UNIVERSIDAD DEL QUINDIO, FACULTAD

CIENCIAS BSICAS, PROGRAMA DE

BIOLOGIA, LABORATORIO DE BIOLOGIA
GENERAL. PRACTICA # 4

ACTIVIDAD ENZIMATICA,
ALGUNOS FACTORES QUE
AFECTAN LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA
ELIANA MARIA JURADO HOYOS,
LEIDY JULIETH CASTILLO B.
RESUMEN: Las enzimas son de gran
importancia para el funcionamiento
del metabolismo de un organismo.
Estas son encargadas de acelerar o
de contribuir de una u otra forma en
las reacciones qumicas como
desdoblar molculas ms grandes. Al
realizar la prctica, se reconoci la
manera de extraer esas enzimas, y
de conocer qu factores afectaban la
actividad
de
las
mismas.
Posteriormente mediante la prctica
se comprueba el funcionamiento de la
enzima, y se comprueba tambin
como se inhibe el funcionamiento de
la misma. Adems de esto, se
evidencia como el tiempo que se
demora una reaccin puede mejorar
la calidad y el desarrollo de la misma,
ya que al ver si una enzima tiene ms
tiempo para actuar, tendr un mejor
desempeo en su labor como
catalizador. Por otra parte la
concentracin de la enzima tambin
afecta el producto final de la reaccin,
ya que puede ser directa o
inversamente proporcional a la
velocidad de la misma. Finalmente se
concluye que las enzimas tienen una
actividad que se puede ver afectada

por diferentes factores tales como la

temperatura, la concentracin de la
enzima y el tiempo de accin de la
misma.
PALABRAS CLAVES:
Enzima,
sacarasa,
sacarosa.

actividad
amilasa,

enzimtica,
almidn,

INTRODUCCION: Las enzimas son

protenas que funcionan como
catalizadores bilgicos. Cada clula y
cada tejido tienen su actividad propia,
lo que comporta continuos cambios
en su estado bioqumico, en la base
de la cual estn las enzimas, que
tienen el poder de catalizar, facilitar, y
agilizar
determinados
procesos
sintticos y analticos. Los propios
genes son reguladores de la
produccin de las enzimas; por tanto,
genes
y
enzimas
pueden
considerados como las unidades
fundamentales de la vida.
Por otro lado las enzimas se
clasifican
de
acuerdo
a
su
complejidad las cuales pueden
simples las cuales estn formadas
por una o ms cadenas polipeptdicas
o conjugadas que contiene un grupo
no proteico enlazado a la cadena
polipeptdica estando conformada por
la apoenzima que es la parte
polipeptdica de la enzima
y el
cofactor que es la parte no proteica y
la unin de estos dos ltimos forman
la holoenzima. (Kimball, 1986).
Las
enzimas
poseen
varias
caractersticas en este aspecto tiene

una gran influencia los factores

externos que permiten que se den.
Las enzimas se inactivan por el
calor esto sucede ya que por ser
protenas pueden desnaturalizarse
completamente si se someten a
temperaturas altas, otra de las
caractersticas es que las enzimas
funcionan ms eficientemente, a
ciertas temperaturas optimas, es
decir, a ciertas temperaturas las
enzimas realizan una actividad
catalizadora, de tal manera que
permiten la continuacin de la
reaccin catalizada a la mayor
velocidad. A temperaturas por encima
o por debajo de la temperatura
ptima para la actividad de la enzima
esta disminuye o se detiene. De esta
manera la enzima trabaja con mayor
eficiencia a una temperatura de 37C
(Baker, 1972).
Cada enzima funciona de una
manera ms efectiva a cierta
temperatura
y
pH
y,
como
consecuencia, su actividad disminuye
cuando alcanza valores por encima o
por debajo de dichos puntos. Los
enlaces de hidrogeno son fcilmente
destruidos por el aumento de la
temperatura lo cual, a su vez, puede
perjudicar la estructura terciaria de la
enzima que son de gran importancia
para la unin con el sustrato. Los
cambios de pH alteran el estado de
ionizacin de los aminocidos con
carga elctrica.
De esta manera las enzimas adems
de que necesitan ciertas condiciones

ambientales, como la temperatura

adecuada, el pH, de la concentracin
de la enzima que aumenta la
velocidad enzimtica hacia cierto
lmite, la concentracin del sustrato
se obtiene la velocidad mxima.
Tambin necesitan de la presencia de
otras ciertas sustancias antes de
poder actuar; un ejemplo claro es la
amilasa salivar solo podr actuar
sobre la amilasa si estn presentes
iones de cloro (Kimball, 1986).
Por ltimo las enzimas son de gran
importancia es todos los aspectos de
los organismos vivos pues nos dan la
facilidad de acelerar o facilitar las
reacciones que se producen en el
interior del organismo y teniendo
grandes propiedades como el ser
reutilizable. Las enzimas ayudan a
funciones de nuestro organismo
como: favorecen la digestin y
absorcin de los nutrientes, efecto
antiinflamatorio, reduce el dao que
produce las toxinas, favorece la
fertilidad, entre otras.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL: Reconocer la
accin de una enzima y algunos
factores que afectan la actividad
enzimtica.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Preparar un extracto de enzimas
(cebada y levadura) para estudiar su
accin.

2. Reconocer la accin de enzimas

que hidrolizan el almidn.
3. Comprobar la hidrlisis
sacarosa por la invertasa.

de la

4. Estudiar algunos factores que

afectan la actividad enzimtica:
Temperatura,
concentracin
de
sustrato y de enzima.
MATERIALES Y METODOS: Para
realizar la hidrlisis de almidn por la
amilasa; se licuo la cebada pre
germinada se puso en tubo de
centrifugacin y se llevo a centrifugar
2500 rpm (revoluciones por minuto)
durante 5 minutos, de all se obtuvo el
sobrenadante, es decir, la enzima
(amilasa); este quedo en la parte
superior del tubo para centrifugar; y
abajo el precipitado o pelet. Se
tomaron 6 tubos de ensayo los cuales
se marcaron de la siguiente forma 3
de ellos con la letra A y cada uno se
marco
con 0.5%, 1%, 2%
respectivamente; los tres restantes se
marcaron con B y tambin se
marcaron con 0.5%, 1%, 2%. En los 6
tubos se pusieron 0.5 Ml de la enzima
(amilasa). Se calentaron nicamente
los tubos marcados con la letra B en
el mechero hasta una ligera
ebullicin. Y los tubos marcados con
A se dejaron a temperatura ambiente
(20c). Despus se adiciono en cada
tubo de ensayo (los A y B ) 0.5 mL de
la solucin de almidn en la solucin
correspondiente 0.5, 1 y 2% (la
solucin de almidn se agito antes de
emplearse). Estos se dejaron en
reposo
por
10
minutos.

Inmediatamente se marco la placa

excavada de cermica con las
indicaciones A 0.5%, A 1% y A 2%; B
0.5%, B 1% y B 2%. Pasados los 10
minutos se puso la sustancia que
estaba en los tubos en la placa
escavada de acuerdo a como
estaban marcados. All se agrego
sobre cada poso una gota de lugol.
Se observo el cambio de color. En las
muestras donde el lugol no reacciono,
a los tubos de ensayo donde estaban
estas sustancias se les realizo la
prueba de felhing. Se adicione en
orden 3 gotas de felhing A y 3 gotas
de felhing B, y se flamearon.
Para la actividad enzimtica de la
sacarasa de la levadura, se
maceraron 3g de levadura en 40 mL
agua destilada, este se puso en un
tubo de centrifugacin y se llevo a
centrifugar a 1500 rpm, durante 5
minutos.
De
este
obtuvo
el
sobrenadante
(sacarasa)
y
el
precipitado. Se tomaron 4 tubos de
ensayo; 2 se marcaron con A, en uno
se grabo 1% y en el otro 5%; los 2
restante se marcaron con B y se
procedi igual que con los A. En los 4
tubos se adicionaron 1 mL de
sacarasa, y se les agrego 1 mL de
sacarosa
en
la
concentracin
correspondiente. Los tubos A se
dejaron reposar por 10 minutos, y los
tubos B por 20 minutos. Pasado el
tiempo de reposo se les realizo la
prueba de felhing.
RESULTADOS
Y
DISCUCIN:
Habiendo puesto las sustancias de

los tubos en la placa escavada, es

decir, la amilasa (enzima) con las
diferentes concentracin de almidn,
y habiendo realizado todo el proceso
con estas, se agrego a cada uno una
gota de lugol; se observo que el lugol
dio positivo en las muestras de los
tubos B, es decir, que hallo almidn;
esto indica que la enzima de amilasa
no actu. Lo que lleva a concluir que
el factor de temperatura alta provoco
que la enzima se desnaturalizara, y
por esto el almidn sigui intacto.
El proceso de desnaturalizacin se
caracteriza en general por un
coeficiente de temperatura elevado,
es decir, el aumento de la
temperatura en unos grados provoca
un gran incremento en la velocidad
de reaccin. Tambin hay que sealar
la influencia del pH en la velocidad de
desnaturalizacin. Consecuencia de
la desnaturalizacin por calor que
afecta principalmente a la estabilidad
de la estructura terciaria, es la
disminucin de la solubilidad y el
punto isoelctrico. Si la estabilidad
trmica, o sea, la resistencia al calor
depende de la proporcin relativa
entre uniones hidrfobas y enlaces
polares y de la presencia o no de
puentes disulfuro (Biologa celular y
molecular).
A diferencia de estas, las muestras de
las sustancias A, la prueba de lugol
dio como resultado negativo lo que
lleva a decir que la enzima de
amilasa
actu,
haciendo
un
desdoblamiento
del
sustrato

(almidn) convirtindolo en un
monosacridos o un disacrido. A
estas se realizo la prueba de felhing,
para la identificacin de azucares; en
esta su resultado fue positivo, dando
a concluir que efectivamente la
enzima actu.
Toda reaccin o proceso qumico a
nivel celular involucra sustratos y
enzimas. Los sustratos son las
molculas sobre las cuales actan las
enzimas. Una enzima representa un
tipo
de
protena
(catalizador
biolgico) encargado de acelerar las
reacciones bioqumicas en una va
metablica particular. Las enzimas no
sufren
cambios
durante
las
reacciones, ni cambian la naturaleza
de la reaccin ni su resultado.
(http://www.saludmed.com/).
En la segunda parte despus de
realizar la prueba de felhing a las
muestras de sacarosa con la enzima
de sacarasa; los resultados fueron,
en la concentracin de sacarosa de
5% el resultado fue un color y una
especidad mas clara, con respecto a
las muestras de concentracin del
1%, en estas el color fue ms fuerte y
una mayor especidad. Pero las
muestras que duraron en reposo ms
tiempo fueron relativamente ms
oscuras. Esto se da debido a que
entre menos concentracin de
sacarasa, mas rpido actuara esta
enzima,
desdoblando
los
polisacridos o disacridos en
monosacridos, y a mayor tiempo de
accin, mejor desdoblamiento de los

polisacridos. Entonces, esto traduce

que en este caso la velocidad de la
reaccin
es
inversamente
proporcional a la concentracin. Lo
que hace la sacarasa bsicamente es
pasar esa sacarosa a convertirla en
glucosa y fructosa.
CONCLUSIONES:
Este
trabajo
permiti que se aprendiera que la
actividad enzimtica tiene una
secuencia para actuar, en la cual la
enzima acta
sobre el sustrato
dando un producto. Tambin se
conoci que la enzima es un
catalizador biolgico que mejora la
activacin qumica en una reaccin.
Por otro lado se pudo identificar las
enzimas de la cebada (amilasa) la
cual su substrato fue el almidn. La
amilasa hidroliz el almidn para
convertirlo en azcar; y la levadura
(sacarasa) la cual su substrato fue la
sacarosa que acelero la reaccin y
permiti que se diera un resultado de
presencia de azucares ante la prueba
de felhing. Cabe destacar que si a
medida que se deja expuesto el
substrato con la enzima va a ser
mejor su desarrollo enzimtico esto
se pudo observar en la levadura
(sacarosa) que a medida que el
tiempo
aumenta
actuando
la
sacarasa sobre la sacarosa la prueba
realizada dio con mayor nivel de
positividad que la de menor tiempo.
Tambin
se pudo observar que
factores como la concentracin de
sustrato y temperatura influyen de
gran manera en la actividad
enzimtica, debido a que menor

concentracin de sustrato hay mayor

actividad enzimtica y en mayor
concentracin de sustrato hay menor
actividad enzimtica, es decir, es
inversamente proporcional; y la alta
temperatura desnaturaliza la enzima.
BIBLIOGRAFIA:
Kimball, John. (1986). Biologa.
Editorial:
Addison
Wesley
Iberoamericana, S. A. Cuarta Edicin.
Baker, J. y Allen, G. (1972) Materia,
Energa y Vida.
Editorial: Fondo
Educativo Interamericano S.A.
Muos, E. (1979) Biologa Celular y
Molecular.
Editorial:
H.
Blume
Ediciones- Rosario, 17.
http://www.saludmed.com/.
ANEXOS:
1. Mediante los smbolos E= enzima
S= sustrato P= producto represente la
ecuacin general de una ecuacin
enzimtica.
E+S

E-S

E+P

2. Teniendo en cuenta el cambio de

energa libre de los re accionantes,
que significa trminos de reaccin
exogmica y endogmica. Cmo
puede aprovechar la clula este tipo
de reacciones? Indique un ejemplo de
cada una de ellas.
La reaccin exergmica es aquella
donde el nivel de energa de los
productos es menor que el nivel de
energa de los reactivos. La energa

es liberada en esta reaccin. La

cantidad de energa que se libera
durante la reaccin se denomina G,
que es menor que cero, es decir
negativa. La clula puede usar esta
reaccin para llevar a cabo procesos
de respiracin celular.
La reaccin endergnica se da en los
procesos anablicos, son aquellas
que requieren un aporte neto de
energa para tener lugar: los
productos resultantes tienen ms
energa que los reactivos de partida
(la variacin de entalpa, H<0). Esto
se manifiesta con un enfriamiento, ya
que el sistema qumico toma energa
calorfica del medio que lo rodea para
que ocurra la transformacin (de ah
que se conozcan tambin como
reacciones endotrmicas). La clula
puede usar esta reaccin para llevar
acabo procesos de fotosntesis y
sntesis de protenas.
En las clulas vivas deben realizarse
innumerables reacciones metablicas
distintas, en forma simultnea y a una
velocidad tal, que asegure el
necesario aporte de energa para el
mantenimiento de las funciones
vitales, y por ello es necesario el uso
de enzimas, que a su vez usan estas
reacciones para desarrollar todo el
metabolismo celular.
3. Represente las formulas qumicas
en los sustratos y productos
estudiados en los experimentos
anteriores.
La formula qumica de de Almidn es:
(C6H10O5).

La formula qumica de la sacarosa es

(C12H22O11)
La formula qumica de la amilasa es

La formula qumica de la sacarasa es

4. La sacarosa o el azcar comn

estn presentes en muchos vegetales
con qu objeto es hidrolizada por las
clulas.
Estos compuestos estn constituidos
por la unin de dos monosacridos.
Por ejemplo: la sacarosa (azcar
comn azcar de caa) est
formada por una glucosa y una
fructosa (monosacridos de seis
carbonos que posee una funcin
cetona en el carbono 2), de frmula
C12H22O11. El disacrido sacarosa
es la principal forma en que los
azucares se transportan a travs del
floema (vasos conductores de savia
en los vegetales), desde las hojas
hasta los sitios de la planta donde
son requeridos. Es soluble en agua y
ligeramente soluble en alcohol y ter.
Cristaliza en forma de agujas largas y
delgadas siendo dextrgira. Por
hidrlisis (separacin por medio de
agua ya que se necesita una
molcula de agua para que queden
completos ambos monosacridos)
rinde una mezcla de glucosa y
fructosa, que resulta levgira, por lo
que esta mezcla se conoce como
"azcar invertido".