TEORIA

1)QU ES UNA ENZIMA?

Es una protena que cataliza reacciones qumicas, es decir las acelera
disminuyendo la energa de activacin de los reactantes y haciendo que haya
mas choques efectivos entre sus componentes. Son muy especificas y muchas
veces necesita de coenzimas para actuar. A parte de necesitar un medio
adecuado, como un Ph y una temperatura optima.
Se encargan de la transformacin de sustratos a productos a una gran
velocidad.

2)LEYES DE CINETICA ENZIMATICA

La cinetica enzimtica se explica mediante la siguiente reaccion, en donde se
ve que la E y el S se unen formando el complejo ES. A partir de aqu puede
volver a separarse sin necesidad de transformar al S o bien transformarlo en P,
quedando la E libre nuevamente para seguir transformando mas sustratos.

LEY DE MICHAELIS-MENTEN
La deduccin de la ley depende de la siguiente suposicin:
La concentracin de sustrato debe ser mucho mayor que la concentracin de
enzima en el medio.
El complejo ES no debe variar en concentracin, esto se debe a que como
estamos en un medio con mucho S, apenas se forme P la E va a unirse
nuevamente al S. Manteniendo asi la concentracio ES invariable.
Hallan la concentracin total de E de la siguiente forma:

Como la concentracin de [ES] es constante, entonces

su velocidad de formacin y disosiacion son iguales:
V1=V2+V3
Como [ES] es constante, la velocidad de formacin de
los productos tambin es constante: V=V3=K3[ES]

K1 ([Eo] - [ES]) [S] = K2 [ES] + K3 [ES].V1 = V2 + V3

K1 [Eo] [S] = (K2+K3) [ES] + K1 [ES] [S]
K1 [Eo] [S] = (K2 + K3 + K1 [S]) [ES]
[ES] = K1 [Eo] [S]/K2 + K3 + K1[S](Dividimos entre 1)
[ES] = [Eo] [S]/{(K2 + K3)/k1 + [S]}
[ES] = [Eo] [S]/Km + [S]
Sabemos que para hallar la velocidad de formacin de productos se halla con
la ecuacin
(K2 + k3)/k1 = Km

V3 = K3 [ES]
Entonces: V = (K3 [Eo]) [S] / Km + [S]
Nos da la siguiente ecuacin:

K3 [Eo] = Vmax, debido a que la

enzima total es constante

Representada grficamente:

La Vmax es la asntota de la hiprbola rectangular

EN CONCLUSION
LA LEY NOS DICE QUE EN UNA REACCION DONDE HAY SUFICIENTE SUSTRATO, LA
FORMACION DEL COMPLEJO [ES] SERA CONSTANTE, PUESTO QUE LA ENZIMA
SIEMPRE TENDRA UN SUSTRATO PARA UNIRSE RAPIDAMENTE. TODO ESTO
CONLLEVA A QUE LA VELOCIDAD DE FORMACION Y DE DISOSIACION SEA
CONSTANTE, DE ESTO TENEMOS QUE V1=V2 + V3.
COMO EL [ES] ES CONSTANTE, ENTONCES LA FORMACION DE PRODUCTOS TAMBIEN
SERA CONSTANTE, ES POR ESO QUE (VELOCIDAD DE LA REACCION) = K3[ES]
SE DETERMINA TAMBIEN QUE LA [S] LLEGARA A UN PUNTO EN LA QUE NO SEA
DETERMINANTE, CUANDO AL REACCION HAYA ALCANZADO SU Vmax SIGUIENDO ASI
UNA REACCION DE ORDEN CERO, MIENTRAS QUE FUE UNA REACCION DE PRIMER
ORDEN HASTA ENCONTRAR AL Km.

LEY DE LINEWEAVER BURK

Se utiliza como una herramienta para determinar el parmetro cintico de una
enzima.
Parte del inverso de la ecuacin de Michaelis-Menten.

Esto asemeja la ecuacin de la recta:

y = ax + b

El punto de corte en el eje de las

ordenadas equivale al inverso de la
Vmax, mientras que el punto de corte en
las abcisas equivale al inverso del km,
pero este Km se tiene que tomar
positivo,
dado
que
no
hay
concentraciones negativas.
Dado que los valores son inversos, se
observa que las cantidades son mas
pequeas mientras mas lejos del origen
estn.

LEY DE EADIE-HOFSTEE
El diagrama de Eadie-Hofstee, es una representacin grfica de la funcin
matemtica utilizada en bioqumica en el estudio de la cintica de las
reacciones enzimticas, por la que se relaciona la velocidad de una reaccin
con la concentracin del sustrato:

donde 'v' representa la velocidad de la reaccin, 'Km' es la constante de

Michaelis-Menten, [S] es la concentracin del sustrato y 'vmax' es el mximo de
la velocidad de la reaccin.

El diagrama puede deducirse de la ecuacin de Michaelis-Menten como sigue:

si se invierte y multiplica por Vmax, se obtiene:

que reordenando:
al aislar v se obtiene:

De manera similar a otras tcnicas que linealizan la ecuacin de MichaelisMenten, el diagrama de Eadie-Hofstee permite visualizar rpidamente los
parmetros cinticos importantes como Km y Vmax, pero est menos afectado
por el margen de error que el diagrama de Lineweaver-Burke, debido a que
asigna el mismo peso a todos los puntos para cualquier concentracin del
sustrato o velocidad de reaccin.
Una de las consecuencias del planteamiento de Eadie-Hofstee es que las
variables en la ordenada y en la abscisa no son independientes, sino que
ambas dependen de la velocidad de reaccin. En consecuencia, cualquier error
experimental se manifiesta en ambos ejes

3)QU ES Km?
Es la constante de Michaelis-Menten, caracterstica de una enzima y particular
para un substrato. Refleja la afinidad de la enzima por ese substrato. Km es
numricamente igual a la concentracin de substrato a la cual la velocidad de
reaccin es la mitad de la Vmax (Km= Vmax/2). Este parmetro, Km no vara
con la concentracin de enzima.
Significado de una Km pequea: un valor numrico pequeo de Km refleja
una alta afinidad de la enzima por su substrato porque a una baja
concentracin del mismo, la enzimaa desarrollado ya la mitad de la velocidad
mxima.
Significado de una Km grande: el valor numrico grande de Km refleja
una baja afinidad de la enzima por su substrato porque a una concentracin
elevada del mismo, la enzima desarrolla la mitad de la velocidad mxima.

Relacin de la velocidad con la concentracin de enzima: la velocidad de la

reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima a
cualquier concentracin de substrato. Por ejemplo, si la concentracin de
enzima es disminuida a la mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v0) es
reducida tambin a la mitad de la original.
Orden de la reaccin: cuando [S] es mas pequea que la Km, la velocidad de la
reaccin es aproximadamente igual a la concentracin de substrato.
La velocidad de reaccin se dice en estas condiciones es de primer orden con
respecto al substrato. Cuando S es mas grande que la Km, la velocidad es
constante e igual a laVmax. La velocidad de la reaccin es independiente de la
concentracin de substrato y se dice que es de orden cero con respecto a la
concentracin de substrato

4)QU ES Vmax?
Es el indicador de la mxima actividad enzimtica independiente del sustrato,
puesto que por mas que agreguemos mas sustrato la actividad enzimtica de la
enzima no va a aumentar, puede definirse segn la ley de michaelis-menten
como:
Vmax = K3 [Et]
K3: constante cinetica de la formacin de productos
[Et]: concentracin de enzima total, osea la suma de [E] + [ES]

TRABAJO EN LABORATORIO

Sustancias
Almidon
Buffer PH = 6.8
HCl 0,5N
NaCl 0.9%
Agua destilada

Tubo D1
1ml
0.5ml
1.2ml
-

Tubo D2
1ml
0.5ml
1.2ml

Tubo D3
1ml
1.2ml
0.5ml

Se pone los tres tubos en bao maria por un tiempo de 8 a 10 min para darle la
temperatura optima a la amilasa salival.
Esta amilasa salival actua rompiendo los enlaces alfa 1,4 entre glucosas.
Recordemos que el almidon tiene enlaces alfa 1,4 y enlaces alfa 1,6
RECONOCIMIENTO DE AZUCARES CON REL REACTIVO DE BENNEDICT
Se ha diluido 1ml de saliva con 4ml de H2O para luego echar 1ml en cada uno
D1
D2
D3
BENNEDICT

B1
1
0.5

B2
1
0.5

B3
1
0.5

LA AMILASA HA DESCOMPUESTO EL ALMIDON EN AZUCARES

REDUCTORES (MALTOSAS Y GLUCOSAS-tienen su OH libre)

LOS AZUCARES REDUCTORES

REDUJERON EL SULFATO CUPRICO
(+2) DEL BENNEDICT A SULFATO
CUPROSO (+1). EL SULFATO
CUPROSO SE OBSERVA DE COLOR

EL TUBO B3 NO REACCIONO, YA QUE

SE LE DIO UN MEDIO ACIDO CON EL
HCl 0.5N LO CUAL IMPIDIO QUE LA
ENZIMA ACTUE ADECUADAMENTE

Bibliografa

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm

http://www.biorom.uma.es/contenido/UIB/Jmoldesarrollo/enzimas/enzima
5.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_de_Michaelis-Menten
https://es.scribd.com/doc/44436498/amilasa-salival