UNIVERSIDAD DE CRDOBA

FACULTAD DE INGENIERAS
INGENIERA DE ALIMENTOS
BIOQUIMICA
LABORATORIO N 1

TITULACIN POTENCIOMTRICA DE
AMINOCIDOS
Amada Abad 1., Amarilis Acosta 1., Bernardo Argumedo 1., Maura
Castao1., Luis F. Logreira 1

RESUMEN
Con esta prctica de laboratorio se determin el punto isoelctrico de varios
aminocidos, para ello fue necesario medir el pH inicial del aminocido
estudiado. Despus de esto se hizo la titulacin con HCl , a medida que se iba
titulando se media el pH de la solucin y se registraban los datos. Este
procedimiento se realiza igualmente con los dems aminocidos y se procede
tambin a hacer la titulacin utilizando NaOH.
Palabras claves: Titulacin, Aminocido, pH, Punto Isoelctrico.

ABSTRACT
With this lab it was determined the isoelectric point of several amino acids, for
this it was necessary measuring the initial pH of the studied amino acid. After
all this it was made a titration with HCl, as would be half titrating the pH of the
solution and recording the data. This procedure is made similarly with the
another amino acids and the titration is made with NaOH.
Word keys: Titration, Amino acid, pH, isoelectric point.

Estudiantes de Ingeniera de Alimentos, IV Semestre, Universidad de Crdoba, Facultad de Ingenieras,

Programa de Ingeniera de Alimentos, Berasategui- Crdoba 2013

INTRODUCCIN
Las protenas son macromolculas
compuestas por unidades ms
pequeas
conocidas
como
aminocidos. En las protenas se
encuentra
bsicamente
veinte
aminocidos diferentes, los cuales
contienen un grupo carboxilo y un
grupo
amino unidos al mismo
tomo de carbono (carbono ) estos
aminocidos difieren unos de otros
solo por la naturaleza de sus
cadenas laterales, o grupos R que
varan tanto en estructura, como en
tamao y carga elctrica e influyen
en la solubilidad en agua.

Los grupos carboxilo y amino de los

aminocidos funcionan como cidos
y bases dbiles, respectivamente, y
como tales, se ionizan cuando estn
en solucin. Los aminocidos tienen
al menos dos pK, por lo que tienen
mayor capacidad
amortiguadora,
ya que presentan de tres a cuatro
formas inicas diferentes. Cuando la
forma inica tiene una carga neta
de cero se dice que se encuentra en
su punto isoelctrico o pI. Al
variar
de
pH,
cambia
la
proporcin de la formas inicas y
es
posible
ver
la
capacidad
amortiguadora de los aminocidos.

Cada aminocido tiene sus propio

pK, puesto que presenta diferentes
sustituyentes
en
sus
cadenas
laterales. Mediante una titulacin,
se puede determinar el pK de un
aminocido. (1)
Titulacin: Es la adicin de
sucesivas cantidades de una base o
de un cido fuertes, a una solucin
de cido o de base a titular, con la
medicin simultnea de su pH,
hasta el punto de equivalencia en el
cual los equivalentes de cido y de
base se igualan.(2)
La curva de titulacin ser bifsica.
Habr dos porciones separada o
inflexiones en la curva de titulacin.
El punto
medio de la primera
inflexin (B) es donde el aminocido
est mitad en forma cida y mitad
en forma zwitterion. EL punto de
inflexin C ocurre cuando todo el
aminocido original ya est en
forma de zwitterion. El pH al cual
esto ocurre se denomina el pH
isoelctrico (punto isolelctrico) y se
le da el smbolo pI (asumiendo que
el grupo R no tiene carga). En la
titulacin de pH de un aminocido
con un grupo no ionizable R, el
punto de equivalencia ocurre en el
pI del aminocido. En el punto
medio de la segunda inflexin (D),
la mitad del aminocido est en
forma de zwitterion y la otra mitad
est en forma bsica. (3)
las
curvas
proporcionan
informacin

de
la

titulacin
siguiente

 Medida del pK de los grupos

ionizables: se localizan en el
punto medio de la zona tampn.
Regiones de capacidad tampn:
mesetas donde se localizan los
pKs;
dichas
regiones
se
encuentran en el intervalo pK
1 unidad de pH.

pI: se localiza en el intervalo de

viraje.

Formas
ionizables
del
aminocido en cada rango de
pH.

Carga elctrica del aminocido

en cada rango del pH

Interpretar
correctamente
la
curva de titulacin de la Lisina.

PROCEDIMIENTO
Con el potencimetro se mide el pH
inicial del aminocido estudiado, se
procede a hacer las debidas
titulaciones con HCl para cada
aminocido, a medida que se titula
se mide el pH a la solucin, seguir
titulando hasta llegar a agotar 10 ml
de HCl por ltimo se reportan los
datos obtenidos y se desecha el
titulado. Repetir este procedimiento
utilizando ahora como agente
titulador el NaOH. Los aminocidos
a utilizar son alanina, arginina, acido
asprtico y glicina. En el caso de
nuestro
grupo
se
tomo
el
aminocido Lisina.

Solubilidad
relativa
del
aminocido en cada rango de
pH. (4)

OBJETIVOS
Construir
con
datos
experimentales la curva de
titulacin del aminocido Lisina.

Establecer
grficamente
punto isoelctrico de la lisina.

el

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Lisina

Titulacin con
NaOH
pH inicial= 5.74
Volumen pH
(ml)
2
7.78
4
8.80
6
8.20

Titulacin con
HCl
pH inicial= 6.48
Volumen pH
(ml)
2
3.35
4
2.78
6
2.72

8
10

8.42
8.57

8
10

2.49
2.40

Tabla # 1 resultado de la Lisina

Alanina

Titulacin con
NaOH
pH inicial=
6.23
Volumen pH
(ml)
2
8.00
4
8.40
6
8.65
8
8.86
10
9.00

Titulacin con
HCl
pH inicial= 6.23
Volumen pH
2
4
6
8
10

3.40
3.15
3.00
2.86
2.71

Tabla # 2 resultados de la Alanina

Glicina

Titulacin con
NaOH
pH inicial= 6.48
Volumen pH
(ml)
2
8.12
4
8.41
6
8.54
8
8.74
10
8.95

Titulacin con
HCl
pH inicial= 6.48
Volumen pH
(ml)
2
3.42
4
3.18
6
3.08
8
2.93
10
2.89

Volumen
(ml)
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
Tabla #
asprtico

pH

Volumen pH

3.23
3.42
3.55
3.71
3.83
4.07
4.20
4.42
4.80
5.45

2
4
6
8
10
12
14
16
18
20

resultados

2.77
2.65
2.51
2.31
2.10

del

A.

Arginina

Titulacion con
NaOH
pH inicial=
10.16
Volumen PH
(ml)
2
10.47
4
11.46
6
11.66
8
11.83
10
11.99

Titulacin con
Hcl
pH
inicial=10.16
Volumen PH
2
4
6
8
10

9.85
9.68
9.40
9.28
9.20

Tabla # 5 resultados de la Arginina

Tabla # 3 resultado de la Glicina

Acido aspartico.

Titulacin con
NaOH
pH inicial=
3.00

Titulacin con
HCl
pH inicial= 3.00

PARA LA ALANINA

El aminocido valorado se comenz

con un pH diferente a 0 en este
caso la alanina se titulo con pHi=
6.23 al valorar con NaOH, y de igual
forma con el HCL.
Hablando del punto isoelctrico,
como sabemos este se define como
el pH en el cual el nmero de cargas
positivas se iguala al nmero de

cargas negativas que aportan los

grupos ionizables de una molcula.
En el punto isoelctrico la carga
neta de la molcula es cero (0),
para el caso de la alanina que solo
tiene solo
dos grupos de
disociacin tenemos:
(CN= Carga neta.)
El primer pk1(R-COOH) es 3.15 y el
segundo pk2(R-NH3+) es 8.40. As
que el punto isoelctrico (pI) de la
alanina es:

como un cido diprtico, ya que

tanto el grupo amino como el
carboxilo se encuentran protonados,
es decir, a pH = 1, el 100% de las
molculas
de
aminocido
se
encuentran en forma de catin
Al ser ste un amino cido neutro,
posee un grupo amino y un grupo
carboxilo es el aminocido mas
sencillo, es decir su grupo R es un
hidrogeno.
El punto isoelctrico estipulado para
este aminocido (Glicina) debe ser
5,97.
Y
el
obtenido
experimentalmente fue : 5.77.

PARA LA GLICINA

A pH cido la Gly se encuentra

PARA
EL
ASPARTICO

ACIDO

El ph inicial de la solucin de acido

aspartico antes de valorar con HCL
0,1M y el NaOH fue de 3.0 ml, en el
acido aspartico el valor del punto
isoelctrico se tomo del ph medio
entre los valores de pk, este pI esta
dado de la siguiente manera:

Para este aminocido, al igual q los

otros, se comenz con un pH
diferente a 0 en este caso la lisina,
su PH inicial fue: pHi= 5.74 al
valorar con NaOH y HCL.

PARA LA ARGININA

Para la valoracin de la solucin del

aminocido con HCl arginina el phi=
10.16, as mismo se tomo un igual
para la titulacin con NaOH

El punto isoelctrico de la Lisina es

de 9.74 pero en este caso el punto
isoelctrico
que
obtuvimos
experimentalmente no fue el mismo
que se marca tericamente. Esto
pudo ocurrir por el error que se tuvo
al
momento
de
hacer
las
respectivas mediciones, puesto que,
no tomamos unos datos completos
con respecto al Ph.

ANLISIS DE RESULTADO:
La representacin grfica de la
variacin del pH de una solucin por
la adicin de equivalentes de cido
o de base se denomina curva de
titulacin. En el caso de los
aminocidos,
las
curvas
de
titulacin proporcionan la siguiente
informacin
Para este caso de la arginina que es
un aminocido con cadena lateral
bsica.

PARA LA LISINA

-Medida del pK de los grupos

ionizables: se localizan en el punto
medio de la zona tampn.
- Formas ionizables del aminocido
en cada rango de pH.
- Carga elctrica del aminocido en
cada rango del pH

INVESTIGACIN

A) Registrar en una tabla

resultados obtenidos:

los

Tabla # 7 pI Gly-A-Glu-His-Tyr-LysAsp

Aminocidos
(ESTAN CONTENIDOS EN LOS
RESULTADOS Tabla # 1, 2, 4 y 5).

Glicina
6,05
Alanina
Glutamico
3,25
Histidina
3,9
Treonina
Lisina
Asprtico
2,75

pK1

pK1
2,4

2,3

2,6
2,2

9,9

6,1
4,3

1,8

6,0

10,4
9,2
1,9

Aminocidos
pI
Alanina
5.77
Glisina
5.70
Aspartico
3.00
Arginina
10.16
Lisina
5.66

pK1

pK2

3.15

8.40

3.42

8.12

2.77

3.23

9.85

10.47

3.35

7.78

C) Determinar
el
pI
de
los
aminocidos Gly- A-Glu-His-TyrLys-Asp:

6,5
5,7
3,6

los

Tabla # 8 pi de v, trp, met

Aminocidos
pI

Tabla # 6 Pl de los amioacidos

estudiados en laboratorio

9,7

2,2

D) Determinar
el
pI
de
siguientes aminocidos:
B) Determinar el pI del aminocido.

pI

Valina
5,96
Triptfano
5,89
Metionina
5,7

pK 1

pK1

2,32

9,62

2,83

9,39

2,28

9,21

Conclusin
Esta prctica, aunque su desarrollo fue
sencillo,
nos
deja
conocimientos
amplios, sobre todo las curvas de
titulacin, que son herramientas muy
poderosas, ya que a travs de stas
pudimos determinar, por ejemplo, el
pKa, el pKb, y por medio de stos, el
punto isoelctrico de un aminocido, en

este caso la Lisina, aunque no nos

hayan dado los resultados esperados.

(2) http://uninga.net/verpost/Apunt
es/3847/Titulaci--n--Bioqu-mica--Medicina.html
(3) http://agu.inter.edu/halices/TIT
ULACION_AMINOACIDOS.pdf

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
(1) http://docencia.izt.uam.mx/sgp
e/files/users/uami/jaislocr/BIOQ
UIMICA_I/PRACTICA_3.pdf

(4) http://212.128.130.23/eduCom
mons/cienciasbiosanitarias/bioquimica-phequilibrios-acido-2013base/contenidos/4.%20Curvas
%20de%20titulacion%20de
%20aminoacidos.pdf