considerar para hacer una identificacin microscpica de
los hongos?
2. Anote la ficha de identificacin de los siguientes hongos
a. Rhizopus
b. Mucor
c. Aspergillus niger
d. Penicillum sp
e. Ulocladium sp
f. Alternaria sp
g. Sacharomyces cereviceae
h. Rodhotorula sp
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Prctica No. 6
Dermatofitos (tias)
Introduccin
Las tias constituyen un grupo de micosis causadas por hongos taxonmicamente
relacionados que afectan los tejidos queratinizados: piel, cabello, uas en el humano,
plumas, cuernos y piel de animales. Estos hongos pertenecen a numerosas especies
agrupadas en tres gneros: Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton.
Los hongos pertenecientes a estos gneros tienen como caracterstica comn la de
poseer enzimas queratinofilicas para atacar a la queratina presente en la piel y otras
estructuras del hospedero, por lo que se conocen con el nombre de dermatofitos y
dermatofitosis o tias a las enfermedades que ellos producen.
Los dermatofitos manifiestan su estado parasitario a travs de hifas ramificadas o
bien hifas con artrosporas, esta forma la adquieren en el tejido que atacan. En el estado
saprofito o vegetativo estos hongos presentan estructuras ornamentadas y variadas que se
toman como base para la diferenciacin entre diferentes gneros y especies a nivel
microscpico.
Objetivo
Familiarizar al alumno con las diversas tomas de muestras clnicas de acuerdo a la
zona afectada por los dermatofitos; instruirlo en el manejo de las tcnicas en fresco a travs
de la cual buscara el estado parasitario de los mismos en las diferentes muestras clnicas
Tcnicas a emplear
A) Obtencin de escamas.
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Sobre un porta objetos agregar una gota de NaOH o KOH del 5 al 10%
(solucin aclarante).
b)
c)
d)
Trichophyton
(T.
mentagrophytes,
T.
rubrum,
T.
tonsurans,
T.
concentricum).
b)
Microsporum gypseum.
c)
Epidermophyton floccosum.
Desarrollo de la prctica
1. Hacer preparaciones en fresco con las muestras de pelo y/o escamas, de piel y/o
uas.
2. Buscar artrosporas e hifas ramificadas (fase parasitaria comn de los dermatofitos)
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3. Cultivar las muestras clnicas por la tcnica de punto en placa o en tubo, empleando
los diversos medios de cultivo.
4. Hacer microcultivo de las cepas tipo proporcionadas por el profesor.
5. 5.- Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por el
profesor.
Dibujos
Muestra positiva a fase parasitaria.
Descripcin macroscpica de las cepas tipo.
Cuestionario
1. Defina el trmino tia.
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Prctica No. 7
Identificacin macro y microscpica de los dermatofitos
Introduccin.
Se ha podido llegar a una clasificacin simplificada de los dermatofitos mediante el cultivo
de los mismos y la seleccin de ciertos caracteres morfolgicos especficos como criterios
para la diferenciacin entre gneros y especies.
Por este mtodo, Emmons demostr con claridad mxima que tan solo procede
considerar tres gneros: Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton, la diferenciacin de
los gneros y sus respectivas especies se basa en las caractersticas macroscpicas de las
colonias y en la morfologa microscpica.
Gnero Trichophtyon: Por examen macroscpico, la colonia tiene aspecto
algodonoso, pulverulento o polvoriento o velloso, liso o creo. La pigmentacin vara
notablemente, ya que en cultivo pueden ser blancos, rosados o rojos, purpreos, violetas,
anaranjados, amarillos o pardos. Puede presentarse pigmento difusible al medio, que se
aprecia al reverso de la placa o tubo; este pigmento puede variar del color beige al caf o
rojo vino intenso.
Por examen microscpico las macroconidias son raras o no existen en algunas
especies, a menos que el hongo se desarrolle sobre un medio de cultivo apropiado y se
observan como grandes estructuras fusiformes en mazo, de pared gruesa o lisa de 4 a 6
micras de ancho por 10 a 50 micras de longitud.
Pueden verse tambin otras estructuras como micelio en raqueta, clamidosporas y
cuerpos nodulares o hifas en espiral.
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Dibujos
a) Trichophyton tonsurans.
b)
Trichophyton rubrum.
c)
Trichophyton mentagrophytes.
d)
Microsporum gypseum.
e)
Epidermophyton floccosum.
Cuestionario
1. De la clasificacin con gnero y especie de Dermatofitos
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Prctica No. 8
Cromomicosis y esporotricosis
(micosis subcutneas)
Introduccin.
Esporotricosis, es una micosis generalmente subcutnea y benigna, pero que en raros casos
puede ser generalizada y mortal.
Afecta especialmente las extremidades superiores e inferiores y excepcionalmente
produce enfermedad pulmonar primaria al penetrar por va respiratoria.
La esporotricosis prevalece en campesinos, empacadores de alfarera y vendedores
de diversos zacates, la va de entrada es a travs de la piel, mediante un traumatismo
cutneo con espinas u otros objetos vegetales.
En su fase parasitaria, el hongo se observa como levaduras gemantes alargadas (en
forma de puro) o redondeadas de 3 a 10 micras de dimetro. En la fase saprobia el hongo
tiene micelio delgado (1 a 2 de dimetro), tabicado, ramificado, que esporula mediante
conidiforos en forma de flor de margarita.
El examen directo del pus no permite en general visualizar al hongo; raramente se
pueden observar las formas parasitarias en frotes de pus teidos por el mtodo de
Hotchkiss-Mac Manus.
El cultivo es el mejor mtodo diagnstico de la esporotricosis, mediante la siembra
del pus en placa con SDA, las colonias al principio son pequeas y blancas y crecen de
micelio areo; a medida que aumenta el crecimiento, la superficie de la colonia adquiere
aspecto hmedo, rugoso y membranoso, el color puede variar de crema al negro.
Cromomicosis, es una micosis verrucosa, crnica, de evolucin lenta, generalmente
se localiza en miembros inferiores. Se caracteriza por la formacin de ndulos cutneos
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Objetivo
Familiarizar al alumno con el manejo y conocimiento macro y microscpico de las
cepas como agentes etiolgicos de la esporotricosis y cromomicosis.
Tcnicas a emplear
A. Tcnica de observacin directa o en fresco.
B. Tcnica de microcultivo (cepas tipo).
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Material a emplear
1. Placas para microcultivo.
2. Placas con agar Saboraud seccionadas en cuadros.
3. Glicerol estril al 10%.
4. Formol al 10%.
5. Pipetas estriles.
6. Colorante azul de algodn.
7. Cepas proporcionadas por el profesor.
8. Porta y cubre objetos.
Desarrollo de la prctica
1. Sembrar microcultivo con las cepas tipo.
2. Hacer preparaciones directas a partir de las cepas tipo (es recomendable no usar
colorante para que se observe el tipo de micelio en el caso de los hongos
dematiceos).
3. Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo.
Dibujos
a)
Sporothrix schenkii.
b)
Phialophora verrucosa.
c)
Fonsecae pedrosoi.
d)
Cladosporium carrionii.
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Prctica No. 9
Criptococosis
(Micosis oportunistas)
Introduccin
La criptococosis es una micosis oportunista que afecta primariamente a pulmones,
producindose una enfermedad que generalmente cursa en forma asintomtica, pudiendo
diseminarse a cualquier rgano de la economa, particularmente a meninges y sistema
nervioso central, donde produce meningitis subaguda o crnica.
El hongo fue aislado por primera vez por Emmons del excremento y nidos de
palomas; Sanfelice lo aisl del zumo de frutas.
El diagnstico de laboratorio se hace en base a los productos biolgicos como
esputo y lquido cefalorraqudeo, el hongo se manifiesta en el producto de la lesin como
un organismo en forma de levadura con pared gruesa y en gemacin, de 5 a 20 micras de
dimetro, rodeado por una cpsula ancha, refrctil.
Deben cultivarse todos los materiales en agar sangre a 37C y en agar Saboraud a
temperatura ambiente, puede aadirse cloranfenicol al medio para evitar la presencia de
bacterias en las muestras, pero nunca cicloheximida, dada la sensibilidad de Criptococcus
neoformasa la misma. Sobre agar glucosa Saboraud a temperatura ambiente, el organismo
crece con lentitud, produciendo colonias en forma de levadura que al principio pueden ser
blancas, rugosas y granulosas.
En las preparaciones macroscpicas se comprueba la presencia de organismos y
clulas en gemacin con tubos germinales, en la etapa de crecimiento no se advierte
cpsula, la colonia se desarrolla a 37C sobre agar Sabouraud con apariencia mucoide,
viscosa, de color crema a pardo, en su morfologa se observan levaduras encapsuladas al
teir con tinta china.
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Objetivo
Familiarizar al alumno con la bsqueda de la fase parasitaria del hongo a travs de
la tincin con tinta china y que a la vez conozca la morfologa colonial macroscpica del
agente etiolgico.
Tcnicas a emplear
A. Obtencin de esputo.
B. Concentracin de esputo.
C. Obtencin de Lquido Cefalorraqudeo (es preferible que esta muestra sea obtenida
por un profesionista experto en la obtencin de dicho lquido).
CONCENTRACIN DEL LQUIDO CEFALORRAQUDEO.
1. Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 20 min.
2. Con pipeta Pasteur estril separar cuidadosamente el sobrenadante y pasarlo a un
tubo estril.
3. Utilizar el sedimento para las pruebas diagnsticas de rutina.
TINCIN NEGATIVA (con tinta china)
1. En un porta objetos poner una gota de tinta china.
2. Con un asa bacteriolgica poner una o dos asadas del sedimento (ya sea esputo o
LCR)
3. Poner un cubre objetos tratando de no formar burbujas de aire.
4. Montar la muestra y observar al microscopio a seco dbil y seco fuerte, tratando de
hallar la fase parasitaria del hongo.
Material a emplear
1. Frascos de boca ancha estriles.
2. Tinta china.
3. Asa bacteriolgica.
4. Porta y cubre objeto.
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5. Pepsina al 1%.
Desarrollo de la prctica
1. Obtener muestras patolgicas y concentrarlas siguiendo las tcnicas ya descritas.
2. Hacer preparaciones en fresco con la tinta china.
3. Buscar la fase parasitaria de C neoformans en las preparaciones con tinta china.
4. Observar las caractersticas coloniales de C. neoformans en agar Saboraud.
Dibujos
a)
Criptococcus neoformans.
Cuestionario
1. Qu estructura es caracterstica de Criptococcus neoformans?
3. Cules son los cuadros clnicos mas graves que puede ocasionar este hongo?
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Prctica No. 10
Candidiasis
(Micosis oportunista)
Introduccin
La Candidiasis, por los diversos cuadros clnicos que presenta, puede causar desde una
micosis superficial, una subcutnea, hasta una profunda o bien comportarse como
oportunista. Candida albicans puede causar infeccin aguda o subaguda, produciendo
lesiones en boca, vagina, piel, uas, bronquios, pulmones y ocasionalmente, septicemia,
endocarditis o meningitis.
Como pueden aislarse cepas patgenas de Candida albicans en piel normal, mucosa
oral y vaginal normales y en la materia fecal de individuos sanos, salta a la vista que la
mayor parte de las infecciones tienen un origen endgeno y la determinacin de la fuente
de infeccin constituye un problema tan difcil como en el caso de infecciones de
Staphylococcus aureus.
La presencia de Candida en el individuo normal explica la diseminacin durante las
enfermedades debilitantes, padecimientos malignos del sistema hematopoytico, diabetes,
lupus eritematoso, enfermedades granulomatosas, etc...
La Candidiasis ataca a personas de todas las edades y razas y en ambos sexos,
habindose reconocido ciertos factores predisponentes. Los antibiticos de amplio espectro
y las drogas citotxicas favorecen la infeccin por Candida albicans y otras especies de
Candida.
Tcnicas a emplear
A) Tomar de exudados farngeos.
1. El paciente debe presentarse sin haber tomado alimentos, con aseo bucal hecho al
menos 12 h antes de tomar la muestra.
2. Se coloca al paciente sentado en posicin odontolgica. Auxiliarse con una lmpara
adecuada para visualizar perfectamente la cavidad oral.
3. Mediante un abatelenguas estril sujetar la lengua e introducir un hisopo estril,
raspando con la punta del algodn las partes ms afectadas de las amgdalas, sin
tocar vula.
4. Repetir la operacin con otro hisopo estril.
5. Se colocan los hisopos dentro de un tubo con solucin salina estril.
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1. Inocular una pequea cantidad de clulas en 0.5 mL del suero (de preferencia de
pacientes diabticos).
2. Incubar a 37C en agitacin durante 30 a 60 min o en condiciones estacionarias
durante 2 h.
3. Montar entre portada y cubre objetos una gota de la suspensin y observar al
microscopio a seco dbil y seco fuerte.
B).- Produccin de clamidosporas (Tcnica de Dalmov)
1. Marcar en dos partes iguales el reverso de las placas de Petri con medio Oxgall y
Clamidosporas o bien Harina de Maz.
2. En uno de los sectores de cada medio, descargar el inoculo de la cepa problema,
trazando un zig-zag abierto con el asa, procurando no sobrepasar la superficie de 2
cm cuadrados.
3. Flamear el asa y repasar la estra en sentido contrario.
4. Flamear el cubre objetos y colocarlo sobre la siembra, presionndolo ligeramente
con el extremo contrario del asa.
5. Repetir la misma operacin en el sector contrario y con cepa testigo.
6. Incubar las placas a 28C durante 48 a 96 h.
7. Destapar las placas y observar al microscopio directamente sobre el agar y cubre
objetos a seco dbil y seco fuerte.
De la cepa problema hacer una suspensin en solucin salina estril para sembrar los
medios para la fermentacin y asimilacin de carbohidratos.
Zimograma:
1. Utilizar una serie de tubos de hemlisis conteniendo cada uno 4 mL de medio base
de Wickerham y 1 mL de los azcares a probar al 6%. Adicionar una campana de
Durham como indicador de la produccin de gas.
2. Inocularlos con dos gotas de la suspensin.
3. Incubar a 28C durante 72 h.
4. Hacer las lecturas de produccin de cido y gas.
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Auxonograma:
1. Utilizar una serie de tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca, conteniendo cada
uno 4.5 mL del medio base y 0.5 mL de los azcares a probar al 5%.
2. Inocular con dos gotas de la suspensin.
3. Incubar a 28C y observar el crecimiento cada 48 h.
Material a emplear
1. Cepa del gnero Candida (Candida albicans).
2. Exudado farngeo.
3. Exudado vaginal.
4. Suero humano.
5. Placas Petri con:
a)
Gelosa sangre.
b)
Saboraud dextrosa.
c)
Clamidospora.
d)
Oxgall y Biggy.
Saboraud inclinado.
b)
Micobiotico inclinado.
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b)
c)
d)
Cuestionario
1. Aparte de Candida albicans, qu otras especies existen?
2. Cules son los cuadros clnicos que con mayor frecuencia produce Candida
albicans?
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Prctica No. 11
Aspergilosis
(Micosis oportunistas)
Introduccin
La Aspergilosis es micosis de animales y seres humanos causadas por hongos oportunistas
del gnero Apergillus en especial A. fumigatus, A. nigery A. flavus.
Pueden dar enfermedad pulmonar alrgica o invasora, aspergiloma, diseminarse a
sistema nervioso central u otros rganos o localizarse, en inmunodeprimidos es sistmica y
letal. Es una enfermedad cosmopolita y rara que afecta a cualquier edad, raza o sexo,
predomina en varones adultos, los aspergilomas se ha observado en tuberculosos curados.
Las formas alrgicas parecen ms frecuentes en campesinos y en quienes trabajan
con granos, como los empleados de silos y molinos. Como factores predisponentes estn el
uso de antibiticos de amplio espectro, citotxicos y glucocorticoides, leucemia, trasplantes
de rganos en especial mdula sea, infecciones por citomegalovirus, no suele observarse
en pacientes con SIDA.
En aves como pavos y pollos hay epidemias de aspergilosis de vas respiratorias por
consumo de granos contaminados, en bovinos y ovinos ocasionan abortos.
Objetivo
Familiarizar al alumno con la bsqueda de la fase parasitaria del hongo a travs del
examen en fresco y que a la vez conozca la morfologa colonial macroscpica del agente
etiolgico.
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Tcnicas a emplear
A. Obtencin de expectoracin, escamas, exudados, raspado de uas
B. Realizar examen directo empleando KOH al 10% o SSI
C. Cultivo en Agar Saboraud o Agar Papa Dextrosa de 1 a 3 das a 28C
Material a emplear
1. Frascos de boca ancha estriles, placas Petri estriles, medio de transporte
2. KOH al 10%.
3. Asa micolgica, lancetas estriles
4. Porta y cubreobjetos.
5. Agar Saboraud y/o Agar Papa Dextrosa.
Desarrollo de la prctica
1. Obtener muestras patolgicas siguiendo las tcnicas ya descritas.
2. Hacer preparaciones en fresco con KOH AL 10% o SSI.
3. Buscar la fase parasitaria de las especies de Aspergillus
4. Observar las caractersticas coloniales de las especies de Aspergillus en el agar
correspondiente.
Dibujos
a)
Especies de Aspergillus.
Prctica No. 12
Accin fungicida de Desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos
en superficies inertes
Introduccin.
Los desinfectantes son preparaciones con propiedades germicidas es decir que eliminan
microorganismos patgenos, deben su accin a los ingredientes activos que contienen.
Entre los principales tenemos: fenol, cresol, aceite de pino, alcohol isopropilico, los
ingredientes activos son completamente emulsificantes y otros ingredientes inertes como el
agua, colorantes,fijadores, teniendo las siguientes caractersticas :
Deben tener una buena concentracin de ingredientes activos lo cual garantiza su
efectividad y poder residual.
Si son desinfectantes para ambientes domsticos deben tener un aroma agradable,
para lo cual se pueden adicionar esencias aromticas, las cuales no alteran en absoluto el
poder del ingrediente activo.
No deben contener sustancias txicas para el organismo humano o para animales
menores, esto quiere decir que al aplicarse el producto este no contamine
Objetivo
Determinar la accin de desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos a
nivel de superficies inertes.
Tcnicas a emplear
A. Preparacin de placas Petri con en medio de cultivo seleccionado
B. Preparacin de los diferentes desinfectantes a las concentraciones a probar
C. Purificar las cepas de hongos causantes de contaminacin ambiental.
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Material a emplear
1. Placas Petri
2. Agar Saboraud y/o Agar Papa Dextrosa.
3. Asa micolgica
4. Benzal, hipoclorito de sodio, fenol, aceite de pino, alcohol isoproplico
5. Cepas a probar
Desarrollo de la prctica
1. Previamente las placas fueron preparadas con una mezcla entre los desinfectantes y
el agar correspondiente
2. Sembrar las diferentes cepas a probar en las cajas Petri con la mezcla previa
3. Debern prepararse 2 placas por cada una de las cepas, una solo con agar, la
segunda con agar y el desinfectante
4. Los desinfectantes debern encontrarse a una concentracin conocida, la primera
placa ser la relacin del desinfectante con el agar correspondiente de uno a uno, la
segunda sin ninguna concentracin del agente
5. Diariamente por aproximadamente una semana ser medido el crecimiento radial de
cada una de las placas, para poder llevar as un control de crecimiento.
Reporte
Todas las mediciones sern graficadas para denotar la relacin de crecimiento entre estas,
para poder identificar as el mejor desinfectante
Cuestionario
1. Defina que es un desinfectante
2. De los desinfectantes conocidos cual o cuales son los ms efectivos
3. Que desinfectantes presentan una elevada toxicidad
4. Que otros desinfectantes se conocen
5. Los hongos pueden crear resistencia a los desinfectantes
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BIBLIOGRAFA
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