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Introduccin

Las reacciones qumicas que se presentan en los organismos vivos ocurren por una parte
gracias a la capacidad de las enzimas de disminuir la energa de activacin que acta
como una barrera y por otra parte por la especificidad con que se realiza esta catlisis.

Los estudios pioneros de Henry y Brown realizados con enzimas de la levadura mostraron
que la cintica enzimtica presenta el comportamiento ilustrado en la figura, donde [S] es
la concentracin de sustrato y dS/dt equivale a la velocidad de transformacin del sustrato
(v).

Podemos observar que la curva se divide en 3 zonas. En la zona I, la velocidad (v)


aumenta linealmente con la concentracin de sustrato [S]. Esta regin corresponde a una
cintica de primer orden en la cual a una concentracin dada de enzima (que permanece
constante) podemos obtener un rpido incremento de v con cambios pequeos en [S].

En la zona II la velocidad permanece constante para un intervalo de [S] y se considera


que la enzima est saturada.

A concentraciones altas de S, se llega a la zona III donde se observa una disminucin de


la velocidad a medida que aumentamos ms y ms S. Este comportamiento se interpreta
como una inhibicin de la enzima por exceso de sustrato.

Modelo de Michaelis Menten


El anlisis del comportamiento de la enzima en las zonas I y II condujo a Michaelis y
Menten a plantear que la enzima (E) se une reversiblemente con el sustrato (S) formando
un complejo inestable (ES) que da lugar, irreversiblemente, al producto (P) y a la enzima
libre (E), la formacin del complejo ocurre por complementariedad estrica entre el
sustrato y una regin de la enzima, denominada el sitio activo, donde se realiza la
catlisis. El Sitio activo es entonces un grupo de aminocidos de la protena que son los
responsables de la actividad cataltica y que, como consecuencia de la estructura
terciaria, se disponen espacialmente de tal manera que la conformacin del conjunto es
complementaria de la conformacin del sustrato.
El planteamiento de Michaelis y Menten se puede resumir en la expresin:



E+ S ES E+ P Ecuacn1

La descomposicin irreversible de ES hacia la formacin de E + P es considerablemente


menor que la las otras 2 reacciones que se llevan en el proceso, por lo que la velocidad
global de reaccin estar dada por la expresin:

V =K 2 [ S ] Ecuacin 2

Teniendo en cuenta las consideraciones anteriores es posible deducir la ecuacin de


Michaelis-Menten que describe el comportamiento de la enzima:

V max [ S ]
V= Ecuacin 3
K M+ [ S ]

Donde Vmax (velocidad mxima) y KM (constante de Michaelis) son dos parmetros


importantes de la enzima dado que en la zona I tenemos una cintica de primer orden,
podemos considerar que habr un momento en el cual la velocidad es igual a la mitad de
la velocidad mxima, es decir:

1
V = V max Ecuacin 4
2

Sustituyendo la ecuacin 4 en la ecuacin 3 y dividiendo entre Vmax se llega a la


ecuacin KM=[S].

Esta ecuacin nos proporciona el significado fsico de KM que ser entonces la


concentracin del sustrato (moles/litro) necesaria para alcanzar la velocidad semimxima.

Los valores de KM y Vmax de una enzima se pueden determinar por mtodos grficos
realizando en el laboratorio la cintica con un sustrato dado en condiciones
experimentales bien definidas, de manera que al calcular las velocidades (cantidad
sustrato transformada/ mililitro/ minuto) alcanzadas con diferentes concentraciones de S
se obtiene la figura 19.

Modelo de Lineweaver- Burk


Se opta por transformar la ecuacin de Michaelis Menten tomando el inverso, llegando as
a la ecuacin:
1 K M+ [ S ]
= Ecuacin 5
V V max [ S ]

Que puede ser igualmente expresada de la manera:

1 KM 1 1
= + Ecuacin 6
V V max [ S ] V m ax

La ecuacin 6 corresponde a una lnea recta: Y = mX + b. En donde: Y = 1/v y X = 1/[S].


La pendiente m = KM/Vmax; y la intercepcin en el eje Y, b = 1/Vmax.

Graficando 1/v versus 1/ [S] tendremos que la interseccin en el eje X corresponde a


-1/KM y su valor absoluto expresa la afinidad de la enzima por su sustrato.

Esta representacin tiene la ventaja de poder detectar errores experimentales en la


determinacin de la cintica; cuando esto ocurre la dispersin de los datos no permite
trazar una recta por los puntos obtenidos.

Modelo de Eadie-Hofstee
El mtodo de Eadie- Hofstee transforma la ecuacin de Michaelis-Menten a la ecuacin
de Lineweaver- Burk y se prosigue como se muestra a continuacin:

1 KM 1 1
= + Ecuacin 6
V V max [ S ] V m ax

1 K 1 1
V max V =V max V M +V max V Ecuacin 7
V V max [ S ] V m ax
V
V max =K M +V Ecuacin 8
[ S]

Graficando V versus V/[S] tendremos la siguiente figura:

Si los datos obtenidos se ajustan a una recta, se descartan eventuales errores


experimentales y de la grfica se obtienen directamente los valores de KM y Vmax.

Conclusin
El mtodo que parece ser el mejor a consideracin ma es el mtodo de Lineweaver- Burk
ya que, como se menciona, permite detectar los errores en la experimentacin de
laboratorio, pues si los datos se encuentran muy dispersos el coeficiente de correlacin
ser muy pequeo lo que supondra que al momento de intentar trazar una lnea que pase
por todos aquellos puntos, sta ser una muy errada y nada representativa al ajuste real
de los datos. Adems en el ejemplo realizado, se puede ver que el modelo de Lineweaver-
Burk tiene un mejor ajuste a los datos que el modelo de Eadie Hofstee, teniendo el
primero un coeficiente de correlacin (R2) de 0.9174 mientras que para el segundo es de
0.6934, aunque cabe la posibilidad de que no sea as para todos los posibles conjuntos de
datos.