III CURSO DE BIOSEGURIDAD

LABORATORIO ESTATAL DE SALUD PBLICA

Tcnicas de monitoreo
para la deteccin de
microorganismos en el
medio ambiente

Gloria Alicia Figueroa Aguilar

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Condiciones Ambientales

REQUISITO: El laboratorio debe asegurarse que

las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los
ensayos microbiolgicos,
no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la
calidad requerida de los resultados.

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Ejemplos de condiciones ambientales

no deseables
Condiciones
Ambientales
Deficiente
esterilidad
biolgica
Mayor polvo en
suspensin en
el aire

Efecto posible sobre el

ensayo
Contaminacin de las
muestras y cultivos
Contaminacin de las
muestras y cultivos

Lugar a monitorear
rea de siembra y
de preparacin de
muestras
rea de siembra y
de preparacin de
muestras

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El laboratorio debe establecer:

Un programa documentado de limpieza y desinfeccin
que tenga en cuenta
los resultados de vigilancia de las condiciones ambientales y la
posibilidad de contaminacin cruzada.
Para la desinfeccin se deben tomar en cuenta agentes
antimicrobianos que no pongan en riesgo la salud del
operador y que no daen las superficies de trabajo

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Limpieza y desinfeccin
Organizarlastareas de limpiezaydesinfeccin del laboratorio.
Establecer la frecuencia de realizacin de lasmismas
Se detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel
de limpiezarequerido (trapeohmedo, trapeomojado, etc.),
los desinfectantes a prepararysumodo de uso.
El personal querealiza la actividad
Propsito:paraque loslaboratoriosestn en
condicionesadecuadaspararealizar los ensayosypermitir al
personal quetrabaje en forma segura.

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Limieza y desinfeccin
Son los procedimientos operativos
empleados durante la realizacin del
trabajo en el laboratorio.
Tiene como principal objetivo evitar la
contaminacin en todas las etapas del
ensayo, de lo contrario implicara
obtener resultados errneos, la infeccin
del personal, etc.

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El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones :

Por ejemplo:
Asegurarse que el rea de trabajo est limpia y que no haya corrientes de aire.

Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y despus del

trabajo.

Durante la siembra y manipuleo estril de muestras no hablar y evitar toser, en caso

necesario utilizar un cubrebocas.

Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama del mechero.

Trabajar, evitando movimientos innecesarios.

La manipulacin del material patgeno o txico requiere trabajar en reas cerradas o

bajo campanas de bioseguridad.

Utilizar el equipo de seguiridad apropiado de acuerdo a la actividad.

Evitar la formacin de aerosoles. Se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos,
las botellas o los frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrfugas, etc. y cuando se
esterilizan asas.

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Relativo al rea de trabajo:

Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, no debe ser usado

fuera del rea de trabajo del laboratorio.

Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios,

etc. Y en el rea del laboratorio no comer, beber, fumar.

Relativo a la Higiene del personal tcnico:

Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal debe lavarse las

manos con un producto adecuado (jabn desinfectante).

El personal debe tener uas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido,
no tener anillos ni pulseras. Uso de cubrebocas cuando sea necesario.

El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe

realizar exmenes microbiolgicos.

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MONITOREO AMBIENTAL:

La calidad microbiolgica del aire y las superficies

del laboratorio en microbiologa es
un indicador de la efectividad de las tareas realizadas en
cuanto a:
FLos programas de limpieza y desinfeccin y a el
cumplimiento del reglamento interno de trabajo.

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Procedimiento: MONITOREO AMBIENTAL.

Establece :
FMetodologa para la toma de muestra.
F Lugares de toma de muestra.
F Lmites de tolerancia o criterios de aceptacin o rechazo.
FFrecuencia de monitoreo.
FAcciones correctivas a tomar en caso de desvos de los lmites
establecidos.
Esto se aplica tanto a control ambiental del rea analtica del
laboratorio como para las campanas de flujo laminar y /o
bioseguridad, EN ACTIVO Y EN PASIVO.

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El procedimiento de muestreo para monitoreo ambiental

puedeincluir (dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio):
Determinacin cuantitativa de microorganismos presentes en
el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos
de microorganismos como por ejemplo hongos).
Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o
indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el
laboratorio (Ejemplo: Salmonella spp,Listeria spp,
Staphylococcus aureus).

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MTODO PARA CONTROL DE CALIDAD DEL AIRE:

En activo
En pasivo

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Toma de muestra: durante un tiempo estipulado (15min), se exponen placas

de Petri con medio de cultivo no selectivo y un medio para cultivo de hongos
(Cuenta Estndar / Agar papa dextrosa), en el rea de trabajo.

reas a monitorear o zonas de toma de la muestra: rea de

siembra, rea de preparacin de la muestra.

Tiempo y temperatura de incubacin: Luego de la exposicin al aire,

las placas se cierran e incuban durante 48 horas para BMA y de 3 a 5 das para
hongos.

Frecuencia de realizacin de los controles.Semanal en diferentes

turnos de trabajo.

Criterio de conformidad:nmero mximo de colonias portiempo de

exposicin de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15 colonias

Los resultados se expresan como unidades de colonias (UFC) por placa

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Mtodo para muestreo de superficies

Colocar sobre la superficie que se va a muestrear una plantilla
estril de papel aluminio con un cuadro de 5x5 cm recortado en
el centro.
Humedecer un hisopo estril en una solucin amortiguadora de
fosfatos (10 mL) y eliminar el exceso de lquido.
Con el hisopo inclinado en ngulo de 30 frotar 3 veces la
superficie delimitada por la plantilla, cada una en direccin
opuesta.
Enjuagar el hisopo en la solucin amortiguadora, hasta obtener
una suspensin y repetir la operacin con el mismo hisopo, sobre
tres superficies ms.
Regresar el hisopo al tubo y retirar del mismo la parte que estuvo
en contacto con los dedos.

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Bacterias mesoflicas aerobias

NOM 092-SSA1
Agitar perfectamente los tubos con la suspensin
anterior. Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,1 mL de la
suspensin y agregar de (15 a 20) mL de agar cuenta
estndar fundido.
Incubar a 35C por 48 horas
Contar colonias
Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)
100cm2
Reportar como Bacterias Mesoflicas Aerobias
UFC/cm2

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Coliformes
NOM 133-SSA1
Colocar en 2 placas petri 1 mL y 0,5 mL de la suspensin y
agregar de (12 a 15) mL de agar rojo violeta bilis fundido y
conservado a 45C dejar solidificar y agregar una segunda
capa (5 mL) de agar rojo violeta.
Incubar las placas durante 24 horas a 35C
Realizar la cuenta de colonias tipicas
Realizar clculos: No. Colonias (UFC) X vol (10ml)
100cm2
Reportar como UFC / cm2

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Microorganismos especficos
NOM 114 SSA Determinacin de Salmonella
spp
NOM 115 SSA Determinacin de
Staphylococcus aureus

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Acciones correctivas

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GRACIAS