Tema E3. Niveles de Bioseguridad

Bioseguridad y riesgos asociados en los laboratorios
BIOSEGURIDAD Y OTROS
RIESGOS ASOCIADOS EN LOS
LABORATORIOS
NORMASDE MANIPULACIÓN EN
LABORATORIOS DE CONTENCIÓN
BIOLÓGICA
Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

Norma UNE-CWA 15793:2013 -Gestión del riesgo biológico en el laboratorio

Técnicas microbiológicas apropiadas
 La empresa debe asegurarse de que todo el personal que maneje agentes biológicos y toxinas sea competente
y que estén disponibles los recursos adecuados (incluyendo tiempo y equipamiento) para asegurarse de que
dichas prácticas puedan cumplirse eficazmente.
 Programas de formación y tutoría hagan hincapié en las técnicas microbiológicas apropiadas con objeto de que
se realicen las tareas con seguridad y protección.
 La empresa debería tener procedimientos de seguimiento para garantizar que los empleados sean
competentes para realizar todas las tareas usando las técnicas microbiológicas apropiadas, las cuales deberían
estar adecuadamente supervisadas.
 Procedimientos para: implantar y documentar un estándar para las técnicas microbiológicas apropiadas; formar en
este modelo y promoverlo a través del proceso de comunicación de la empresa; utilizar los controles de
seguimiento para asegurar que el personal mantenga el estándar; asignar los recursos.

GESTIÓN DE LA PREVENCIÓN EN LA MANIPULACIÓN DE AGENTES

BIOLÓGICOS
Personas que trabajan con agentes infectivos o material biológico :

 Formación y entrenamiento adecuado en todas las prácticas y técnicas requeridas
 Director del centro, Profesor y/o investigador responsable, deben asegurar que el personal ha
recibido el adecuado entrenamiento y formación.
 Formación específica del director del personal investigador o científico.
 Si se requiere procedimientos o medidas de seguridad adicionales el director es el responsable
de garantizar que se disponen de todos los medios, tanto de diseño de laboratorios,
equipamiento, etc. para garantizar la seguridad en su manipulación.

GESTIÓN DE LA PREVENCIÓN EN LA MANIPULACIÓN DE

AGENTES BIOLÓGICOS
Debe existir un Manual de Bioseguridad específico donde estén indicados los riesgos de
esa instalación
Los usuarios deben ser informados sobre los riesgos específicos y debe quedar constancia
de que conoce los riesgos y modos de proceder.

OPERACIONES EN LAS QUE AUMENTA EL RIESGO BIOLÓGICO
• Transporte de muestras y animales de laboratorio: Este riesgo también existe

en el transporte de jaulas que alberguen animales de experimentación. Riesgo
implícito de arañazo y mordedura
• Trabajos experimentales. Recogida de muestras clínicas. Biopsias y necropsias:
En estas operaciones se utiliza material cortante y jeringuillas.
• Operaciones de subcultivo y caracterización: Trituración, homogeneización,
sonicación y centrifugación:
• Limpieza de jaulas y cambio de camas

OPERACIONES EN LAS QUE AUMENTA EL RIESGO BIOLÓGICO
Hay que valuar al personal, al producto y la contaminación ambiental al menos, los riesgos
asociados con los siguientes puntos:
a) Manejo de animales
b) Centrifugación
c) Control de agujas y objetos cortantes
d) Correcto uso de las bombas de vacío
e) Técnicas de cultivo, purificación y almacenamiento
f) Minimización/contención de aerosoles
g) Pipeteo
h) Sonicación y otras formas mecánicas de rotura de células/tejidos
i) Uso de cabinas de seguridad biológica
j) Uso de desinfectantes, incluyendo el control de vertidos, descontaminación de rutina,
lavado de manos y ducha
k) Gestionar adecuadamente los residuos biológicos generados

Según el Artículo 7. Medidas higiénicas del Real Decreto 664/1997
a. Prohibir que los trabajadores coman, beban o fumen en las zonas de trabajo
b. Proveer a los trabajadores de prendas de protección apropiadas
c. Disponer de WC y cuartos de aseo apropiados.
d. Disponer de un lugar determinado para el almacenamiento adecuado EPIs/limpios/buen funcionamiento
e. Especificar los procedimientos de obtención, manipulación y procesamiento de muestras de origen
humano o animal.
f. Los trabajadores dispondrán, dentro de la jornada laboral, de diez minutos para su aseo personal antes
de la comida y otros diez minutos antes de abandonar el trabajo
g. Al salir de la zona de trabajo, el trabajador deberá quitarse las ropas de trabajo y los equipos de
protección personal que puedan estar contaminados por agentes biológicos y deberá guardarlos en
lugares que no contengan otras prendas

CUANDO TRABAJAMOS CON ORGANISMOS MODIFICADOS GENETICAMENTE

• Exposición mínima de los OMGs en el lugar del trabajo y el medio ambiente
• Aplicar medidas de control y completar con vestimentas y equipos de protección adecuadas
• Comprobar y Mantener de forma adecuada las medidas y los equipos de control
• Verificar, cuando proceda, la presencia de organismos fuera del confinamiento físico
• Proporcionar al personal la formación adecuada
• Crear comités de bioseguridad
• Formular y aplicar códigos de practicas locales para la seguridad del personal
• Disponer de señales de riesgo biológico
• Establecer instalaciones de descontaminación para el personal
• Llevar los correspondientes registros de OMGs
• Prohibir que se coma, beba o fume, se empleen cosméticos y se acumulen alimentos en las
zonas de trabajo
• Prohibido pipetear con la boca
• Establecer protocolos de trabajo por escrito si es necesario
• Tener a disposición desinfectantes a mano por si un OMG se ha derramado
• Disponer un lugar de almacenamiento seguro para materiales contaminados

NORMAS GENERALES MANIPULACIÓN MATERIAL BIOLÓGICO

 Las puertas del laboratorio cerradas y el acceso restringido mientras se trabaje con material
biológico
 El laboratorio debe mantenerse limpio, ordenado y libre de materiales extraños
 Antes de iniciar la manipulación, la piel de sus manos no presente cortes o heridas y cubrirlas.
Usar guantes de nitrilo de buena calidad
 Cambiar los guantes de cada vez que se contaminen, lavarse las manos y ponerse guantes
limpios
 No tocar los ojos, nariz o piel con las manos con guantes
 No salir del laboratorio con los guantes puestos

 El uso de agujas, jeringas, etc. Solo su uso indispensable y ser eliminados en recipientes resistentes.
 No reintroducir las agujas descartadas en capuchones o de romperlas o doblarlas por la posibilidad de
accidentes por pinchazos o salpicaduras.
 No usar tijeras con puntas muy agudas.
 Evitar la creación de aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.
 Nunca pipetear con la boca, siempre pipeteadores automáticos y puntas con filtro.
 Las superficies del área de trabajo deberán ser descontaminadas cuando se termine la
experimentación.
 Lavar las manos antes de salir del laboratorio.
 Antes y al terminar de trabajar, debe descontaminarse y limpiarse con la cabina y/o otras superficies
de trabajo utilizadas.
 El material biológico derramado deberá ser inactivado inmediatamente.
 Trasportar las muestras desde congeladores y neveras en recipientes cerrados y también desde
cabinas a centrífugas.
 Asegurarse de que todo el material queda en perfecto estado y recogido.

UTILIZACIÓN CORRECTA DE PIPETAS
 Utilizar pipetas con algodón o puntas con filtro para evitar contaminar el dispositivo de aspiración.
 No insuflar aire en un líquido que contenga material infeccioso, producción de aerosoles.
 Ni expulsar a la fuerza el material infecciosos de una pipeta.
 Prevenir los riesgos de goteo accidental de material infeccioso poniendo en la superficie de trabajo
papel desechable con un desinfectante, que se eliminará a los contenedores indicados.
 Las pipetas contaminadas se sumergirán en un desinfectante.
 La pipetas se depositarán en una bandeja dentro de la cabina, mientras se utilizan, y se
desinfectarán en el autoclave.

TRANSPORTE DE MEDIOS DE CULTIVO CONTAMINADOS
 Se transportarán las placas de cultivo en contenedores cerrados
 Las muestras, stocks de virus, etc. se trasportarán en tubos cerrados (tapón de rosca) y en
contenedores apropiados
 Las plantas transgénicas se transportaran en envases cerrados para evitar la propagación de

semillas

PROCEDIMIENTOS DE CENTRIFUGACIÓN
■ Centrífugas de baja velocidad –utilizar tubos con tapón de rosca.

■ Se pondrán en porta-tubos de la centrífuga: en el caso de rotura del tubo, quedará en el
porta-tubo.
■ Los porta-tubos sólo se cerrarán y abrirán dentro de las cabinas de seguridad biológica.
■ Antes de centrifugar asegurarse que los tubos están nuevos y no tienen grietas.
■ Colocar los adaptadores correspondientes.
■ Llenar los tubos dentro de la cabina de seguridad biológica.
■ Pasar un papel desechable impregnado en desinfectante por fuera de los tubos, antes de
introducirlos en el rotor.
■ No llenar los tubos, sólo ¾ partes de su volumen.
■ La descontaminación del rotor se realizará al terminar: introducir rotor y buckets en un
barreño con desinfectante, lavar después con agua.
■ Consultar siempre cualquier duda acerca de los tubos, portatubos, rotores, centrífuga,
etc..

MICROAGUJAS:
■ Se seguirán los mismos procedimientos mencionados de desinfección de
los tubos y de la centrífuga al terminar.
ULTRACENTRIFUGAS
■ Antes de utilizar una ultracentrífuga asegurarse de la utilización correcta
de velocidad, tubos, rotores, etc.
■ No utilizar los portatubos sin el anillo de goma y aplicar periódicamente
grasa especial en el mismo.
■ Se transportarán los tubos en gradillas con los tubos cerrados
previamente calibrados en la balanza.
■ Al terminar poner los portatubos y tapas en desinfectante, antes de su
procesamiento.

ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS: NEVERAS, CONGELADORES Y

CONTENEDORES DE NITRÓGENO LÍQUIDO
 Se deben inspeccionar y limpiar periódicamente.

 Eliminar todos los tubos o ampollas rotas o que no tengan identificación.
 Utilizar guantes específicos, bata y careta de protección facial.
 Abrir las cajas y tubos dentro de las cabinas de seguridad biológica.
 Todos los tubos y muestras deben estar identificadas con :
• Material biológico que contienen.
• Nombre del usuario.
• Núm. de laboratorio.
• Fecha de almacenamiento.
• En su caso, señalización de biorriesgo.

Cada laboratorio debe disponer de zona señalizada en neveras y

congeladores de las muestras
■ Debe indicarse nombre de usuarios y localización ,en el caso de averías, incidentes, etc.
■ Asegurarse que quedan bien cerradas las puertas de las neveras y congeladores
■ Comunicar al responsable de cultivos cualquier avería para el aviso al Servicio de

Mantenimiento

TIPOS DE LABORATORIOS SEGÚN EL NIVEL DE CONTENCIÓN BIOLÓGICO

Existen 4 niveles de contención biológica (NCB) con normas que engloban como base el NCB
anterior mas las especificaciones de cada nivel.
NCB-1. Labs convencionales NCB-2. Labs de cultivo celular
NCB-3. Labs de cultivo/diagnostico NCB-4. Labs de cultivo/diagnostico

LABORATORIOS -NIVEL DE CONTENCIÓN 1

Patógenos que no presentan ningún peligro para el operador, nulo para el medio ambiente y que
nuestro sistema inmune es capaz de eliminar fácilmente. No sé necesita ningún tipo de seguridad
especial.
 El acceso al laboratorio estará limitado, a juicio del responsable del mismo, cuando los
experimentos estén en marcha.
 Se recomienda el empleo de batas u otro tipo de equipamiento que prevenga la contaminación de

la ropa de calle. Los materiales contaminados se irán depositando en contenedores apropiados.


Patógenos que pueden presentar algún riesgo para el operador pero tienen bajo peligro si se extienden por el ambiente , su
profilaxis y tratamiento son conocidos , Se debe trabajar en cabinas de bioseguridad tipo I si forma aerosoles
1. Incluye las normas del NCB1
2. Los materiales contaminados, se llevarán al autoclave.
3. El personal llevará una bata de uso exclusivo en el laboratorio.
4. Se prestará especial atención para evitar la contaminación a través de la piel, por lo que es obligatorio llevar guantes.
5. Todos los residuos de los laboratorios deben ser descontaminados adecuadamente antes de su eliminación por medios
apropiados.
6. Las agujas hipodérmicas y jeringuillas irán provistas de diafragma. Hay que prestar especial atención a la autoinoculación y
a la creación de aerosoles.
7. Las agujas / jeringuillas se desecharán en contenedores específicos y se descontaminarán en autoclave antes de su
eliminación.
8. Los derramamientos y otros accidentes que puedan producir la sobreexposición del personal a materiales infectados
deberán ser comunicados al responsable de seguridad biológica o/o de PRL.
9. Laboratorio nivel de contención 2 OMG. Es obligatorio el acceso controlado al laboratorio: -Tarjetas magnética personal -
Huella digital

Material de bioseguridad indispensable

1. Dispositivos de pipeteo.
2. Cabinas de Seguridad Biológica (CSB) Siempre que se manipule material infeccioso.
Cuando se utilicen procedimientos con producción aerosoles, (centrifugación,
trituración, homogeneización, agitaciones, desintegración ultrasónica), inoculación
intranasal a animales y recolección de tejidos infecciosos de animales).
3. Asas de siembra de plástico desechables. También pueden utilizarse incineradores
eléctricos de asas dentro de la CSB.
4. Frascos y tubos con tapón de rosca.
5. Autoclaves u otros medios apropiados para esterilizar el material contaminado.
6. Pipetas de Pasteur -plástico desechables, en vez pipetas vidrio.
7. Aparatos validados (autoclaves /CSB).

Patógenos que pueden presentar gran peligro para el operador, con peligro si se extiende por el medio
ambiente o comunidad pero su tratamiento y profilaxis son conocidos. Se debe manejar en cabinas de
bioseguridad 1 o 2
Incluye las normas del NCB 1 y 2
1. Indumentaria de protección adecuada mas calzado
2. Laboratorio hermético para fumigación
3. Existencia entrada/salida individualizada
4. Superficies resistentes a ácidos, álcalis, desinfectantes, agentes descontaminantes y fácil limpieza (suelo,
mesa)
5. Presión negativa respecto a la presión del medio ambiente inmediato
6. Aire de entrada y salida laboratorio filtro Hepa
7. Autoclave en el laboratorio

Patógenos que representan gran peligro para el operador, más peligrosos sin se
extiende en el ambiente o comunidad y cuyo tratamiento o profilaxis no existen. se
debe manejar en cabina de bioseguridad nivel 3. Son obligatorios:
1. Superficies resistentes a ácidos, álcalis, desinfectantes, agentes descontaminantes y
fácil limpieza en m esa, suelo, techo y paredes
2. Aire de entrada y salida laboratorio filtro HEPA
3. Autoclave en laboratorio de doble puerta
4. Ducha
5. Indumentaria de protección con cambio completo de ropa
6. Inactivación OMGs: efluentes de lavabos, desagües y duchas
7. El aire introducido y extraído se filtrara con filtros HEPA, para entrada y salida de aire

En resumen:
LABORATORIO GRADO DE CONFINAMIENTO
Especificaciones 1 2 3 4
1 Dependencias del laboratorio No No Si Si
2 Laboratorio hermético: No No Si Si
Fumigación
3 Existencia entrada/salida No No Si Si
individualizada
EQUIPO
4 Superficies resistentes a ácidos, Si Si Si Si
álcalis, desinfectantes, agentes Mesa Mesa Mesa Mesa, Suelo
descontaminantes y fácil limpieza Suelo Techo, Paredes
5 Acceso al laboratorio a través de No No Opcional Si
exclusa
6 Presión negativa respecto a la No No Si Si
presión del medio ambiente
inmediato
7 Aire de entrada y salida No No Si Si
laboratorio filtro HEPA HEPA salida HEPA
Entrada Salida
8 Cabina seguridad biológica No No Si Si
9 Autoclave Edificio planta En laboratorio En laboratorio
doble puerta


NORMAS DE TRABAJO
10 Acceso restringido No Si Si Si
11 Señalización de riesgo No Si Si Si
biológico
12 Medidas de control de la No Si Si Si
formación y difusión de
aerosoles
13 Ducha No No Opcional Si
14 Adecuada Adecuada Mas calzado Cambio
Indumentaria de Protección adecuado completo de
ropa
15 Guantes No Opcional Si Si
16 Control roedores e insectos Opcional Si Si Si


RESIDUOS
19 Inactivación OMG: efluentes de No No Opcional Si
lavabos, desagües y duchas
20 Inactivación OMG: Material Opcional Si Si Si

contaminado, residuos
OTRAS MEDIDAS
21 Almacenamiento equipos en el No No Opcional Si
propio laboratorio
22 Ventana observación acupantes Opcional Opcional Opcional Si

Medias de contención GRADO DE CONFINAMIENTO

1 2 3 4
1 El lugar de trabajo se encontrará No No Aconsejable Si
separado de toda actividad que se
desarrolle en el mismo edificio
2 El aire introducido y extraído se No No Si, para la salida Si, para entrada y
filtrara con filtros HEPA de aire salida de aire
3 Acceso a personal designado No Aconsejable Si Si, con exclusa de
aire
4 Se puede precintar para No No Aconsejable Si
desinfección
5 Procedimiento de desinfección No Si Si Si
específico
6 Control eficiente de vectores, No No Si Si
roedores e insectos
7 Aire de entrada y salida No Aconsejable Si Si
laboratorio filtro HEPA
8 Almacenamiento de seguridad No Si Si Si,
para agentes biológicos almacenamiento
seguro

SELECCIÓN Y EQUIPAMIENTO
ESPECÍFICO
CABINAS DE BIOSEGURIDAD
Selección y equipamiento específico. Cabinas de bioseguridad

MANIPULACIÓN DE AGENTES BIOLÓGICOS

• Hay que elegir los sistemas de prevención adecuados al NCB en el que se vaya a
trabajar.
• Se deben tomar las medidas necesarias para evitar los riegos.
• Hay que prevenir la exposición de los trabajadores expuestos y del resto de la

población en el caso de ocurrencia de cualquier accidente.

BARRERAS DE CONTENCIÓN PRIMARIA
Previenen la exposición de los agentes biológicos : trabajadores y población.
Tienen las Características mínimas exigibles en función del nivel de contención

biológica
Características:
 Robustez
 superficies lisas
 fácilmente descontaminables
 resistentes a desinfectantes

Equipos e instrumentos generales

• Cabinas de seguridad biológica.
• Sistemas de pipeteo.
• Microincineradores de asas de siembra.
• Centrifugas/ultracentrífugas y tubos de tapón de rosca.
• Homogeneizadores.
• Contenedores para frascos y placas de cultivo.
• Contenedores transporte de material biológico / esterilizar.
• Sistemas de aspiración de líquidos mediante vacío
• Incubadores de co2
• Baños de agua termostáticos.
• Microscopios.

CABINAS DE BIOSEGURIDAD
Presentan un flujo laminar cuyo flujo de moléculas de aire se mueven a la misma velocidad y en sentido
paralelo 0,45m/s.
El aire que filtra es estéril según la clase de cabina
FLUJO LAMINAR HORIZONTAL
■ Circulación aire, área de trabajo hacia operador.

■ Barrido de zona de trabajo.
■ PROTEJE AL PRODUCTO.
■ NO PROTEJE AL OPERADOR (bioseguras para las muestras).
Uso para preparación de medios
FLUJO LAMINAR VERTICAL
■ Circulación aire parte superior hasta zona trabajo.

■ aire recirculado o no.
■ Protección OPERADOR.
■ MEDIO AMBIENTE.

FILTROS
Hay 2 tipos que dependen de su eficacia:
FILTRO HEPA (High Efficiency Particulate Air)

– Filtro esterilizante de alta eficiencia.
– Filtro absoluto.
– Material de fibra sellado en marco aluminio con resina epoxi.
– Eficacia > 95%partículas 0,3 micras.
FILTRO ULPA (Ultra low penetration air)

- Filtro ultra absoluto.
- Eficacia > 99,999 % partículas 0,12 micras

Tipos de cabinas de Bioseguridad (CSB) para el

usuario (Normativa EN12469)
■ CABINAS CLASE I: cabinas que protegen al operador y al medio ambiente, no al

producto.
■ CABINAS CLASE II: cabinas que protegen al operador y al medio ambiente y al

producto (A y B).
■ CABINAS CLASE III: cabinas totalmente cerradas de máxima protección.

CLASE I
■ Funcionamiento similar a vitrina de gases.

■ Trabaja a presión negativa y está abierta frontalmente.
■ Velocidad entrada aire 0,4--1 m/sg.
■ Filtro HEPA (protección ambiente).
■ Protección operador.
■ No protección producto.
■ No adecuada material biológico peligroso.

CLASE II
■ El área de trabajo e en la zona de flujo laminar vertical.
■ Tiene Presión negativa.
■ Velocidad entrada aire 0,4--1 m/seg.
■ Filtros Hepa (protección ambiente).
■ Protección operador: barrera de aire-abertura frontal /aire filtrado
■ Protección producto.
■ % aire filtrado/% recirculado.
■ 2 tipos, A y B.

CLASE II: A Y B
CLASE II- A
■ 70% aire recirculado.
■ 30% aire extraído.
■ Abertura frontal-20cm/ velocidad aire 0,4m/sg.
■ Flujo 0,4m/sg.
CLASE II- B
■ 30% aire recirculado.
■ 70 % aire extraído.
■ Abertura frontal 20cm/ 0,5m/sg.
■ Flujo 0,25m/sg.

CLASE III
■ Cabinas cerradas acceso a zona de trabajo a través de guantes.
■ Presión negativa.
■ filtros HEPA en impulsión /extracción.
■ PROTECCIÓN AMBIENTE.
■ PROTECCIÓN OPERADOR.
■ PROTECCIÓN PRODUCTO.

MATERIALES Y EQUIPOS
■ Ubicar el material dentro limpio de partículas antes de empezar a trabajar.
■ Evitar mecheros Bunsen por turbulencias.
■ Tubos con tapón de rosca, no tapones de algodón ni materiales que desprendan

partículas.
■ Recipientes impermeables en cabina para residuos (acero inoxidable)

PROCEDIMIENTOS TRABAJO EN CSB

• No realizar movimientos bruscos que distorsionen el flujo laminar.
• Tienen zona específica de manipulación.
• Hay que evitar salpicaduras, etc.. al filtro HEPA.
• No ubicar materiales que distorsionen flujo.
• Para su perfecto funcionamiento se deben ubicar alejadas de puertas, salidas de
ventilación, ventanas (no practicables).
• El paso de personal provoca corrientes de aire que pueden distorsionar el equilibrio de
flujos de aire.
• Deben tener un mantenimiento.
• Deben estar Limpias y desinfectadas.
• Usar Equipos de protección personal (Epis).

COMO USAR EL SISTEMAS DE PIPETEO AUTOMÁTICO
Características del sistema, micropipetas de material plástico:

- Aforadas con filtro.
- Acopladas a pipeteadores automáticos o electrónicos.
- Adición y retirada de medios de cultivo y otros líquidos en rango de ml.
- Tienen filtros de disco de 0.22 μm.
Características de seguridad
- Facilidad de uso.
- Al evitar la contaminación del extremo bucal de la pipeta se
protege el dispositivo de pipeteo, el operador y el circuito de
vacío.
- Posibilidad de esterilización.

COMO USAR EL SISTEMAS DE MICROPIPETAS Y PIPETAS PASTEUR
Micropipetas automáticas/ pipetas multicanal

 Adición, retirada y mezcla de pequeños volúmenes (rango de μl)
 Puntas equipadas con filtro que evitan aerosoles.
Pipetas Pasteur de plástico

 Es un materiales resistentes de un solo uso.
 Pipetas Pasteur vidrio. Accidentes por pinchazos. Evitarlas prohibida a partir NCB3.

CENTRIFUGAS/ULTRACENTRIFUGAS Y TUBOS DE TAPÓN DE ROSCA
Riesgos
La Centrifugación puede generar aerosoles, salpicaduras y roturas de los tubos.
- Cestillos de cierre hermético seguridad/tubos específicos.
- Contención eficaz del sistema.
- Recomendado NCB 2 / obligatoria nivel 3 y 4.
- Ultracentrifugación: filtro HEPA entre centrífuga y bomba de vacío.

HOMOGENEIZADORES
·Riesgos
Salpicaduras / producción de aerosoles.
Homogeneizadores herméticos presentan una contención eficaz.
Características del sistema

- Material metálico /cierre hermético/ esterilizable en autoclave.
- No utilizar homogeneizadores con vasos de vidrio.
- Manipulaciones dentro de la cabina.
- Esperar 10 minutos antes de abrir por aerosoles.

CONTENEDORES DE HIELO PARA MUESTRA BIOLÓGICA

Más fáciles de limpiar si hay derrames de muestras biológicas

SISTEMAS DE ASPIRACIÓN DE LÍQUIDOS BIOLÓGICOS

MEDIANTE VACIO
Riesgos
- Contaminación de sistema de vacío
- Formación de aerosoles
- Rebosamiento del líquido.
Características de seguridad (Vacusafe)
Sistema adecuado para la retirada de medio de cultivo e inactivación química.
• Recipiente o botella irrompible de 3L.
• Seguridad.
• Plástico.
• Autoclavable.
• Conectada a tubo de aspiración de silicona.
• Cierre de seguridad para el seguro intercambio de la botella.
• Pantalla digital para controlar la presión de aspiración.
• Adaptadores de plástico para el tipo de placas a utilizar.
• Sensor de llenado.
• El vacío se realiza mediante bomba de aspiración.

INCUBADORES DE CO2
 Los incubadores por vía húmeda son una gran fuente de contaminación para
muestras biológicas.
 Limpieza periódica. Antes de limpiarlos hay que vaciar todos sus contenidos (bandejas,
matraces, gradillas,etc.).
 Limpiar la parte interna con un detergente no tóxico y con etanol.
 Si un cultivo celular se vuelca en la incubador el agua de su interior debe ser eliminada

tras pasar por el autoclave.

BAÑOS DE AGUA TERMOSTÁTICOS
• Contenedores en soportes adecuados, bien cerrados para

evitar salidas o descargas accidentales de la muestra.
• Instalar el baño termostático a distancia de los dispositivos

eléctricos (cables, enchufes o aparatos eléctricos).
• Llenar el baño termostático con agua destilada y añadirle un

antimicrobiano (no utilizar azida sódica, puede formar un
compuesto explosivo con cobre, latón o plomo).
• Cambiar el agua, al menos, cada 15 días.
• Periódicamente proceder a la limpieza del baño.

MICROSCOPIOS
 La fijación y tinción de muestras de sangre para el microscopio no destruye
necesariamente todos los organismos o los virus.
 Estas deben manipularse con pinzas, almacenarse cuidadosamente y eliminarlas al

contenedor de residuos para su procesamiento en el autoclave.
 Al terminar la utilización es obligatoria la limpieza de los oculares por parte del

usuario según las normas.

DESCONTAMINACIÓN,
DESINFECCIÓN Y
ESTERILIZACIÓN
Descontaminación, desinfección y esterilización

FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS DE

DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN
Agente destructor Efecto

Calor seco Oxidación de componentes celulares
Calor húmedo Coagulación de proteínas
Germicidas líquidos Oxidación de diferentes moléculas
Toxicidad metabólica en algunos casos
Germicida gaseoso Oxidación de diferentes moléculas
Toxicidad metabólica en algunos casos
Irradiación β o γ Producción de radicales libres y posteriores
procesos oxidativos
“STERILITY ASSURANCE LEVEL” Probabilidad 10-6 de que quede un microorganismo vivo en el material

FACTORES EN LA ELECCIÓN DEL MÉTODO
 Necesidad de infraestructura e instalaciones especiales.
 Destrucción por calor o presión de materiales de interés reciclables.
 Toxicidad del germicida para el personal expuesto.
 Efectos nocivos del germicida a nivel medioambiental.
 Radiaciones ionizantes: irradiación y contaminación, producción de residuos

radiactivos.

NORMAS TÉCNICAS
 Organizaciones internacionales de estandarización ISO (Organización

internacional para la estandarización) y CEN (comité europeo de normalización).
 Normas generales de calidad en el proceso y de protección del medio ambiente:

normas UNE-EN-ISO 9000 y 14000, entre otras.
 Normas más específicas referentes a las características de la instrumentación a

utilizar, los métodos de desinfección y esterilización y los métodos de validación
de éstos últimos:
•UNE-EN 285:2007 Esterilización. Esterilizadores de vapor. Esterilizadores
grandes
•UNE-EN 554:1995. Esterilización de productos sanitarios. Validación y control
de rutina de la esterilización por medio de calor húmedo

DESINFECTANTES QUÍMICOS
NTP 429: Desinfectantes: características y usos más corrientes
Desinfectante Bacterias Micobacterias Esporas Hongos y Virus Antagonismos Sinergismos
levaduras
Gram + Gram -
Amoniaco Humedad > 70%
Aldehídos +++ +++ ++ ++ ++ ++
Materia orgánica
Compuestos Tiosulfatos Sulfuros Sales
clorados +++ +++ +- + ++ + ferrosas Ácidos
Materia orgánica Jabones Amonio

Compuestos Compuestos de Hg cuaternario
Yodados +++ +++ ++ ++ +++ + Tiosulfato de sodio
Materia orgánica Agua

Compuestos de calcárea Detergentes Cresol
amonios +++ + +- +- +- +- aniónicos
cuaternarios
(Catiónicos)
Materia orgánica Amonio Sales de sodio y
Compuestos cuaternario Ciertos jabones potasio Sales metálicas
fenólicos +++ + + + ++ +-
Materia orgánica Agua Detergentes Clorexidina

Alcoholes +++ +++ +++ +++ + +- calcárea formaldehído

hipoclorito sódico y cálcico:
• Germicidas de amplio espectro, acción muy rápida. Principio activo: cloro libre, agente oxidante
muy potente.
Inconvenientes:
Inactivación significativa en presencia de materia orgánica. Corrosivo para el acero y tóxico por
inhalación y contacto.
Corta vida útil de las soluciones preparadas.
Dicloroisocianurato sódico:
Fuente de cloro libre, se puede obtener comercialmente en polvo.
También se puede obtener en forma de tabletas.
Mas fácil de almacenar y mas seguro en su utilización.
Cloraminas:
Fuente de cloro libre, se puede obtener comercialmente en polvo.
Liberación de cloro mas lenta, uso de mayores concentraciones.
Mas fáciles de almacenar y mas seguras en su utilización.
Menor inactivación por materia orgánica.

Compuestos fenólicos, C6H5OH:

• Activos para bacterias vegetativas y virus con envuelta.
• No tóxicos.
• Base de desinfectantes comerciales para superficies.
• Base para antisépticos en higiene personal preventiva.
Inconvenientes: Espectro reducido.
Algunas bacterias expuestas a estos compuesto desarrollan resistencia a
determinados antibióticos.
Compuestos del amonio cuaternario, NH4:

• En combinación con alcoholes, activos para bacterias vegetativas y virus con
envuelta.
• No tóxicos. Base para antisépticos cutáneos (cloruro de benzalconio).
Inconvenientes: Espectro reducido
Se inactivan con materia orgánica, agua calcárea y detergentes aniónicos.

Alcoholes, CH3-CH2-OH, CH3CH(OH)CH3:

Etanol y 2-propanol activos para bacterias vegetativas y virus con envuelta.
Se utilizan al 70% en agua.
No tóxicos.
Desinfección de superficies.
Desinfección cutánea junto con agentes emolientes.
Inconvenientes: Espectro reducido Inflamables, precauciones en el almacenamiento.
Yodo y yodóforos, I2:

Germicidas de amplio espectro, parecido al del cloro.
Desinfección de superficies utilizando 0,45 gr/l de yodo libre.
Dilución en etanol para desinfección cutánea Povidona yodada (Betadine).
Inconvenientes: Inactivación en presencia de materia orgánica (menor que el Cl).
Toxico por ingestión.
El yodo tiñe los materiales y es corrosivo para el aluminio y el cobre.

Peróxido de hidrogeno y perácidos, H2O2,CH3CO3H:

 Potente acción oxidante, germicidas de amplio espectro.
 Mas seguros que el cloro.
 Desinfección de heridas: agua oxigenada al 3%.
 Desinfección de superficies: adición de componentes que mejoran las
características del H2O2
 El peróxido de hidrogeno y el A. peracético se utilizan como aerosol para la
desinfección de laboratorios y locales.
Inconvenientes:
 Tóxicos.
 Corrosivos para algunos metales.
 Efecto decolorante de los tejidos vivos.
 Inestabilidad química.

PREPARADOS GERMICIDAS COMERCIALES
Existen soluciones germicidas complejas que se pueden acercar a estas

características: Mezclas de varios germicidas agonistas de amplio espectro con
agentes tensoactivos, humectantes, disolventes y estabilizantes
Características optimas:
 Amplio espectro de aplicación.
 Rapidez de actuación.
 Capacidad de arrastre.
 Resistencia a la materia orgánica.
 Estabilidad química.

DESINFECCIÓN Y DESCONTAMINACIÓN DE LOCALES Y SUPERFICIES
1) Disolución, inmersión, fregado, rociado y fumigación.

Se emplean aldehídos, peróxido de hidrógeno/peracético,
compuestos clorados, compuestos de amonio cuaternario,
fenoles, sosa.
2) Microdifusión con aldehídos, peróxido de

hidrógeno/peracético, compuestos de amonio cuaternario.
3) Difusión en fase gaseosa peróxido de hidrógeno.

AUTOCLAVES DE ESTERILIZACIÓN POR VAPOR SATURADO
El vapor transfiere su enorme energía a los materiales donde se condensa.

Tiene la capacidad de penetrar fácilmente objetos porosos.
La esterilización de objetos huecos y de materiales porosos

 El vapor no llega a las superficies internas.
 El problema crece en objetos con una sola abertura.
 El vapor aunque penetrante, queda frenado por el aire remanente en el centro
del paquete.
 Los textiles quedan húmedos después del ciclo de esterilización.
solución: eliminar el aire antes y después de la esterilización

EL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN MEDIANTE PREVACÍO FRACCIONADO
 Se consigue eliminar prácticamente toda la cantidad de aire de forma muy

rápida.
 Es el método más seguro para objetos huecos y materiales porosos.
 En los autoclaves modernos el ciclo se reduce a los 45 min.
 Esterilizadores a vapor con sistema de vacío.
 La esterilización de líquidos mediante vapor saturado.
Otros métodos de esterilización

 Calor seco.
 Esterilizadores por aire caliente.
 Incineración.

PLANTAS “BIOWASTE”
Esterilización de todos los residuos del laboratorio
 Métodos: calor, químico, ozono, luz ultravioleta.
 Sistema dimensionado, automático, autorregulado y autoprotegido.
 Elementos en acero u otros materiales, resistentes, herméticos y esterilizables.
 Determinados elementos se encontrarán duplicados (bombeo, filtración, etc.)
 Ciclo de esterilización validable mediante microorganismos testigo.
 Sistema compatible con la utilización de un método de esterilización de emergencia.
 Los efluentes que se eliminen deberán encontrarse a <40ºC y a pH neutro.

LUZ ULTRAVIOLETA
• Longitud de onda: 200-400 nm.

• Lámparas germicidas: 254 nm.
• Vida útil de los fluorescentes UV: 4.500 hr.
• Radiación superficial no ionizante.
• Cabinas de flujo laminar, SAS de paso y salas.
CONDICIONES DE ESTERILIZACIÓN
 Superficies a esterilizar muy limpias.
 Humedad relativa > 70%.
 Irradiación directa.
 Distancia < 90 cm. A mayor distancia mas nocivo que efectivo.
 Utilización de señalización y enclavamiento con luz visible.

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN
• Esterilización del aire filtros del 99,997% de eficiencia (HEPA).

• Aplicación en instalaciones de contención, vitrinas de Bioseguridad.
• Esterilización de líquidos filtros de 0,1 a 0,22 µm de diámetro de poro.
• Aplicación en líquidos que no resisten otros métodos redes de agua estéril en asociación con
otros métodos.

MARCO LEGISLATIVO NACIONAL E INTERNACIONAL

PARA LOS ORGANISMOS MODIFICADOS
GENÉTICAMENTE (OMGS)
OMGs. Marco Legislativo

LEGISLACIÓN, PROCESOS DE AUTORIZACIÓN Y EVALUACIÓN DEL

RIESGO SOBRE OMGs
Los OMGs están regulados por una Normativa europea y española que
controla su utilización, liberación y comercialización.
Para ello tiene como principio de precaución realizar una Evaluación de

Riesgo que es fundamental para que se concedan los permisos de uso

BIOTECNOLOGÍA
 Tradicional: “Utilización de los seres vivos, o partes de éstos,

para la obtención de sustancias útiles para el hombre”
En ambos casos hay
 Moderna (Ingeniería Genética): “Modificación de las mejora genética
características de los seres vivos de una manera directa y precisa
utilizando técnicas de ADN recombinante”
Aplicaciones de biotecnología y tipos:
Biotecnología roja Biotecnología verde Biotecnología azul Biotecnología blanca

Sanitaria Agroalimentaria Marina y acuicultura Industrial

ORGANISMO MODIFICADO GENÉTICAMENTE (OMG)
“ Cualquier organismo, con excepción de los seres humanos, cuyo

material genético ha sido modificado de una manera que no se produce
de forma natural en el apareamiento o en la recombinación natural, siempre
que se utilicen las técnicas que reglamentariamente se establezcan”
Artículo 2 de la Directiva 2001/18/CE

TÉCNICAS DE MODIFICACIÓN GENÉTICA
 Técnicas in vitro de ácido nucleico, incluidos el ácido desoxirribonucleico (ADN)

recombinante y su inserción en sistemas de vectores (virus, plásmido bacteriano) que
permiten incorporar nuevas moléculas de ácido nucleico en un organismo hospedante.
 Incorporación directa de ácido nucleico en un organismo (micro-inyección, macro-

inyección y micro-encapsulación).
 Fusión de células , incluida la fusión de protoplastos, o de hibridación mediante métodos

que no se producen normalmente.

EXCLUSIONES
 TÉCNICAS NO CAUSANTES DE MODIFICACIÓN GENÉTICA

 Fertilización “ in vitro ”
 Conjugación
 Inducción poliploide
 ORGANISMOS OBTENIDOS POR OTRAS TÉCNICAS DE MODIFICACIÓN GENÉTICA:

 Mutagénesis
 Autoclonación
 ¿NUEVAS TÉCNICAS DE MODIFICACIÓN GENÉTICA?

(ODM, CRISPR/Cas, Cisgénesis, Intragénesis, Biología Sintética, etc.).

MARCO NORMATIVO SOBRE OMG EN LA UE

LEGISLACIÓN HORIZONTAL
 Directiva 2009/41/CE, sobre utilización confinada de microorganismos modificados

genéticamente.
 Directiva 2001/18/CE, sobre liberación intencional al medio ambiente de organismos

modificados genéticamente.
 Directiva 90/679/CEE, sobre protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados
con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo (última modificación: Directiva
2000/54/CE).
 Directiva 94/55/CE, relativa al transporte de mercancías peligrosas por carretera (última

modificación: Directiva 2003/28/CE).
 Directiva 98/44/CEE, sobre protección de las invenciones biotecnológicas.


LEGISLACIÓN SECTORIAL
 Reglamento (CE) Nº 726/2004: Autorización y control de medicamentos de uso

humano y veterinario.
 Directiva del Consejo 98/95/CE: Comercialización de semillas.
 Reglamento (CE) nº 1107/2009: Comercialización de productos fitosanitarios.
 Reglamento (CE) Nº 258/97: Nuevos alimentos y nuevos ingredientes alimentarios.
 Reglamento (CE) Nº 178/2002: Legislación alimentaria y se crea la Autoridad
Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA).
 Reglamento (CE) Nº 1829/2003: del Parlamento Europeo y del Consejo sobre
alimentos y piensos modificados genéticamente


LEGISLACIÓN HORIZONTAL ESPECÍFICA
Reglamento (CE) Nº 1830/2003: sobre etiquetado y trazabilidad de OMG y trazabilidad de

alimentos y piensos producidos a partir de OMG (DOCE L 268, de 18.10.2003).
Reglamento (CE) Nº 1946/200: sobre movimiento transfronterizo de organismos

modificados genéticamente (DOCE L 287, de 5.11.2003).
Reglamento (CE) Nº 65/2004: por el que se establece un sistema de creación y asignación

de identificadores únicos a los OMG (DOCE L 10, de 16.1.2004).

PRINCIPIO DE PRECAUCIÓN EN LA UNIÓN EUROPEA:

ANÁLISIS DEL RIESGO
Evaluación del riesgo: Identificación de efectos potencialmente nocivos desde una
evaluación científica (incertidumbre).
Gestión del riesgo: decisión política para juzgar el nivel de riesgo que es aceptable para la
sociedad y decidir si actuar o no.
Comunicación del riesgo: El proceso de toma de decisiones debe ser transparente e

implicar a todas las partes interesadas.

Pasos de la Evaluación científica de los riesgos para la salud y el medio ambiente
1) Identificación del peligro/daño
2) Caracterización del peligro/daño
3) Evaluación de la exposición
Caracterización del Riesgo

PRINCIPIOS BÁSICOS EN LEGISLACIÓN DE OMGs

Principio de Precaución: “caso por caso” y “paso a paso”
Laboratorios
Invernaderos
Animalarios
(Directiva 2009/41/CE)
Ensayos controlados
(Directiva 2001/18/CE y/o
Legislación sectorial)
Comercialización
(Directiva 2001/18/CE y/o
Legislación sectorial)

DESARROLLO NORMATIVO EN ESPAÑA
Ley 9/2003 de 25 de abril, por la que se establece el régimen jurídico de la utilización confinada,
liberación voluntaria y comercialización de organismos modificados genéticamente, a fin de prevenir los
riesgos para la salud humana y para el medio ambiente (BOE núm. 100, de 26.4. 2003).
Real Decreto 178/2004, de 30 de enero, por el que aprueba el Reglamento General para el Desarrollo y
Ejecución de la Ley 9/2003 de 25 de abril, por la que se establece el régimen jurídico de la utilización
confinada, liberación voluntaria y comercialización de organismos modificados genéticamente (BOE núm. 27,
de 31.01.2004). (El Capítulo V del el R. D. 178/2004 se modifica por el Real Decreto 367/2010).
Real Decreto 191/2013, de 15 de marzo, por el que se modifica el Real Decreto 178/2004, de 30 de enero,
por el que se aprueba el Reglamento general para el desarrollo y ejecución de la Ley 9/2003, de 25 de abril,
por la que se establece el régimen jurídico de la utilización confinada, liberación voluntaria y comercialización
de organismos modificados genéticamente.
(TEXTO CONSOLIDADO: Última modificación: 28 de marzo de 2013).

LEY 9/2003, R. D. 178/2004 Y R. D. 191/2013
 La distribución de competencias entre la Administración General del Estado y las

Comunidades Autónomas.
 Requisitos para la realización y autorización de actividades de utilización confinada, de

liberación voluntaria y de comercialización de organismos modificados genéticamente.
 Normas sobre información, vigilancia y control de estas actividades.
 Responsabilidad, infracciones y sanciones.
 Composición y competencias de:
• El Consejo Interministerial de OMG (CIOMG)

• La Comisión Nacional de Bioseguridad (CNB)

CONSEJO INTERMINISTERIAL DE OMG (CIOMG)

Responsable de otorgar las autorizaciones que corresponden a la Administración General del
Estado.
 Composición:
 Ministerio de Agricultura y Pesca, Alimentación y Medioambiente (4)
 Ministerio de Sanidad, Servicios Sociales e Igualdad (3)
 Ministerio de Economía y Competitividad (3)
 Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (1)
 Ministerio de Interior (1)
Texto consolidado del 28 de marzo de 2013 del Real Decreto 178 / 2004

COMISIÓN NACIONAL DE BIOSEGURIDAD (CNB)
Órgano consultivo, responsable de evaluar e informar preceptivamente todas las solicitudes

de autorización que corresponda otorgar a la Administración General del Estado y a las CCAA.
COMPOSICIÓN:
Expertos de instituciones científicas (6)

Expertos de instituciones científicas (6)
Ministerio de Agricultura y Pesca, Alimentación y Medio Ambiente, MAGRAMA(6)
Ministerio de Sanidad, Servicios Sociales e Igualdad (5)
Ministerio de Economía y Competitividad (5)
Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (1)
Ministerio de Interior (1)
Representantes de las CCAA (17)
COMISIÓN NACIONAL DE BIOSEGURIDAD (CNB)

 Actividades iniciadas en 1993
 Evaluaciones realizadas de Notificaciones de Utilización Confinada:
• + 400 Instalaciones
Laboratorios (59%)
Animalarios (18%)
Invernaderos + Cámaras de Cultivo (16%)
Plantas piloto e Industriales (7%)
• + 700 Actividades
282 Tipo 1
347 Tipo 2
84 Tipo 3
 Elaboración de Formularios de notificación y Guías para los notificadores para presentar solicitudes de
utilización confinada de OMG y de liberación al medio ambiente de PMG y para ensayos clínicos.
 Consultas sobre procedimientos OMG: bznsecretariaomg@mapama.es
 Web biotecnología MAGRAMA: http://www.mapama.gob.es/es/calidad-y-evaluacion-
ambiental/temas/biotecnologia/organismos-modificados-genéticamente-omg

Ministerio de Agricultura y Pesca, Alimentación y Medio Ambiente

(MAGRAMA)
Presidente: Secretario General de Agricultura y Alimentación

Dirección General de Calidad y Evaluación Vicepresidencia: Dirección General de Producciones y Mercados
Ambiental, y Medio Natural Agrarios
Comisión Nacional de Consejo Interministerial de OMG (CIOMG)

Bioseguridad (CNB) GESTIÓN
EVALUACIÓN
Comité de Participación de OMG

COMUNICACIÓN
AUTORIDADES COMPETENTES
COMUNIDADES AUTÓNOMAS
b) Autorizaciones de ensayos de liberación voluntaria al medio ambiente.
c) Vigilancia y control en todos los casos (excepto los casos indicados abajo)
a) Autorizaciones de ensayos de utilización confinada.
ADMINISTRACIÓN GENERAL DEL ESTADO

a) Autorizaciones de ensayos de utilización confinada y liberación voluntaria (ensayos
experimentales en campo o ensayos clínicos) en los casos de:
 Los supuestos derivados de la Ley 14/2011 de la Ciencia, la Tecnología y la Innovación o
financiados por el Plan Estatal de Investigación Científica y Técnica y de Innovación.
 Ensayos en campo enmarcados dentro del registro de variedades vegetales (OEVV)
 Ensayos en campo complementarios dentro del procedimiento para la autorización de
comercialización.
 Incorporación de OMG a medicamentos de uso humano o veterinario y productos que
puedan suponer un riesgo para las personas
b) Vigilancia, control e imposición de sanciones en los casos de las actividades de los centros
públicos estatales, el registro varietal y la importación/exportación.

UTILIZACIÓN CONFINADA DE OMG

Directiva 2009/41/CE
Ley 9/2003 y R.D. 178/2004
“Cualquier actividad por la que se modifiquen genéticamente los

microorganismos (organismos) o por la que los OMG se cultiven, almacenen,
utilicen, transporten o eliminen, o se utilicen de cualquier otro modo y para la cual
se empleen medidas específicas de confinamiento con el fin de limitar su
contacto con el conjunto de la población y con el medio ambiente”

MEDIDAS DE CONFINAMIENTO
Se emplean varios tipos de barreras para evitar la propagación al medio ambiente:
Barreras físicas
 Locales: laboratorios, animalarios, invernaderos…
 Equipo: acceso, presión negativa, filtros HEPA, campanas, autoclaves…
 Normas de trabajo: buenas prácticas en microbiología, señalización, indumentaria de
protección (EPIs), duchas, etc.
Barreras biológicas: mutantes auxótrofos
Barreras químicas:
Soluciones desinfectantes en desagües para inactivación de efluentes y material contaminado

UTILIZACIÓN CONFINADA CLASIFICACIÓN DEL RIESGO DE LA ACTIVIDAD Y

MEDIDAS DE CONFINAMIENTO
TIPO 1-Riesgo insignificante o nulo TIPO 2-Bajo riesgo
TIPO 3-Riesgo moderado TIPO 4-Alto riesgo
Establece cuatro grados de confinamiento que se corresponden con cada una de las clasificaciones de
riesgo de la actividad de utilización confinada:
Actividad Utilización Confinada Tipo 2 Grado de confinamiento 2

UTILIZACIÓN CONFINADA EVALUACIÓN CIENTÍFICA DEL RIESGO
1) Identificación de las propiedades potencialmente nocivas del OMG
2) Tipo de riesgo del OMG
3) Gravedad y Probabilidad de los efectos potencialmente nocivos identificados

nocivos identificados
4) Características de la actividad y de la instalación
5) Clasificación definitiva del riesgo de la actividad
(Directiva 41/2009/CE y Decisión de la Comisión 2000/608/CE)

1. Identificación de las propiedades potencialmente nocivas* del OMG. Dependerá del:
- Organismo receptor
- Organismo donante
- Inserto
- Vector
- OMG resultante
* Enfermedades que afecten a las personas (efectos alergénicos y tóxicos), enfermedades que afecten a los animales o a los vegetales, compromiso de tratamientos terapéuticos
antimicrobianos, establecimiento y diseminación, transferencia genética.

2. Clasificación inicial del OMG (Tipos 1 a 4) en función de la gravedad de los efectos potencialmente nocivos
(Legislación comunitaria y nacional existente (Directiva 2000/54/CE, etc.) y sistemas de clasificación nacionales e
internacionales (OMS, NIH, etc.)
3. Probabilidad y magnitud de que se produzcan efectos nocivos (exposición de las

personas y el medio ambiente.):
 Características de la actividad
 Concentración y escala
 Condiciones de cultivo
 Entorno potencialmente expuesto
 Presencia de especies susceptibles
4. Clasificación definitiva y confirmación de la idoneidad de las medidas de confinamiento.

MEDIDAS DE CONFINAMIENTO Y PROTECCIÓN
Requisitos mínimos habituales:
A) Buenas Practicas de Trabajo (Buenas Prácticas Microbiológicas y Principios de Seguridad e Higiene en el

Trabajo)
B) Formación adecuada
C) Equipos de contención (Barreras primarias, secundarias, etc.)
D) Diseño de las instalaciones

OTRA LEGISLACIÓN INTERNACIONAL
PROTOCOLO DE CARTAGENA SOBRE BIOSEGURIDAD
• Aprobado el 29 de Enero de 2000 en Montreal (Canadá) por la Primera Conferencia

Extraordinaria de las Partes del Convenio sobre Diversidad Biológica
• Ratificado hasta la fecha por 170 países (Partes)
• Entrada en vigor: 11 de septiembre de 2003
• España ratificó el 16 de enero de 2002

PROTOCOLO DE CARTAGENA SOBRE BIOSEGURIDAD
Por Organismo Vivo Modificado (OVM) " se

entiende cualquier organismo vivo que posea una
combinación nueva de material genético que se
haya obtenido mediante la aplicación de la
biotecnología moderna”

GUÍAS Y NORMAS TÉCNICAS
MANUAL DE BIOSEGURIDAD DE LA Organización Mundial de la Salud
– Incluye el uso de la tecnología del ADN recombinante en condiciones de seguridad y la evaluación

de riesgos, y además ofrece directrices para la puesta en servicio y la certificación de los laboratorios
(OMS, 2005)
– El Capítulo 16: evaluación de los riesgos de los OMG y las consideraciones de bioseguridad para
los experimentos que supongan la obtención o el uso de OMG
– Consideraciones de bioseguridad específicas para los vectores de expresión, los vectores víricos
para la transferencia de genes, animales transgénicos y con genes inactivados (knock-out) y las
plantas transgénicas

GUÍAS Y NORMAS TÉCNICAS

DIRECTRICES NIH
– Directrices para un desarrollo y trabajo seguro con agentes biológicos
– En marzo de 2013 se publicó un nuevo documento con las directrices para la
investigación con moléculas de ácido nucleico recombinante o sintético que se
integren en células, organismos y virus, procedimientos de evaluación del riesgo y
medidas de contención
INSHT
Guía técnica para la evaluación y prevención de los riesgos relacionados con la
exposición a agentes biológicos (actualizada en 2014)
NORMAS UNE
UNE-CWA 16393:2014: Gestión del riesgo biológico en el laboratorio. Guía para
la aplicación del CWA 15793:2008.
UNE-CWA 16335:2014 sobre competencia del profesional de bioseguridad

AUTORIZACIÓN DE ACTIVIDADES E INSTALACIONES PARA

TRABAJAR CON ORGANISMOS MODIFICADOS GENÉTICAMENTE.
OMGs. Autorizaciones
UTILIZACIÓN CONFINADA: PROCEDIMIENTO DE

COMUNICACIÓN/AUTORIZACIÓN
 Para poder trabajar con OMGs hay que pedir una serie de permisos mediante una Solicitud de
Comunicación/Autorización a la Autoridad Competente (A. C.) de las:
 Instalaciones
 Operaciones de utilización confinada: Tipos 1, 2, 3 y 4
 Evaluación del Riesgo (ER)
 Autoridad Competente envía solicitud a la Comisión Nacional Bioseguridad y pide su informe de
Evaluación Riesgo.
 Visita previa a las instalaciones.
 Evaluación del Riesgo de la Comisión Nacional Bioseguridad hace el informe Evaluación de Riesgo.
 La Autoridad Competente da respuesta a la autorización (dependiendo del tipo de riesgo de la actividad y
puede estar sujeta a condiciones)
 Vigilancia y control por la Autoridad Competente: Inspecciones periódicas.
GUÍA PARA LOS NOTIFICADORES PARA PRESENTAR SOLICITUDES DE

UTILIZACIÓN CONFINADA DE OMG
Esta es la Guía de
la Comisión
Nacional de
Bioseguridad para
la petición de
Autorizaciones.
Está publicada en
el Ministerio de
Agricultura, Pesca
y Alimentación:
Magrama
GUÍA PARA LOS NOTIFICADORES PARA PRESENTAR SOLICITUDES DE

UTILIZACIÓN CONFINADA DE OMG DE LA JUNTA DE ANDALUCÍA
http://investigacion.ugr.es/pages/etica/omg/guia_para_la_autorizacion_para_la_utilizacion_confinada_de_organismos_modificados_geneticamente/!
PROCEDIMIENTO SOLICITUD DE UTILIZACIÓN CONFINADA
1) Entrega de la Solicitud de Comunicación o Autorización vía Sede Electrónica del MAGRAMA

cuando la competencia sea del CIOMG (Consejo interministerial de OMG) informarse en el caso de
competencia de las CC. AA.
2) Autoridad Competente (AC) envía Acuse de Recibo
3) Las A. C. envían las solicitudes en formato electrónico al buzón del MAGRAMA:

bznsecretariaomg@magrama.es
4) Asignación del Nº de Notificación por la CNB
5) La Secretaría del CIOMG, o la A. C. correspondiente, solicita el informe preceptivo a la CNB
6) Una vez evaluado la solicitud la CNB envía informe Evaluación de Riesgo a la A. C.
7) Respuesta final de la A. C. al solicitante
SOLICITUD
RECORRIDO DE LA SOLICITUD
SOLICITUD DE AUTORIZACIÓN DE ACTIVIDADES DE UTILIZACIÓN CONFINADA
 Hay 3 formularios para rellenar:

 Formulario Parte A: descripción del OMG y la actividad.
• Tabla actividades tipo 1.
• NUEVO Formulario simplificado actividades Tipo 2.
 Formulario Parte B: descripción de la instalación.
 Formulario Parte C: evaluación del riesgo de la realización de la actividad en la instalación.
INFORMACIÓN EXIGIDA EN LA NOTIFICACIÓN
FORMULARIO PARTE B:
Notificación de primer uso de instalaciones para realizar actividades de utilización
confinada con OMG:
– Nombre de las personas responsables de instalación, de la actividad, y los
responsables de la supervisión y la seguridad.
– Información sobre la formación profesional y titulación de las personas responsables
de la supervisión y de la seguridad.
– Datos relativos a todos los comités de bioseguridad.
– Dirección, tipo y descripción general de la instalación – Descripción de las distintas
secciones (finalidad, responsables, dependencias y equipos) – Descripción de la
naturaleza del trabajo a realizar y tipo de riesgo de la actividad de utilización confinada.
– Medidas de confinamiento (contención) y otras medidas de protección (Cuadros)
– Información sobre gestión y eliminación de los residuos.
FORMULARIO PARTE A: Notificación actividades de utilización confinada con OMG

– Nombre de las personas responsables de la actividad y de la supervisión y de seguridad, y tipo de
financiación.
– Descripción de la actividad: objetivo y tipo de riesgo.
– Organismo utilizados: receptor, donantes y, si procede, sistemas hospedador-vector utilizados. Técnica
de modificación genética empleada.
– Procedencia y funciones previstas de los materiales genéticos utilizados en la modificación– identidad
y características del organismo modificado genéticamente (OMG).
– Finalidad de la actividad realizada, incluidos los resultados esperados.
– Cantidades aproximadas de OMG que se vayan a utilizar.
– Descripción de las operaciones(naturaleza y volumen, duración, origen del OMG y transporte)
– Descripción de las medidas de confinamiento y protección individual.
– Gestión, inactivación y eliminación de residuos (tipo, tratamiento y destino final).
– Informaciones adicionales relativas a la ubicación de la instalación.
– Prevención de accidentes(planes de emergencia).
– Únicamente para las actividades de tipo 1, se presentará una tabla resumen y para sucesivas
actividades será obligatorio llevar un registro interno de las nuevas actividades junto con su evaluación
del riesgo.
FORMULARIO PARTE C: Evaluación del riesgo de actividades de utilización confinada con OMG
− Responsable de la actividad.
− Descripción de la actividad − Evaluación del riesgo.
− Identificación de las propiedades nocivas del OMG(organismo receptor, donante, inserto, vector y OMG).
− Efectos para la salud humana y la sanidad animal y vegetal.
− Efectos para el medio ambiente.
− Clasificación inicial del riesgo del OMG.
− Probabilidad de que se produzcan efectos nocivos y gravedad de dichos efectos (exposición,
concentración y escala, condiciones de cultivo, etc.)
− Determinación de la clasificación y medidas de confinamiento definitivas y confirmación de su idoneidad.
− Determinación del riesgo en el caso de que se produzca una liberación accidental(ubicación de la
instalación , probabilidad de producirse un accidente, equipos de seguridad, planes de emergencia).
− Únicamente para las actividades de tipo 1, se presentará un resumen de las actividades (tabla modelo) y
evaluación del riesgo.
CRITERIOS RELEVANTES PARA LA EVALUACIÓN DEL RIESGO DE OMG
• Origen y naturaleza del ADN introducido: si derivan de agentes infecciosos patógenos o si son
organismos patógenos y si se maneja un fragmento de ADN o el genoma completo.
• Organismo receptor: diseminación, persistencia e invasividad, potencial para hibridar con parientes
silvestres y potencial para provocar un impacto perjudicial sobre los agro-ecosistemas o ecosistemas
naturales.
• Naturaleza de la proteína expresada: efectos tóxicos o potencial alergénico conocido (incluido el

entorno circundante).
• Entorno circundante: efectos sobre la biodiversidad o los agroecosistemas.
• Procedimientos experimentales: transporte al o desde el invernadero y medidas de contención

necesarias.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD PARA OMG EN CONFINAMIENTO

• Tipo 1: Sin capacidad para diseminarse o/y establecerse en el medio ambiente en caso de liberación
accidental (ej. plantas resistentes a insectos).
• Tipo 2: Pueden ser viables en el entorno circundante con un impacto bajo sobre el medio ambiente y con
un manejo para su eliminación sencillo (ej. girasoles resistentes al hongo Sclerotinia , ya que es capaz de
hibridar con parientes silvestres y convertirse en mala hierba).
• Tipo 3: Evitar la liberación de PMG cuando van asociados a patógenos, especialmente agentes
infecciosos exóticos, que puedan causar un impacto severo en el medio ambiente (ej. cítricos MG resistente
a un patógeno asiático cuya liberación puede causar graves consecuencias en España).
• Tipo 4: Recomendado para experimentos con patógenos exóticos y rápidamente transmisibles por
vectores existentes en el medio y que pueda causar graves daños a los principales cultivos de un país.
INFORMACIÓN
REQUERIDA Y
PLAZOS.
Cuadro Resumen
OTROS REQUISITOS
PLANES DE EMERGENCIA
• Los responsables de la instalación tendrán que elaborar planes de emergencia y de vigilancia de
las instalaciones.
• Cuando sea necesario, se deberá elaborar un plan de emergencia sanitaria y de vigilancia
epidemiológica y medioambiental antes de que comience una operación de utilización confinada con
OMG de los tipos 3 y 4, ocasionar un peligro grave para la salud humana y el medio ambiente.
INFORMACIÓN CONFIDENCIAL
• Los solicitantes de las actividades podrán invocar el carácter confidencial de determinados
datos e informaciones facilitados, siempre y cuando se aporte la justificación correspondiente. La
Administración resolverá sobre la confidencialidad invocada.
• No tendrán carácter confidencial las informaciones y datos relativos a la descripción de los OMG,
a la identificación del titular, a la finalidad y al lugar de la actividad, a la clasificación del riesgo de la
actividad de utilización confinada y a las medidas de confinamiento, a los sistemas y medidas de
emergencia y control y a la evaluación de los efectos para la salud humana y el medio ambiente.
OTROS REQUISITOS
COMITÉS DE BIOSEGURIDAD
• La CNB recomienda siempre la creación de un Comité de Bioseguridad en cada
centro de trabajo. Este debe ser un comité de gestión del riesgo biológico en el
sentido más amplio, incluida la supervisión de la evaluación del riesgo realizada para las
distintas actividades desarrolladas en el centro. (Anexo II RD: “Crear comités y
subcomités de seguridad biológica, si es preciso”)
TASAS
• La primera utilización de instalaciones específicas que impliquen la utilización
confinada de OMG cualquiera que sea el riesgo asignado a la actividad.
• La utilización confinada de OMG en actividades de bajo riesgo, de riesgo moderado y
de alto riesgo (tipos 2, 3 y 4, respectivamente).
• Están previstas bonificaciones en determinados casos.
Gracias por vuestra atención

Tema E3. Niveles de Bioseguridad

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Bioseguridad y riesgos asociados en los laboratorios

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

Norma UNE-CWA 15793:2013 -Gestión del riesgo biológico en el laboratorio

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

GESTIÓN DE LA PREVENCIÓN EN LA MANIPULACIÓN DE AGENTES

Personas que trabajan con agentes infectivos o material biológico :

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

GESTIÓN DE LA PREVENCIÓN EN LA MANIPULACIÓN DE

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

OPERACIONES EN LAS QUE AUMENTA EL RIESGO BIOLÓGICO

• Transporte de muestras y animales de laboratorio: Este riesgo también existe

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

OPERACIONES EN LAS QUE AUMENTA EL RIESGO BIOLÓGICO

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

Según el Artículo 7. Medidas higiénicas del Real Decreto 664/1997

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

CUANDO TRABAJAMOS CON ORGANISMOS MODIFICADOS GENETICAMENTE

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

NORMAS GENERALES MANIPULACIÓN MATERIAL BIOLÓGICO

 El laboratorio debe mantenerse limpio, ordenado y libre de materiales extraños

 No salir del laboratorio con los guantes puestos

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

UTILIZACIÓN CORRECTA DE PIPETAS

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

TRANSPORTE DE MEDIOS DE CULTIVO CONTAMINADOS

 Se transportarán las placas de cultivo en contenedores cerrados

 Las plantas transgénicas se transportaran en envases cerrados para evitar la propagación de

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■ Centrífugas de baja velocidad –utilizar tubos con tapón de rosca.

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ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS: NEVERAS, CONGELADORES Y

 Se deben inspeccionar y limpiar periódicamente.

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Cada laboratorio debe disponer de zona señalizada en neveras y

■ Comunicar al responsable de cultivos cualquier avería para el aviso al Servicio de

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TIPOS DE LABORATORIOS SEGÚN EL NIVEL DE CONTENCIÓN BIOLÓGICO

NCB-1. Labs convencionales NCB-2. Labs de cultivo celular

NCB-3. Labs de cultivo/diagnostico NCB-4. Labs de cultivo/diagnostico

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LABORATORIOS -NIVEL DE CONTENCIÓN 1

 Se recomienda el empleo de batas u otro tipo de equipamiento que prevenga la contaminación de

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LABORATORIOS -NIVEL DE CONTENCIÓN 2

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

Material de bioseguridad indispensable

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LABORATORIOS -NIVEL DE CONTENCIÓN 3

Normas de Manipulación en laboratorios de contención biológica

LABORATORIOS -NIVEL DE CONTENCIÓN 4

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LABORATORIO GRADO DE CONFINAMIENTO

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LABORATORIO GRADO DE CONFINAMIENTO

20 Inactivación OMG: Material Opcional Si Si Si

22 Ventana observación acupantes Opcional Opcional Opcional Si

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Medias de contención GRADO DE CONFINAMIENTO

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