INTRODUCCION

Inmunoensayo es una prueba que usa complejos de anticuerpo y antgeno

como medio para generar un resultado perceptible. Un complejo
anticuerpo:antgeno tambin es conocido como inmuno-complejo. Inmuno se
refiere a una respuesta inmunolgica que hace que el cuerpo genere
anticuerpos, y ensayo se refiere a una prueba. Entonces, un inmunoensayo
es una prueba que utiliza inmunocomplejos cuando se unen los anticuerpos y
los antgenos. Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de
laboratorio, como las pruebas colorimtricas, ya que usan complejos
anticuerpo:antgeno para generar una seal que pueda medirse. En oposicin,
la mayora de las pruebas de rutina de qumica clnica utilizan reacciones
qumicas entre el reactivo (solucin de sustancias qumicas u otros agentes) y
la muestra del paciente para generar un resultado de la prueba.
Anticuerpo es una protena producida por el cuerpo en respuesta a una
sustancia invasora (extraa)1. Los anticuerpos se producen como parte de la
respuesta inmunolgica del cuerpo para protegerse. Es tambin el caso, por
ejemplo, de algunos test de inmunoensayos para determinar la presencia de
anticuerpos contra las molculas de cncer. As, si los anticuerpos estn
presentes, significa que las clulas invasoras de cncer tambin lo estn.
Antgeno es la sustancia que el cuerpo est tratando de combatir (eliminar o
reducir) preparando una respuesta inmunolgica. Algunos test de
inmunoensayos determinan la presencia de antgenos directamente, en vez de
buscar anticuerpos. En un anlisis para medir la concentracin de una droga
teraputica, por ejemplo, la droga es el antgeno que se une al anticuerpo.

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
Esta tcnica fu desarrollada por Solomon A. Berson y Rosalyn Yalow en 1960
para determinar la concentracin de insulina en el plasma sanguneo. Por ese
motivo, R. Yalow recibi el Nobel de Medicina en 1977 (Berson muri en 1972).
Hoy en da, esta tcnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se
encuentran en cantidades muy pequeas y mezcladas con muchas otras. Es
por tanto una tcnica muy sensible y muy especfica. Utilizando anticuerpos de
gran afinidad se pueden detectar hasta picogramos de antgeno. (1 pg = 10-12
g).
EL FUNDAMENTO
Se mezcla una cantidad constante de antgeno marcado radioactivamente y
una cantidad constante de un anticuerpo para ese antgeno
Se produce la reaccin entre antgeno (Ag) y anticuerpo (Ac)
se separa la fraccin de antgeno que se ha unido de la que permanece libre
(hay varias formas de hacerlo. En la figura inferior se utiliza un 2 anticuerpo
dirigido contra el primero)
se determina la radioactividad
Si la muestra contiene adems antgeno fro (no marcado), ste competir con
el marcado para unirse al anticuerpo, y se observar un descenso en la medida
de la radioactividad
Este descenso es proporcional a la concentracin de antgeno fro en la
muestra

TIPOS DE RADIOINMUNOENSAYO
RADIOINMUNOENSAYO DIRECTO
Se basa en la competencia existente entre el antgeno no marcado y una
cantidad conocida del antgeno marcado (Ag*) para formar los complejos Ag-Ac
o Ag*Ac. Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el
ensayo en el que manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se observar
que a mayor cantidad de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y
por tanto menos radiactividad), lo que permitir relacionar la radiactividad con
la concentracin de antgeno.
1. Se debern obtener anticuerpos especficos; para ello se inyecta a un
animal peque?as cantidades en varias dosis del antgeno purificado, con
un esquema caracterstico de inmunizacin. El animal generar
anticuerpos que podrn ser recogidos del plasma sanguneo.
2. Se marca el antgeno radiactivamente, sin que este pierda la propiedad
de ser reconocido por el anticuerpo.
3. Se a?aden anticuerpos a una placa de titulacin y quedan unidos al
soporte slido, tras lo que se agrega el Ag* en cantidad conocida y el Ag
de la muestra problema.
4. Se elimina el antgeno no unido por decantacin y lavado, y se
determina la cantidad de marcaje unido.
5. Se interpola el valor obtenido en la recta de calibracin que debe
haberse realizado con anterioridad.
RADIOINMUNOENSAYO SNDWICH
1. Se inmoviliza una concentracin fija del Ac 1 (anticuerpo no marcado) en
un soporte slido. Tras lo que se satura el soporte.
2. Se a?ade la muestra problema (o de calibrado) de Ag.
3. Se a?ade Ac*2 (anticuerpo marcado) que se une a otro eptopo del Ag.
4. Eliminacin del Ac*2 no unido.
5. Se determina la cantidad de anticuerpo marcado unido.
6. A partir de una recta patrn se interpola el valor obtenido para saber la
concentracin de Ag presente o bien se realiza la recta de calibrado.
RADIOINMUNOENSAYO DE INHIBICIN
Usado cuando no se puede marcar el antgeno.

1. Se inmoviliza una cantidad constante de antgeno en un soporte slido.

Se suele saturar con BSA, leche en polvo o casena para que no se
acopleotra molcula, y de esta forma evitar indeseables
inespecificidades y altos valores de fondo.
2. Se a?ade una cantidad constante de anticuerpo marcado y el antgeno
fro a medir (o de calibrado). En este paso se establece una
competencia en la que el Ac se une al Ag fijo al soporte o al problema.
3. Se eliminan el anticuerpo no inmovilizado y el antgeno soluble y se
determina la cantidad de Ac* que se ha inmovilizado.
4. Se construye una curva de calibrado representando la cantidad de Ac*
inmovilizado frente a la concentracin de Ag soluble a?adida o bien se
interpola la radiactividad medida en esta curva de calibrado.

HEPATITIS B
La hepatitis B es una enfermedad del hgado que es contagiosa y resulta de la
infeccin por el virus de la hepatitis B. Cuando una persona se infecta, puede
desarrollar una infeccin aguda, que puede variar en gravedad de una
enfermedad muy leve con pocos o ningn sntoma a una afeccin grave que
requiere hospitalizacin. La hepatitis B aguda se refiere a los primeros seis
meses despus de que alguien ha estado expuesto al virus de la hepatitis B.
Algunas personas pueden combatir la infeccin y eliminar el virus. En otras, la
infeccin permanece y da lugar a una enfermedad crnica o de por vida. La
hepatitis B crnica se refiere a la enfermedad que ocurre cuando el virus de la
hepatitis B permanece en el cuerpo de la persona. Con el tiempo, la infeccin
puede causar problemas graves de salud.
MECANISMOS DE TRANSMISIN
El reservorio del VHB es el hombre, siendo adems el nico con capacidad
infectiva. La va de transmisin es por contacto percutneo o permucoso. La
mayor concentracin del virus en el organismo se encuentra en la sangre,
aunque su presencia en otros lquidos biolgicos como saliva, semen,
secreciones vaginales y orina puede explicar ciertos contagios. El conocimiento
de las principales formas de transmisin del VHB es crucial para desarrollar
medidas de profilaxis primaria, de tal manera que los principales mecanismos
de transmisin del VHB van a ser:
VA PARENTERAL: ocurre a travs de agujas, productos sanguneos
contaminados, tatuajes o acupuntura. Actualmente esta va est disminuyendo
debido a una mejora en los hbitos higinicos, incluyendo el menor
intercambio de jeringuillas entre adictos a estupefacientes por va parenteral y
la generalizacin de tcnicas de esterilizacin de material sanitario.
VA SEXUAL: se trata de la va de transmisin ms frecuente en pases
desarrollados, siendo mayor el riesgo entre homosexuales y heterosexuales
con conductas de riesgo. Las campaas de vacunacin y medidas como el uso
del preservativo disminuyen las posibilidades de contagio.

TRANSMISIN VERTICAL: este trmino se aplica a la transmisin de madre a

hijo durante el parto y constituye el mecanismo principal en zonas de alta
prevalencia. El riesgo aumenta en caso de que la madre sea positiva para
HBsAg, HBeAg y DNA. En pases en los que se realiza el cribado sistemtico a
la madre, la vacunacin del recin nacido y el tratamiento con gammaglobulina
anti-HBs pueden evitar la transmisin.
TRANSMISIN HORIZONTAL por contacto no sexual: se produce a partir de
objetos en los que el virus puede permanecer estable hasta 7 das. Tal es el
caso del uso compartido de cepillos de dientes, material sanitario, etc.

CARACTERSTICAS DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EL VHB

Este virus pertenece a la familia Hepadnaviridae. Tiene la capacidad de infectar
a seres humanos, siendo el hombre el nico reservorio con capacidad de
infeccin a otros. Dentro del VHB se distinguen ocho genotipos, designados
con las letras de la A a la H. Estos se encuentran distribuidos geogrficamente,
siendo los ms frecuentes en nuestro medio el A y el D, mientras que en el
Extremo Oriente son el B y el C. Estos diferentes genotipos tendrn adems
distintas caractersticas en su expresin cl- nica y respuesta al tratamiento10.
El VHB tiene forma de esfera con una cubierta lipoprotenica formada por
diversas protenas, entre las que la mayoritaria es el antgeno de superficie S
(HBsAg). Esta cubierta rodea la cpside formada por el antgeno del core
(HBcAg) y una serie de protenas parecidas al HBcAg que se excretan de
forma soluble, formadas por el antgeno e (HBeAg). La cpside engloba al
genoma del virus, la ADN polimerasa y otras protenas involucradas en la
replicacin. Es importante destacar que el VHB posee un ADN de cadena doble
que se replica de forma asimtrica mediante la enzima transcriptasa inversa;
caracterizndose por provocar un elevado nmero de mutaciones responsables
de que pueda existir una respuesta clnica mayor (mutaciones del precore y el
core), una respuesta inmune deficiente (mutacin del gen S) o una alteracin
en la respuesta a frmacos (mutacin del gen de la polimerasa)
Una de las caractersticas del ciclo replicativo del VHB es que no produce
muerte celular per se sino que se replica en el interior de las clulas infectadas
durante mucho tiempo, producindose citlisis por la respuesta inmune. El VHB
entra en el hepatocito por la unin de las protenas de la superficie a receptores
de la propia clula, liberndose posteriormente la cpside en el citoplasma. En
el citoplasma se descapsida el virus y su DNA es transportado al ncleo.
Inicialmente se convierte en DNA circular de cadena doble cerrada por enlaces
covalentes (DNAccc) debido a la accin de polimerasas del virus y del
husped. Esta forma presenta una alta vida media dentro de los hepatocitos
infectados, siendo fuente de nuevos viriones infectivos en caso de interrupcin
del tratamiento o inmunodepresin del paciente, as como la principal dificultad
para la erradicacin del VHB con los tratamientos actuales. En una segunda
fase se producir la trascripcin del RNA desde el DNAccc.
SNTOMAS

No todas las personas que tienen hepatitis B aguda presentan sntomas, en

especial los nios pequeos. La mayora de los adultos tienen sntomas que
aparecen en un plazo de tres meses despus de la exposicin. Los sntomas
pueden durar de algunas semanas a varios meses e incluyen: Fiebre
Cansancio Prdida de apetito Nuseas Vmitos Dolor abdominal
Orina de color oscuro Heces de color gris Dolor en las articulaciones
Ictericia

USO
DE
RADIOINMUNOENSAYOS
PARA
DESCUBRIMIENTO DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B

EL

DE

Las investigaciones que derivaron en el descubrimiento del virus de la hepatitis

se generaron por la inquietud de un grupo de investigadores al evidenciar la
presencia de hepatitis en receptores de transfusiones.
Baruch Blumberg, un investigador mdico especializado en medicina interna y
bioqumica y el hematlogo especialista en banco de sangre Harvey Alter, del
NIH utilizaron la difusin en gel de agar para analizar las reacciones del suero
de los pacientes que haban recibido varias transfusiones (por ejemplo,
pacientes hemoflicos y con leucemia) con los distintos sueros que haba
reunido Blumberg procedentes de personas con diversos orgenes y de
distintos pases. En 1963, tras meses de experimentos, los investigadores
descubrieron que el suero de un paciente hemoflico de Nueva York
reaccionaba con el suero de una persona que viva en el extremo opuesto del
mundo: un aborigen australiano.
El descubrimiento no era inusual en s mismo; hasta ese punto, la sangre de
los pacientes a los que se haban realizado transfusiones en estos
experimentos haba reaccionado con frecuencia a otros sueros, lo que indicaba
que los pacientes haban estado expuestos a muchos antgenos comunes
mediante transfusiones. Como resultado, no se haban podido obtener
conclusiones definitivas sobre qu antgeno o antgenos provocaban la
reaccin; hasta ahora. Pero, en el experimento concreto con el suero del
aborigen australiano, slo reaccion con l el suero de uno de los 24 pacientes
hemoflicos. La importancia que esto tena era emocionante, ya que implicaba
que era un nico y extrao antgeno el que provocaba la reaccin. Entonces,
cul era el antgeno? Como slo ocurra en raras ocasiones, era improbable
que se tratara de un antgeno provocado por variacin gentica en la sangre
humana. Era ms probable que se tratara de una fuente infecciosa.
Intrigados por esta cuestin, Blumberg y Alter, aunque todava no estaban
trabajando directamente sobre la hepatitis B, realizaron anlisis del suero del
hemoflico en cuestin con miles de muestras de otros sueros. Descubrieron
que slo una de cada 1.000 muestras de donantes de sangre americanos
sanos y no hemoflicos reaccionaba con el suero del hemoflico, mientras que
uno de cada 10 pacientes con leucemia reaccionaba. Cualquiera que fuera el
antgeno de la sangre del aborigen australiano que haba provocado la reaccin
en las pruebas de Blumberg y Alter, se encontraba tambin presente con
frecuencia en la sangre de pacientes con leucemia. Por otra parte, el antgeno
rara vez se encontraba en la sangre de pacientes normales, pero se
encontraba con frecuencia en pacientes hemoflicos y con leucemia. Los
investigadores denominaron a la misteriosa protena el antgeno australiano
(Aa), en referencia a la patria del aborigen cuya sangre condujo a su
descubrimiento. Plantearon la hiptesis de que un antgeno desconocido de la
sangre del aborigen australiano reaccionaba a los anticuerpos de la sangre de
ciertos pacientes hemoflicos y con leucemia.

Blumberg crey que podra haber detectado un polimorfismo hereditario de una

protena de la sangre que afectaba a la susceptibilidad de las personas a la
leucemia, pero saba que haba otras explicaciones posibles (entre las que se
inclua un agente infeccioso como un virus) para el vnculo entre el Aa y la
leucemia. Para clarificar ese vnculo, comenz a buscar el Aa en la sangre de
nios con sndrome de Down, que tenan un riesgo especialmente alto de
desarrollar leucemia. Casi una tercera parte de estos nios tena el Aa.
Blumberg analiz a continuacin a pacientes con sndrome de Down de
diversas edades que residan en distintos lugares. Los pacientes recin nacidos
dieron negativo para el Aa, pero cuanto mayor era la institucin en la que
resida el paciente, mayor era la probabilidad de que el resultado de la prueba
fuera positivo.Esto indicaba que el Aa podra estar vinculado a alguna infeccin
de algn tipo.
Normalmente, los nios que daban negativo para el Aa seguan siendo
negativos cuando se volva a realizar la prueba, y los que daban positivo
seguan siendo positivos, lo que era de esperar en un polimorfismo de protena
sangunea. Pero en 1966, Blumberg, W. Thomas London y Alton Sutnick
descubrieron que un nio de 12 aos de edad con sndrome de Down que no
tena ningn rastro de Aa en su suero cuando se le realiz la primera prueba,
mostraba la presencia del antgeno en su sangre unos meses despus. Era
significativo que este nio no slo presentaba el Aa mediante la prueba de
difusin en gel de agar, sino que tambin tena hepatitis. La coincidencia
sugera que, en lugar de asociarse a un polimorfismo de la protena sangunea
hereditario, el Aa estaba vinculado a la hepatitis. Los investigadores
comenzaron a estudiar esta hiptesis inmediatamente.
En pruebas realizadas con pacientes con y sin hepatitis, observaron que
aquello con hepatitis daban positivo para el Aa con ms frecuencia que
aquellos que no tenan la enfermedad. La hiptesis se reafirm con gran fuerza
cuando la tcnico de laboratorio de Blumberg comenz a sentirse enferma.
Como era consciente del vnculo entre el Aa y la hepatitis, realiz pruebas para
detectar la presencia del Aa en su propio suero, con resultado positivo.
Posteriormente desarroll hepatitis y se convirti en la primera persona cuya
hepatitis viral se diagnostic mediante la prueba del Aa.
Cuando el virlogo Alfred Prince, del Centro de Sangre de Nueva York, tuvo
conocimiento de las conclusiones de Blumberg, inici un experimento a
mediados de la dcada de 1960 que finalmente confirmara el vnculo entre el
Aa y la hepatitis. Prince saba que al menos uno de cada 10 pacientes que
reciban varias transfusiones de sangre desarrollara hepatitis, y quiso
determinar si el Aa apareca en la sangre durante el perodo de incubacin de
la enfermedad, antes de que apareciera ningn sntoma de la misma, como
ocurrira si el Aa fuese parte del virus que causaba la hepatitis. Prince comenz
a obtener muestras de sangre de pacientes de determinados pacientes del
Centro de Sangre de Nueva York a intervalos regulares y a guardarlas en un
congelador. Finalmente, en 1968, se enter de que un paciente de cuya sangre
haba tomado una muestra haba desarrollado sntomas claros de hepatitis.
Cuando analiz las muestras de sangre del paciente no encontr ningn rastro

del Aa en las primeras muestras, pero s una muestra clara en la muestra de

sangre obtenida unas semanas antes de la aparicin de la enfermedad. Una
prueba tan aparentemente directa indicaba con bastante claridad que el Aa
estaba de hecho involucrado en el desarrollo de la hepatitis B.
Por aquel tiempo, Kazuo Okochi, de la Universidad de Tokio, demostr que la
sangre que daba positivo en el anlisis del Aa tena muchas ms
probabilidades de transmitir la hepatitis a pacientes a los que se realizaban
transfusiones que la sangre cuyas pruebas eran negativas. En el mismo ao
1968, Albert Vierrucci, de la Universidad de Siena, Italia, confirm de forma
independiente los informes de Prince y Okochi. Otros descubrimientos,
realizados en 1970 por S. Dane y sus colegas del hospital Middlesex de
Londres con un microscopio electrnico, y K. E. Anderson y sus colegas en
Nueva York, que descubrieron lo que parecan partculas vricas en el suero de
personas que haban dado positivo para el Aa, contribuyeron a fortalecer an
ms el vnculo entre el Aa y la hepatitis. Tambin encontraron partculas en las
clulas hepticas de pacientes con hepatitis.
A finales de 1970, las pruebas acumuladas llevaron a todos los que trabajaban
en ese campo a la misma conclusin: El Aa formaba parte del virus que causa
la hepatitis B. (En este punto, la nomenclatura del Aa se cambi por HAA,
siglas en ingls de antgeno asociado a la hepatitis; actualmente se denomina
oficialmente HBsAg, siglas en ingls de antgeno de superficie de la hepatitis
B.) Todos los pacientes hemoflicos y con leucemia cuya sangre mostraba una
elevada incidencia de HBsAg haban necesitados transfusiones frecuentes y,
por tanto, era ms probable que hubieran recibido sangre contaminada con el
virus de la hepatitis B.
El descubrimiento del antgeno HBsAg, de la hepatitis B, tena enormes
implicaciones clnicas. En los aos 1960 en Estados Unidos, un gran
porcentaje de la sangre que se donaba se obtena de donantes remunerados,
que tenan ms probabilidad de tener hepatitis B que la poblacin general.
Como consecuencia, la incidencia de hepatitis post-transfusin era elevada; en
algunos estudios, la enfermedad se desarroll en la mitad de los pacientes que
recibieron gran cantidad de transfusiones debido a tratamientos quirrgicos
importantes. La comunidad mdica reconoci que si se pudiera analizar
mediante una prueba adecuada la sangre contaminada con HBsAg, se podra
reducir drsticamente la incidencia de la hepatitis post-transfusin.
Pero la tcnica de difusin en gel que haban utilizado Blumberg y Alter para
detectar el HBsAg no era lo suficientemente sensible para realizar anlisis de
sangre precisos. Por fortuna, la curiosidad de dos investigadores del Centro
Mdico de la Administracin de Veteranos del Bronx por saber lo que ocurra
con la insulina en la sangre de los diabticos haba llevado a principios de los
aos 1950 al desarrollo de una tcnica revolucionaria para detectar y medir
cantidades muy pequeas de protenas de suero y anticuerpos.
Rosalyn Yalow y Solomon Berson se haban quedado perplejos al observar
cmo los diabticos producan insulina, una hormona producida por el

pncreas, pese a que la diabetes se caracteriza por sntomas que indican una
carencia de insulina. Para determinar lo que ocurre con la insulina en los
diabticos una vez que entra en el torrente sanguneo, prepararon una forma
radioactiva de hormona que se poda detectar con facilidad. Sin embargo,
mientras estudiaban la sangre de diabticos que haban recibido inyecciones
de insulina radioactiva, los investigadores descubrieron que la insulina se una
a anticuerpos generados por el sistema inmunolgico del paciente. Ese
descubrimiento condujo a Yalow y Berson a inventar una tcnica denominada
radioinmunoensayo, que permite rastrear cantidades nfimas de una sustancia
cuando se vincula a un anticuerpo u otra protena. El radioinmunoensayo no
slo era mucho ms simple que las tcnicas de difusin en gel, sino que
adems su sensibilidad era mil veces superior. Yalow comparti el premio
Nobel de fisiologa o medicina en 1977 por su desarrollo del
radioinmunoensayo.
Varias empresas comerciales e investigadores acadmicos adaptaron el
radioinmunoensayo para producir equipos para detectar con precisin el
HBsAg en la sangre. En 1972, se promulgaron leyes en Estados Unidos por las
que se obligaba a realizar anlisis del virus de la hepatitis B (VHB) en la sangre
procedente de donaciones. Como resultado, todos los bancos de sangre
realizaron anlisis de todas las muestras de sangre, y la hepatitis posttransfusin debida a la hepatitis B se convirti en algo fuera de lo comn. Los
anlisis de VHB en sangre procedente de donaciones han supuesto un ahorro
en tratamientos mdicos estimado en unos 500 millones de dlares al ao tan
slo en Estados Unidos.
Las ventajas del descubrimiento del HBsAg/hepatitis B pronto se extendi ms
all de la proteccin frente a la hepatitis B de las personas que reciban
transfusiones de sangre hasta la proteccin de todas las personas frente a la
enfermedad. A finales de los aos 1960, Blumberg, que trabajaba en el centro
Fox Chase Cancer Center (FCCC), junto con la inmunloga y virloga Barbara
Werner, el microscopista electrnico Manfred Bayer y el bilogo molecular
Lawrence Loeb, describieron mejor las pequeas partculas aisladas de la
sangre que haba dado positivo para el HBsAg y las visualizaron con el
microscopio electrnico. Algunas partculas eran virus completos; otras no
contenan ningn cido nucleico, el gen o los genes responsables de la
infeccin y la enfermedad.Varios experimentos demostraron que las partculas
podan inducir a la proteccin inmunitaria.

En 1971, el experto en
enfermedades
infecciosas
Saul
Krugman,
de
la
Universidad de Nueva
York,
public
un
artculo
sobre
el
descubrimiento
accidental de que
inyecciones de sangre
contaminada con el
virus de la hepatitis B
que
haban
sido
sometidas
a
temperaturas elevadas para matar los virus ofrecan cierta proteccin frente a
la hepatitis B. Aunque las partculas sin cido nucleico que haba aislado
Blumberg no podan causar la enfermedad, varios hallazgos sugeran que se
podran utilizar para estimular la inmunidad frente a los virus infecciosos.
Okochi y sus colegas descubrieron que los pacientes que haban recibido
transfusiones y cuya sangre contena anticuerpos para el HBsAg tenan menos
probabilidades de desarrollar hepatitis post-transfusin que los pacientes que
no tenan el anticuerpo.
Blumberg e Irving Millman, que trabajaban en el FCCC, intrigados por la idea
de que el HBsAg provoca una respuesta inmunolgica que protege a las
personas frente a la hepatitis B, propusieron la creacin de una vacuna hecha
con partculas de HBsAg obtenidas de la sangre de portadores de la hepatitis
B. Este era un planteamiento inusual para el desarrollo de una vacuna. Antes
de 1969, todas las vacunas se hacan de tres maneras.
En un mtodo se preparaban a partir de bacterias o virus completos muertos
para evitar la infeccin. En otro mtodo se preparaban a partir de cepas
debilitadas de organismos patgenos que no provocaban sntomas o
provocaban sntomas moderados al inyectarse como vacuna, pero que
protegan a los receptores frente a cepas no modificadas ms graves. Tambin
se hacan vacunas a partir de virus completos que, aunque no causaban la
enfermedad por s mismos, estaban muy relacionados con los virus que la
causaban. Pero no se haban elaborado vacunas a partir de la sangre humana,
utilizando slo partes, o "subunidades", de virus humanos. El FCCC solicit una
patente para un mtodo relacionado con este concepto en 1969.
Maurice Hilleman y sus colegas del Instituto Merck para la Investigacin
teraputica reconocieron la importancia de la posibilidad de desarrollar un
vacuna a partir de partculas, o subunidades, del virus. En 1971, Merck, donde
varios cientficos trabajaban independientemente en lneas relacionadas,
obtuvo una licencia del FCCC y, tras muchos aos de investigacin y pruebas,
desarrollaron una vacuna de subunidades de hepatitis B hechas a partir de
HBsAg purificados de la sangre. En 1980, Wolf Szmuness, del Centro de

Sangre de Nueva York, y sus colegas de Merck demostraron que la vacuna

proporcionaba una proteccin superior al 90 por ciento frente a la hepatitis B y
no tena efectos secundarios adversos. En 1981 la vacuna derivada del suero
estuvo disponible para uso general.
La produccin de la vacuna de subunidades para la hepatitis B en grandes
cantidades se vio obstaculizada por la necesidad de sangre de portadores de la
hepatitis B, al darse cuenta de que dicha sangre poda estar contaminada con
otros virus. Sumndose al inters por este problema, William Rutter y sus
colegas de la Universidad de California-San Francisco obtuvieron de Merck en
1977 material que contena el virus. Propusieron desarrollar una vacuna para la
hepatitis B preparando partculas de HBsAg mediante tecnologa recombinante.
Este nuevo proceso garantizara la ausencia de contaminacin de otras fuentes
y permitira la produccin de grandes cantidades de la vacuna.
El concepto de produccin de una vacuna de esta forma era totalmente nuevo.
Tras clonar el virus de la hepatitis B y obtener la secuencia gentica del HBsAg,
Rutter y sus colegas exploraron una gran variedad de sistemas biolgicos
distintos en los que producir las partculas utilizando tcnicas de
recombinacin. No tuvieron xito con las bacterias.
Entonces, en 1980 y 1981, Rutter colabor con Benjamin Hall y sus colegas de
la Universidad de Washington, que haban desarrollado un sistema modelo
utilizando clulas de levadura. Rutter y Hall produjeron con xito partculas
puras de HBsAg a partir de clulas de levadura modificadas genticamente.
Posteriormente, Rutter y sus colegas fundaron Chiron Corporation, en parte
para desarrollar la vacuna del HBsAg mediante una relacin contractual con
Merck y tambin para desarrollar otros tratamientos mdicos utilizando tcnicas
de recombinacin. En Merck, Hilleman utiliz los HBsAg recombinantes
derivados de la levadura, en lugar de antgenos derivados de plasma
sanguneo, para elaborar una versin mejorada de la vacuna contra la hepatitis
B. Esta vacuna recombinante fue la primera de su tipo para su uso en
humanos, y su uso generalizado fue autorizado por la Food and Drug
Administration de EE.UU. en 1986, tras nueve aos de investigacin.
Estudios posteriores han revelado que la hepatitis B se puede transmitir de una
persona a otra no slo a travs de la sangre, sino tambin por contacto sexual
o de una madre portadora al recin nacido. Un importante estudio realizado en
Taiwan por Palmer Beasley y sus colegas en 1975 demostr que casi dos
terceras partes de los nios nacidos de madres positivas para el HBsAg se
convertan a su vez en portadores del HBsAg.

CONCLUCION
Los presentes datos confirman estudios anteriores que indican que el HBsAg
puede ser detectado en el suero de un alto porcentaje de pacientes con
hepatitis viral
El HBsAg en hepatitis viral persistente puede darse por meses o aos y su
permanencia despus de un episodio agudo marcara una evolucin de la
enfermedad que dependera del sistema inmunolgico del paciente.
La incidencia del antgeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) por distintas
tcnicas fue la siguiente: en HVA, 25% por inmunodifusin (ID), 35% por
contrainmunoelectroforesis discontinua (CIED) y 52% por radioinmunoensayo
(RIA); en HCA, 31% por ID, 46% por CIED y 100% por RIA; en las cirrosis, 27%
por ID, 32% por CIED y 63% por RIA
.