UVM México Escuelas de Ciencias de la Salud

Nombres de los estudiantes:

Daniel Jiménez Espinoza
Paola Judith Valle Córdova
Hannia Celeste Ramírez Ruíz
Andrea Carely Fuentes Cadena

Nombre del trabajo: Práctica 3. Producción de ácido pirúvico

durante la fermentación de la glucosa por levadura

Fecha de entrega: 10 / marzo / 2022

Campus: Villahermosa

Carrera: QFBT

Semestre: 2do.

Nombre del maestro: Juan Manuel Urrieta Saltijeral

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REPORTE DE PRÁCTICA Universidad del Valle de México

Práctica número 3. Producción de ácido pirúvico durante la fermentación de la

glucosa por la levadura.
Jiménez Espinoza Daniel, Valle Córdova Paola Judith, Ramírez Ruíz Hannia Celeste,
Fuentes Cadena Andrea Carely
Asignatura: Procesos metabólicos
Licenciatura: QFBT
Fecha de entrega: 10 de marzo del 2022
Docente: Juan Manuel Urrieta Saltijeral

INTRODUCCIÓN
Las levaduras son un tipo particular de hongos, muy importantes para el hombre por su
destacado papel como agentes de fermentación en procesos varios industriales.
Por ser eucarióticos, tienen su material genético en el interior de un núcleo, no libre en
el citoplasma (como las bacterias).
Las levaduras son organismos unicelulares, y forman colonias tal como lo hacen las
bacterias.
La reproducción de las levaduras se produce por gemación, esporulación o fisión.
A menudo, las levaduras deterioran los alimentos. Justamente al poder utilizar sustancias
complejas como el almidón crecen en una gran variedad de alimentos, incluso en
alimentos de gran acidez o de baja humedad.
La levadura de cerveza es el producto derivado de la fermentación de cereales como la
cebada o el trigo, gracias a un microorganismo llamado Saccharomyces cerevisiae.
La levadura de cerveza es una fuente importante de proteínas de alto valor biológico,
vitaminas del grupo B, selenio, cromo y fibra.
La glucólisis convierte una molécula de glucosa de seis carbonos en dos moléculas de
piruvato de tres carbonos. El producto neto de este proceso son dos moléculas de NADH
La molécula de gliceraldehído-3-fosfato se convierte en piruvato mediante una serie de
pasos que producen una molécula de NADH y dos de ATP. Esto sucede dos veces por cada
molécula de glucosa, puesto que la glucosa se rompe en dos moléculas de tres carbonos y
ambas proceden hasta los pasos finales de la vía.
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Al final de la glucólisis nos quedan dos moléculas de ATP, dos de NADH y dos de piruvato.
Si hay oxígeno presente, el piruvato se puede degradar (oxidar) hasta dióxido de carbono
en la respiración celular y así obtener más moléculas de ATP.
La glucólisis es una serie de reacciones que extraen energía de la glucosa al romperla en
dos moléculas de tres carbonos llamadas piruvato lo que significa que, se
degrada la glucosa hasta dos moléculas de piruvato, a la vez que se produce energía en
forma de ATP y de NADH.
El ácido pirúvico es un compuesto orgánico clave en el metabolismo. Es el producto final
de la glucólisis, una ruta metabólica universal en la que la glucosa se escinde en dos
moléculas de piruvato y se origina energía (2 moléculas de ATP).
En la conversión en lactato, interviene la enzima lactato deshidrogenasa y la coenzima
NADH; en la fermentación alcohólica el piruvato es convertido primero en acetaldehído y
luego en etanol y dióxido de carbono, interviniendo las enzimas piruvato descarboxilasa y
alcohol deshidrogenasa, así como la coenzima NADH.
La producción de piruvato durante la fermentación se realiza por una serie de reacciones
enzimáticas que involucran algunos intermediarios. Este proceso se conoce
como fermentación o glucólisis. La reacción total podría considerarse como la
transferencia de dos pares de átomos de hidrógeno de la glucosa al NAD+.
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MATERIALES Y MÉTODO

MATERIALES EQUIPO SUSTANCIAS

18 tubos de ensayo de Parrilla con agitación NaOH

18x150
6 tubos de ensayo de Centrífuga Ácido tricloroacético
13x100
1 gradilla Agitador Vortex Nitroprusiato de Sodio

1 pinza para tubo de ensayo Baño maría Sulfato de amonio sólido

5 matraces Erlenmeyer de Balanza digital 2,4-dinitrofenil-hidracina

50 ml
1 agitador de vidrio Hidróxido de amonio
concentrado
2 vasos de precipitados de Glucosa
50 ml
4 vasos de precipitados de Levadura
50 ml
4 pipetas serológicas de 5 Na2HPO4
ml
3 pipetas serológicas de 1 KH2PO4
ml
1 probeta de 50 ml

1 probeta de 25 ml

2 propipetas

1 barra magnética

1 espátula

4 pisetas con agua

destilada, extrán, benzol,
alcohol
Jabón para manos, pipeta
Pasteur desechable, charola
para pesar
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1. Presente su metodología durante la segunda hora de la clase explicando el

principio fundamental en la identificación de piruvato con los reactivos empleados.
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2. Presente la ruta de la glucólisis con sus pasos y enzimas.

La glucólisis es una serie de reacciones que extraen energía de la glucosa al romperla en

dos moléculas de tres carbonos llamadas piruvato. Está compuesta de una serie de
reacciones las cuales son:
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• Reacción 2
• Reacción 1 Isomerización de la Glucosa-6-fosfato.
Primera inversión de ATP. Catalizada por la enzima
Se realiza la fosforilación de la fosfoglucoisomerasa, se produce a
glucosa dependiente de ATP través de un intermediario enediol. Se
catalizada por la enzima hexoquinasa expone el carbono 1 para su posterior
en el Carbono 6. fosforilación.

• Reacción 4
• Reacción 3 Fragmentación en dos triosas fosfato.
Segunda inversión de ATP. La enzima aldolasa produce la ruptura
del azúcar. (glucolísis)
La enzima fosfofructoquinasa lleva a
cabo una segunda fosforilación De D-fructosa-1,6-bisfosfato
dependiente del ATP en el carbono 1. àDihidroxiacetona fosfato + D-
Gliceraldehído-3-fosfato con ayuda de
una formación de una Base de Schiff.

• Reacción 6
• Reacción 5
Generación de primer compuesto de
Isomerización de la dihidroxiacetona
energía derivada.
fosfato.
Gliceraldehído-3-fosfato
La triosa enzima fosfatoisomerasa
deshidrogenasa crea un compuesto de
convierte la dihidroxiacetona
energía elevada y genera un par de
fosfato en D-Gliceraldehído-3-
equivalentes reductores.
fosfato.

• Reacción 7
• Reacción 8
Primera fosforilación a nivel de sustrato.
La enzima cataliza el fosfoglicerato Preparación para la síntesis del
quinasa. siguiente compuesto de
energía elevada.
El 1,3-bifosfoglicerato tiene tendencia a
transferir su grupo acilfosfato al ADP. La enzima fosfoglicerato mutasa
transfiere el fosfato de la posición 3 a
1,3-Bifosfoglicerato + ADP a 3- la 2 del sustrato.
Fosfoglicerato + ATP

• Reacción 10
• Reacción 9
Segunda fosforilación a nivel de
Síntesis del segundo compuesto de
sustrato.
energía elevado.
Catalizada por la enzima piruvato
Catalizada por la enolasa, consiste en
quinasa, el fosfoenolpiruvato
una deshidratación simple. transfiere su grupo fosforilo al ADP.
2-fosfogliceratoàFosfoenolpiruvato.
Fosfoenolpiruvato.
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3. ¿Cuáles son los destinos del piruvato después de la glucólisis?

El ácido pirúvico puede tomar una de varias rutas. Dos son la fermentación láctica
anaeróbica (sin presencia de oxígeno) que se produce por la reacción del NADH que se
oxida y el ácido pirúvico se reduce a ácido láctico. En esta ausencia de oxígeno, las dos
moléculas pirúvicas se convierten en dos moléculas de lactato mediante la enzima lactato
deshidrogenasa; en el caso de la fermentación alcohólica, la formación de alcohol a partir
del azúcar se denomina fermentación.

En cualquier caso, nos referimos a la fermentación alcohólica cuando el ácido láctico se

transforma en alcohol. Ya sea que la fermentación alcohólica o láctica ocurra en el
citoplasma, el propósito de la fermentación es regenerar NADH+ permitiendo que la
glucólisis continúe y produzca un pequeño pero vital suministro para el organismo.

En presencia de oxígeno, las dos moléculas de piruvato se convierten en dos moléculas de

acetil CoA mediante el complejo enzimático piruvato deshidrogenasa que pasará al ciclo
de Krebs.

4. ¿Cómo se le conoce también a la glucólisis?

Se le conoce también como Vía de Embden-Meyerhoff en honor a sus descubridores: Vía

metabólica de la glucólisis anaerobia. Comienza con la fosforilación de la glucosa y termina
produciendo ácido láctico en condiciones anaerobias, mientras que en aerobiosis da lugar
a ácido pirúvico, que da lugar a acetil coenzima A, compuesto que entra a formar parte del
ciclo de Krebs o también la encontramos como glicólisis.

5. Menciones los nombres de los descubridores de la vía

- Louis Pasteur
- Arthur Harden
- William Young
- Otto Meyerhoff

Los primeros estudios informales de los procesos glucolíticos fueron iniciados en 1860,
cuando Louis Pasteur descubrió que los microorganismos son los responsables de la
fermentación y en 1897 cuando Eduard Buchner encontró que cierto extracto celular
puede causar fermentación.

La siguiente gran contribución fue de Arthur Harden y William Young en 1905, quienes
determinaron que para que la fermentación tenga lugar son necesarias una fracción
celular de masa molecular elevada y termosensible (enzimas) y una fracción
citoplasmática de baja masa molecular y termorresistente (ATP, ADP, NAD + y otras
coenzimas).
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Los detalles de la vía en sí se determinaron en 1940, con un gran avance de Otto

Meyerhoff y algunos años después por Luis Leloir. Las mayores dificultades en determinar
lo intrincado de la vía fueron la corta vida y las bajas concentraciones de los
intermediarios en las rápidas reacciones glucolíticas.

6. ¿Por qué la levadura es capaz de realizar la glucólisis?

La fermentación es una vía anaeróbica, es decir que no que requiere oxígeno para
degradar la glucosa, esta se realiza en muchos tipos de células y organismos. En la
fermentación, la única vía de extracción de energía es la glucólisis, con uno o dos
reacciones extras al final.

La fermentación y la respiración celular comienzan del mismo modo, con la glucólisis.

Sin embargo, en la fermentación, el piruvato producido en la glucólisis no continúa su
oxidación ni hacia el ciclo del ácido cítrico, y no funciona la cadena de transporte de
electrones.

Dado que la cadena de transporte de electrones no es funcional, NADH que se

produce en la glucólisis no puede entregar allí sus electrones para regresar a NAD+.

Entonces, el propósito de las reacciones extras en la fermentación es regenerar el

acarreador de electrones NAD+ a partir de NADH producido en la glucólisis.

Las reacciones adicionales logran esto dejando que el NADH entregue sus electrones a
una molécula orgánica, como lo es el piruvato, producto final de la glucólisis. Esta
entrega permite que continúe la glucólisis al asegurar un suministro constante de
NAD+.

7. ¿Qué condiciones son necesarias para que la levadura produzca piruvato?

La levadura y el piruvato decarboxilasa actúa independientemente durante la

fermentación anaerobia y libera acetaldehído y dióxido de carbono. La característica
común en el metabolismo de las levaduras es la conversión de glucosa 6-fosfato o
fructosa 6- fosfato a
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piruvato a través de la glucólisis. El destino del piruvato es diferente dependiendo de la

especie de levadura y las condiciones de crecimiento.

8. ¿Cuál es el producto final de la oxidación incompleta después del ácido pirúvico y

qué enzima está implicada?

Si no hay suficiente cantidad de oxígeno disponible o el organismo es incapaz de continuar

con el proceso oxidativo por acción de la enzima piruvato deshidrogenasa, el piruvato
sigue una ruta anaeróbica, la fermentación.
Al contrario, si hay suficiente suministro de oxígeno, el ácido pirúvico es descarboxilado en
la matriz de la mitocondria por el complejo enzimático piruvato deshidrogenasa rindiendo
CO2 y acetil coenzima A que es el inicio de una serie de reacciones llamada ciclo de Krebs,
seguida de la fosforilación oxidativa.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Como resultado luego de la agregación de la mezcla a otro tubo y se le agrega 1ml de
NaOH en la reacción de 2,4-dinitrofecero -hidracina se añadió 2,4-dinitrofenil-hidracina, se
añadió la un poco de la mezcla a otro tubo y se agregó 1 ml de NaOH. La prueba
importante nos dio como el objetivo de importancia donde dio positivo ya que aparece un
color rojo porque el grupo aldehído del piruvato reacciona con el 2,4-dinitrofenil-
hidracina, aunque igual tenía un color como amarillo-naranja, pero se puede afirmar que
la prueba salió positiva abarcando los objetivos generales que se buscaban conseguir con
la práctica.

Formación de piruvato
La glucosa es asimilada por la levadura mediante la ruta metabólica de la glucólisis, y el
oxígeno es incorporado en el metabolismo energético como receptor final de electrones
es la cadena respiratoria. El producto conectivo final de la glucólisis es el piruvato. Este
compuesto puede ser incorporado a hacer mecanismos metabólicos diferentes:
- Metabolismo oxido - reconductor, por un lado, el piruvato es descarboxilado para
producir etanol. La biomasa microbiana se incrementa solo ligeramente bajo este
régimen metabólico que se denomina generalmente metabolismo oxidativo-
reductor
- Metabolismo oxidativo, por otro lado, la formación del acetil coenzima A es la
prima etapa de incorporación del piruvato a las rutas del metabolismo respiratorio.
Reacción de nitroprusiato de sodio
La determinación de acetona por el método de Imbert es de hacer en tal una formación de
ferropentacianuro con el derivado isonitrato de la acetona. por una presencia de
nitroprusiato, cuando existe antes sensación de ferropentacianuro la prueba da un color
azul o verde considerando la prueba como positiva.
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Reacción con 2,4-dinitrofenil-hidracina

La 2,4-dinitrofenilhidrazina se puede para detectar cualitativamente los grupos carbonilo
de cetonas y aldehídos. El resultado es positivo cuando hay formaciones unidas
precipitado rojo amarillo o llegar a un naranja como en este caso nos resultó. En la
alícuota en la formación de piruvato se agrega 1 ml de 2,4-dinitrofenil-hidracina. Se agrega
la mitad de la mezcla a otro tubo y se le agrega 1 ml de NaOH. La prueba es positiva ya
que aparecen colirrojo porque el grupo aldehído del piruvato reaccionar con el 2,4-
dinitrofenil-hadracina. Como tal verificando todos los pasos se determina que se realizó un
trabajo bien realizado por parte del estudiante verificando cada punto y usando uso de los
conocimientos realizados en el tema dando como una buena forma de implementar el
tema del metabolismo.

CONCLUSIÓN
Se cumplieron los objetivos ya que se lograron analizar las reacciones de identificación de
piruvato, además se identificó también la glucolisis y se comprendió como se obtiene la
energía a través de los carbohidratos. Si consideramos que entran los dos piruvatos de la
glucólisis (por cada molécula de glucosa), podemos resumir la oxidación del piruvato de la
siguiente manera:
Dos moléculas de piruvato se convierten en dos moléculas de acetil-CoA.
Se liberan dos carbonos como dióxido de carbono (de los seis que originalmente se
encontraban en la glucosa). Se generan 2 NADH a partir de NAD+.
Estos conocimientos son relevantes en nuestra carrera ya que como químicos es esencial
conocer los procesos metabólicos de degradación de la glucosa.
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Referencias Bibliográficas
Alonso, M. J. (2019, 3 septiembre). Levadura de cerveza: para qué sirve. canalSALUD.
Recuperado 4 de marzo de 2022, de https://www.salud.mapfre.es/cuerpo-y-
mente/naturopatia/levadura-de-cerveza-para-una-piel-radiante/

Colaboradores de Khan Academy. (s. f.). Glucólisis (artículo) | Respiración celular. Khan
Academy. Recuperado 4 de marzo de 2022, de
https://es.khanacademy.org/science/biology/cellular-respiration-and-
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Colaboradores de Wikipedia. (2020, 18 junio). Ácido pirúvico. Wikipedia, la enciclopedia

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https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_pir%C3%BAvico

Máxima, J. (2019, 17 julio). 10 características de la Levadura. Características. Recuperado

4 de marzo de 2022, de https://www.caracteristicas.co/levadura/#:%7E:text=Las
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%C3%ADas