RESUMEN

El cultivo a gran escala de microalgas y el uso prctico de su biomasa como una fuente de ciertos
constituyentes, ha sido muy importante. Un ejemplo de ello fue el uso del alga verde Chlorella vulgaris
que puede ser utilizada como suplemento alimenticio, para la acuacultura; purificador de aguas
residuales en biorremediacin, entre otras. Dadas las propiedades atribuidas a esta microalga, el presente
trabajo tuvo como objetivo identificar el medio en el que Chlorella vulgaris crece con mayor rapidez, as
como elaborar un producto comestible a partir de su biomasa y encapsularla. Se evaluaron tres diferentes
medios de cultivo en laboratorio para el alga: Basal de Bold (BBM), Chu No. 10 y Solucin Nutritiva
Knop, obteniendo como resultado un mayor crecimiento en el medio de cultivo Bolds Basal con una
velocidad de crecimiento de 0.541 divisiones por da, esto debido a la cantidad de nutrientes que posee.
Para verificar el contenido nutricional de Chlorella y realizar el producto comestible se realizaron
pruebas para identificar vitamina C, monosacridos y protenas, las cuales resultaron positivas, por lo
que es una buena opcin como suplemento alimenticio de consumo humano. Para encapsularla y
elaborar un producto comestible a partir de su biomasa, se consider un anlisis bacteriolgico y la
importancia de la esterilizacin del alga antes de encapsular o elaborar el producto, que en este caso fue
una alegria de Chlorella.

CULTIVO Y ELABORACIN DE UN PRODUCTO COMESTIBLE DE Chlorella

vulgaris.

MARCO TERICO

El reino protista tambin se conoce con el nombre de Protoctista. En l se encuentran los organismos
unicelulares eucariontes y varios grupos de individuos en los que se observa una tendencia a la
pluricelularidad, pero que no poseen verdaderos tejidos.
Los protoctistas comprenden los organismos tradicionalmente llamados protozoos, as como todas las
algas. El trmino alga es una denominacin vulgar que incluye los eucariotas fotoauttrofos que no
son plantas ni cianobacterias.
Las algas unicelulares representan un porcentaje muy notable del fitoplancton de los ocanos y aguas
dulces, que es donde se lleva a cabo no menos del 50% del total de la fotosntesis que se realiza en
nuestro planeta. Son muy importantes especialmente las diatomeas, dinoflagelados y clorofitas
unicelulares porque son los principales productores de alimentos del ecosistema marino, que es donde se
encuentra la principal reserva de alimentos y fuente renovadora del oxgeno de la atmsfera terrestre
(Gama, 2004).
El cultivo a gran escala de microalgas y el uso prctico de su biomasa como una fuente de ciertos
constituyentes (por instancia lpidos) fue probablemente considerado en Alemania durante la Segunda
Guerra Mundial. Las investigaciones inciales fueron realizadas por un grupo de cientficos de Carnegie
Institute Washington, cuyo objetivo principal fue el uso del alga verde Chlorella como productor de
alimento a gran escala (Becker, 1995).
Antecedentes
Chlorella apareci en la Tierra hace aproximadamente 1.5 o 2 mil millones de aos. Es un alga verde
unicelular de agua dulce; de forma esfrica, cerca de 2-10 micras de dimetro que es extensamente
encontrada en lagos y pantanos por todo el mundo. El nombre Chlorella proviene del griego Chloros,
que significa verde, y del latn ella, que significa cosa pequea, y fue descubierta y nombrada por el
holands M.W. Beyerinck en 1890.

Comparada con otras plantas, Chlorella tiene una alta concentracin de clorofila, as que su capacidad
de fotosntesis es muchas veces mayor que la de otras plantas. Chlorella vulgaris puede dividirse en
cuatro clulas cada 20 horas (Kanno y Kazie, 2005).
En el curso del tiempo, el uso continuo del alga bajo condiciones controladas ha sido importante, con
diversas posibilidades econmicas. La investigacin con la microalga ha demostrado que la biomasa
puede ser usada para aplicaciones, como son: alimento para animales, biofertilizantes, condicionador del
suelo, alimento de los acuarios o puede ayudar a resolver problemas de salud pblica, por medio de la
purificacin biolgica de las aguas negras de las ciudades.
Chlorella est siendo investigada como un nuevo recurso alimenticio (ya que una clula de Chlorella
contiene cerca de 50% de protenas, 5% de clorofila y un gran nmero de vitaminas y carotenos) para
utilizarse en las poblaciones humanas pobres de todo el mundo y para proveer comida y oxgeno en
viajes al espacio y en submarinos (Lee, 1995). Segn se ha documentado, posee beneficios teraputicos,
como la capacidad de desintoxicar al organismo de metales pesados como el Hg, el Cd y el Pb entre
otros qumicos, que son contaminantes agregados a insecticidas o plsticos. Adems se piensa que posee
la capacidad de prevenir el cncer (Konishi et al., 1996). En la tabla 1 se muestra la composicin
qumica total de diferentes algas y de algunos alimentos humanos (Becker et al., 1995).
Producto
Leche
Huevo de
gallina
Soya
Arroz
Pan
Carne
Chlorella
vulgaris
Chlorella
pyrenoidosa
Spirulina
mxima
Spirulina
platensis
Scenedesmus
dimophus

Protenas Carbohidratos

Lpidos

26
47

38
4

28
41

cidos
nuclicos
-

37
8
39
43
51-58

30
77
38
1
12-17

20
2
1
1
14-22

4-5

57

26

60-71

13-16

6-7

3-4.5

46-63

8-14

4-9

2-5

50-56

8-18

16-40

Tabla 1. Composicin qumica total de algunos alimentos humanos

y diferentes algas (% de materia seca)

Como en las plantas superiores, la composicin qumica de las algas no es un factor constante. Muchos
factores ambientales influencian la proporcin de los diferentes constituyentes de la biomasa de las
algas.
Taxonoma de Chlorella vulgaris
Reino: Protoctista
Divisin: Chlorophyta
Clase Chlorophyceae
Orden: Chlorococcales
Familia: Oocystaceae
Gnero: Chlorella
Especie: vulgaris

Las investigaciones sobre el cultivo de microalgas revisten gran importancia dada su amplia aplicacin
biotecnolgica y comercial. En tal sentido, se han utilizado los cultivos discontinuos por su relativo fcil
manejo, para determinar la cintica de crecimiento y los parmetros que influyen en el desarrollo
poblacional de las microalgas (Abalde et al.1995). Sin embargo, el uso de los medios de cultivo
sintticos ha incrementado sustancialmente el valor econmico para la produccin de la biomasa de
estos microorganismos (Gonzlez et al. , 1999).
Medios de Cultivo
Un cultivo puede ser definido como un ambiente artificial en el que las algas crecen. En teora las
condiciones del cultivo deben semejarse al ambiente natural del alga; en la realidad existen diferencias
significativas. La imposicin de un ambiente artificial en una poblacin celular que sobrevivi
anteriormente bajo condiciones complejas y fluctuantes, siguiendo un ciclo de vida estacional, causa
inevitablemente un periodo de adaptacin fisiolgica o de seleccin, en el que el crecimiento de la
poblacin puede no ocurrir o es muy lento.

Parmetros del cultivo

Un cultivo tiene tres diferentes componentes: un medio de cultivo contenido en un recipiente adecuado;
las algas creciendo en el medio y aire, para permitir el intercambio de dixido de carbono entre el medio
y la atmsfera.
Los parmetros ms importantes que regulan el crecimiento de las algas son, cantidad y calidad de
nutrientes, luz, pH, turbulencia, salinidad y temperatura (Barsanti et al., 2006).
Nutrientes
Requerimentos
Compuestos qumicos
Valores
CO 2, CO 3
g/100 ml
C
g/100 ml
O 2, H 2 O
O, H
N2, NH4, NO 3
g/100 ml
N
g/100 ml
PO4
P
SO4
g/100 ml
S
Sales
g/100 ml
Na, K, Ca, Mg
Sales
mg/100 ml
Fe, Zn, Mn, B, Br, Si
Sales
g/100 ml
Cu, Co, Cl, I, Sr, Rb,
Al, et
B12, Tiamina y Biotina
g/100 ml
Vitaminas
Tabla 2. Requerimientos principales de cultivos de microalgas

Temperatura
La mayora de la especies de microalgas toleran temperaturas entre 16 y 27C, aunque esto puede variar
de acuerdo a la composicin del medio de cultivo o la especie cultivada. Un valor intermedio de 18-20C
es frecuentemente empleado. Temperaturas por debajo de los 16C pueden retardar el crecimiento,
mientras que aquellas por arriba de los 35C son letales para cierto nmero de especies.
Luz
Como en las plantas, la luz es la fuente de energa que promueve las reacciones fotosintticas en las
algas. Aqu, la intensidad, la calidad espectral y el fotoperiodo deben ser considerados.
pH
El rango del pH para la mayora de las especies de algas cultivadas es entre 7 y 9, siendo el rango
ptimo 8.2-8.7. Para mantener un pH aceptable es necesario airear el medio de cultivo.

Aireacin
La aireacin es necesaria para prevenir la sedimentacin de las algas, para asegurar que todas las clulas
de la poblacin estn igualmente expuestas a la luz y los nutrientes, y para mejorar el intercambio de
gases entre el medio de cultivo y el aire.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El crecimiento de los problemas al que se enfrenta la humanidad es proporcional al crecimiento
poblacional. El dficit energtico, de alimentos, de agua, de terreno habitable y productivo y de
medicamentos entre otros, aumenta de manera tal, que se hace imprescindible la bsqueda de nuevas
fuentes de recursos, que permitan disponer de materia prima para el constante desarrollo y preservar la
existencia de los seres vivos.
Entre las posibilidades mundialmente reconocidas como fuente de diferentes productos de gran utilidad
est la utilizacin de microorganismos, y en particular, las microalgas, como una opcin proteica con
balance adecuado de aminocidos, vitaminas y minerales, y como fuente de colorantes, viscosantes,
combustibles, medicamentos, edulcorantes, aditivos alimenticios y de materia prima para la fabricacin
de cosmticos y frmacos.
En el caso de Chlorella vulgaris, una especie con un alto rango fotosinttico, puede fijar grandes
cantidades de CO2, gas que por sus altas concentraciones en la atmsfera est ocasionando lo que
conocemos como efecto invernadero. Debido a su alto contenido de protenas, vitaminas, minerales,
fibras dietticas, componentes antioxidantes y a sus componentes desintoxicadores, se ha empleado
como suplemento alimenticio y tambin se emplea en el tratamiento de aguas residuales. Dadas las
propiedades atribuidas a esta microalga, se pretende cultivar, bajo condiciones de laboratorio, en
distintos medios para determinar su ptimo crecimiento, elaborar un producto comestible a partir de su
biomasa y encapsularla.
OBJETIVO GENERAL
Identificar en qu medio de cultivo crece con mayor rapidez la microalga Chlorella vulgaris.
Elaborar un producto comestible a partir de la biomasa de Chlorella vulgaris.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Cultivar Chlorella vulgaris bajo condiciones de laboratorio.

Determinar la tasa de crecimiento de Chlorella vulgaris en diferentes medios de cultivo.

Resaltar la importancia biolgica de Chlorella vulgaris como suplemento alimenticio.

Identificar el contenido nutrimental de la microalga Chlorella vulgaris.

Deshidratar y encapsular a Chlorella vulgaris para consumo humano.

Elaborar un producto comestible con Chlorella vulgaris.

DESARROLLO
1. Preparacin de medios de cultivo.
Medio Basal de Bold (BBM)
Se pesaron las siguientes cantidades de reactivos para cada medio.
Componente

KH2PO4
CaCl2
MgSO4
NaNO3
K2HPO4
NaCl
H3BO3

Solucin de microelementos
Solucin 1
Solucin 2

Por litro
175 mg
25 mg
75 mg
250 mg
75 mg
25 mg
11.42 mg
1 ml
1 ml
1 ml

Solucin de Microelementos
Componente

ZnSO4
MnCl2
MoO3
CuSO4
Co(NO3) 2

g/litro
8.82
1.44
0.71
1.57
0.49

Solucin 2

Solucin 1
Componente
Na2EDTA
KOH

g/litro
50
3.1

Componente
FeSO4
H2 SO4 (Conc.)

Por litro
4.98 g
1 ml

Medio Chu No. 10

Componente
Ca(NO3) 2
K2HPO4
Na2CO3
MgSO4
Na2SiO3
Citrato de Fierro Amoniacal

Gramos/litro
0.04
0.01
0.02
0.025
0.025
0.005

Solucin Nutritiva Knop

Componente
KNO3
Ca (NO 3) 2
KH2PO4
MgSO4
Citrato de Fierro Amoniacal

Gramos/litro
0,2
0,8
0,2
0,2
0,1

2. Cultivos
Se proporcionaron las condiciones adecuadas para el establecimiento del cultivo de una cepa de
Chlorella vulgaris en los laboratorios LACE de la Escuela Nacional Preparatoria No. 2. Para ello se
coloc cada medio de cultivo en un recipiente transparente con capacidad de 2 litros y se le aadieron 5
ml de la microalga respectivamente. Se les coloc una bomba de aire para evitar la sedimentacin de las
algas y permitir la homogenizacin de los nutrientes.
Despus se midi la temperatura y pH de cada medio con ayuda de un potencimetro y se colocaron de
tal manera que pudieran recibir luz natural.
8

3. Conteo de Clulas
Se tom una gota de cada medio de cultivo y se evalu la densidad celular (clulas/ml), siguiendo el
mtodo del hemocitmetro, utilizando una cmara de Neubauer.

Despus de 21 das se realiz un segundo conteo para determinar el crecimiento de Chlorella Vulgaris
en cada medio y se determinaron los parmetros poblacionales segn las frmulas siguientes:

Cf
ln

Ci
K=
tf ti

TD =

ln 2
K

Donde:
K = velocidad de crecimiento (nmero de divisiones por da)
TD = Tiempo de duplicacin
Ci = concentracin inicial del cultivo
Cf = concentracin final del cultivo
ti = tiempo inicial
tf = tiempo final
Despus de 7 das se realiz un tercer conteo.
4. Deshidratacin
Se dej sedimentar el cultivo de la microalga hasta observar la total separacin
de las fases lquida y slida. La biomasa se separ del lquido sobrenadante por
decantacin y se lavaron las clulas con agua destilada, utilizando un embudo de
separacin. A continuacin se colocaron en un recipiente de vidrio con una
lmpara de 100 W hasta que se deshidrat. Posteriormente se ray para obtener
un polvo verde y se guard en un recipiente de vidrio con tapa.
5. Identificacin de Vitamina C
Se agregaron 30 ml del medio a un tubo de ensayo, despus se aadi 1 gota de fenolftalena y se titul
con NaOH [0.5 M] hasta que la solucin, conteniendo al cido ascrbico, se neutraliz.
9

6. Identificacin de monosacridos
Se colocaron 5 ml del medio en un tubo de ensayo y se le agregaron 5 gotas de la solucin de Fehling A
(solucin de cobre) y a continuacin se le adicionaron 5 gotas de la solucin de Fehling B (solucin
alcalina tartrato). Posteriormente se calent con una lmpara de alcohol hasta observar la presencia de
un precipitado de color rojo (xido de cobre reducido).

7. Identificacin de protenas.
Se prepar una solucin de 10 mg/mL de ovoalbmina. En 4 tubos de ensayo se prepararon las
soluciones de la siguiente tabla.
Tubo
Blanco
1
2
3

Cf
0 mg/ml
2 mg/ml
5 mg/ml
10 mg/ml

Vi
0 ml
0.2 ml
0.2 ml
1 ml

Agua
1 ml
0.8 ml
0.5 ml
0 ml

Vf
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml

Donde:
Cf = concentracin final
Vi = volumen inicial
Vf = volumen final
Adems se prepar un tubo con 1 ml de la solucin problema (Chlorella vulgaris previamente
deshidratada y molida).
Se les coloc 2 ml de reactivo de Biuret a cada tubo, se agit y se dejaron reposar por 20 min.
Transcurrido ese tiempo, se ley la absorbancia de cada solucin a 570 nm.
Con los resultados obtenidos se elabor una grfica y se interpol la absorbancia de la protena problema
para calcular su concentracin.
8. Anlisis Bacteriolgico
a) Preparacin de medio de cultivo:
10

Se disolvieron 7.5g del medio deshidratado (agar) en un matraz con agua destilada. Se esteriliz el
medio de cultivo en la autoclave a 121 C durante 20 min. Con ayuda de la campana de flujo laminar, se
vaci, dentro de cajas petri, los medios de cultivo y se rotul con la fecha y tipo de medio.
b) Inoculacin del alga
Con ayuda de la campana de flujo laminar se inocul cada placa de agar, con la biomasa de Chlorella
vulgaris, utilizando la tcnica de siembra por estra.
c) Tincin Gram
Se colocaron dos gotas de agua destilada en el extremo de un portaobjetos, se disolvi en ella una
muestra de una colonia representativa de una placa. Se tom una muestra con asa bacteriolgica, se
prepar el frotis y se fij a la flama. Se cubri la preparacin con cristal violeta durante 10 min. Se
escurri el colorante y se lav el frotis con agua corriente o destilada. Se cubri con lugol y se lav
nuevamente. Se decolor con alcohol etlico, procurando no lavar todo el colorante. Se cubri el frotis
con la solucin de fucsina por 30 segundos. Se escurri el colorante y se lav una vez ms. Se dej secar
la preparacin y se examin al microscopio a 100X. Si las preparaciones se tornan violetas son Gram
positivas y si se tien de rojo son Gram negativas.
9. Esterilizacin de la biomasa de Chlorella vulgaris
Se coloc la biomasa de Chlorella vulagris en un matraz erlenmeyer tapado, se introdujo en la autoclave
a 120C durante 20 minutos. Transcurrido este tiempo se sac y se realiz la prueba bacteriolgica una
vez ms.
10. Encapsulado de la biomasa de Chlorella vulgaris
El encapsulado se llev a cabo en la campana de flujo laminar, en donde se introdujeron 250 mg de
Chlorella vulgaris deshidratada y esterilizada en cpsulas estriles de gelatina dura.
11. Elaboracin de producto comestible a base de Chlorella vulgaris
Con amaranto y miel se elaboraron piezas de alegras. En un recipiente se pusieron capas alternadas de
amaranto y miel, se dejaron secar por 24 horas hasta que tomaran una consistencia estable. Despus se
espolvore un poco de alga esterilizada sobre las piezas de amaranto.

11

RESULTADOS
1. Tras el segundo conteo se obtuvieron los siguientes resultados.

Velocidad de crecimiento
2.5
Solucin
Nutritiva
Knop
Bold's
Basal

2
1.5
1

Chu No.
10

0.5
0

Velocidad de crecimiento (divisiones/da)

Semana
Solucin
Bolds Basal
Chu No. 10
Nutritiva
Knop
1
0.44058784 0.541571023 1.983658166
2
0.88117568 1.083142046 0.000005589
3
1.32176352 1.624713069
0
Tabla 3. Velocidad de crecimiento

Semana 1 Semana 2 Semana 3

Grfica 1. Velocidad de crecimiento (divisiones/da)

300000

Tiempo de Duplicacin
Solucin
Nutritiva
Knop
Bold's
Basal

250000
200000
150000
100000

Chu No.
10

50000
0
Semana 1 Semana 2 Semana 3

Tiempo de duplicacin (clulas/da)

Solucin
Semana
Nutritiva
Bolds Basal
Chu No. 10
Knop
1
55087.84686 67714.03765 248021.9547
2
110302.1818 135428.0753 124010.978
3
165263.5406 203142.1129
0 12
Tabla 4. Tiempo de duplicacin

Grfica 2. Tiempo de duplicacin (clulas por da)

2. La identificacin de cido ascrbico (vitamina C) result positiva, ya que al agregar el indicador

fenolftalena a la muestra, sta no cambi de color, sino hasta que se neutraliz con hidrxido de
sodio y se calcul una concentracin de [0.001 M] de vitamina C.
3. La prueba de identificacin de monosacridos tambin result positiva. Al aadir las soluciones de
Fehling (A y B) a la muestra, stas reaccionaron con los azcares reductores, y cambi de color azul
(sulfato de cobre II) a color rojo (xido de cobre), con lo que comprobamos la existencia de
carbohidratos en Chlorella vulgaris.
4. En la prueba de identificacin de protenas en Chlorella vulgaris se
obtuvo una concentracin de 0.06% de protenas en un litro de solucin.

5. El anlisis bacteriolgico result gram positivo en la primera siembra y despus de la esterilizacin

no se present crecimiento de ninguna bacteria.
6. Como resultado del encapsulado se obtuvieron cpsulas de gelatina dura, de 250 mg cada una, de Chlorella
vulgaris deshidratada, parte de este material se utiliz para la elaboracin de la alegra, la cual se mezcl
con 250 mg de la biomasa.

ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS

1. Se obtuvo un mayor crecimiento en el medio de cultivo Bolds Basal

debido a la cantidad de nutrientes que posee. A pesar de ello no se logr
obtener una divisin completa al da y las clulas tardaron en duplicarse
casi 9 das. Esto puede deberse a que siguen adaptndose a las condiciones
de laboratorio.
Se observ un buen crecimiento en la solucin nutritiva Knop, cuya cantidad de
nutrientes es mucho menor que la del medio Bolds Basal. Su tiempo de
duplicacin fue de 11 das y tampoco se logr una divisin completa al da.
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En el medio Chu No. 10 se observ una velocidad de crecimiento mayor pero al trmino de tres semanas no
se encontr ninguna clula, probablemente porque el medio Chu No. 10 promueve un buen crecimiento en
bajas concentraciones de clulas, pero puede exhibir deficiencias cuando hay una mayor densidad de clulas
(Lewin, 1962).

2. La concentracin que se obtuvo en una muestra de 30 ml de vitamina C, fue de [0.001M], lo que

quiere decir que la cantidad de vitamina detectada fue de 5.28 mg. Esta vitamina es muy importante
por su funcin antioxidante y para la reparacin y crecimiento de tejidos en todas las partes del
cuerpo humano.
3. La prueba de identificacin de monosacridos result positiva, con lo que se comprob la existencia
de carbohidratos en Chlorella vulgaris, los cuales son primordiales por sus funciones estructurales y
porque son la mayor fuente de energa almacenada de los seres vivos.
4. En la identificacin de protenas se obtuvo una concentracin de 0.06% de protenas en un litro de
solucin. Se debe considerar que no se logr romper completamente la pared celular de Chlorella
vulgaris.
5. La esterilizacin fue un xito ya que no se present el crecimiento de ninguna bacteria. Se debe
considerar la desnaturalizacin de las protenas bajo el calor producido en la esterilizacin.

6. A partir del alga deshidratada se pudieron obtener productos

comerciales con un gran contenido nutricional, como son las cpsulas
y las alegras, siendo estas una buena propuesta para la elaboracin
de un suplemento alimenticio comercial a partir de Chlorella vulgaris
deshidratada y esterilizada.
CONCLUSIONES
El medio de cultivo en el que se present un crecimiento ms rpido fue el Basal de Bold.
El cultivo de Chlorella vulgaris resulta econmico ya que no requiere de una gran cantidad de
nutrimentos, su crecimiento es rpido y tiene mltiples aplicaciones.

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El estudio y la aplicacin de microalgas en suplementos alimenticios, as como su produccin en

laboratorio puede llegar a ser una buena opcin para pases con escasos recursos, gracias a su
contenido en protenas, vitamina C y monosacridos, que son compuestos bsicos para una buena
alimentacin.
Se logr el objetivo al elaborar un producto comercial apto para el consumo humano.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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edicin. Pearson educacin. Mxico.

E. W. Becker, et al., (1995). Microalgae biotechnology and microbiology. Cambridge, Great

Britain.

Kanno, Toshihiro. Uyama, Kazie. (2005). Chlorella vulgaris: The Powerful Japanese
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Publishing. 63 pginas.

Lee R. E. (1995) Phycology. Cambridge, University Press, USA.

Konishi, F. et al., (1996). Protective effect of an acidic glycoprotein obtained form culture of
Chlorella vulgaris sp against myelo-suppression by 5-fluorouracil cancer inmunol
inmunolother, 46:268-274.

Abalde J., A. Cid, J. P. Fidalgo, E. Torres y C. Herrero. (1995). Microalgas: Cultivos y

Aplicaciones. Universidad Da Corua.

Gonzlez B., E. Buitargo y K. Frontado. (1999). Evaluacin de medios nutritivos para el

crecimiento de tres microalgas marinas de uso comn en acuicultura.

Barsanti, Laura y Gualtieri, Paolo. (2006). Algae. Anatomy, Biochemistry, and Biotechnology.
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Lewin, Ralph A. (1962). Physiology and Biochemistry of algae. Academic Press. 929 pginas.

REFERENCIAS ELECTRNICAS

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 www.fao.org/docrep/field/003/AB473S/AB473S02.htm

Consultada el 26 - Marzo -2009

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