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CUANTIFICACION DE UREA I:

USO DEL PRODUCTO


Para la determinacin de Urea en plasma, suero u orina. Mtodo de Berthelot
FUNDAMENTO DEL METODO:
La enzima ureasa transforma la urea en dixido de carbono e in amonio. En
presencia de este ltimo y por accin del hi- poclorito de sodio en medio alcalino,
se produce la oxidacin del fenol con formacin de indofenol (reaccin de
Berthelot) de intenso color azul, cuya intensidad medida fotomtricamente es
proporcional a la concentracin de amonaco y por lo tanto a la de urea presente
en la muestra.
REACTIVOS
Ureasa suspensin: Suspensin de ureasa en buffer fosfato. Actividad > 10 U/mI.
Listo para usar.
Reactivo Fenol: Fenol slido recristalizado y pentacianonitrosil- ferrato disdico
slido (PNFS).
Concentracin final luego de preparado:
Fenol...........................................................................500 mM
PNFS............................................................................0,6 mM
Reactivo Hipoclorito: Solucin concentrada de hipoclorito s- dico e hidrxido de
sodio.
Concentracin final luego de preparado:
Hipoclorito de Sodio......................................................30 mM
Hidrxido de Sodio......................................................0,62 mM
Estndar: Solucin de urea 0,60 g/l.
REACTIVOS Y MATERIAL AUXILIAR NO PROVISTOS

Bao Mara de 37C


Timmer
Pipetas y micropipetas
Tubos y Cubetas de Vidrio
Fotmetro o Espectrofotmetro

Conservacin y estabilidad de los reactivos


Reactivo Fenol y Reactivo Hipoclorito se pueden conservar a temperatura
ambiente, en lugar fresco y al abrigo de la luz.

La estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en la caja.


Ureasa suspensin se conserva en refrigerador. Estable 24 meses.
Precauciones y advertencias sobre el uso de los reactivos
Los Reactivos provistos como las soluciones de trabajo son cus- ticos. Evitar
contacto con piel y mucosas. El Reactivo Fenol es txico. Para uso diagnstico IN
VITRO.
Preparacin de los reactivos
Reactivo Hipoclorito de trabajo: Se prepara diluyendo con agua destilada el
Reactivo Hipoclorito como se indica en cada envase.
Reactivo Fenol de trabajo: Se prepara disolviendo el Reactivo Fenol con agua
destilada como se indica en cada envase.
Conservacin y estabilidad de los reactivos de trabajo
Una vez preparados los Reactivos de trabajo deben conservarse en refrigerador.
La estabilidad alcanza un perodo minimo de por lo menos seis meses.
Indicios de inestabilidad o deterioro de los reactivos de trabajo
Usar pipetas individuales para los Reactivos de trabajo, as se evita el deterioro de
las soluciones.
El aumento grosero de la coloracin de los blancos indica con- taminacin con
amonaco. Si esto ocurri con las soluciones de trabajo, se deben desechar.
DETERMINACION DE UREA EN SANGRE
Muestra: Suero o plasma anticoagulado con heparina, oxalato, citrato o EDTA. No
usar anticoagulantes que contengan fluoruro.
La urea es estable en el suero a temperatura ambiente por un mnimo de 24
horas. En refrigerador puede llegar a 10 das.
DETERMINACION DE UREA EN ORINA
Muestra: Usar sobrenadantes de orinas centrifugadas. La urea en orina es estable
varios das si se conserva la muestra en refri- gerador dependiendo del grado de
contaminacin.
Las muestras de pacientes deben manipularse considerndolas potencialmente
infectivas, al igual que el material descartable y los utilizados en el ensayo, que
hayan estado en contacto con las mismas.
Un procedimiento aconsejado para descartarlos es el siguiente: autoclavado a
121C durante una hora y el tratamiento de los lquidos residuales con hipoclorito
de sodio durante una hora a una concentracin final del 5%.

Sustancias interferentes
Muestras con moderada hemlisis no interfiere.
No se observa interferencia para valores de bilirrubina hasta 20 mg/dl.

ENSAYO I:
Determinacin de Urea en suero o plasma. Procedimiento: En tres tubos
rotulados, colocar:
B
E
D
Agua
2
2
2
Muestra
-gotas
-gotas
20
l
destilada
gotas
Estndar
20 l
Ureasa
1 gota 1 gota
1
Mezcle.
Incube 5 minutos entregota
37
suspensi
y
40
C.
Rvo. Fenol 1 ml
1 ml
1 ml
Rvo.
1 ml
1 ml
1 ml
Agitar
suavemente. Incubar 5
Hipoclorit
Agua
1040
mlC 10 ml
10 ml
minutos a 37Mezclar
destiladapor inversin. Dejar
estabilizar el color 10 minutos. Leer
en fotocolormetro
a 510-550 nm o
ENSAYO
II:

Determinacin de Urea en orina.


Procedimiento: Procesar diluciones 1/10. Si los valores obteni- dos escapan al
rango de linealidad, continuar con diluciones mayores.
En cuatro tubos marcados: BR (blanco de reactivos), BO (blanco de orina), E
(estndar) y O (desconocido), colocar:
BO
BR
E
D
Agua
2
2
2
2
Orina
destilada -gota -gota -gota 20
gota
Estndar
20
diluida
l
Ureasa
1
1
1
1
l
Mezcle.
entre gota
37
suspensiIncube
gota5 minutos
gota gota
y
40
C.
Rvo. Fenol 1 ml
1 ml
1 ml
Rvo.
1 ml
1 ml
1 ml
Agitar
suavemente. Incubar 5
Hipoclorit
Agua
1040
mlC 10 ml
10 ml
minutos a 37Proseguir
destilada como en el ENSAYO I

CONTROL DE CALIDAD
INTERNO:
Para adultos, con edad promedio
correspondida entre 30-35 aos y
dietas balanceadas se acepta:
Urea (suero o plasma): 0,20-0,40
g/l
Urea (eliminacin en orina): 20-3
g/24 hs.
NOTAS
1.
Los volmenes de muestras
y reactivos a utilizar pueden disminuir o aumentar, siempre que se

CALCULOS

Determinacin de Urea en suero o plasma:


Absorbancia D
Urea g/l = ----------------------x 0,60
Absorbancia E

Determinacin de Urea en orina:

(Abs. D - Abs. BO)


Urea g/l = ----------------------- x 0,60 x dilucin
Abs. E
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Se recomienda procesar juntamente con las muestras, sueros control normal y
anormal para controlar la perfomance del en- sayo. Se aconseja el uso de Qualiset
Sueros Control Nivel 1 y 2 GT Lab (Cdigos 602105-602205)
Cada Laboratorio debe disear su propio sistema de Control de Calidad Interno y
establecer las medidas correctivas si se supe- ran los limites de tolerancia
aceptables.
SISTEMA ANALITICO
1.
Ley de Beer: La reaccin colorimtrica sigue la ley de Beer hasta 1,5 g/l.
Para valores superiores diluir la muestra en proporcin adecuada con solucin
fisiolgica, o la solucin final con blanco de reactivos.
Multiplicar el resultado obtenido por la dilucin efectuada.
2.
Sensiblidad:
Usando
aproximadamente 0,03 g/l.
3.

fotocolormetro

Precisin:

Intraensayo
Nivel
Medio
0,36/
g/l
1,02 g/l

Rango
0,330.42 g/l
0,951,06 g/l

D.S
0,016
g/l
0,035
g/l

C.V.
%
4,4
3,4

la

sensibilidad

es

de