Celda Molecular

Revisin
Los aislantes de la cromatina:
Mecanismos regulatorios y la herencia
epigentica
Ashley M. Bushey,1,2 Elizabeth R. Dorman,1,2 and Victor G. Corces1,*
1Department of Biology, Emory University, Atlanta, GA 30322, USA
2Department of Biology, Johns Hopkins University, Baltimore, MD 21218, USA
*Correspondence: vcorces@emory.edu

DOI 10.1016/j.molcel.2008.08.017
Los aisladores potenciadores de bloqueo son elementos de ADN que interrumpen la comunicacin
entre una secuencia reguladora, tal como un potenciador o un silenciador, y un promotor. Los
Aislantes participan tanto en la regulacin transcripcional y la organizacin nuclear mundial, dos
caractersticas de la cromatina que son pensado para ser mantenido de una generacin a otra
mediante mecanismos epigenticos. Por otra parte, hay muchos mecanismos de regulacin en el
lugar que potencian o dificultan la actividad aislante. Estas maneras de regulacin pueden ser
utilizados para establecer un actividad aislante celular-tipo-especifica que es epigeneticamente
heredado a lo largo de una clula y / o el linaje del organismo. Esta revisin discutir la evidencia de
la herencia epigentica y la regulacin de la funcin aislante
Introduccin
La organizacin de la cromatina en las clulas eucariotas est regulada tanto a nivel local y global por un sistema
muy complejo de elementos de ADN, las protenas y ARN que interactan con ellos. Los aislantes son elementos
de ADN reguladores que crean lmites en la cromatina, delineando las gamas sobre la cual otras influencias
reguladoras surtiran efecto. Hay dos tipos de aisladores: los aisladores potenciador de bloqueo, el cual impiden
la comunicacin entre los elementos de la secuencia discretas (tpicamente potenciadores y promotores) cuando
se encuentra entre ellos, y los aisladores de barrera, que impiden la propagacin de heterocromatina ( Gaszner y
Felsenfeld, 2006 ). Esta revisin se centrar en los aisladores de potenciador de bloqueo.
En Drosophila melanogaster hay mltiples aisladores conocidos definidos por sus protenas de unin, supresor
de Hairy Wing [Su (Hw)], Factores Lmite de Elementos Asociados (BEAF-32A y 32B) BEAF-, ralladura-blanca 5
(ZW5), GAGA Factor de Encuadernacin (GAF), y la ms recientemente identificada, Drosophila CTCF
(dCTCF). Sin embargo, en los vertebrados, la nica protena aislante conocida es-CCCTC de unin al factor
(CTCF) ( Valenzuela y Kamakaka, 2006 y Wallace y Felsenfeld, 2007 ). Se desconoce si los vertebrados CTCF
cumple las funciones de todos los aisladores de protenas encontrada en la Drosophila o si otros vertebrados
aisladores de protenas estn aun por descubrir
Aunque el trabajo previo se centr principalmente en descifrar los mecanismos por los que los aislantes bloquean
la comunicacin entre un potenciador y un promotor, el campo se ha desplazado recientemente a una visin ms
global de los aisladores. Aqu hablamos de lo que se conoce acerca de la herencia epigentica y la regulacin de
la informacin aislante, reas que deberan ser entendidas a fin de colocar los aisladores en el contexto de un
sistema de desarrollo

PRENSA
CELULAR
Un papel para los aisladores en la Organizacin Nuclear
Hay varios modelos de cmo los aisladores potenciador de bloqueo interrumpen la comunicacin entre
potenciadores y promotores. Nos referiremos a ellos como el modelo promotor seuelo, el modelo de barrera
fsica, y el modelo de dominio de bucle. Los modelos no son necesariamente excluyentes entre s, por lo que
potencialmente cualquier aislador podra emplear al menos una combinacin de mecanismos para poder
funcionar correctamente. Segn el modelo de seuelo promotor, un aislador de potenciador de bloqueo recluta
componentes del sistema de transcripcin que le hace asemejarse a un promotor al nivel molecular. Este
parecido le permite competir con genuinos promotores para interaccin con los potenciadores ( Geyer,
1997 ). Este modelo es consistente con el hecho de que el potenciador ADN y el aislador ADN han sido
observado co-localizar ( Yoon et al., 2007 y Zhu et al., 2007 ). Sin embargo, la interaccin entre los aisladores y
promotores a s mismos tambin se ha observado ( Yoon et al., 2007 ), que podra indicar que un mecanismo
alternativo es responsable de ambas observaciones. Adicionalmente, es poco probable que el promotor de
seuelo sea el nico mecanismo fundamental de la funcin de bloqueo de potenciador, principalmente porque
no explica la naturaleza direccional del efecto de bloqueo potenciador, es decir, por qu un promotor de
quedara atrapado por un aislante situado en la misma direccin que el promotor y no por un aislante a la misma
distancia pero en la otra direccin. El modelo barrera fsica de funcin aislante propone que una seal molecular
procedente del potenciador, tal como una transcripcin complejo de polimerasa ARN ( Kong et al., 1997 y Tuan
et al., 1992 ), que simplemente "se encuentra con" el complejo aislante y es incapaz de seguir
avanzando. Consistente con este mecanismo es la observacin de que la insercin de un terminador de la
transcripcin, el complejo Laco / R, entre un potenciador y un promotor reduce la funcin de potenciador ( Ling et
al., 2004 ). Adems, cuando se colocaron los aislante -globina de pollo 5 'HS4 (cHS4) entre el potenciador HS2
humana y su gen de globina de destino, la ARN polimerasa II acumuladas el aislador y reducidas cantidades de
el gen promotor, lo que sugiere que la progresin de los bloques aislantes polimerasa desde potenciador al
promotor ( Zhao y Dean, 2004 ).Sin embargo, esto podra no ser un mecanismo universal de aislamiento, como
aislantes situados dentro de intrones pueden silenciar a los posteriores potenciadores sin truncar el producto del
gen, lo que implica que, al menos en algunos casos, los complejos de transcripcin pueden pasar a travs de
aisladores funcionales (Geyer y Corces, 1992 ) . La premisa bsica del modelo de dominio de bucle es que los
sitios de aisladores interactan entre s y / o con otras estructuras nucleares para formar bucles de
cromatina. Esta idea es sencilla, bien apoyado, y se discutir en detalle a continuacin. Sin embargo, la cuestin
de la formacin de bucle con precisin cmo interfiere con la funcin potenciador sigue siendo un rea activa de
estudio.

Una gran cantidad de evidencia indica que los aisladores forman bucles de cromatina. El emparejamiento de los
sitios de aisladores especficos para formar bucles individuales se ha demostrado, incluyendo el scs / scs ' par
aislante que bordea el soplo de choque calor 87A7 en el cromosomas politeno Drosophila. El aislador scs es
limite para la protena ZW5, mientras que los aislador scs' es limite para BEAF. La Captura de conformacin
Cromosoma (3C) experimentos mostraron que los dos sitios co-localizan, y los ensayos de co-immuno
precipitacion demostraron que las dos protenas interactan, proporcionando as un mecanismo para el anclaje
del bucle ( Blanton et al., 2003 ). Del mismo modo, en lneas de la mosca con dos inserciones de
la gitana retrotransposn, que contiene un aislante Su(Hw), los sitios de insercin cromosmica co-localizan en el
ncleo en un dependiente Su(Hw) de manera significativamente mas frecuente que en las lneas de la mosca
que carecen uno o ambos de las inserciones ( Gerasimova et al., 2000 ). Por otra parte, los bucles anclados por
aisladores Su(Hw) se han visualizado directamente en los ncleos de sal extrada mediante hibridacin in situ
fluorescente ( Byrd y Corces, 2003 ). La Evidencia funcional que soporta la idea de que Aisladores de formar
bucles es proporcionada por un estudio que demuestra que un bucle puede actuar como un aislante ( Ameres et
al., 2005 ). Las clulas HeLa fueron transfectadas con un plsmido que contiene un potenciador y un
promotor. El potenciador estaba rodeado por matrices de operadores de tet , y las clulas tambin fueron
transfectadas con un plsmido que expresa una protena que se une primero las matrices tetO y luego se
dimeriza. Presumiblemente, este proceso debe conducir a la interaccin entre los tetO matrices y bucles del
potenciador. De hecho, se observ silenciamiento de potenciador impulsada, pero el efecto podra ser revertido
por las condiciones que causaron la protena de dimerizacin de disociarse de las matrices tetO. Adems, un
ejemplo endgena de formacin de bucle funcional ha sido encontrado en la regin de control de impresin H19
(ICR) en ratones, que se une CTCF en una forma de alelo especfico ( Kurukuti et al., 2006 , Murrell et al.,
2004 y Yoon et . al, 2007 ). Yoon et al. Sugiere que la ICR unido CTCF interacta con elementos potenciadores
y promotores, mientras que Kurukuti et al. Sugiere que el ICR unido CTCF interacta con otros elementos
reguladores de ADN de la regin, una regin de unin de matriz (MAR3) y una regin diferencialmente metilado
(DMR1). Aunque estos estudios no estn de acuerdo en las interacciones especficas que son necesarias para la
funcin aislante, tanto a la conclusin de que el ICR unido CTCF participa en la formacin de bucle que es
necesario para evitar la comunicacin del potenciador con el promotor Igf2.
Adems de formar bucles mediante la interaccin con otros, los aisladores pueden formar bucles por la
inmovilizacin de la cromatina a diversas estructuras nucleares. En clulas de mamferos, CTCF interacta con
la nucleofosmina, una protena que es enriquecida en el nucleolo. Tambin, los transgnicos loci con sitios de
unin CTCF intacta para localizar al nuclolo ms a menudo que los transgenes que albergan sitios de unin
CTCF mutados. Juntos, estos resultados sugieren que los aisladores CTCF forman bucles de cromatina por la
inmovilizacin de la cromatina a la superficie del nucleolo ( Yusufzai et al., 2004 ). Estudios como ste, junto con
la observacin de que hay numerosos sitios de aisladores endgenos repartidos por los genomas de varias
especies, implican que los aislantes podran desempear un papel importante en la organizacin nuclear
global. Esta idea se ve apoyada por observaciones en las clulas diploides Drosophila . En este modelo de
sistema, hay miles sitios de unin de Su(Hw) distribuidos en todo el genoma, pero ms bien que lo esperado
difusa el patrn de localizacin anlisis de inmunofluorescencia detecta un nmero mucho mas pequeo de
distintos focos, que van desde menos de diez a unas pocas docenas ( Gerasimova y Corces, 1998 ). Este
hallazgo ha sido interpretado en el sentido de que los sitios se agrupan, organizando toda la masa de la
cromatina en estructuras como de rosetas. Por otra parte, la mayora de estos grupos estn ubicados en la
periferia nuclear ( Gerasimova et al., 2000 ), donde hay indicios de que pudieran interactuar con la lmina nuclear
(Capelson y Corces, 2005 ). Esta opinin se ve reforzada por un nuevo estudio en fibroblastos humanos, lo que
demuestra que CTCF se encuentra en los lmites de muchos dominios de Laminas-asociadas en todo el genoma
( Guelen et al., 2008 ). Como perifrica frente posicionamiento central de genes en el ncleo, generalmente
parece ser no aleatoria, un nuevo nivel de organizacin nuclear podra ser instrumentada por aislantes.
Recientemente, dCTCF se encontr en los mismos grupos como Su(Hw) en clulas diploides. Curiosamente, en
los cromosomas politnicos, Su(Hw) y dCTCF no parecen co-localizar. Sin embargo, ambas protenas co-
localizan con una tercera protena, CP190, que es necesaria tanto para Su(Hw) y la funcin aislante dCTCF,
sugiriendo as la cooperacin entre diversas clases de aisladores Drosophila (Gerasimova et al., 2007 y Mohan
et al., 2007 ) . Si diferentes tipos de aisladores tienen variaciones en sus propiedades, a continuacin, las
interacciones entre estos elementos podran permitir un nivel an ms fino de control sobre el genoma.








El papel de los aisladores en Herencia epigentica
La informacin epigentica no est contenida en la secuencia de ADN, pero, sin embargo, se hereda de una
generacin de clulas a la siguiente y, en algunos casos, de una generacin del organismo a la siguiente. Un
sistema de epigentica tiene dos componentes: la seal que desencadena un cambio epigentico y la marca que
mantiene el cambio a travs de divisiones celulares, ms o menos de forma estable, a menos que y hasta que
brote otra seal contradicindola ( Figura 1 ). Si la organizacin nuclear, segn lo establecido por los aisladores,
contiene toda la informacin intrnseca en cualquier momento durante el desarrollo en lugar de limitarse a
responder a la informacin codificada en otro lugar, a continuacin, aisladores deben tener alguna conexin con
un sistema epigentico. Aunque esta rea de investigacin an no ha sido ampliamente investigado, la creciente
evidencia sugiere que los aislantes pueden actuar como una marca epigentica y una seal epigentica. Los
primeros estudios de Mod (mdg4), un miembro del aislante complejo Su(Hw), mostraron un efecto paternal fuerte
el efecto de posicin variegacin (PEV) ( Dorn et al., 1993 ). PEV se ensay usando el In(1)w
m4h
reordenamiento
en el que el gen blanco se coloca en estrecha proximidad a la heterocromatina, dando lugar a un fenotipo de ojo
variado debido a cantidades variables de difusin de heterocromatina y, por lo tanto, cantidades variables
de expresin gnica blanca . En este sistema, las mutaciones que mejoran la formacin de heterocromatina
conducen a un fenotipo de ojo blanco ms fuerte, mientras que las mutaciones que perturban la formacin de
heterocromatina conducen a un fenotipo de ojo rojo fuerte Las mutaciones en el mod (mdg4) acta como gen
potenciadores de PEV. Curiosamente, la progenie masculina, de un mod (mdg4)neo129 padre heterocigotos
albergan dos copias de tipo salvaje de la genes mod(mdg4) de, muestran una mayor PEV. Este efecto se
mantiene a travs de al menos 11 generaciones de tipo salvaje descendencia masculina, pero no se observ en
los hijos de a mod (mdg4)neo129 madre heterocigota.

El papel de los aisladores en la
memoria epigentica
A) Protena Aislante vinculante podra ser una marca
epigentica que se mantiene a travs de la divisin
celular. Lugar A y lugar B representan dos genoma loci
diferente que contiene los elementos aislantes. Lugar A
est unido por una protena aislante que impide la
transcripcin, mientras que el lugar B no esta unido y
por lo tanto capaz de producir un producto gnico
(pentgono). Si la unin de protenas aislante actua
como una marca epigentica, la unin o la falta de
unin es recordado despus de la divisin celular.
(B) Un aislante podra participar en una seal
epigentica a travs de la regulacin de un gen que
establece una marca epigentica. En esta situacin, la
prdida de la unin de protenas aislante lleva a la
produccin de un producto gnico (pentgono) que
establece una marca epigentica, aqu en el Lugar B.
La marca epigentica se mantiene a travs de la
divisin celular, independientemente del estado del
aislador. Por lo tanto, el aislante participa en el establecimiento de la marca epigentica pero no es la propia marca. Cuadrados,
protenas potenciador de unin; Crculos, protenas aisladoras; Pentgonas, productos de genes cuya expresin est regulada por
aislantes; valos, marcas epigentica.

Este efecto paterna tambin se observa en otros ocho mutaciones mod(mdg4) ( Buchner et al., 2000 ). Estos
hallazgos sugieren que Mod (mdg4) es necesario transmitir la informacin epigentica, en este caso,
probablemente en el cromosoma Y. Sin embargo, tales estudios no se pueden determinar si el Mod (mdg4) est
implicado en la seal epigentica que establece una marca epigentica en el cromosoma Y, que luego afecta
PEV o si el Mod(mdg4) est directamente involucrado en el mantenimiento de la marca epigentica que, en caso
de prdida en una generacin de mosca, es ineficiente restablecido.
Al considerar las mutaciones mod(mdg4), es importante sealar que este gen codifica al menos 27 isoformas
diferentes generadas por emplame alternativo, y slo uno de ellos, llamado Mod (mdg4) 2.2 o Mod(67,2 mdg4),
se sabe que es involucrado en la funcin aislante. Las mutaciones analizadas en el estudio PEV mencionados
anteriormente estn ubicados dentro de la regin comn de estas isoformas, y por lo tanto, Mod(mdg4) 2.2
funcin no se puede aislar. Sin embargo, el alelo mod(mdg4)u1, que afecta especficamente a la regin C-
terminal de Mod (mdg4) 2.2, tambin ha sido implicado en la herencia epigentica. Esta mutacin inhibe la
funcin aislante cuando se coloca un aislante Su(Hw) entre un potenciador y el gen promotor amarillo
( Gerasimova et al., 1995 ). Un pequeo porcentaje de hijos varones heterocigotos provienen de una madre
mod(mdg4)u1 homocigotos de un padre tipo salvaje muestra interrupcin en la funcin aislante, mientras que la
cruz inversa, entre una madre de tipo salvaje y un padre homocigotos mod(mdg4)u1, conduce a la funcin de
tipo salvaje aislante ( Gerasimova y Corces, 1998 ). Por lo tanto, hay un efecto materno que se retiene en la
mosca adulta, lo que indica que la protena es necesaria desde el principio en el desarrollo para establecer un
estado que se conserva a travs de muchas divisiones celulares. Como la funcin de aislante en s es la lectura
de datos en esta situacin; el aislante debe ser parte de la marca epigentica. La presencia de la protena ms
tarde en el desarrollo, despus de la iniciacin de la transcripcin cigticos no es suficiente para restaurar la
funcin normal del aislador, lo que sugiere que Mod(mdg4) 2.2 est involucrado en el establecimiento de una
marca epigentica embrionario temprano.
Para algo que acte como una marca epigentica, debe tener algn medio de retener su contenido de
informacin a pesar de todas las interrupciones de la cromatina. Tales interrupciones incluyen la transcripcin, la
replicacin del ADN, y la compactacin de la cromatina / descompactacin durante la mitosis. Aunque gran parte
de esta rea de investigacin an no est clara, la evidencia est comenzando a emerger lo que indica que los
aisladores cumplen estos tres criterios. La funcin apropiada del aislante Drosophila Su(Hw) es compatible con la
transcripcin a travs del sitio aislante, como la insercin de sitios de unin de Su(Hw) en un intrn del gen
amarillos resultados en el silenciamiento de potenciadores con la corriente sin interrupcin del producto gnico
( Geyer y Corces, 1992 ). De hecho, el sistema transcripcional podra pasar a travs de aisladores complejos
Su(HW) muy a menudo como sitios de consenso Su(HW) se encuentran con frecuencia dentro de intrones
( Ramos et al., 2006 ), aunque si todos estos sitios son aislantes activos queda por la determinado. Adems, el
mapeo de Drosophila CTCF y sitios de unin humana de la cromatina CTCF a travs de inmunoprecipitacin
muestra que un nmero de sitios se encuentran dentro de intrones ( Barski et al., 2007 , Holohan et al.,
2007 y Kim et al., 2007 ), lo que sugiere que la coexistencia con la transcripcin podra ser una propiedad
comn de los aislantes, aunque tambin es posible que estos sitios CTCF juegan un papel diferente en la
transcripcin.
Hay indicios de que los aislantes tambin son funcionales durante la replicacin del ADN. El gen corion loci
Drosophila se amplifican aproximadamente 80 veces durante la ovognesis, pero cuando se inserta
aleatoriamente en otros sitios genmicos, el nivel de amplificacin disminuye drsticamente. Rodeando el lugar
amplificado con los aisladores Su(Hw) lo protege contra esta variegacin por efecto de posicin ( Lu y Torre,
1997 ), mientras que la insercin de un aislante entre dos elementos reguladores necesarios suprime la
amplificacin ( Lu et al., 2001 ). Estos resultados sugieren que los aislantes podran interactuar con los
mecanismos de control de duplicacin de una manera similar a aquella por la que interactan con los
mecanismos de control de la transcripcin. Es plausible, por tanto, que los aislantes podran estar involucrados
en la delimitacin de los dominios de replicacin por separado con el tiempo de replicacin distinto y regulacin,
un papel que presumiblemente implicara el mantenimiento de la funcin de aislante en toda la fase S. No queda
claro, sin embargo, precisamente lo que ocurre cuando el propio sitio de aislante se replica.
Durante la mitosis, sin embargo, hay evidencia ms directa de que las protenas de aisladores pueden ayudar a
mantener la informacin epigentica. Por ejemplo, la protena aislante Beaf Drosophila permanece en los
cromosomas durante la mitosis ( Hart et al., 1999 ) pero no parece ser necesario para la mecnica de la mitosis,
lo que sugiere que podra actuar como un marcador de posicin para retener la memoria molecular de aislante
activa sitios ( Gilbert et al., 2006 ). Adems, en las clulas HeLa, CTCF ha sido observado en los cromosomas
mitticos; un examen de un subconjunto de sitios de unin en interfase conocido CTCF revel que los mismos
sitios tambin estn obligados durante la mitosis (Burke et al., 2005).
Otro estudio comprob este hallazgo en una lnea celular diferente ( Rubio et al., 2008 ). Por el contrario, otros
dos estudios informaron el hallazgo opuesto que CTCF no permanece unido a la cromatina durante la mitosis
(Komura et al., 2007 y Wendt et al., 2008 ). El mantenimiento de la unin es fundamental si CTCF realmente
acta como una marca epigentica; Sin embargo, esta idea sigue siendo controvertida en el campo.
Una pista ms sutil que sugiere que los aislantes podran estar involucrados en el mantenimiento de los estados
epigenticos proviene de estudios sobre la relacin entre CTCF y la protena relacionada con BORIS (Hermano
del Regulador de Sitios Imprimido). BORIS contiene un dominio de dedo de zinc con la secuencia casi idntica a
la de CTCF y se une al mismo lugar, pero que slo se expresa normalmente en la lnea germinal masculina en la
etapa de desarrollo en la que se borran las marcas de metilacin del ADN, una etapa en la que la expresin
CTCF drsticamente regulada negaticamente ( Loukinov et al., 2002 ). Aunque indirecta, este hallazgo podra
indicar que si la ausencia de CTCF es importante para que las marcas epigenticas sean restablecidas,
entonces, su presencia podra jugar un papel en su mantenimiento.
Para profundizar en los mecanismos mediante los cuales la funcin de aislante se mantiene epigeneticamente,
podemos mirar a otras protenas que estn involucradas en la herencia epigentica. Protenas trxG y PcG son
conocidas por estar implicados en la memoria celular de los estados de la cromatina ( Grimaud et al., 2006 ). Las
mutaciones en mod(mdg4) mejora las mutaciones trxG y suprimen las mutaciones PcG , y las mutaciones
trxG aumentan el ) efecto paternal mod(mdg4) descrito anteriormente. Ms importante, el efecto materno de la
mutacin mod(mdg4)u1 tambin se ve reforzada por las mutaciones trxG y suprimida por una mutacion PcG, lo
que indica que la herencia epigentica de aislante actividad se ve afectada por las protenas celulares
(memoria Gerasimova y Corces, 1998 ). Por lo tanto, las protenas trxG y PcG y las protenas de aisladores son
interdependientes unos de otros para su correcto funcionamiento. Aunque no hay evidencia de una interaccin
directa entre estos grupos de protenas, todos ellos son pensados para participar en la organizacin nuclear a
gran escala. Esto implica que parte de la informacin que es epigeneticamente retenida de una generacin a la
siguiente es la organizacin fsica de la cromatina en el ncleo, y cada una de estas protenas debe ser funcional
para que este proceso se produzca correctamente.
Aislantes Modular Celular-tipo-especfico Organizacin Nuclear
Si la organizacin nuclear contiene informacin epigentica, a continuacin, se puede inferir que es especfica de
clulas de linaje. Adems, la organizacin nuclear y la regulacin transcripcional son conocidos por ser
ntimamente relacionados. El hecho de que los patrones de expresin de genes definen la identidad celular
tambin implica que la organizacin nuclear es de tipo celular especfico. Por lo tanto, los elementos, tales como
aislantes, que estn involucrados en el establecimiento de la organizacin nuclear y la regulacin transcripcional
deben regularse entre tipos de clulas.
Aqu nos centramos en lo que se conoce acerca del la informacin aislante de clulas de tipo especfica de todo
el genoma. Sin embargo, la funcin de los aisladores especficos que son conocidos por ser regulada entre
diferentes tipos de clulas, tales como el aislante CTCF en el ICR en los vertebrados y los aisladores se
encuentran en la Drosophila Abd-B regin reguladora, se discutir en mayor detalle en una prxima seccin.
Mirando el mundo, los sitios de unin CTCF en el genoma humano fueron asignadas recientemente utilizando
inmunoprecipitacin de la cromatina seguido por el anlisis de microformaciones ( Barski et al., 2007 y Kim et
al., 2007 ). El anlisis de los dos tipos de clulas diferentes revel diferencias en una pequea pero un
porcentaje reproducible de estos sitios, lo que indica que CTCF de unin al ADN es parcialmente del tipo de
clula especfico. Sin embargo, cuando un pequeo nmero de sitios de unin Su(HW) fue analizado en
diferentes tejidos Drosophila, se observ poca o ninguna variacin ( Adryan et al., 2007 y Parnell et al.,
2006 ). Esta diferencia podra indicar que el aislamiento de Su (HW) es slo involucrado en la arquitectura
nuclear esttica, aunque otros Drosophila aisladores pueden dictar organizacin especfica de tipo celular.
Alternativamente, puede haber cambios en las clulas de tipo especfica en la unin Su(HW) al ADN que no se
podan resolver al comparar tejidos integrales que contienen muchos tipos de clulas diferentes. Una tercera
posibilidad es que la organizacin nuclear dela regulacin del aislante Su(Hw) se produce a travs de la
regulacin de las interacciones entre las protenas aisladoras implicadas en la formacin de bucle y no al nivel de
la unin de ADN. En apoyo de esta tercera posibilidad, durante el golpe de calor, que hace que los genes de
choque trmico que se activen y la transcripcin en el resto del genoma para ser apagado, los aislador cuerpos
disociados de Su(HW), pero las protenas aislantes mantienen unido al ADN ( Gerasimova et al., 2000 ). Por lo
tanto, el cambio masivo en los patrones de expresin de genes que sigue de choque trmico se acompaa de
reorganizacin de las interacciones protena-protena entre las protena aisladoras, lo que indica que la
regulacin especfica del tipo de clula de aisladores Su (HW) podra ocurrir en gran medida en el nivel de
agrupacin aislante.


Figura 2.
La Regulacin de Actividad aislante
(A) la funcin aislante podra ser regulada a nivel de la actividad de unin al ADN. Reglamento podra ser positivo o negativo y podra ocurrir por
diversos mecanismos moleculares, incluyendo la modificacin del ADN, la modificacin de protenas, interacci n protena-protena, y los efectos
de las cercanas de la cromatina. (B) la funcin aislante podra ser regulada en el nivel de interaccin protena-protena. Una vez ms, la
regulacin podra ser positivo o negativo. Mecanismos moleculares podran incluir la modificacin de protenas, interaccin protena-protena,
efectos de las cercanas de la cromatina, y la interaccin con los pequeos ARNs.


La lmina nuclear est involucrado en clulas de tipo organizacin nuclear especfica y la expresin gnica
en Drosophila . A medida que el aislante Su(Hw) interacta con la lmina nuclear, una interaccin que es
necesaria para la funcin aislante adecuada, aisladores podran estar involucrados en este proceso de
organizacin especfica de clulas de tipo nuclear ( Capelson y Corces, 2005 y Gerasimova et al., 2000 ). La
Diferenciacin in vitro indica un pequeo nmero de genes para alterar su asociacin con la lmina nuclear, y
estos reordenamientos nucleares son acompaados por cambios en la expresin gnica (Pickersgill et al.,
2006 ). Aunque no se ha examinado el papel de aisladores en este contexto, la activacin o la desactivacin de
los aislantes podran causar a la cromatina a asociar con o disociar de la lmina nuclear, que conduce a los
cambios observados en la disposicin nuclear y la expresin gnica. Recientemente, los dominios de la lmina
asociada fueron asignadas a lo largo de todo el genoma humano, que revel un fuerte enriquecimiento para
sitios CTCF dentro de 5-10 kb de estos dominios ( Guelen et al., 2008 ). Aunque este anlisis estuvo limitado a
un tipo de clula y por lo tanto no proporciona informacin sobre el papel de la lmina nuclear o CTCF en la
organizacin nuclear-tipo de clulas especficas, sugiere la conservacin de la interaccin funcional entre lmina
nuclear y las protenas aisladoras en los vertebrados. Se requiere ms anlisis exhaustivo para determinar si los
aisladores son, de hecho implicada en la organizacin nuclear-tipo de clulas especficas.
La Regulacin de Actividad aislante
Dado que las secuencias de ADN a las que se unen las protenas aislantes estn presentes en todas las clulas,
pero que la funcionalidad de los sitios especficos de los aisladores en tipos especficos de celulas exhibe cierta
variabilidad, se deduce que debe haber algn medio para regular el comportamiento de protenas aislantes. Esta
regulacin podra tener lugar una vez en un linaje como parte de un evento de diferenciacin, con el efecto de
ser mantenido de forma estable por mecanismos epigenticos como se discuti anteriormente, o como parte de
un sistema continuo de control que se volvi a imponer continuamente (o se permite la caducidad) en cada
generacin celular. Existe evidencia para una variedad de mecanismos moleculares que afectan al
comportamiento aislante de la protena en mltiples etapas involucradas en la funcin aislante ( Figura 2 ).


Un requisito bsico para cualquier tipo de aislante complejo de proteina funcional es la actividad de unin al
ADN. Un mtodo de modulacin de la actividad de unin al ADN es la modificacin covalente del ADN en el sitio
de unin. El ejemplo clsico de este tipo de regulacin es diferencial metilacin del sitio de unin CTCF entre
los genes H19 y Igf2 ( Bell y Felsenfeld, 2000 y Hark et al., 2000 ). En este caso, cuando CTCF est unido y el
aislador es funcional, slo H19 es expresado; esto ocurre en el cromosoma materno. En el cromosoma paterno,
el sitio de unin es metilado, y CTCF es incapaz de unirse, haciendo que el aislador se desactive; slo Igf2 es
expresado. Se impone Esta marca de metilacin es puesta durante el desarrollo de las clulas germinales
masculinas y mantiene de manera estable a partir de entonces. Otra forma de regulacin es la modificacin
covalente de las protenas implicadas. Parece que la ubiquitinacin podra desempear un papel aqu, como los
dTopors ligasa ubiquitina E3 pueden afectar el aislador Su(Hw) en Drosophila (Capelson y Corces, 2005 ). Las
mutaciones en este gen reducen la funcin aislante, mientras que dTopors sobreexpresin puede rescatar
fenotipos de aisladores que ya han reducido la funcin y alterado la unin al ADN vinculante. Un punto de
mutacin que suprime la actividad de ubiquitina ligasa tambin suprime el efecto rescate, lo que sugiere que la
actividad enzimtica es importante; sin embargo, la identidad del objetivo de la enzima en este proceso sigue
siendo desconocido. Una tercera estrategia para la regulacin de la competencia de unin a ADN es protena-
protena. La relacin entre Beaf y el regulador transcripcional DREF es un candidato probable para este tipo de
regulacin ( Hart et al., 1999 ). Ambas protenas se unen el mismo motivo de ADN, pero no interactan unos con
otros. Ensayos de cambio de movilidad electrofortica muestran que slo uno a la vez puede unirse a un sitio
especfico. En los cromosomas politnicos, parecen esconderse en muchos puntos, lo que sugiere que algunas
copias del cromosoma pueden ser obligados por Beaf, mientras que otros estn obligados por DREF. La
importancia funcional de esta relacin, si la hay, no se ha determinado.
Dado que los modelos predominantes de la funcin aislante sugieren que los sitios de aisladores interactan uno
con el otro para formar bucles de cromatina, la regulacin de la actividad aislante en el nivel de las interacciones
protena-protena requeridas para formar estos bucles es tambin probable que sea importante. Un ejemplo
probable de este tipo de regulacin es la modificacin de CTCF por poli (ADP-ribosilacin), o PARlacion ( Yu et
al., 2004 ). Experimentos de inmunoprecipitacin de la cromatina en las clulas murinas indican que la marca
PAR y CTCF se superponen en numerosos puntos en el genoma, y en la movilidad vitro demuestran que los
ensayos de cambio PARlada CTCF conserva su capacidad de unin al ADN. Juntos, estos resultados sugieren
que una gran fraccin de los sitios de unin endgenas CTCF contiene protena PARlada. En este caso, hay
indicios de que la modificacin es un regulador positivo de la funcin aislante, como el tratamiento con 3-
aminobenzamida, un inhibidor de PARlacion, resulta en prdida de aislamiento. La idea de que PARlacion regula
el aislamiento CTCF mediante la promocin de las interacciones entre los sitios de aisladores no se ha
demostrado de forma concluyente, pero parece probable, como PARlacion parece promover las interacciones
protena-protena en otros contextos ( Reale et al., 2000 ). Otro caso de la regulacin del aislador por la
modulacin de la interaccin protena-protena es la modificacin de la MOD (mdg4)2.2 y CP190 en complejo
aislante de la Drosophila Su(Hw) mediante la adicin de SUMO (Small ubiquitina-como modificador) ( Capelson y
Corces, 2006 ). Como es el caso de PAR, SUMO colocaliza con las protenas aisladoras en un nmero de sitios
en todo el genoma, como se demuestra a travs de la inmunotincin de cromosomas politnicos. Sin embargo, a
diferencia de PAR, SUMO parece ser un regulador negativo de la actividad aislante, como mutaciones en el
resultado va SUMOilacion en funcin aislante reforzado. Por otra parte, la sobreexpresin de componentes del
sistema SUMOilacion altera la apariencia de los cuerpos aislantes puntiformes en ncleos diploides de larvas de
tercer estadio. Este hallazgo sugiere fuertemente que la SUMOilacion regula la actividad aislante al interferir con
la capacidad de los sitios de aisladores en diferentes lugares para interactuar uno con el otro. El sistema de ARNi
tambin parece desempear un papel en la regulacin de las interacciones entre las protenas aislante ( Lei y
Corces, 2006 ). Este papel no parece ser algo sencillo, sin embargo, ya los diferentes componentes del sistema
afectan a la funcin aislante de maneras opuestas. Sobre la base de la prdida de funcin y los estudios de
sobreexpresin, la helicasa Rm62 se opone, mientras que las protenas Argonaute facilitan, la actividad
aislante. La interaccin de las protenas de aisladores con la cromatina parece estar afectada en alguna de estas
condiciones, indicando de nuevo que la regulacin se produce a nivel de la interaccin entre los sitios de
aisladores, en lugar de ADN de las protenas de unin en cada sitio. La interaccin entre Rm62 y CP190 es
dependiente de ARN, lo que nos lleva a una interesante posibilidad. Adems de determinar simplemente si o no
un sitio aislante especial participa en las interacciones con otros aislantes, tambin se puede imaginar que puede
haber modos de regulacin que especifiquen el conjunto de sitios de aisladores que participan en cada
grupo. Potencialmente, la especificidad de secuencia proporcionada por la inclusin de ARN en un complejo
aislante puede proporcionar un medio de lograr este objetivo.
Adems de los mecanismos de regulacin descritos anteriormente, hay otros factores que afectan la actividad
aislante para los que los detalles funcionales son todava desconocidos. Un ejemplo es el de la Drosophila
Abdominal-B ( Abd-B locus). la regin de control Abd-B consiste en una serie de potenciadores, silenciadores
regulados por el desarrollo, y aislantes. Cmo la meta correcta potenciadora el gen Abd-B en un tipo de clula
dada es un rea de gran inters. Curiosamente, uno de los aisladores en esta regin, Fab-7, se compone de
varios subelementos que ejercen su funcin aislante, ya sea en diferentes puntos durante el desarrollo o con
diferentes combinaciones de potenciador-promotor ( Schweinsberg et al., 2004 ). Este hallazgo revela el
potencial para la actividad especificada aislante que podran dilucidar algunas de la expresin del gen regulado
por el desarrollo en este lugar. Adems, se ha demostrado mltiples aislantes dentro de la regin de control Abd-
B para exhibir derivacin aislante, lo que significa que la actividad aislante se suprime cuando dos aisladores se
colocan cerca uno del otro debido al emparejamiento aislante ( Gruzdeva et al., 2005 , Kyrchanova et al.,
2007 , Kyrchanova et al., 2008 y Rodin et al., 2007 ). Aunque la derivacin aislante no se ha demostrado en el
lugar endgeno, es posible que este mecanismo desempee un papel en la seleccin de elementos
potenciadores especficos para el promotor en el tipo de clula correcta en el punto correcto tiempo de
desarrollo. Otra parte de la explicacin de la expresin gnica regulada por el desarrollo del gen Abd-B proviene
de secuencias del Promotor dirigidas (PTS) que se han encontrado de 3a dos de los aisladores, Fab-7 y Fab-8, y
permitir a los potenciadores superar tanto la Drosophila CTCF y la actividad del potenciador Su(Hw) en los
ensayos de bloqueo de transgenes ( Chen et al., 2005 y Zhou y Levine, 1999 ). Estos STP se dirigen a un
potenciador, y slo uno, el promotor en un linaje celular dado, lo que sugiere que estas secuencias estabilizan los
complejos potenciador-promotor ( Lin et al., 2003 ). Tal vez estos complejos potenciador-promotor interfieren con
la formacin de bucle aislante y, de esta manera, anulan la actividad aislante.
Otro ejemplo de secuencias cercanas que afectan a la actividad aislante es el elementos de respuesta a la
hormona tiroidea (TREs), que a menudo se encuentran en estrecha proximidad a los sitios de unin CTCF en los
vertebrados ( Arnold et al., 1996 , Awad et al., 1999 y Perez-Juste et al ., 2000 ). El Anlisis de la relacin entre
estos dos elementos sugiere que la actividad de bloqueo de potenciador CTCF se reduce por tanto la TRE
encontradas antes en los genes lisozima de la gallina y la TRE encontradas antes en el gen c-myc del humano
en presencia de la hormona tiroidea ( Lutz et al ., 2003 ). CTCF permanece unido al ADN en presencia de la
hormona, indicando que TREs debe desactivar a CTCF.
La Modulacin adicional de la actividad CTCF proviene de varias parejas de interaccin ( Wallace y Felsenfeld,
2007 ). Considerando a Kaiso se cree que regulan negativamente la actividad de bloqueo del potenciador CTCF,
CHD8 mejora esta funcin ( Defossez et al., 2005 y Ishihara et al., 2006 ). Estudios recientes indican que el
cohesin tambin interacta con CTCF. Estos informes demuestran que CTCF recluta cohesin para la cromatina y
que es necesaria para la funcin aislante adecuado en ambos lugares transgnicos y endgenos (Parelho et al.,
2008 , Rubio et al., 2008 , Stedman et al., 2008 y Wendt et al. , 2008 ). Aunque el efecto de la cohesin en la
asociacin CTCF con el ADN no est claro debido a datos contradictorios a partir de estos estudios, Kaiso y
CHD8 no se cree que tengan un efecto. Por lo tanto, por lo menos algunos socios CTCF-interactuando deben
afectar la actividad aislante a travs de un mecanismo alternativo, tales como promover u obstaculizar la
formacin de bucle.
El gran nmero de mecanismos de regulacin que existen para modular la funcin de aislante implica que la
actividad aislante es dinmica. Mecanismos independientes se han identificado para la regulacin aislante de la
protena de unin al ADN e interacciones protena-protena que conducen a la formacin de bucle. Estas
estrategias podran ser utilizadas para diferentes niveles de regulacin. La interferencia en el nivel de unin al
ADN podra ser una forma ms permanente de la regulacin, mientras que la interferencia en el nivel de
formacin de bucle puede ser ms transitoria como las protenas podran permanecer presentes y preparadas
para la activacin. As, por ejemplo, una clula podra responder rpidamente a los cambios en sus necesidades
metablicas inmediatas y su entorno mediante la alteracin de su organizacin de bucle, mientras que todava
conserva su identidad diferenciada a travs de los patrones de unin al ADN. Sin embargo, se necesita ms
trabajo para entender cundo y cmo la clula utiliza estas formas de regulacin aislante.



Conclusiones
Por lo menos algunos aisladores potenciador de bloqueo parecen participar en la herencia epigentica, y muchas
exposiciones de regulaciones de la actividad aislante. Cada sitio aislante contiene el potencial para la regulacin
en muchos niveles, incluyendo las protenas de unin al ADN aislador, las modificaciones de estas protenas, o
cercanos a la actividad de elementos de modulacin de los complejos de aisladores. Como aisladores
potenciador de bloqueo se encuentran en toda la Drosophila y en los genomas de los vertebrados, existe una
gran cantidad de informacin especfica de tipo celular potencial que se puede mantener a lo largo de una clula
y / o el linaje del organismo. Todava no se sabe, sin embargo, la gran diversidad de formas de regulacin que
son utilizadas por una clula, y por lo tanto, no est claro cunto de la actividad del aislante en un determinado
genoma es de tipo celular especfico.
Aunque mucho se ha trabajado para entender la funcin aislante, los mecanismos a travs de los cuales
funcionan todava no son bien entendidas. Tampoco est claro si la funcin principal de los aisladores es actuar
a nivel local a travs de potenciador de bloqueo, si su funcin en Regulacin-cis de la transcripcin simplemente
refleja su papel en la organizacin nuclear global, o si los aisladores juegan un papel activo en la regulacin
transcripcional y la organizacin nuclear. Si su papel en la organizacin nuclear es funcional, es posible que la
organizacin nuclear aislante-dependiente de la cromatina contiene informacin epigentica que es importante
para la diferenciacin celular. La regulacin de esta organizacin por el control de la actividad aislante en
ubicaciones especficas del genoma podra, por lo tanto, ser un mecanismo importante para el establecimiento y
mantenimiento de las clulas destinos especficos durante el desarrollo en eucariotas superiores.