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Extracción de Dna Vegetal PDF
Extracción de Dna Vegetal PDF
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Laura Martnez Martn- 1 Grado Gentica - UAB!
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EXTRACCIN DE DNA
Abril de 2015
ndice!
Pg.
Introduccin
3!
Objetivos
3!
Material.
3!
Procedimiento
4!
8!
Valoracin personal.
11!
Webgrafia.
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EXTRACCIN DE DNA
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Introduccin!
Todo organismo vivo est formado por la ampliamente estudiada y conocida
molcula de DNA. Sabemos que los organismos vivos provienen de una nica clula
ancestral llamada LUCA. Este hecho nos indica que entre organismos vivos compartimos
mucho ms de lo que a veces nos podramos llegar a imaginar. Por ejemplo, los humanos
compartimos el 50% del DNA con el pltano. Sin embargo, el porcentaje de DNA que
compartimos depende de cmo se mida. Si medimos secuencias idnticas de pares de
bases, entonces es bastante bajo, pero si nos fijamos en los genes con funciones idnticas o
similares entonces es de hecho el 50 %. Algunas de las cosas para las que estos genes
codifican son de bioqumica bsica: la replicacin
del DNA, la transcripcin, la traduccin, el
metabolismo
reparacin),
del
el
DNA
(recombinacin
metabolimso
de
la
clula
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Pltano!
Barilla agitadora!
Pia!
Vaso de precipitados!
Fairy (o detergente)!
Erlenmeyer!
Agua destilada!
Termmetro!
Sal!
Colador y filtro!
Agua!
Embudo!
Tubos de ensayo!
Balanza!
Pipeta Pasteur!
Probeta
Batidora
EXTRACCIN DE DNA
Procedimiento!
1. Trituracin del pltano: Con la ayuda de un cuchillo cortamos unos 100g de pltano y
lo troceamos hasta obtener porciones muy pequeas. Despus aplastamos todos los
trozos con un tenedor para formar una pasta ms o menos homognea. Depositamos
esta pasta en un vaso de precipitados.!
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2. Preparacin de la solucin de extraccin: Primero pesamos con la balanza 3g de sal.
Con una probeta preparamos 100ml de agua destilada y 10ml de Fairy. A continuacin
lo mezclamos todo en un erlenmeyer procurando no formar muchas burbujas.!
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3. Detergente + pltano: Vertemos el detergente en el vaso de precipitados que contiene
el pltano y lo mezclamos todo procurando de nuevo no hacer muchas burbujas.!
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EXTRACCIN DE DNA
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5. Bao frio: Preparamos un recipiente con agua y hielo e introducimos el vaso de
precipitados. Lo dejamos en estas condiciones durante 5 removiendo constantemente.!
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6. Preparacin del zumo de pia: Mientras esperamos que pasen los 5 del bao fro
preparamos el zumo de pia. Troceamos una pia y trituramos la parte central o
corazn en la batidora. Filtramos la pasta con un colador para obtener el zumo.!
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8. Solucin + zumo de pia: Con una pipeta Pasteur cogemos 1ml de zumo de pia y lo
aadimos a 5ml del extracto en un tubo de ensayo. Dejamos que actue el zumo en la
solucin de 2 o 3. !
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9. Solucin + alcohol: Sacamos el alcohol del congelador y preparamos en un tubo de
ensayo aproximadamente el mismo volumen de alcohol que de la solucin de inters.!
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EXTRACCIN DE DNA
10. Observacin del DNA: Vertemos muy lentamente el alcohol en el tubo de ensayo con
la solucin. Al cabo de pocos segundos seremos capaces de observar tres capas bien
diferenciadas. Encima de todo estar el alcohol, debajo de todo estarn los restos
celulares (membranas, orgnulos) del pltano y los otros componentes de la solucin y,
en la interfase observaremos una especie de hilos blancos rodeados de burbujas. Eso
es el DNA! (1)!
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DNA!
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(1) El procedimeinto de extraccin de DNA es en realidad un procedimiento de extraccin de acidos nucleicos as que lo
que estamos observando es un mezcla de RNA y DNA.!
EXTRACCIN DE DNA
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El DNA se encuentra en el interior del ncleo de las clulas eucariotas rodeado de
protenas (histonas) que lo mantienen unido y compactado. Para poder aislarlo y
observarlo se deben deshacer la membrana plasmtica y la envoltura nuclear y tambin se
precisa la desnaturalizacin de las protenas. A continuacin se explicar qu pasos del
procedimiento explicado anteriormente son los encargados de realizar estas funciones y
tambin se aclarar el por qu de cada paso.!
- Trituracin del pltano: Incrementar el rea superficial del pltano ayuda a hacer la
superfcie de la membrana ms fcil de disolver y tambin permite una absorcin ms
efecitva del calor y de las soluciones que se aadirn.!
- Detergente: Las membranas de las clulas estn formadas por dos capas de lpidos
con protenas transmembrana a travs de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa de
fosfolpidos de las membranas plasmticas y la envoltura nuclear (Imagen 1). Los lpidos
de la membrana se descomponen debido al detergente que deshace las uniones que
mantienen la membrana junta. Cuando el detergente se pone en conacto con los lpidos
stos se separan de la membrana rompindola. La estructura de los lpidos es similar a la
del detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y lpidos
(Imagen 2).!
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EXTRACCIN DE DNA
- Bao caliente: Este paso se utiliza para liberar el DNA de sus barreras protectoras.
La incubacin se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para
ayudar a disolver la bicapa de fosfolpidos mediante la desnaturalizacin de las protenas
de membrana y rotura de los enlaces que mantienen los fosfolpidos unidos. El calor
ablanda la membrana.!
- Bao frio: El agua fra ayuda a mantener el DNA intacto durante el proceso de
extraccin. El enfriamiento de la solucin ayuda a prevenir la desnaturalizacin que
podra destruir el DNA si se expusiera al calor de manera prolongada (protege el DNA de
enzimas que pueden destruirlo como las DNAasas ya que la refrigeracin ralentiza las
reacciones enzimticas).!
- Filtracin: Este paso permite separar los restos de los tejidos del pltano y de las
clulas que hemos roto en los pasos anteriores. Ese maerial no nos interesa y quedar
retenido en el colador (los restos ms grandes) o en el filtro (restos ms pequeos). El
lquido filtrado que conseguimos es el que contiene el DNA libre de la membrana nuclear.!
- Zumo de pia: Las molculas de DNA estn rodeadas de protenas del tipo
histonas, y para obtener un extracto ms puro de DNA es necesario eliminarlas. Para ello
hay que utilizar enzimas proteolticos. El zumo de pia contiene bromelana, una enzima
capaz de hidrolizar las proteinas y por tanto capaz de separar el DNA de las histonas
(Imagen 3). Este proceso ayuda a que el DNA se desempaquete y es ms fcil su
extraccin.!
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EXTRACCIN DE DNA
- Alcohol congelado: El DNA es una molcula polar, pero la reaccin con el etanol a
muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formndose un
precipitado justo entre la capa con etanol lquido y la capa con el extracto. El DNA es el
nico componente de la solucin que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque
las diferentes cadenas se van aglutinando entre s al precipitar debido a la accin de
fuerzas fsicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la
capa del extracto.!
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EXTRACCIN DE DNA
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Valoracin personal!
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Antes de descubrir este experimento no me hubiera imaginado que extraer DNA de un
organismo vivo fuera tan sencillo y mucho menos usando ingredientes que tenemos en
casa como el Fairy, la sal o la pia.!
A partir de aqu me surgen dudas como por ejemplo, si hubiera usado otro organismo
con ms cromosomas hubiera obtenido ms DNA? o, podra realizar este experimento
con clulas humanas o se requieren procesos ms complejos? Tendr que seguir
investigando para encontrar la solucin!!
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Webgrafia!
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http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/!
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/howto/!
http://www.scientificamerican.com/article/find-the-dna-in-a-banana-bring-sciencehome/!
http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dnaen.htm!
http://classic.sidwell.edu/us/science/vlb5/Labs/DNA_Extraction_Lab/
dna_extraction_lab.html!
http://leadersk.tripod.com/!
http://www.biologyjunction.com/extracting_dna.htm!
EXTRACCIN DE DNA
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