Universidad Andrs Bello

Facultad de Ecologa y Recursos Naturales

Laboratorio de Biologa Celular
Profesores: Mara Jos Daz
Valentina Muoz


Trabajo practico N4:
Componentes Qumicos de la
Clula
BIO131





Autores: Nadine Arce
Vannia Briones
Javiera Osorio
Natalia Varela

15-Octubre-2014
Introduccin:

La unidad bsica de todo organismo vivo es la clula. sta posee estructuras de gran
complejidad y una alta gama de funciones en organismos pluricelulares, siendo stas
compuestas de agua, sales minerales y molculas orgnicas que estn compuestas de
carbono. Estos componentes celulares, son fundamentales, ya que le proporcionan
caractersticas particulares a la clula.
Existen cuatro tipos de biomolculas orgnicas fundamentales en la clula, estos son los
cidos nucleicos, carbohidratos, lpidos y protenas. Las biomolculas orgnicas estn
compuestas principalmente de carbono, hidrogeno y oxgeno en distinta proporcin y son
importantes para los procesos vitales de todos los organismos seres vivo. Estas molculas
orgnicas estn constituidas principalmente de subunidades (1).
Las molculas inorgnicas como las sales minerales desempean funciones importantes en
la homeostasis, reacciones metablicas, presin osmtica y diversas regulaciones celulares.
Las que se encuentran en abundancia en los seres vivos son los fosfatos, carbonatos de
calcio, cloruros, potasio, sodio y magnesio (2).
Si bien todas estas molculas forman parte de las clulas, en trminos generales, es posible
determinar en distintas muestras la presencia de alguna de stas? La determinacin tanto de
molculas orgnicas como inorgnicas se puede lograr a travs de diferentes mtodos como
el uso de las reacciones de Fehling, el cual permite detectar rpidamente azcares en el
nivel de monosacridos, debido a su capacidad reductora. El Lugol por otra parte identifica
polisacridos y la reaccin de Biuret permite reconocer protenas y as diferentes tipos de
muestras, ayudando al reconocimiento de stas molculas, por medio de la variacin de
colores de las soluciones (2).
Por tanto, la variacin de color en las soluciones, tras agregar distintos reactivos o
muestras, denota la composicin molecular de stas, hiptesis que desarrollaremos por
medio de este informe.
Es de suma importancia conocer a fondo estructuras increblemente complejas capaces de
realizar distintas funciones, como lo son molculas orgnicas e inorgnicas. Por lo cual
resulta muy interesante el reconocimiento de estos compuestos a travs de los diferentes
experimentos a realizar.
El propsito de este informe es provocar un aprendizaje sobre las molculas orgnicas e
inorgnicas y poder identificarlas, por medio de distintos reactivos utilizados. Tambin se
debe reconocer y diferenciar molculas orgnicas e inorgnicas y comprender y explicar
por medio de la justificacin de los resultados obtenidos, los fundamentos de las
metodologas de reconocimiento utilizadas.



Materiales y mtodos:


Actividad N1
Reconocimiento de Hidratos de Carbono.

A: Identificacin de monosacridos mediante reaccin de Somogyi
Para reconocer monosacridos se utilizaron 6 tubos de ensayos rotulados cada uno con
diferentes tipos de muestras colocados con una pipeta pasteur y estas eran: 1ml de agua
destilada, 1ml de solucin de glucosa al 1%, 1ml de almidn al 1%, 1ml de almidn
hidrolizado, 1ml de leche, 1ml de solucin NaCl al 1%; a cada uno de estos tubos se le
agrego con una pipeta 1 ml de reactivo de somogyi y se dej en el bao termorregulado a
80C por algunos minutos hasta que reaccionara.

B: Identificacin de polisacridos mediante prueba de Lugol:
Para reconocer polisacridos se utilizaron 6 tubos de ensayos rotulados cada uno con
diferentes tipos de muestras colocados con una pipeta pasteur y estas son: 1ml de agua
destilada, 1ml de glucosa al 1%, 1ml de almidn al 1%, 1ml de almidn hidrolizado, 1ml
de leche, 1ml de NaCl al 1%. A estos tubos se agreg con una pipeta 10 gotas de reactivo
de Lugol a cada tubo de ensayo y se agitaron los tubos para que ocurriera la reaccin.


Actividad N2
Reconocimiento de protenas.

Reaccin de Biuret para la identificacin de protenas:
Se procedi a rotular cinco tubos de ensayo, en tubo N1 se coloc 1 ml de agua destilada y
1 ml del reactivo Biuret, en el tubo N2 se coloc 1ml de solucin glicina 1% y 1 ml del
reactivo Biuret, en el tubo N3 se coloc 1 ml de clara de huevo y 1 ml de reactivo Biuret,
en el tubo N4 se coloc 1 ml de leche y 1ml de reactivo Biuret y en el tubo N5 se coloc
1 ml de solucin de NaCl 1% y 1 ml de reactivo Biuret. Posteriormente se procedi a agitar
y observar las reacciones de los cinco tubos.





Actividad N3
Reconocimiento de lpidos.

Se utilizaron tres tubos de ensayo; el primero contena 1 mL de aceite + 1 ml de agua, el
segundo 1 ml de aceite + 1 ml de ter y el tercero 1 ml de agua + 1 ml de ter. Los dos
ltimos tubos que contenan solvente orgnico (ter), debieron ser tapados con parafilm, al
ser un solvente voltil.

Actividad N4
Reconocimiento de Sales Minerales.

Se rotularon dos tubos de ensayo a los cuales se agreg por medio de una pipeta pasteur 1
ml de Cloruro de Calcio. En el tubo N1 se aadi 1 ml de Nitrato de Plata y en el tubo N2
se aadi 1 ml de Oxalato de Amonio. Finalmente ambos tubos se dejaron reposar en la
gradilla, se observ reaccin y posteriormente se registraron sus resultados.

Actividad N5
Reconocimiento de Enzimas.

Se utilizaron dos tubos de ensayo con una muestra de hgado cada uno, al tubo N1 se le
agreg 1 ml de agua destilada y se hirvi a una temperatura de 80 C en bao
termorregulado. Posterior a esto, tenemos dos muestras de hgado, una cocina y una fresca.
Finalmente, a ambos tubos con sus respectivos hgados, se les agreg 1/2 ml de perxido de
hidrgeno, se procedi a observar la reaccin.











Resultados:


Actividad N1: Reconocimiento de Hidratos de Carbono.

A: Identificacin de monosacridos mediante reaccin de Somogyi

Tabla A
Tubo/ Muestra Reactivo utilizado Reaccin Observaciones
1. 1ml de Agua
destilada
1ml de reactivo de
somogyi
- No se observa reaccin ya
que en el agua destilada no se
encuentran monosacridos.
2. 1ml de
Glucosa al
1%
1ml de reactivo de
somogyi
+++ Se observa la reaccin
esperada ya que la glucosa es
un monosacrido.
3. 1ml de
almidn al
1%
1ml de reativo de
somogyi
- No se observa reaccin ya
que no posee monosacridos.
4. 1ml de
almidn
hidrolizado
1ml de reactivo de
somogyi
+++ Se observa reaccin debido al
que el almidn es la unin de
dos polisacridos estos
debido a diversas rupturas
queda como monosacridos
de glucosa por eso se ve la
reaccin. (referencia 1)
5. 1ml de leche 1ml de reactivo de
somogyi
++ En este tubo no se aprecia
totalmente la reaccin debido
a que la galactosa (azcar de
la leche) es un disacrido.
6. 1ml de
solucin de
NaCl al 1%
1 ml de reactivo de
somogyi
- No se aprecia reaccin ya que
no posee monosacridos.
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: Cinco muestras diferentes (1ml cada una), se les agregan 1 mL de reactivo
Somogyi, posteriormente son llevadas a bao termorregulado a 80 C, en el cuadro se
muestra cuales reaccionan a este reactivo ms que a otros.
Cul es el color y cantidad relativa del precipitado en cada uno de los tubos?
En el primer tubo (agua destilada) es azul y no se muestra precipitados; segundo tubo
(glucosa) es rojo ladrillo y muestre relativa de precipitado; tercer tubo (almidn) es azul y
no se muestra precipitado; cuarto tubo (almidn hidrolizado) mostr reaccin positiva; el
quinto tubo (NaCl) es azul y no se muestra precipitado y por ltimo, el sexto tubo (leche) es
caf-rojizo y muestra relativa de precipitado.
A qu se caracterstica se debe su capacidad reductora?
La capacidad reductora de los glcidos se debe a que el grupo aldehdo o cetona puede
oxidarse, dando un cido.


Figura A Reconocimiento de monosacridos mediante reactivo de somogyi.




B: Identificacin de polisacridos mediante prueba de Lugol:

Tabla B
Tubo/ Muestra Reactivo utilizado Reaccin observaciones
1. 1ml de agua
destilada
10 gotas de Lugol - No reacciona debido
a la ausencia de
polisacridos

2. 1ml de
glucosa al
1%
10 gotas de Lugol - No reacciona por la
ausencia de
polisacridos.
3. 1ml de
almidn al
1%
10 gotas de Lugol ++ Se observa reaccin
aunque no la
esperada (azul-
violeta) ya que
posee polisacridos.
4. 1ml de
almidn
hidrolizado
10 gotas de Lugol +++ Se observa reaccin
aunque no la
esperada ya que
posee disacridos.
5. 1ml de leche 10 gotas de Lugol - No reacciona por la
ausencia de
polisacridos.
6. 1ml de NaCl
al 1%
10 gotas de Lugol - No reacciona por la
ausencia de
polisacridos.
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: Cinco muestras diferentes (1 ml cada una), se les agregan reactivo Lugol (2
gotas), tubos agitados, en el cuadro se muestra cuales reaccionan a este reactivo.

Figura B reconocimiento de polisacridos mediante la prueba de lugol.



Actividad N2: Reaccin de Biuret para la identificacin de protenas.

Tabla 1
Tubo/ Muestra Reactivo utilizado reaccin observaciones
1. 1ml de agua
destilada
1 ml de Biuret - No reacciona debido
a la ausencia de
protenas.

2. 1 ml de
Solucin
glicina 1%
1 ml de Biuret - No reacciona por la
ausencia de
protenas.
3. 1ml de clara
de huevo
1ml de Biuret +++ Se observa reaccin
(azul-violeta) ya que
posee protenas.
4. 1ml de leche 1 ml de Biuret ++ Se observa reaccin,
tornando una
coloracin violeta
inmediata.
5. 1ml de NaCl
1%
1 ml de Biuret - No reacciona por la
ausencia de
protenas.
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: Son sometidas a Reaccin de Biuret 5 muestras distintas, para identificacin de
protenas, de las cuales dos, muestran un tonalidades violeta, arrojando resultados
positivos. Las 3 muestras restantes muestran una ausencia de protenas.


Figura 1 Reconocimiento de protenas mediante prueba de lugol.

Cmo se explica la diferencia de intensidades en los tubos que presentaron una reaccin
positiva?
Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la valoracin
de los mismos, llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones peptdicas
reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de
color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas para que se forme el complejo
coloreado. Esta prueba sirve para la identificacin de tripptidos en adelante.(Wharton
1972)(3)
Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en medio alcalino se complejan con
los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y oxgeno de los enlaces de todas
las protenas. La cantidad de color producido es proporcional a la concentracin de
protenas y es medida espectrofotomtricamente a 550 nm. (Wharton 1972)(3)
R.- La variacin respecto a la tonalidad que presenta cada muestra con resultado positivo,
es directamente proporcional a la concentracin de protena que en l se encuentra, de
acuerdo a la ley de Beer- Lambert.
El reactivo Biuret marca positivo en el tubo N3 y 4 ya que solo reacciona cuando hay
protenas presentes. y como sabemos la leche y la clara de huevo son altamente ricos en
protenas, por ende en los tubos N 1, 2 y 5 su reaccin fue negativa ya que no contienen
pptidos.







Actividad N3: Reconocimiento de Lpidos.

Tabla 1
Tubo/ Muestra Reaccin Reaccin Observaciones
1. Aceite -
Agua
Insolubilidad/
Heterogeneidad
- Al agitarlo, se observa
claramente que no se
mezclan. Se observan
micelas de aceite sobre el
agua y al agitar se forma
mayor cantidad de micelas
como sobrenadante.

2. Aceite -
ter
Solubilidad/
Homogeneidad
+++ Al agitarlo, se puede
percibir en este caso una
mezcla homognea y
transparente al mezclar los
dos componentes. No se
observan micelas,
quedando un lquido
amarillo transparente
3. Agua -
ter
Solubilidad/
Homogeneidad
++ Al agitarlo, se percibe una
homogeneidad y
transparencia, pero no
absoluta. An se observan
micelas, pero muy
mnimas.
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: En esta actividad se busc la comparacin de solubilidad de 3 muestras. La
primera contena aceite y agua; esta muestra mostr una insolubilidad notoria al observarse
micelas. La segunda muestra contena aceite y ter; la cual si mostr solubilidad,
mezclndose de forma homognea. Y por ltimo, la tercera muestra que contena agua y
ter, mostr una solubilidad relativa, ya que si bien logr mezclarse, an era posible ver
pequeas micelas.





Actividad N4: Reconocimiento de sales minerales.

Tabla 1
Tubo CONTENIDO REACCIN OBSERVACIN
Tubo N1 Cloruro de calcio +
Nitrato de plata 1%
+++ Reaccion
inmediatamente
formando un
precipitado blanco
Tubo N2 Cloruro de calcio +
oxalato de amonio
1%
++ Reaccin inmediata,
pero se observa
menor precipitacin
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: Identificar que s existen sales y cul de estas es ms precipitada a Cloruro de
Calcio.


Figura 1 Reconocimiento de Sales Minerales.

Ambas soluciones reaccionaron, el tubo nmero uno reaccion de mayor grado que el tubo
nmero dos, es debido a esto que se produce un color ms lechoso y precipitado que en el
tubo nmero uno que es ms cristalino, y aparte se observa en su superficie un polvillo
blanco que no se encuentra en el tubo que reaccion con oxalato de amonio. Se
identificaron cloruros en el tubo n 1 y calcio en el tubo n2 al mezclar cada uno con una
solucin distinta, ya descrita en materiales y mtodos.






Actividad N5: Reconocimiento de enzimas

Tabla 1
Tubo Muestra Reaccin Observacin
1 Hgado Cocido

- Al hervir por 5
minutos la muestra y,
al aadir agua
oxigenada se observa
burbujeo y generacin
de calor
2 Hgado no Cocido - Al aadir agua
oxigenada se observa
una efervescencia,
generando tambin
calor.
Simbologa: Reaccin total +++ Reaccin media ++ No reacciona
Leyenda: A travs de dos muestras de hgado, fue posible concluir que tras aadir agua
oxigenada quin tuvo reaccin fue la muestra de hgado no cocido.


Figura 1 Reconocimiento de enzimas.







Discusin

Actividad N1: Reconocimiento de Hidratos de Carbono.

A) En esta actividad se puede observar que nos dio reaccin el tubo con glucosa y el
tubo con almidn hidrolizado (figura A) (tabla NA). El tubo con glucosa se debe a
que es un hidrato de carbono monosacrido esto se refiere a que es un azcar
simple. El tubo con almidn hidrolizado reaccion debido a que la hidrolizacin es
un proceso de rupturas de enlaces que deja las azucares en monosacridos y
oligosacridos por esta razn nos dio positiva la prueba. Estos dos tubos nos dieron
ms positiva la reaccin que otros y esto se puede deber a que tenan ms
monmeros que otras muestras y por eso el color varia en intensidad. Otra
posibilidad podra ser que un tubo que no debera reaccionar lo hiciera esto podra
deberse a que el tubo, la sustancia o la pipeta estuvieran contaminadas como por
ejemplo si el agua destilada diera positivo, esto sera imposible a menos que alguno
de los objetos estuviera contaminado.

B) En esta ocasin se ocup el reactivo de Lugol y nos dio respuesta negativo el tubo
con almidn y almidn hidrolizado (Figura B) (Tabla B), el tubo con almidn
hidrolizado no debera dar positivo en esta prueba ya que es almidn procesado para
que quede en disacridos y monosacridos. El tubo con almidn debera dar
positivo ya que es un polisacrido por lo que el yodo del Lugol queda entremedio de
las molculas del almidn. El motivo por el cual debi dar negativo es por poca
agitacin o porque el almidn no se encontraba en buen estado de conservacin ya
que igual nos dio reaccin no del color esperado pero se diferenciaba de los dems
al igual que el almidn hidrolizado. (4)


Actividad N2: Reaccin de Biuret para la identificacin de protenas.
En esta actividad se utiliz el reactivo de Biuret, ya que detecta la presencia de protenas,
pptidos cortos y est hecho de KOH y CuSO4. En el tubo que contena agua no reacciono
ya que el agua no posee protenas, en el tubo con glicina tampoco reaccion ya que es un
aminocido y no contiene enlaces peptdicos, en el tubo que contena leche si reacciono ya
que contiene pptidos, el tubo con clara de huevo reaccion con un color muy intenso ya
que es una fuente muy rica en protenas y finalmente el tubo que contena NaCl no
reaccion porque es una sal.

Actividad N3: Reconocimiento de Lpidos.
La solubilidad es la mxima cantidad de soluto que se puede disolver en una cantidad de
disolvente a una temperatura determinada (5).
En el tubo de aceite agua se pudo observar que al agitarlo, quedaron en todo el tubo
pequeas gotas aceitosas y adems se formaron dos fases: una de agua y otra de aceite.
Por qu ocurri esto? Debido a que el agua es un solvente polar y el aceite es no polar, por
lo tanto no se puede crear una fase homognea.
En el tubo aceite - ter se observ que al agitarlo, no se form ninguna fase, en otras
palabras, se homogenizaron Por qu? Debido a que ambos compuestos son no polares, es
decir, en sus molculas no se presentan densidades de cargas opuestas, eso hace que el
aceite se solubilice en ter.
En el tubo agua ter se pudo observar al momento de agitarlo, una solubilidad, pero no
completamente homognea, ya que an era posible ver pequeas micelas dentro del tubo.
Por qu ocurri esto? Esto se debe a que el agua es un solvente polar, y el ter es un
solvente no polar. Sin embargo, pese a que el ter no posee puentes de hidrgeno, con el
agua s puede formarlos (6). Es probable que la solubilidad del ter en agua, se deba a esta
causa. Lo cual podra explicar que dos compuestos de diferente polaridad sean
relativamente solubles.


Actividad N4: Reconocimiento de sales minerales.
La precipitacin causada en las soluciones de reconocimiento de enzimas puede definirse
como el proceso mediante el cual se separa un slido de una masa lquida y se sedimenta
en el fondo del recipiente que la contiene
i
. Esto sucedi ms rpido en el tubo nmero 1
que en el nmero 2, se observ inmediatamente un precipitado blanco en el fondo del tubo.
En cambio en el tubo nmero 2 se observ una leve concentracin de soluto que empezaba
a precipitarse pero de manera ms lenta. Pero si se deja reposar por mas tiempo al tubo
nmero dos, el precipitado sera el mismo que en el tubo nmero uno, solo que la solucin
sera de un tono ms cristalino, y as se pudo realizar un correcto reconocimiento de sales.







Actividad N5: Reconocimiento de enzimas

En el primer tubo de ensayo con hgado cocido deba ocurrir que la enzima catalasa se
desnaturalizara, debido a la alta temperatura a las que fue expuesta (80 C) por unos
minutos (aproximadamente 5 min) y a la cual posteriormente se le agreg 1 ml de perxido
de hidrgeno. Envs de desnaturalizarse, la enzima si tuvo reaccin (efervescencia y gener
calor), esto se debi, probablemente a que el tiempo al cual fue expuesto a calor en el bao
termorregulado, fue inferior al necesario. Por lo cual la enzima no se desnaturaliz y
reaccion con el perxido de hidrgeno.
En el segundo tubo de ensayo con hgado no cocido, al cual se le agrego perxido de
hidrogeno, provoc efervescencia y calor, esto debido a que se descompuso en agua y
oxgeno. (7)















Conclusin

En este laboratorio se logr conocer en trminos generales cual es la composicin de las
clulas (agua, sales minerales y compuestos orgnicos), enfocndose principalmente en los
compuestos orgnicos, los que le otorgan a la clula caractersticas nicas.
Dentro de estos componentes se encuentran los hidratos de carbono, protenas, lpidos y
cidos nucledos, principalmente; de los cuales se conoci su estructura qumica, sus
monmeros y sus principales funciones y usos, adems de cada reaccin o tincin frente a
la que debera reaccionar cada una de las clulas orgnicas, junto a su composicin y
principales caractersticas.
Durante el trabajo practico en laboratorio se logr aprender a trabajar con distintas
reacciones como la de Fehling (para monosacridos), Lugol (para polisacridos) y Biuret
(para protenas); llegando as a diferenciar entre muestras de monosacridos y
polisacridos, adems de reconocer como actan estas diferentes reacciones ya sea para
reconocer tambin protenas, lpidos, sales minerales y la actividad de una enzima
(catalasa).


Luego de realizar este trabajo prctico se concluye:

Actividad n1: Que la glucosa se encuentra formada por hidratos de carbono, o
monosacridos y el almidn por polisacridos (encontrndose una gran diferencia entre
estos).
Actividad n2: Que la clara de huevo y la leche presentan en su composicin protenas pero
en distintas cantidades, variedades y concentraciones (provocando una diferencia en el tono
observado luego de la reaccin), Luego de realizar un anlisis cualitativo para
identificacin de protenas, se pudo concluir que el objetivo se cumpli, ya que fue posible
identificar enlaces peptdicos de protenas en ciertas muestras, tras someterlas a Reaccin
de Biuret. Teniendo dos resultados positivos y tres negativos.

Actividad n3: Realizados los mtodos necesarios del experimento y posteriormente su
anlisis, se pudo lograr el objetivo de este experimento, que era comparar y comprobar la
solubilidad que exista en distintos escenarios. Logrando ver que producto de las distintas
polaridades del agua y el aceite, estas no pudieron homogeneizarse. Contrario del aceite
con ter, que, gracias a la misma polaridad, pudieron fusionarse sin dejar ver ms de una
fase en el tubo de ensayo. Y por ltimo la sorpresa que fue comprobar que aun teniendo
distinta polaridad, el agua y el ter, pudieron homogeneizarse gracias a que juntos forman
puentes de hidrgeno.

Actividad n4: Que se puede lograr la deteccin de cloruros y Calcio reaccionando con
nitrato de plata y oxalato de amonio.

Actividad n5: Las enzimas pueden perder su actividad al exponerse a altas temperaturas.
En este experimento el objetivo de reconocer la presencia y ausencia de la enzima catalasa
no fue cumplido en su totalidad. Esto, producto del tiempo insuficiente al cual fue expuesta
a calor la primera muestra. Generando calor y efervescencia en ambos casos: en la muestra
expuesta a calor y en la muestra fresca.

















Bibliografa

1.- Universidad Andrs Bello. Gua de laboratorio N4: Componentes Qumicos de la
Clula, curso BIO-131 Biologa Celular, 2011.

2.- Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., Watson J.D., Biologa Molecular de
la clula. (2004). Ediciones Omega, 4 edicin .Espaa. pp. 58

3.- http://es.scribd.com/doc/62055042/Reaccion-de-Biuret ,
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf

4.- http://www.buenastareas.com/ensayos/Hidrolisis-Del-Almidon/2509376.html

5.-http://www.prepa9.unam.mx/academia/cienciavirtual/SEC-DISOL/solubilidad.html

6.- http://132.248.103.112/organica/qo1/ok/eteres/eter2.htm

7.- http://sebbm.es/BioROM/contenido/proteinas3d/practica/catalasaboton.html
http://www.ehowenespanol.com/cuales-son-propiedades-catalasa-info_290653/